一種凝血酶緩釋醫(yī)療器械及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種凝血酶緩釋醫(yī)療器械的制備方法，包括如下步驟：(1)將醫(yī)療器械用去離子水超聲洗滌干燥后浸泡于羥基乙叉二膦酸溶液中，取出進行二次干燥后洗滌；(2)將步驟(1)處理后的醫(yī)療器械浸泡于羥基磷灰石懸濁液中，取出干燥；(3)將步驟(2)處理后的醫(yī)療器械浸泡于凝血酶溶液中取出得到凝血酶緩釋醫(yī)療器械。本發(fā)明可實現(xiàn)凝血酶等僅能局部應(yīng)用的藥物的靶向緩釋，可用于制備的“功能性”藥物復(fù)合器械可直接放置于人體靶器官以及手術(shù)靶部位。
【專利說明】
一種凝血酶緩釋醫(yī)療器械及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)療器械及其制備領(lǐng)域，特別是涉及一種凝血酶緩釋醫(yī)療器械及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，隨著醫(yī)療技術(shù)的飛速發(fā)展與創(chuàng)新，各種內(nèi)鏡技術(shù)、微創(chuàng)技術(shù)等診療合一的醫(yī)學(xué)手段逐步成為主流醫(yī)療技術(shù)不斷出現(xiàn)，但內(nèi)鏡與微創(chuàng)器械也帶來一。上消化道出血是常見的消化道疾病，同時也是內(nèi)鏡下治療中常見的手術(shù)并發(fā)癥。對于上消化道出血的傳統(tǒng)內(nèi)科治療手段主要有局部噴灑或注射止血、靜脈應(yīng)用止血藥物等，目前內(nèi)鏡下止血廣泛應(yīng)用靶向藥物凝血酶局部作用于病灶表面，血液很快形成穩(wěn)定的凝血塊。但靶向噴灑后存在凝血酶被組織液快速稀釋的問題，使藥效降低。后隨著內(nèi)鏡下器械的不斷發(fā)展與改良，用于局部止血及封閉穿孔的各種吻合夾開始出現(xiàn)。鈦夾作為內(nèi)鏡下治療的重要器械之一，目前只對局部損傷承擔物理封閉治療作用。很多學(xué)者嘗試在醫(yī)用金屬基材上靶向緩釋凝血酶，目前所有的緩釋研究都基于生物惰性材料表面，不但生物活性差，而且重金屬離子毒性會造成凝血酶失效。輕基磷灰石(hydroxyapat i te，簡寫為HA或HAP，分子式為Ca1 (OH) 2 (PCk) 6)是牙齒和骨骼的主要(無機)成分，在前沿醫(yī)學(xué)上也作為人造骨的最佳成分。羥基磷灰石生物兼容性好，是能刺激或者誘導(dǎo)骨組織生長并能與骨組織形成骨性結(jié)合的天然陶瓷材料，生物兼容性及生物活性均優(yōu)于磷酸三鈣及其它磷鈣陶瓷材料。羥基磷灰石的使用，有助于細胞的粘附、增殖及功能發(fā)揮，在直接作為骨、牙等替代或缺損修復(fù)材料的基礎(chǔ)上，不但是優(yōu)異的骨組織工程載體材料，也可作為其它醫(yī)學(xué)功能材料或藥物的載體材料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有凝血酶緩釋醫(yī)療器械技術(shù)中存在的部分問題，提供(發(fā)明名稱)。
[0004]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0005]—種凝血酶緩釋醫(yī)療器械的制備方法，包括如下步驟:
[0006](I)將金屬板用去離子水超聲洗滌干燥后浸泡于羥基乙叉二膦酸溶液中，取出進行二次干燥后洗滌；
[0007](2)將步驟(I)處理后的金屬板浸泡于羥基磷灰石懸濁液中，取出干燥；
[0008](3)將步驟(2)處理后的金屬板浸泡于凝血酶溶液中取出即得；
[0009]所述金屬板為金屬基質(zhì)的醫(yī)療器械。
[0010]優(yōu)選地，所述步驟(I)和步驟(2)中的干燥是在干燥箱中50-70°C干燥5-10分鐘或20-30°C空氣中干燥1-2小時。
[0011]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的浸泡溫度為20_30°C，時間為1-2分鐘。
[0012]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的羥基乙叉二膦酸溶液濃度為3-5mol/l。
[0013]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的羥基乙叉二膦酸溶液濃度為4-5mol/l。
[0014]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的二次干燥為干燥箱中50-70 °C干燥10-20分鐘或20-30 °C
空氣中干燥2-4小時。
[0015]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的洗滌時間為2-3分鐘。
[0016]優(yōu)選地，所述步驟(2)中的輕基磷灰石懸濁液濃度為5-50g/l，浸泡溫度為20-30°C，時間為5-10分鐘。
[0017]優(yōu)選地，所述步驟(2)中的羥基磷灰石懸濁液濃度為20_30g/l。
[0018]優(yōu)選地，所述步驟(3)中的凝血酶溶液中凝血酶濃度為4000-8000U/1，由凝血酶凍干粉與0.9 %生理鹽水制備。
[0019]優(yōu)選地，所述步驟(3)中的凝血酶溶液中凝血酶濃度為4500-5500U/1。
[0020]優(yōu)選地，所述步驟(3)中的浸泡溫度為20_30°C，時間為1-2小時。
[0021]本發(fā)明的另一方面，一種凝血酶緩釋醫(yī)療器械，由上述任一所述方法制備而得。
[0022]本發(fā)明的有益效果:
[0023]1.本發(fā)明實現(xiàn)了醫(yī)療器械金屬基的生物活性表面的凝血酶緩釋涂層制備，可實現(xiàn)從單純“裸”器械到“功能性”藥物復(fù)合器械的升級。
[0024]2.本發(fā)明可實現(xiàn)凝血酶等僅能局部應(yīng)用的藥物的靶向緩釋，可用于制備的“功能性”藥物復(fù)合器械可直接放置于人體靶器官以及手術(shù)靶部位。
[0025]3.本發(fā)明可實現(xiàn)凝血酶等藥物在金屬基涂層體系上的穩(wěn)定緩釋，藥物可實現(xiàn)在指定部位緩釋從而可持續(xù)增加周圍組織濃度，解決了局部噴灑的藥物被組織液快速稀釋而影響藥效的問題。
【附圖說明】
[0026]圖1是本申請凝血酶緩釋金屬醫(yī)療器械的產(chǎn)品圖示；
[0027]圖2是制備的穩(wěn)定羥基磷灰石納米/亞微米涂層；
[0028]圖3是羥基磷灰石納米/亞微米涂層表面的凝血酶層；
[0029]圖4是羥基磷灰石層的光電子能譜(XPS)曲線；
[0030]圖5是凝血酶層的光電子能譜(XPS)曲線；
[0031]圖6是不同時間下凝血酶平均濃度曲線圖；
[0032]圖7是不同時間段動態(tài)凝血酶緩釋濃度的柱圖。
【具體實施方式】
[0033]為了更好地說明本發(fā)明，下面結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。
[0034]具體實施例1:實驗室制備凝血酶緩釋涂層
[0035]1.SUS304奧氏體不銹鋼樣品用去離子水超聲洗滌2分鐘，清除表面的油污或銹蝕。待表面干凈后，放置于干燥箱中70°C干燥5分鐘，以表面無殘留水滴為合格。
[0036]2.浸泡于25°C、5mol/l的羥基乙叉二膦酸溶液中2分鐘，進行羥基乙叉二膦酸表面化學(xué)裝換薄膜的制備。
[0037]3.取出后待多余溶液流下后，放置于干燥箱中70°C干燥10分鐘，使制備的薄膜干燥。
[0038]4.待樣品表面無明顯液體或膠體，用去離子水沖洗樣品表面3分鐘，沖洗掉多余的羥基乙叉二膦酸結(jié)晶殘留，剩下不易被沖洗掉的羥基乙叉二膦酸金屬表面化學(xué)轉(zhuǎn)換膜。放置于20g/l不斷進行攪拌的羥基磷灰石(HA)懸濁液中，25°C浸泡5分鐘。完成羥基乙叉二膦酸表面化學(xué)轉(zhuǎn)換薄膜上的羥基磷灰石涂層的自組裝制備。保留一部分樣品進行羥基磷灰石涂層的光電子能譜(XPS)與原子力顯微鏡(AFM)表征，見附圖2-5。
[0039]5.取出步驟4制備好的產(chǎn)品放入干燥箱中70°C干燥10分鐘，待表面無殘留水滴后。放入凝血酶凍干粉與0.9%生理鹽水制備5000U/1凝血酶溶液中，25°C浸泡2小時。
[0040]6.取出在30°C空氣中干燥2小時，進行光電子能譜(XPS)與原子力顯微鏡(AFM)表征。原子力顯微鏡表征測試結(jié)果見附圖2-3，從AFM對比圖可以看出，制備前后表面出現(xiàn)明顯變化，淺色區(qū)域為凝血酶分子。光電子能譜表征測試結(jié)果見附圖4-5，經(jīng)過XPS對比可以看出，(I)凝血酶分子成功涂覆在羥基磷灰石表面，且有一定厚度；(2)從高分辨XPS解譜來看，沒有新的化學(xué)鍵和產(chǎn)生，緩釋產(chǎn)物是凝血酶。上述結(jié)果說明凝血酶涂層前后成分與形貌產(chǎn)生了明顯的變化，形成了穩(wěn)定的涂層，涂層為凝血酶層;沒有新的化學(xué)鍵結(jié)合產(chǎn)生，說明凝血酶無其它污染物產(chǎn)生。
[0041 ]具體實施例2:工廠車間制備凝血酶緩釋涂層
[0042]1.SUS304奧氏體不銹鋼樣品用表面清洗液浸泡2分鐘，清除表面的油污，隨后用去離子水清洗兩次，每次2分鐘。待目測表面干凈后，放置于相對濕度55%溫度20°C空氣中干燥2小時，以表面無明顯殘留水滴為合格。
[0043]2.取出步驟I樣品浸泡于20°C、5mol/l的羥基乙叉二膦酸溶液中5分鐘，進行羥基乙叉二膦酸表面化學(xué)裝換薄膜的制備。
[0044]3.步驟2樣品取出后放置于相對濕度55 %溫度20 °C空氣中干燥2小時，讓制備的薄膜干燥。
[0045]4.待步驟3樣品表面無明顯液體或膠體，放置于20g/l不斷進行攪拌的羥基磷灰石(HA)懸濁液中，25°C浸泡10分鐘。多余的羥基乙叉二膦酸結(jié)晶殘留會在水中溶解，同時在完成羥基乙叉二膦酸表面化學(xué)裝換薄膜上的羥基磷灰石涂層的自組裝制備。
[0046]5.取出步驟4樣品放置于相對濕度55%溫度20°C空氣中干燥2小時，待表面無明顯殘留水滴后。放入凝血酶凍干粉與0.9%生理鹽水制備5000U/1凝血酶溶液中，25°C浸泡I小時。
[0047]6.取出步驟5樣品在300C空氣中干燥2小時，每組取6塊樣品，利用酶標儀在450nm波長下分別測定不同濃度標準品的吸光度，根據(jù)不同標準品濃度及對應(yīng)的吸光度繪制標準曲線。在此基礎(chǔ)上不同時間下計算的出的平均凝血酶濃度如附圖6所示，從附圖6可知在0-60分鐘內(nèi)凝血酶釋放迅速，從60-180分鐘凝血酶釋放十分緩慢但仍可維持一定的濃度。
[0048]將鍍有凝血酶的金屬板(共6塊)分別浸泡于盛有200ml生理鹽水的燒杯中，分別于0h、lh、2h、3h、4h、5h取樣本液10ul置于標記好的EP管中，每次取樣后棄去原有生理鹽水，利用酶標儀測定不同時間下六組溶液的吸光度并計算平均值。不同時間下棄去浸泡溶液測得的吸光度應(yīng)用t檢驗兩兩組間比較P值均大于0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，每隔I小時棄去浸泡溶液前測得的溶液的吸光度無顯著差異，我們可以認為相同時間段內(nèi)藥物涂層金屬板可穩(wěn)定持續(xù)釋放凝血酶。具體結(jié)果如附圖7所示。
[0049]上述結(jié)果說明凝血酶在I小時候達到穩(wěn)定緩釋值，而在持續(xù)變化的溶液中可以穩(wěn)定的緩釋凝血酶。
[0050]通過上述方法制備的凝血酶緩釋金屬板，所述金屬板為金屬基質(zhì)的醫(yī)療器械時，該凝血酶緩釋醫(yī)療器械如圖1所示，包括醫(yī)療器械的金屬基底12、金屬表面15、磷酸鹽層13、磷酸化學(xué)轉(zhuǎn)換膜14、羥基磷灰石層和16和凝血酶層17。
[0051 ]上述試驗研究表明“凝血酶-羥基磷灰石-無氧化物層-金屬”鋼板于生理鹽水溶液中可持續(xù)穩(wěn)定地釋放凝血酶，從而保證溶液中凝血酶的濃度，具有凝血酶緩釋效果，即，如此制備的凝血酶緩釋金屬基質(zhì)醫(yī)療器械也具有良好的凝血酶緩釋效果。
[0052]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)該涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書的保護范圍為準。
【主權(quán)項】
1.一種凝血酶緩釋醫(yī)療器械的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)將金屬板用去離子水超聲洗滌干燥后浸泡于羥基乙叉二膦酸溶液中，取出進行二次干燥后洗滌； (2)將步驟(I)處理后的金屬板浸泡于羥基磷灰石懸濁液中，取出干燥； (3)將步驟(2)處理后的金屬板浸泡于凝血酶溶液中取出，得到凝血酶緩釋醫(yī)療器械。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)和步驟(2)中的干燥是在干燥箱中50-70°C干燥5-10分鐘或20-30°C空氣中干燥1-2小時。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中的浸泡溫度為20-30°C，時間為1-2分鐘。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中的羥基乙叉二膦酸溶液濃度為3-5mol/l。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中的二次干燥為干燥箱中50-70°C干燥10-20分鐘或20-30°C空氣中干燥2-4小時。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)中的洗滌時間為2-3分鐘。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的羥基磷灰石懸濁液濃度為5_50g/l，浸泡溫度為20-300C，時間為5-10分鐘。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中的凝血酶溶液中凝血酶濃度為4000U/1-8000U/1，由凝血酶凍干粉與0.9%生理鹽水制備。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中的浸泡溫度為20-30°C，時間為1-2小時。10.—種凝血酶緩釋醫(yī)療器械，其特征在于，由權(quán)利要求1-9任一所述方法制備而得。
【文檔編號】A61L31/10GK106075608SQ201610395324
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月3日 公開號201610395324.9, CN 106075608 A, CN 106075608A, CN 201610395324, CN-A-106075608, CN106075608 A, CN106075608A, CN201610395324, CN201610395324.9
【發(fā)明人】高峰, 高奇輝, 李磊
【申請人】泰安市御翔醫(yī)療科技有限公司