一種魚鱗明膠代血漿注射液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，涉及一種以魚鱗明膠為原料制備魚鱗明膠代血漿注射 液的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國每年醫(yī)療用血量高達(dá)1300噸，近年來的用血量還在以每年7%~10%的速度 遞增，臨床上的用血量迅速增加使得血液的短缺達(dá)到了危機(jī)的程度。而臨床上，90%的丙型 肝炎是由輸血傳播，在重點(diǎn)傳染病中經(jīng)輸血傳染的病例已經(jīng)連續(xù)多年位居首位，因輸血而 感染人類免疫缺陷病毒的事故頻發(fā)。血源緊張、貯存及運(yùn)輸困難、價(jià)格昂貴等多方面的原 因，使臨床對(duì)輸血日益審慎，并盡可能地減少輸血機(jī)會(huì)，提倡"節(jié)約用血、科學(xué)輸血、成分輸 血"的觀念。按照衛(wèi)生部輸血指南（2000年）規(guī)定，通常失血量在人體質(zhì)量的20%以內(nèi)，以 及當(dāng)血紅蛋白含量大于或等于100g/L時(shí)，不必輸血，可輸入等量代血漿，因此血漿代用品 ((Plasmasubstitute，PS，一般簡稱"代血衆(zhòng)"）在臨床上的應(yīng)用日益廣泛。
[0003] 代血漿是一種輸入血管后依賴膠體滲透壓而起到擴(kuò)張及代替血容量的作用，分子 量接近血漿白蛋白的膠體溶液，在治療失血性休克時(shí)是節(jié)約用血的重要"功臣"。
[0004] 在人體出血而沒有血液供應(yīng)的情況下，需要大量晶體或膠體液的輸入，晶膠體液 本身不含有血紅蛋白，其大量的輸入并不能直接有效的增加重要臟器的供血和供氧，相反 還會(huì)加速機(jī)體內(nèi)環(huán)境的紊亂，嚴(yán)重干擾了機(jī)體的保護(hù)性機(jī)制，從而加重出血。國內(nèi)外的研究 表明，代血漿是解決問題的唯一出路。與常規(guī)的血液相比，代血漿具有無紅細(xì)胞表面抗原決 定簇，可避免輸血反應(yīng)，可排除適配血型之麻煩，避免了病原微生物污染血源和進(jìn)一步的交 叉感染，其保質(zhì)時(shí)間較長、易于儲(chǔ)存、運(yùn)輸比較方便。代血漿的來源廣泛，也不用依賴于穩(wěn)定 供血人群，取材方便，可保障充足供應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。因此，安全、有效、方便攜帶、可大量生產(chǎn)、使 用方便的代血漿具有廣闊的市場應(yīng)用前景。
[0005] 理想的代血漿應(yīng)具備下列條件：①無毒性，無抗原性，無致熱原；②能在血管內(nèi)存 留而產(chǎn)生暫時(shí)替代血容量的作用；③較易排出或被機(jī)體代謝，不蓄積；④在一定劑量范圍 內(nèi)，不干擾血液有形成分和凝血系統(tǒng)，不損害臟器功能，不影響機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定；⑤性質(zhì)穩(wěn) 定，允許較長期保存。目前尚無完全符合上述條件的代血漿制劑，目前臨床上使用的代血漿 主要有葡萄糖聚合物、羥乙基淀粉、明膠三大類。
[0006] 葡萄糖聚合物代血漿主要包括縮合葡萄糖(又稱409代血漿）和右旋糖酐，409代 血漿擴(kuò)容時(shí)間較短（2h左右)、沒有進(jìn)入醫(yī)保和基藥目錄，但因其價(jià)格便宜，在基層醫(yī)院仍有 使用；右旋糖酐的不良反應(yīng)包括嚴(yán)重過敏、過敏性休克、誘發(fā)腎衰竭，已較少用于擴(kuò)充血容 量。
[0007] 羥乙基淀粉代血漿，主要用于預(yù)防和治療各種原因造成的低血容量。2013年，歐 盟、美國、加拿大等國外藥品管理部門就含羥乙基淀粉類藥品對(duì)特定健康條件患者的腎損 傷及死亡率增高風(fēng)險(xiǎn)陸續(xù)發(fā)布了多項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)控制措施。中國國家食品藥品監(jiān)督管理總局為此 統(tǒng)一修改含羥乙基淀粉說明書，因含羥乙基淀粉類藥品在特定健康條件的患者中存在著死 亡率升高、腎損害及過量出血等風(fēng)險(xiǎn)，國家食品藥品監(jiān)督管理總局同時(shí)建議醫(yī)務(wù)人員和患 者應(yīng)充分重視此類藥品的安全性問題，詳細(xì)了解含羥乙基淀粉類藥品的禁忌癥、不良反應(yīng)、 注意事項(xiàng)、相互作用。
[0008] 明膠代血漿具有最好的血液相容性，根據(jù)交聯(lián)劑的不同又分為脲聯(lián)明膠 (Polyeline，聚明膠肽）和改良液體明膠（ModifiedFluidGelatin，琥?白酰明膠）。目前市 場上所用的聚明膠肽（脲聯(lián)明膠）的代表產(chǎn)品為菲克雪濃，是用健康的牛骨、豬骨的明膠蛋 白經(jīng)熱降解后生成明膠水解蛋白，再經(jīng)尿素交聯(lián)而支撐的一種多肽，平均分子量為27500-39500kDa，滲透壓、PH、相對(duì)粘度都與血漿一致，擴(kuò)容效果確切，不在體內(nèi)蓄積，易于清除，半 衰期為4-6小時(shí)，并含有與血清相當(dāng)濃度的電解質(zhì)，不會(huì)引發(fā)容量治療產(chǎn)生的電解質(zhì)紊亂， 所含鈣離子也更有助于凝血功能。明膠代血漿對(duì)人體內(nèi)環(huán)境影響較輕微，不影響凝血機(jī)制、 不損害腎臟功能，合理使用的情況下無劑量使用限制。
[0009]目前，制備明膠代血漿的原料主要來源于豬、牛等動(dòng)物的皮和骨，因可能攜帶如口 蹄疫、瘋牛病等流行疾病，存在致病性、過敏性等安全風(fēng)險(xiǎn)；而已有報(bào)道采用來源于驢皮、海 狗皮等制備的代血漿則存在原料成本太高的問題。采用魚鱗明膠制備代血漿，則有效規(guī)避 了上述風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)控制了生產(chǎn)成本，探索了一條新來源、制備安全有效的代血漿的新途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的在于提供一種以魚鱗明膠提取的含有多肽、氨基酸等物質(zhì)的供注射 用的明膠代血漿注射液及其制備方法。
[0011] 針對(duì)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案： 一種魚鱗明膠代血漿注射液的制備方法，所述制備方法如下： 1、 魚鱗明膠的降解：將魚鱗明膠用一定量的60~90°C注射用水溶解，用pH調(diào)節(jié)劑調(diào) 節(jié)魚鱗明膠溶液的pH值至5. 5~6. 5,將魚鱗明膠溶液加溫至110~130°C，至相對(duì)粘度達(dá) 到1. 7~2. 0時(shí)，停止加熱，并冷卻至30~40°C得到魚鱗明膠降解液； 2、 交聯(lián)改性：調(diào)節(jié)魚鱗明膠降解液使其pH值至8. 5~9. 5,保持溫度在30~40°C，加 入交聯(lián)劑，不斷攪拌，交聯(lián)1~3h; 3、 加電解質(zhì)：向魚鱗明膠交聯(lián)液中補(bǔ)加一定量的注射用水，加入氯化鉀、氯化鈉、氯化 鈣，全部溶解后調(diào)pH值至6. 5~7. 5 ; 4、 吸附：向補(bǔ)加過電解質(zhì)的魚鱗明膠液中加入活化處理的活性炭，加熱至90~110°C 并保溫20~50分鐘，冷卻降溫，靜置沉淀，上清液過濾； 5、 過濾：加入剩余量的注射用水，調(diào)pH值至6. 8~7. 2,用多孔鈦棒和微孔濾膜組合分 級(jí)過濾，先通過多孔鈦棒，再通過微孔濾膜； 6、 灌封、滅菌、燈檢、包裝； 上述步驟1中pH調(diào)節(jié)劑為鹽酸溶液或氫氧化鈉。
[0012] 上述步驟1中注射用水用量為注射液總體積量的30~50%。
[0013] 上述步驟3中注射用水用量為注射液總體積量的40~50%。
[0014] 上述步驟2中交聯(lián)劑是琥珀酸酐(別名：丁二酸酐或2, 5-二氧四氫呋喃)，琥珀酸 酐與魚鱗明膠的質(zhì)量比，g/g，為0.005~0.02 : 1。
[0015] 上述步驟3中氯化鉀、氯化鈉、氯化鈣的添加量需保證滿足魚鱗明膠代血漿注射 液的鉀、鈉、I丐（μmol/ml)的濃度分別滿足2~4μmol/ml、139~152μmol/ml、0. 2~ 2μmol/ml〇
[0016] 上述步驟4中活性炭與明膠液的質(zhì)量體積比，g/ml,為0. 001~0. 015 :1。
[0017] 上述步驟5中多孔鈦棒和微孔濾膜組合分級(jí)過濾指依次通過10μπι的多孔鈦棒、 0. 45μm的微孔濾膜、0. 22μm的微孔濾膜。
[0018] 上述步驟6中灌封規(guī)格是：250ml: 1.6g(以含氮量計(jì))，滅菌為采用115°C滅菌 30分鐘。
[0019] 本發(fā)明的有益效果主要是： 1、采用魚鱗明膠制備代血漿注射液，既保證了原料低廉的成本，又避免了來源于豬、牛 等動(dòng)物的明膠原料因可能攜帶如口蹄疫、瘋牛病等流行疾病，而對(duì)人體造成的潛在安全風(fēng) 險(xiǎn)，魚鱗明膠代血漿具有更高的生物安全性。
[0020] 2、使用琥珀酸酐做交聯(lián)劑，對(duì)人體無毒副作用，反應(yīng)條件能準(zhǔn)確控制，交聯(lián)程度 高，確保交聯(lián)產(chǎn)物符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。
[0021] 3、通過添加適量的氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣等電解質(zhì)，保證了大量輸入魚鱗明膠代 血漿時(shí)不會(huì)引起電解質(zhì)紊亂，同時(shí)符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。
[0022] 4、采用多孔鈦棒和微孔濾膜組合分級(jí)過濾，制劑中的大顆粒雜質(zhì)被10μπι的多孔 鈦棒去除，微孔濾膜也分為