一種地龍生物活性小肽有效部位組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種具有祛斑美白作用的中藥有效部位組合物及其制備方法，具體地 說從地龍、白芍、白術(shù)、白茯苓中提取的中藥有效部位組合物及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)代生活中，由于生理機(jī)能和外部環(huán)境及亂用化妝品等諸多不良因素，在臨床中 就出現(xiàn)了很多，面部患有妊辰斑，雀斑，黃褐斑，日曬斑，粉刺，青春痘，紅血絲，化妝品引起 的鉛沉積（鉛臉），等色素沉積，這是現(xiàn)代女性面部皮膚一種很常見的現(xiàn)象。愛美是每個(gè)女 性共有的心理特別是面部，可一旦面部出現(xiàn)了妊辰斑，雀斑，黃褐斑，日曬斑，粉刺，青春痘， 紅血絲及使用化妝品引起的鉛沉積（鉛臉）等色素沉積現(xiàn)象就會(huì)痛苦不已，影響面部美觀。 因此，對(duì)色素斑及萎黃的合理預(yù)防治療具有非常重要的意義。
[0003] 地龍（Earthworm)是環(huán)節(jié)動(dòng)物門寡毛綱類動(dòng)物，是我國(guó)傳統(tǒng)的一味中藥。地龍具 有廣泛的藥理作用，效果顯著，如溶栓和抗栓、抗腫瘤、平喘、促進(jìn)皮膚修復(fù)、抗菌等作用。地 龍?bào)w中富含蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)總量約占干重的40%~70%，包括蚓激酶、類蛋白、鈣調(diào)素結(jié)合蛋 白、地龍新鈣結(jié)合蛋白和蚓激酶等。目前，地龍的應(yīng)用主要包括傳統(tǒng)中藥煎服或制成地龍粉 直接服用的形式入藥，以及生產(chǎn)制備天然的具有溶栓、抗栓和抗腫瘤等作用的大分子蛋白 提取物。此外，地龍還是一種良好的生產(chǎn)肽類物質(zhì)的原料，如具有防治高血壓和抗菌等方面 應(yīng)用的地龍肽制品。但還未見報(bào)道采用地龍制備活性肽應(yīng)用于祛斑美白產(chǎn)品的開發(fā)，而且 采用地龍作為原料開發(fā)制備肽的過程中，仍存在制備分離過程繁雜，制備目標(biāo)肽分子量過 大以及分布范圍過廣，針對(duì)性不強(qiáng)等問題。
[0004] 白茍、白術(shù)和白茯苓皆源于我國(guó)傳統(tǒng)古方"三白湯"，是傳統(tǒng)的潤(rùn)澤皮膚、美白的藥 物。在中醫(yī)理論中，白芍味甘、酸，性微寒，有養(yǎng)血的作用，可以治療面色萎黃、面部色斑、無 光澤；白術(shù)性溫，味甘、苦，有延緩衰老的功效；白茯苓味甘、淡，性平，能祛斑祛痘增白?，F(xiàn) 代的藥理研究也證實(shí)了上述各藥的美容作用：白芍有清除自由基、抗氧化的作用；白術(shù)、白 茯苓可以增強(qiáng)免疫功能，擴(kuò)張血管。
[0005] 目前，市面上的祛斑美白產(chǎn)品中含有微量鉛元素或有效部位的藥效成分含量少， 作用差。雖然能有效達(dá)到祛斑美白的目的，但是長(zhǎng)期使用，對(duì)身體有害，而且易出現(xiàn)鉛汞毒 導(dǎo)致的反彈斑。本發(fā)明為純中藥有效部位提取的有效成分，作用效果顯著且對(duì)身體健康無 副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有祛斑美白作用的中藥有效部位組合物； 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述中藥組合物的制備方法和用途。
[0007] 本發(fā)明的第一目的：以地龍小肽、白芍總苷、白術(shù)總多糖和白茯苓總多糖為原料， 加入適當(dāng)藥用輔料，制成相關(guān)的劑型。
[0008] 本發(fā)明藥物的組合物的原料藥的組成及配比為：地龍小肽2~5重量份、白芍總 苷5~14重量份、白術(shù)總多糖2~5重量份、白茯苓總多糖8~15重量份。
[0009] 本發(fā)明中藥藥物組合物優(yōu)選的組成及配比為：地龍小肽3重量份、白芍總苷8重量 份、白術(shù)總多糖4重量份、白茯苓總多糖10重量份。
[0010] 上述地龍小肽有效部位中小肽的含量不低于提取物的50%，白芍總苷有效部位中 總苷不低于提取物的80%，白術(shù)總多糖有效部位中總多糖不低于提取物的40%，白茯苓總多 糖有效部位中總多糖不低于提取物的85%。
[0011] 該藥物組合物可以加入相應(yīng)輔料，適合于本發(fā)明的劑型選自口服制劑、外用制劑 或注射劑?？诜苿┻x自片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、滴丸、糖漿劑、合劑、露劑、泡騰 劑、糊劑、乳劑、茶劑、口服液、懸浮劑（干懸劑或懸浮液）或茶劑等；外用制劑選自凝膠劑、 膏劑（貼膏劑、凝膏劑或軟膏劑）、搭劑、洗劑、涂抹劑、膏藥、霜?jiǎng)④浉鄤?、栓劑等；注射?選自針劑（注射劑）、輸液或凍干粉針等?？刹捎帽绢I(lǐng)域熟知的制劑技術(shù)手段制備得到本發(fā) 明的組合物。然后可以再加入其他具有祛斑美白作用的有效部位、有效成分、化學(xué)合成品或 者半合成品，然后再加入相應(yīng)輔料，適合于本發(fā)明的口服制劑、外用制劑或注射劑中的任意 一種。
[0012] 本發(fā)明中藥組合物的制備方法包括以下步驟： ①地龍小肽的制備：取地龍，適當(dāng)粉碎，加15倍量水勾衆(zhòng)lOmin，加熱煮沸15min，放冷 至室溫，采用鹽酸調(diào)pH至2. 0,然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40°C條件下酶解lh，然后 采用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8. 0,加入底物量1%的胰蛋白酶，在40°C條件下酶解3h，時(shí)時(shí) 攪拌并調(diào)節(jié)pH在8. O范圍內(nèi)，酶解完畢后繼續(xù)升溫煮沸15min，放冷，離心，收集上清液，調(diào) 節(jié)pH7. 0,加入1%的活性炭，攪拌均勻，濾過，濾液用截留相對(duì)分子質(zhì)量為3kD的中空纖維膜 進(jìn)行超濾，收集透過液，再以截留相對(duì)分子質(zhì)量為200D的陶瓷膜進(jìn)行納濾，收集未透過液， 減壓濃縮，干燥，得地龍小肽；其中地龍小肽的含量為40%~70%。
[0013] 白芍總苷的制備：取白芍，加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占 總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，OV流量2ml/g生藥·π?η，萃取 時(shí)間160min，得超臨界萃取物，加入70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功 率500W，萃取2次，每次6分鐘，每次加入的70%乙醇的量為藥材重量的2倍，得萃取液，濃 縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇， 濃縮并干燥，得白芍總苷提取物。其中芍藥苷的含量60%~80%。
[0014] 白術(shù)總多糖的制備：取白術(shù)，適當(dāng)粉碎，加10倍量的體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇，加熱 回流I. 5h，過濾，收集殘?jiān)⒓尤?0倍量的蒸餾水90°C的條件下加熱回流3h，過濾，殘?jiān)?6倍量蒸餾水洗滌兩次，收集濾液，濃縮，干燥，得白術(shù)總多糖。
[0015] 白茯苓總多糖的制備：取白茯苓藥材，粉碎成粗粉，加10倍量的水煎煮2次，第一 次3h，第二次2h，合并提取液，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2. 0左右，放置過夜，過濾，濾液過DlOl 大孔吸附樹脂柱，用6倍量水洗脫樹脂柱，流出液繼續(xù)過AB-8大孔吸咐樹脂柱，用6倍量水 洗脫樹脂柱，再用95%乙醇以2BV/h的速度洗脫，收集8BV的洗脫液，減壓回收乙醇至盡，真 空干燥即得白茯苓提取物。
[0016] 按照比例取上述小肽、總苷和總多糖，不加輔料或加入輔料，制成藥學(xué)上可以接受 的劑型。
[0017] 其中，各樹脂的型號(hào)可以是 HPD-100、HPD-400、HPD600、HPD-700、DlOl、AB-8。
[0018] 地龍小肽、白芍總苷、白術(shù)總多糖、白茯苓總多糖的含量測(cè)定方法為：地龍小肽的 含量測(cè)定方法為：取比伐蘆定對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并制成每ImL含15. 08mg 的溶液，精密量取對(duì)照品溶液〇,〇. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. OmL，分別置具塞試管中，各加水至 L 0mL，再分別加入雙縮脲試劑4. OmL，立即混勻，室溫放置30min，照紫外-可見分光光度 法，在540nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A);同時(shí)以0號(hào)管為空白。另精密取土鱉蟲仿生酶解 小肽0. 4g，精密加水40mL，超聲處理（功率250W，頻率40Hz，30min，濾過，精密量取續(xù)濾液 1.0 mL，同法測(cè)定。從線性回歸方程計(jì)算供試品溶液中蛋白濃度，并乘以稀釋倍數(shù)，計(jì)算，即 得。
[0019] 白芍總苷的測(cè)定方法：色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4. 6_ X 250_， 5 μ m);流動(dòng)相：乙腈（A)-O. 1%磷酸水溶液（B)，梯度洗脫，洗脫程序見表1 ;流速：1. OmL/ min ;檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm ;柱溫：25°C ; 表1液相系統(tǒng)洗脫程序
另取本品中粉約〇. lg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀乙醇約35ml，超聲處理30min，取 出，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，經(jīng)0. 45um的微孔濾膜濾過。取芍藥苷約23mg，精密稱定， 置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；精密吸取芍藥苷對(duì)照品和供試品溶液各10 μ 1， 注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0020] 白術(shù)總多糖的測(cè)定方法：精密取葡萄糖對(duì)照品溶液（0.1 mg / ml) 0, 2,4,6,8, IOml 于IOml量瓶中，加水定容，精密移取I. 〇ml，加5%苯酚1.0 ml和濃硫酸5. 0ml，搖勻，放置 5min，于40°C水浴加熱20min，冷卻至室溫，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。另精密稱取精制 多糖IOlmg于100mL量瓶中，加水溶解定容，搖勻。移取溶液2. 5ml于50ml量瓶中，加水 定容，搖勻，為供試品溶液。精密移取供試液1.0 ml于具塞試管中，計(jì)算出多糖供試液中 以葡萄糖計(jì)的濃度和換算因子f=l.