一種用于增強(qiáng)免疫力的蠶蛹生物活性小肽組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種具有增強(qiáng)免疫力作用的中藥有效部位組合物及其制備方法，具體 地說(shuō)從蠶蛹、黃芪、茯苓、枸杞子、淫羊藿、人參、甘草中提取的中藥有效部位組合物及其制 備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 人們通常把人體對(duì)外來(lái)侵襲、識(shí)別和排除異物的抵抗力稱為"免疫力"，現(xiàn)代免疫 學(xué)認(rèn)為，在正常情況下，機(jī)體保持平衡狀態(tài)，并依靠免疫功能，抵抗各種感染，清除體內(nèi)有害 物質(zhì)，當(dāng)免疫功能異常時(shí)，自身平衡被打破，導(dǎo)致多種自身免疫性疾病，因此，免疫力是人體 識(shí)別和排除"異己"的生理反應(yīng)，主要通過(guò)免疫監(jiān)視，免疫穩(wěn)定和免疫防御來(lái)保持機(jī)體免受 致病物質(zhì)的侵害，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。隨著人們生活節(jié)奏及人口老齡化進(jìn)程的不斷加 快，工作繁忙，家庭不和諧，工業(yè)污染及等原因使的現(xiàn)代人的免疫力越來(lái)越弱，長(zhǎng)此以往，出 現(xiàn)了很多亞健康問(wèn)題，如：營(yíng)養(yǎng)不良、體質(zhì)虛弱、精神萎靡、身倦無(wú)力等等，這些癥狀在幾乎 所有成年人身上都有不同程度的表現(xiàn)，尤以中老年人最為突出。因此增強(qiáng)免疫力，提高人體 對(duì)病原的抵抗能力已成為當(dāng)今人們?nèi)找嬷匾暤囊粋€(gè)重大問(wèn)題，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步及公眾 健康意識(shí)的增強(qiáng)，免疫增強(qiáng)劑的醫(yī)療、保健作用越來(lái)越受到重視，各種保健品應(yīng)運(yùn)而生。
[0003] 中醫(yī)氣血津液理論和現(xiàn)代免疫學(xué)基本理論存在著廣泛聯(lián)系。中醫(yī)虛證可見于多種 疾病過(guò)程中，其病因或由先天稟賦不足，或由后天失養(yǎng)，或由久病耗傷，或由勞倦過(guò)度等。中 醫(yī)理論指出："正氣存內(nèi)，邪不可干""邪之所腠，正氣必虛"，人體正氣強(qiáng)盛，可以控制邪氣， 使其不能發(fā)病；如果正氣虛衰，則邪氣易侵入機(jī)體而引起疾病，因此，中醫(yī)提出了"扶正祛 邪"的基本治療法則。扶正是指扶助機(jī)體正氣，增強(qiáng)體質(zhì)，提高機(jī)體抗邪、抗病能力的一種治 療原則，通過(guò)增強(qiáng)正氣的方法，驅(qū)邪外出，恢復(fù)健康狀況。意在用"扶正"的中草藥解決氣血 兩虛、肝腎不足、脈絡(luò)不通等常見中醫(yī)虛證用，這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)增強(qiáng)機(jī)體免疫力的方法是一致 的。
[0004] 免疫增強(qiáng)劑是近些年來(lái)出現(xiàn)的新藥物，目前臨床上應(yīng)用的免疫增強(qiáng)劑種類繁多， 效果各異，有些屬于治標(biāo)不治本，有些價(jià)格昂貴，且多為化學(xué)合成藥物，存在毒副殘留等弊 端。因此尋找特性確定、高效、穩(wěn)定、無(wú)毒的理想免疫增強(qiáng)劑將是未來(lái)抗御疾病的主要物質(zhì)。 中草藥作為天然藥物，其資源豐富、成本低廉，并且具有毒副作用小、無(wú)殘留、作用廣泛、不 易產(chǎn)生抗藥性、多靶點(diǎn)等特點(diǎn)，成為免疫增強(qiáng)劑的首選。而許多研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)扶正天然 物中草藥及少數(shù)祛邪類天然物中草藥具有促進(jìn)免疫的作用，并具有毒副作用小，多功能作 用、雙相（向）調(diào)節(jié)作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有增強(qiáng)免疫力作用的中藥有效部位組合物； 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述中藥組合物的制備方法和用途。
[0006] 本發(fā)明的第一目的：以蠶蛹小肽、黃芪茯苓枸杞子總多糖、淫羊藿總黃酮和人參甘 草總皂苷為原料，加入適當(dāng)藥用輔料，制成相關(guān)的劑型。
[0007] 本發(fā)明藥物的組合物的原料藥的組成及配比為：蠶蛹小肽6~12重量份、黃芪茯 苓枸杞子總多糖3~9重量份、淫羊藿總黃酮2~4重量份、人參甘草總皂苷2~4重量 份。
[0008] 本發(fā)明中藥藥物組合物優(yōu)選的組成及配比為：蠶蛹小肽9重量份；黃芪茯苓枸杞 子總多糖6重量份；淫羊藿總黃酮3重量份；甘草總皂苷3重量份。
[0009] 上述小肽有效部位中小肽的含量為50%~90%，總多糖有效部位中黃芪多糖的含 量為5%~10%，枸杞多糖的含量為1%~5% ;總黃酮有效部位中淫羊藿苷的含量為5%~ 10% ;總皂苷有效部位中人參皂苷Rgl和人參皂苷Re的總量為0. 5%~1%，人參皂苷Rbl的 含量為〇. 5%~2%，甘草苷的含量為1%~5% ; 該藥物組合物可以加入相應(yīng)輔料，制成丸劑、片劑、顆粒劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑中的任 一種。然后可以再加入其他具有增強(qiáng)免疫力的有效部位、有效成分、化學(xué)合成品或者半合成 品，然后再加入相應(yīng)輔料，制成丸劑、片劑、顆粒劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑中的任一種。
[0010] 本發(fā)明中藥組合物的制備方法包括以下步驟： ①蠶蛹小肽的制備：取蠶蛹，適當(dāng)粉碎，加10倍量水勾衆(zhòng)5~15min，加熱煮沸15min， 放冷至室溫，采用鹽酸調(diào)pH至2. 0 ±0. 1，然后加入底物量1%的胃蛋白酶，在40°C條件下酶 解2h，然后采用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8±0. 1，加入底物量1%的胰蛋白酶，在40°C條件 下酶解4h，時(shí)時(shí)攪拌并調(diào)節(jié)pH在8±0. 1范圍內(nèi)，酶解完畢后繼續(xù)升溫煮沸15min，放冷，離 心，收集上清液，調(diào)節(jié)PH6. 5~7. 0,加入2%的活性炭，攪拌均勾，濾過(guò)，濾液用截留相對(duì)分 子質(zhì)量為3kD的中空纖維膜進(jìn)行超濾，收集透過(guò)液，再以截留相對(duì)分子質(zhì)量為150D~300D 的陶瓷膜進(jìn)行納濾，收集未透過(guò)液，減壓濃縮，干燥，得蠶蛹小肽；其中蠶蛹小肽的含量為 50% ~90%。
[0011] ②黃芪茯苓枸杞子總多糖的制備：取黃芪3重量份、茯苓2重量份和枸杞子1重量 份，加14倍量水提取2次，每次2h，濾過(guò)，濾液合并，減壓濃縮至每ml含lg生藥，加乙醇至 含醇量40%，冷藏靜置12h，濾過(guò)，濾液繼續(xù)加乙醇至含醇量80%，收集沉淀，反復(fù)純化沉淀， 加5~20倍量水使充分溶解，加入0. 5%~5%鞣酸，混勻，靜置12h，離心，取上清液加入 0. 5%~5%活性炭，于80°C保溫脫色3次，每次0. 5h，濾過(guò)，濾液減壓濃縮，干燥，得黃芪茯苓 枸杞子總多糖；其中黃芪多糖的含量為5%~10%，枸杞多糖的含量為1%~5%。
[0012] ③淫羊藿總黃酮的制備：取淫羊藿，加10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1. 5h， 濾過(guò)，濾液合并，減壓回收乙醇，加水稀釋濃縮液，按照樹脂量：藥材量為1:1通過(guò)大孔樹脂 柱，先以5~10倍量去離子水洗脫，再以5~10倍量70%乙醇以2BV/h的速度進(jìn)行洗脫， 收集4BV洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得淫羊藿總黃酮；最后采用50~60°C熱堿液 和95%乙醇再生樹脂，進(jìn)行下一輪純化；其中淫羊藿苷的含量為5%~10%。
[0013] ④人參甘草總皂苷的制備：取人參2重量份和甘草1重量份，適當(dāng)粉碎，加12倍量 水提取2次，每次2h，濾過(guò)，濾液合并，減壓濃縮至每lml含lg生藥，按照樹脂量：藥材量為 1:1通過(guò)大孔樹脂柱，先以5~10倍量去離子水洗脫，再用5~10倍量pH為8~9的50% 乙醇以2BV/h的速度進(jìn)行洗脫，收集4BV洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得人參甘草總 皂苷；最后采用50~60°C堿液和95%乙醇進(jìn)行再生樹脂，進(jìn)行下一輪純化；其中人參皂苷 Rgl和人參皂苷Re的含量為0. 5%~1%，人參皂苷Rbl的含量為0. 5%~2%，甘草苷的含 量為1%~5%。
[0014] ⑤按照比例取上述蠶蛹小肽、黃芪茯苓枸杞子總多糖、淫羊藿總黃酮、人參甘草總 皂苷，不加輔料或加入輔料，制成藥學(xué)上可以接受的劑型。
[0015] 本發(fā)明中采用的大孔吸附樹脂可以使丙烯酸類、苯乙烯類、甲基丙烯酸酯類等常 用樹脂，如D101、D201、AB-8等；采用的水洗脫均為去離子水。
[0016] 蠶蛹小肽采用比色法測(cè)定多肽的含量。測(cè)定方法如下：（1)對(duì)照品溶液的制備： 稱取l〇mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加水適量溶解至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。（2) 供試品溶液的制備：取本發(fā)明組合物〇. 2g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度， 搖勻，備用。（3)測(cè)定法：精密量取對(duì)照品溶液0. 0ml，0. 2ml，0. 4ml，0. 6ml，0. 8ml，1. 0ml。 分別置具塞試管中，各加水至1. 〇ml，再分別加堿性銅試液1. 0ml，搖勻，各加入福林酚試液 4. 0ml，立即混勾，置55°C水浴中反應(yīng)5min，取出，置冷水浴中冷卻lOmin，照紫外-可見分光 光度法，以0號(hào)管為空白，在650nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。 取上述供試品溶液lml，置具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自"分別加堿性銅試 液1. 0ml"起，依法測(cè)定吸光度A，將吸光度A代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品含量。（4)結(jié)果以多肽 含量計(jì)，比色法測(cè)定蠶蛹小肽中總肽的含量不低于50%。
[0017] 黃芪茯苓枸杞子總多糖的含量測(cè)定方法為以無(wú)水葡萄糖作對(duì)照比色法測(cè)定總糖 的含量。測(cè)定方法如下：（1)對(duì)照品溶液的制備：精密稱取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品25mg，置250ml 量瓶中，加水適量溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得（每lml中含無(wú)水葡萄糖0.lmg)。（2)供試 品溶液的制備：取本發(fā)明組合物0. 2g，精密稱定，加乙醚100ml。加熱回流1小時(shí)，靜置，放 冷，小心棄去乙醚液，殘?jiān)盟∩蠐]盡乙醚。加入80 %乙醇100ml，加熱回流1小時(shí)，趁熱 濾過(guò)，濾渣與濾器用熱80%乙醇30ml分次洗滌，濾渣連同濾紙置燒瓶中，加水150ml，加熱 回流2小時(shí)。趁熱濾過(guò)，用