一種抑制ras原癌基因過表達(dá)的抗腫瘤中藥復(fù)方提取物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方提取物及其制備工藝，具體的講該中藥復(fù)方由人參、麥 冬組成，具體涉及中藥復(fù)方提取物在抑制ras原癌基因過表達(dá)中的應(yīng)用和在制備抑制ras 原癌基因突變后過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，屬抗腫瘤藥物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，惡性腫瘤已經(jīng)成為人類的頭號殺手，嚴(yán)重的危害著人類的健康，世界衛(wèi)生組 織的資料表明，每年全世界腫瘤的發(fā)病為1000萬人，死亡約700萬人，我國每年癌癥每年的 新發(fā)病例為200萬，因癌癥死亡的約為140萬，我國居民死亡5人中，即有1人死于癌癥。
[0003] 約30%的人類腫瘤是由于ras原癌基因突變后激活導(dǎo)致RAS蛋白表達(dá)水平增高造 成的。若RAS蛋白持續(xù)處于活化狀態(tài)，可與下游的效應(yīng)蛋白結(jié)合，將信號傳遞到下游信號元 件，引起細(xì)胞的異常增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，以ras信號通路為靶標(biāo)的抗腫瘤治療已成為腫 瘤治療學(xué)的研究熱點，因此，ras原癌基因已成為公認(rèn)的篩選抗相關(guān)惡性腫瘤藥物的靶標(biāo)。
[0004] RAS蛋白在調(diào)控幾種參與調(diào)節(jié)正常細(xì)胞增生的重要信號通路方面具有重要的作 用，所以以RAS蛋白和RAS蛋白所調(diào)控的信號通路為靶標(biāo)的腫瘤治療，在治療由ras原癌基 因突變所導(dǎo)致的腫瘤中具有非常重要的價值。2005年12月20日美國FDA批準(zhǔn)的晚期腎細(xì) 胞癌治療藥Nexavar，其直接靶標(biāo)就是Ras信號途徑，可抑制Raf/MEK/ERK信號傳導(dǎo)通路， 直接抑制腫瘤生長；以ras效應(yīng)子通路為靶標(biāo)的激酶抑制劑如ID1839和0SI774,其可有效 地阻斷EGFR酪氨酸激酶的活性并在某種程度也能抑制ERBB蛋白家族的其它成員，但這些 都不是直接針對ras的藥物。以ras蛋白為靶標(biāo)的法尼基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑也可以抑制其它 大部分蛋白的法尼基化（可能包括一些正常人體蛋白），但也存在特異性差的問題，因此， 開發(fā)安全高效的治療ras原癌基因過度激活的抗腫瘤藥物是當(dāng)務(wù)之急。
[0005] 我國中藥在臨床腫瘤治療方面取得了一定療效，且毒性較低，為腫瘤的預(yù)防和治 療開辟了一條新路。
[0006] 人參為五加科植物人參（Panax ginseng C.A. Mey)的干燥根及根莖，主要活性成 分為人參阜苷和人參多糖。人參具有大補(bǔ)元氣、補(bǔ)脾益肺、生津安神益智，抗疲勞，抗腫瘤， 抗休克，降血脂等功效。
[0007] 麥冬是百合科多年生草本植物麥冬（Ophiopogon japonicus (Thumb) Ker-Gawl)的 干燥塊根。麥冬性微寒，味甘，微苦，具有，具有滋陰益精、養(yǎng)陰益氣、清心除煩、潤腸通便等 功效，是常用中藥之一。麥冬具有廣泛的藥理作用，例如抗心肌缺血，抗心律失常，抗衰老， 抗腫瘤，免疫調(diào)節(jié)等作用。
[0008] 迄今為止，沒有文獻(xiàn)報道過含有人參、麥冬的中藥復(fù)方能夠抑制ras原癌基因突 變后的過表達(dá)，市場上也沒有以含有人參、麥冬的為原料的中藥復(fù)方提取物能夠?qū)Ｐ砸种?由ras原癌基因突變后過表達(dá)導(dǎo)致的抗腫瘤藥物。而本發(fā)明根據(jù)人參、麥冬的特性，經(jīng)過 艱苦努力，通過大量篩選分析，研制了一種治療ras原癌基因過度激活的腫瘤的中藥復(fù)方， 該中藥復(fù)方通過下調(diào)原癌基因 Ras通路的過度激活，達(dá)到治療腫瘤的目的，且毒性低，無致 畸作用，適于在制備由ras原癌基因突變后過表達(dá)引起的相關(guān)抗惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用， 可以與任何一種藥學(xué)上可以接受的輔料混合制成各種劑型，有望開發(fā)成新一代的抗腫瘤藥 物。
[0009] 在制備該中藥復(fù)方提取物的過程中發(fā)現(xiàn)，僅水煎處理就可以顯著抑制ras基因通 路的過度激活，但毒性大，安全性差。因此，該發(fā)明公開了一種該中藥復(fù)方提取物的制備工 藝，對該復(fù)方用無水乙醇進(jìn)行回流提取，并且在醇提的基礎(chǔ)上，通過大孔樹脂對其進(jìn)行進(jìn)一 步分離純化，分離純化后的成分不僅保留了水煎劑抑制ras原癌基因過表達(dá)的作用，并且 大大降低了中藥復(fù)方水煎劑的毒性，因此效果更好，可在制備抑制ras原癌基因過表達(dá)的 抗相關(guān)惡性腫瘤的藥物中應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是提供一種中藥復(fù)方提取物的制備工藝，具體的講該中藥復(fù)方由人 參、麥冬組成，以期提供一種抗腫瘤活性高，毒性小，廉價的中藥復(fù)方提取物，本發(fā)明的另一 目的是提供一種中藥復(fù)方提取物的新用途，具體涉及該中藥復(fù)方提取物在抑制ras原癌基 因過表達(dá)中的應(yīng)用和在制備抑制ras原癌基因突變后過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實施。
[0012] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，其中該中藥復(fù)方由人參、麥冬組成，該中藥復(fù) 方提取物是由下列方法制備的：取人參、麥冬，加入乙醇溶液，浸泡，加熱回流，過濾，減壓濃 縮，得總浸膏；將總浸膏用蒸餾水完全溶解，上大孔樹脂柱，吸附24h，之后用洗脫液洗脫， 洗脫液濃縮至稠膏，干燥，即得。
[0013] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，以人參、麥冬為原料制成，所述原料藥的質(zhì)量 比為4. 5~9 :4· 5~9。
[0014] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，以人參、麥冬為原料制成，所述原料藥的質(zhì)量 比為9 :4. 5。
[0015] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，所述的回流提取時的乙醇溶液為無水乙醇。
[0016] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，所述的大孔樹脂為DlOl型大孔樹脂。
[0017] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，所述的中藥復(fù)方總浸膏分離純化洗脫時的洗 脫量為10倍柱體積。
[0018] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，所述中藥提取物總浸膏在分離純化時所用的 洗脫液是乙醇溶液。
[0019] 本發(fā)明所述的一種中藥復(fù)方提取物，所述中藥提取物總浸膏在分離純化時洗脫時 的乙醇溶液是無水乙醇。此時，在保證中藥復(fù)方提取物藥效的同時，幾乎不顯示毒性。
[0020] 本發(fā)明為中藥復(fù)方提取物，所述的腫瘤是由ras原癌基因突變后過表達(dá)導(dǎo)致的。
[0021] 本發(fā)明為中藥復(fù)方提取物在抑制ras原癌基因過表達(dá)中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明所述的中藥復(fù)方提取物在制備治療抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，可以將中藥復(fù)方 提取物添加藥學(xué)上可接受的載體如填充劑、潤滑劑、濕潤劑、促進(jìn)吸收劑、吸附載體、稀釋 劑、賦形劑等，必要時可加入甜味劑、香味劑等，制備成注射劑、散劑、顆粒劑、粉劑、丸劑、口 服液、片劑等藥物的多種劑型，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的。
[0023] 有益效果：本發(fā)明提供一種治療ras原癌基因過表達(dá)的腫瘤的中藥復(fù)方提取物及 其在制備治療相關(guān)惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用，和現(xiàn)有的技術(shù)相比有以下的優(yōu)點：
[0024] (1)利用本發(fā)明中的制備工藝制備的中藥復(fù)方提取物效果好，能顯著降低毒性，使 評估抑制ras原癌基因通路過度激活藥物的模型秀麗隱桿線蟲的死亡率降低，野生型比例 升1?。
[0025] (2)利用本發(fā)明中的制備工藝制備的中藥復(fù)方提取物可以顯著抑制ras原癌基因 過表達(dá)，可在制備治療由ras原癌基因過表達(dá)導(dǎo)致的腫瘤藥物中應(yīng)用。
[0026] (3)中藥復(fù)方中人參、麥冬之間的組方配比可以根據(jù)中藥組方原則合理改動，利用 本發(fā)明中的制備工藝制備的中藥復(fù)方提取物其仍然可以顯著下調(diào)ras原癌基因過度激活， 具有抗腫瘤活性。
[0027] (4)利用本發(fā)明中的制備工藝制備的中藥復(fù)方提取物僅僅作用于過表達(dá)的突變體 RAS蛋白，而對野生型RAS蛋白無影響。提示中藥復(fù)方提取物在應(yīng)用上安全，它僅作用于癌 細(xì)胞，而不會作用于正常細(xì)胞。今后，我們有望將中藥復(fù)方提取物應(yīng)用在抗相關(guān)惡性腫瘤藥 物的制備中，其中，所述腫瘤是由ras原癌基因的過表達(dá)導(dǎo)致的，從而為此類腫瘤患者提供 更好的治療，為一些疑難癌癥的治療提供新的途徑。