一種促進皮膚傷口愈合的制劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種促進皮膚傷口愈合的制劑及其制備 方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 皮膚創(chuàng)傷愈合是皮膚組織受到損傷后的修復(fù)過程，修復(fù)過程包括炎癥反應(yīng)、細胞 增生和新生組織重塑等。炎癥反應(yīng)包括各種細胞因子、白細胞等；細胞新生包括纖維母細胞 自體增殖或是間充質(zhì)細胞分化為纖維母細胞等；組織重塑包括纖維母細胞的有序重排成有 一定功能的皮膚組織。由此，纖維母細胞是皮膚真皮中的主體細胞成分，它與自身分泌的膠 原纖維、彈性纖維及基質(zhì)成分一同構(gòu)成了真皮的主體。纖維母細胞的主要功能是：合成和分 泌膠原纖維、彈性纖維、基質(zhì)大分子物質(zhì)和某些生長因子，對維持皮膚的彈性和韌性具有重 要作用，纖維母細胞的減少也是引起皺紋產(chǎn)生的重要原因。
[0003] 基質(zhì)細胞衍生因子-1 (SDF-1)是吸引靜息T淋巴細胞、單核細胞以及造血干細胞 的趨化因子。在創(chuàng)面發(fā)生時，局部產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，生成多種細胞因子，其中包括SDF-1因子， 對細胞有趨化歸巢的作用，使得歸巢后的干細胞分化成纖維母細胞，或是歸巢的干細胞分 泌細胞因子促進血管新生，從而達到修復(fù)創(chuàng)面的作用。
[0004] 透明質(zhì)酸又名玻尿酸，是一種酸性黏多糖，在與水分子結(jié)合后可以形成具有黏彈 性的物質(zhì)。在人體內(nèi)主要存在于皮膚和結(jié)締組織中，可以作為一種提供細胞埋入的細胞基 質(zhì)物質(zhì)，除了為體內(nèi)細胞提供一定體積的外基質(zhì)外，還可以影響組織的穩(wěn)定性、結(jié)合力和粘 彈性。所有天然透明質(zhì)酸的分子結(jié)構(gòu)都是一樣的，幾乎沒有物質(zhì)之間和組織特異性的差異， 所以純的透明質(zhì)酸沒有免疫原性。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)中纖維母細胞和透明質(zhì)酸大多是應(yīng)用在美容方面，如除去皺紋、填充痘 坑等，很少有真正修復(fù)創(chuàng)面的產(chǎn)品，基質(zhì)細胞衍生因子-1大多是應(yīng)用在監(jiān)測炎癥或是某種 疾病中的表達和水平，沒有運用到用于修復(fù)創(chuàng)面的實際產(chǎn)品中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種能夠快速愈合傷口，尤其對于大面 積燒燙傷患者的創(chuàng)面具有明顯的療效，可以大大減輕患者的痛苦，顯著提高患者生活質(zhì)量 的促進皮膚傷口愈合的制劑及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明還提供一種含有基質(zhì)細胞衍生因子的制劑用于作為傷口愈合的藥物的新 用途。
[0008] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)該目的：
[0009] -種促進皮膚傷口愈合的制劑，所述制劑的原料包括透明質(zhì)酸、自體纖維母細胞 和基質(zhì)細胞衍生因子-1，所述各原料的含量為：
[0010]透明質(zhì)酸 0.05~1·0ν/ν%
[0011] 自體纖維母細胞 1. 0Χ105~7. 0X106/mL
[0012] 基質(zhì)細胞衍生因子-1 2. 0~7.Ong/mL。
[0013] 作為優(yōu)選的，所述各原料的含量為：
[0014] 透明質(zhì)酸 0· 1 ~0· 5v/v%
[0015] 自體纖維母細胞 7· 0X105~5. 0X106/mL
[0016] 基質(zhì)細胞衍生因子-1 3. 0~6.Ong/mL。
[0017] 作為進一步優(yōu)選的，所述各原料的含量為：
[0018] 透明質(zhì)酸 0·2ν/ν%
[0019] 自體纖維母細胞 2. 0X106/mL
[0020] 基質(zhì)細胞衍生因子-1 5. 0ng/mL。
[0021] 其中，所述的促進皮膚傷口愈合的制劑為肌注用液劑。
[0022] -種促進皮膚傷口愈合的制劑用于作為傷口愈合的藥物的新用途。
[0023] -種促進皮膚傷口愈合的制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0024] 步驟1 :自體纖維母細胞的分離培養(yǎng)，制成纖維母細胞懸液，活力85%以上，于2~ 8 °C保存?zhèn)溆茫?br>[0025] 步驟2 :向步驟1制備的纖維母細胞懸液中加入2. 0~7. 0ng/mL的基質(zhì)細胞衍生 因子-1，以及〇. 05~1.Ov/ν%的透明質(zhì)酸，混合均勻，制得所述制劑，于2~8°C保存?zhèn)溆谩?br>[0026] 其中，所述步驟1具體為：
[0027] 1)采集自體皮膚真皮組織置于離心管，在無菌操作條件下用細胞清洗液離心清洗 2遍，然后用眼科剪刀剪成1~2_ 2的小塊，再加細胞清洗液清洗3遍；用I型膠原酶置2~ 8°C消化8~12h，轉(zhuǎn)移置至37°C搖床消化完全；
[0028] 2)消化完畢后加入培養(yǎng)液離心，棄上清，再加入培養(yǎng)基混勻轉(zhuǎn)移到六孔板培養(yǎng)，每 3天換液，實時觀察細胞狀態(tài)并做好記錄；在細胞達到70%匯合度時，傳代培養(yǎng)，P1代細胞 達到80%的匯合度時，傳為P2代，P2代匯合度到85%時，收集5.OX105~3. 5X10 7個細 胞用5ml生理鹽水重懸，至4°C保存待用。
[0029] 其中，所述細胞清洗液包括D-Hank's液、青霉素和萬古霉素。
[0030] 其中，所述培養(yǎng)液為包含有10 %FBS的DMEM。
[0031] 其中，所述自體皮膚真皮組織取自耳后或不易碰觸到的部位。
[0032] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明的促進皮膚傷口愈合的制劑的原 料包括透明質(zhì)酸、自體纖維母細胞和基質(zhì)細胞衍生因子-1，用于作為傷口愈合的藥物，能夠 快速愈合傷口，尤其對于大面積燒燙傷患者的創(chuàng)面具有明顯的療效，可以大大減輕患者的 痛苦，顯著提高患者生活質(zhì)量，而且該制劑中各原料組分的濃度較低，成本較低。
【具體實施方式】
[0033] 以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述。
[0034] 實施例1。
[0035] 本實施例的促進皮膚傷口愈合的制劑，所述制劑的原料包括透明質(zhì)酸、自體纖維 母細胞和基質(zhì)細胞衍生因子-1，所述各原料的含量為：
[0036] 透明質(zhì)酸 0.05 ~1·0ν/ν%
[0037] 自體纖維母細胞 1.ΟΧ105~7· 0Χ106/mL
[0038] 基質(zhì)細胞衍生因子-1 2. 0~7.Ong/mL。
[0039] 本實施例的促進皮膚傷口愈合的制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0040] 步驟1 :自體纖維母細胞的分離培養(yǎng)，制成纖維母細胞懸液，活力85%以上，于2~ 8 °C保存?zhèn)溆茫?br>[0041] 步驟2 :向步驟1制備的纖維母細胞懸液中加入2. 0~7.Ong/mL的基質(zhì)細胞衍生 因子-1，以及〇. 05~1.Ov/v%的透明質(zhì)酸，混合均勻，制得所述制劑，于2~8°C保存?zhèn)溆谩?br>[0042] 實施例2。
[0043] 本實施例為在實施例1基礎(chǔ)上的進一步優(yōu)化，所述各原料的含量為：
[0044] 透明質(zhì)酸 0· 1 ~0· 5v/v%
[0045] 自體纖維母細胞 7. 0X105~5. 0X106/mL
[0046] 基質(zhì)細胞衍生因子-1 3. 0~6.Ong/mL。