新橙皮苷二氫查二酮的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)及保健品領(lǐng)域，具體涉及新橙皮苷二氫查二酮在防治爆發(fā)性 肝損傷中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 爆發(fā)性肝損傷又叫急性壞死型肝炎，臨床上亦稱急性重型肝炎。是由多種原因引 起的大量肝細(xì)胞壞死及（或）嚴(yán)重的肝功能障礙，病人短期內(nèi)發(fā)展至肝性腦病的一種綜合 征。爆發(fā)性肝損傷的發(fā)病非常迅速，病情重，死亡率高，目前仍然缺乏特異性的治療措施。由 病毒性肝炎、酗酒、服用肝毒性藥物或其它多種原因所致的肝功能衰竭是臨床常見危重癥， 每年發(fā)病數(shù)以百萬計。目前的綜合治療措施僅能使其病死率降至60%，而生物人工肝支持 系統(tǒng)和肝細(xì)胞移植的應(yīng)用雖然能夠進(jìn)一步提高患者的生存率，但肝移植仍然是目前唯一能 明顯改善患者預(yù)后的治療措施。由于供肝來源受限、手術(shù)費(fèi)用昂貴以及術(shù)后須長期服用免 疫抑制劑等，大部分患者還無法接受肝移植治療，尋找新的肝衰竭防治方法勢在必行。
[0003] 由腸源性內(nèi)毒素造成的急性肝損傷是臨床上常見的肝臟急性炎癥反應(yīng)性疾病， 常發(fā)生嚴(yán)重肝壞死和重癥肝炎表現(xiàn)，也是導(dǎo)致急性肝功能衰竭的常見原因之一。肝臟是體 內(nèi)解毒的主要器官，同時也是遭受內(nèi)毒素攻擊的首要臟器。在臨床上，各種致病因素（例 如：肝炎病毒、酒精、藥物等）可以通過其特異性的致病機(jī)制對肝臟造成原發(fā)性損傷，在此 過程中，機(jī)體常出現(xiàn)腸源性內(nèi)毒素血癥，內(nèi)毒素激活枯否細(xì)胞釋放炎性遞質(zhì)，使肝損傷不斷 加重，最終爆發(fā)肝功能衰竭，導(dǎo)致患者死亡。所以，探索內(nèi)毒素性肝損傷的防治方法，對避免 各種致病因素引起的肝臟炎癥向惡性方向發(fā)展，預(yù)防肝功能衰竭的發(fā)生具有重要意義。目 前國內(nèi)外學(xué)者多應(yīng)用D-半乳糖胺（D-galactosamine，D_GalN)造成原發(fā)性肝損傷，結(jié)合腹 腔內(nèi)或靜脈注射小劑量脂多糖（lipopolysaccharide,LPS)模擬腸源性內(nèi)毒素血癥建立肝 衰竭模型，其與HBV所致肝功能衰竭有較高的臨床相關(guān)性，是目前比較公認(rèn)的急性肝衰竭 動物模型之一。通過建立爆發(fā)性肝損傷動物模型，研究肝病的發(fā)生機(jī)制，篩選保肝藥物，探 索保肝作用原理，具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。
[0004] D-GalN/LPS致爆發(fā)性肝損傷動物模型的機(jī)制是，D-GalN是肝細(xì)胞的磷酸尿嘧啶 核苷（UTP)的干擾劑，可造成肝細(xì)胞的彌漫性壞死和炎癥，與臨床病毒性肝炎的病理變化 相似。D-GalN進(jìn)入體內(nèi)后能與磷酸尿苷結(jié)合形成磷酸尿苷-半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭， 使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物質(zhì)合成受到抑制，并限制細(xì)胞器及酶的生成和 補(bǔ)充，使細(xì)胞器受損、膜損害、鈣離子內(nèi)流入細(xì)胞，造成肝細(xì)胞損傷。LPS是G-細(xì)菌最重要的 致病物質(zhì)，屬病原體相關(guān)分子模式（pathogenassociatedmolecularpattern,PAMP)，免 疫刺激作用強(qiáng)。通過激活單核-巨細(xì)胞系統(tǒng)（mononuclearphagacyticsystem,MPS)，弓丨 起TNF-a、IL-6、IL-1等大量炎癥介質(zhì)釋放，導(dǎo)致全身過度炎癥反應(yīng)及腦、心、腎、肝等重要 器官的衰竭。肝細(xì)胞彌漫性的損傷對細(xì)菌LPS的解毒能力大大降低，進(jìn)而增強(qiáng)LPS的肝毒 性。有研究報道，應(yīng)用D-GalN能使LPS的炎癥效應(yīng)增加約104倍以上，微量LPS可以加重 D-GalN所致的急性肝損傷。D-GalN損傷僅限于肝臟，靶點(diǎn)明確，對其他臟器的影響不明顯。 所以常用D-GalN聯(lián)合小劑量的LPS建立爆發(fā)性肝損傷動物模型。
[0005] 新橙皮苷二氫查爾酮（NHDC)(附圖1)是將從天然柑橘植物中提取得到的新橙皮 苷氫化而成的黃酮類衍生物。早在1963年，Horowitz等人就發(fā)現(xiàn)新橙皮苷二氫查爾酮具 有強(qiáng)烈的甜味。其特點(diǎn)在于甜度大（蔗糖甜度的1500~1800倍），口感清爽，余味持久，并 具有極佳的屏蔽苦味的功效。與其它甜味劑相比，熱量較低，因此對人體血糖和血脂水平?jīng)] 有不良影響。目前人們已對它進(jìn)行過毒理試驗(yàn)，并在已有的毒理試驗(yàn)的基礎(chǔ)上確立了它的 食品甜味劑地位。1997年，新橙皮苷二氫查爾酮被我國衛(wèi)生部列入"食品添加劑使用衛(wèi)生 標(biāo)準(zhǔn)"增補(bǔ)品種，可用于食品工業(yè)。但是目前，國內(nèi)外對新橙皮苷二氫查爾酮的研究僅停留 在其作為食品添加劑的應(yīng)用以及對柑橘類植物中黃烷酮的提取，而對其生理活性和合成研 究開展的較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供新橙皮苷二氫查二酮在防治爆發(fā)性肝損傷中的 應(yīng)用，本發(fā)明研究表明新橙皮苷二氫查二酮具有良好的抗氧化和抗炎效果，因此，在制備保 肝藥物中具有良好的應(yīng)用前景。
[0007] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0008] 1、新橙皮苷二氫查二酮在制備預(yù)防或治療肝損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 優(yōu)選的，所述肝損傷為爆發(fā)性肝損傷。
[0010] 2、新橙皮苷二氫查二酮在制備保健品中的應(yīng)用。
[0011] 優(yōu)選的，所述保健品為護(hù)肝類保健品。
[0012] 優(yōu)選的，所述保健品為對爆發(fā)性肝損傷有輔助保護(hù)作用的保健品。
[0013] 優(yōu)選的，所述爆發(fā)性肝損傷為腸源性內(nèi)毒素血癥所致的肝損傷。
[0014] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明通過建立D-GalN/LPS誘導(dǎo)的爆發(fā)性肝損傷動物 模型，從抗氧化和抗炎兩方面研究新橙皮苷二氫查爾酮對爆發(fā)性肝損傷的預(yù)防性治療作 用，研究結(jié)果表明，新橙皮苷二氫查爾酮能顯著提高爆發(fā)性肝損傷小鼠的存活率，顯著降低 血清ALT和AST。因此，新橙皮苷二氫查爾酮在制備保肝，預(yù)防或治療爆發(fā)性肝損傷的藥物 中具有良好的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0015] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖：
[0016] 圖1新橙皮苷二氫查爾酮的結(jié)構(gòu)式；
[0017] 圖2新橙皮苷二氫查爾酮對D-GalN/LPS誘導(dǎo)爆發(fā)性肝損傷小鼠存活率的影響結(jié) 果；
[0018] 圖3H&E染色檢測新橙皮苷二氫查爾酮對D-GalN/LPS誘導(dǎo)爆發(fā)性肝損傷小鼠病 理學(xué)變化的影響；
[0019] 圖4新橙皮苷二氫查爾酮對D-GalN/LPS誘導(dǎo)爆發(fā)性肝損傷小鼠促炎癥因子的影 響。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方 法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。
[0021] ALT、AST、MDA、GSH，CAT、GPx、SOD、iNOS和蛋白定量試劑盒均購于南京建成生物工 程研究所；N0試劑盒購于碧云天生物技術(shù)公司；C0X2和PGE2的ELISA試劑盒購于R&D公 司；TNF-a、IL-6的一抗均購于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；IL-10的一抗和二抗均購于 上海生工生物工程股份有限公司；新橙皮苷二氫查二酮（NHDC)購于阿拉??；D-半乳糖胺 (D-GalN)購于阿拉丁，臨用前用生理鹽水配成40mg/mL;脂多糖（LPS)購于Sigma公司，使 用前用生理鹽水稀釋成10yg/kg;水飛薊素（Silymarin)購于Sigma公司。
[0022] 紫外分光光度儀（UV-2450,日本島津公司）；酶標(biāo)儀（Bio-Tek，美國基因公司）； 電子天平（FA2004,上海舜恒平科學(xué)儀器有限公司）；高速臺式冷凍離心機(jī)（TGL-16M，長沙 湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；三孔電熱恒溫水槽（DK-8D);高速分散器（XHF-P，寧波新芝生 物科技股份有限公司）。
[0023] 清潔級雄性昆明種小鼠，體重18_22g，由重慶中藥研究所提供。
[0024] 需要說明的是，新橙皮苷二氫查二酮和陽性藥物水飛薊素均在給藥前用質(zhì)量分?jǐn)?shù) 〇. 5%的羧甲基纖維素鈉溶液配成20mg/mL。
[0025] 實(shí)施例1新橙皮苷二氫查二酮對D-GalN/LPS誘導(dǎo)的爆發(fā)性肝損傷肝功能的保護(hù) 作用
[0026] 首先取體重18_22g的雄性昆明種小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為10組，10組 均分兩批次處理，第一批次為造模后6h處理，第二批次為造模后24h處理。每批次分為5 組，對照組（Control，10只/組），D-GalN/LPS模型組（D-GalN/LPS，10只/組），新橙皮苷二 氫查二酮給藥組（NHDC，10只/組），新橙皮苷二氫查二酮預(yù)防給藥組（D-GalN/LPS+NHDC， 10 只 / 組），陽性對照組（D-GalN/LPS+Silymarin，10 只 / 組）。
[0027] 第一批次：新橙皮苷二氫查二酮單劑量給藥組與預(yù)防給藥組，灌胃給藥一天一次， 連續(xù)六天；陽性對照組同樣灌胃連續(xù)給藥六天；其余各組則灌胃〇. 5%羧甲基纖維素鈉溶 液連續(xù)六天。末次給藥后一小時，除對照組和NHDC組腹腔注射給予生理鹽水，其他組腹腔 注射給予10yg/kg的LPS和400mg/kg的D-GalN。造模六小時后，眼眶后靜脈叢采血，室溫 靜置30min后，室溫4000r/min，離心lOmin，取血清，測定血清中AST和ALT的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié) 果如表1所示。
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