，干燥；將干燥物以1 :2投入丙酮的水 過飽和溶液，4°C放置24h，過濾收集晶體；其中所述的兩次柱，分別為大孔吸附樹脂H103柱 和活性碳柱。
[0025] 其中所述的兩次上柱，可以先上大孔吸附樹脂H103柱洗脫，收集洗脫液，再上活 性碳柱洗脫；也可以是提取液先上活性碳柱洗脫，再上大孔吸附樹脂H103柱洗脫。
[0026] 在提取液第一次上柱前，可以將提取液濃縮至相對密度為I. 01的液體；第二次上 大孔吸附樹脂H103柱時，也需濃縮至相對密度為I. 01左右的液體。
[0027] 本發(fā)明還公開了一種藥物組合物，含有地黃葉提取物或含有梓醇的組合物和藥學(xué) 可接受的輔料。
[0028] 其中所述的藥物組合物，可以是常見的口服制劑，如片劑、膠囊、顆粒劑等。
[0029] 本發(fā)明還公開了黃葉提取物或含有梓醇的組合物用于制備治療急性腎損傷的藥 物中的應(yīng)用。
[0030] 本申請的發(fā)明人通過藥理對比研宄，出乎意料地發(fā)現(xiàn)地黃葉提取物可單獨作為治 療急性腎損傷的藥物，并通過進一步的研宄，發(fā)現(xiàn)梓醇可單獨作為治療急性腎損傷的藥物。 并通過動物試驗證實，地黃葉提取物及梓醇對于急性腎損傷具有意想不到的治療效果。同 時，本發(fā)明所公開的制備方法工藝簡單，更適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0031] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細、完整地說明。
[0032] 實施例1
[0033] 取干地黃葉10Kg，切碎，加55L濃度為70%的乙醇，回流提取3次，3次時間分別 為2、1、0. 5小時，提取液濃縮至相對密度1. 01，上H103大孔吸附樹脂，控制流速約為IBV/ h ;用3. 0BV10%乙醇洗脫。洗脫液載入活性炭柱，先用水洗3個柱體積至近無色，繼用20% 乙醇洗至洗脫液近無色，收集醇洗脫液。洗脫液減壓濃縮至相對密度1. 01，噴霧干燥，得 220.0 g地黃葉提取物，呈淺棕色粉末。用HPLC測定（以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 以乙腈-0. 1%磷酸溶液（1:99)為流動相，檢測波長210nm)，其中梓醇含量為66%。
[0034] 實施例2
[0035] 取干地黃葉10Kg，切碎，加100L濃度為40%的乙醇，回流提取2次，時間分別為1、 2小時，提取液濃縮至相對密度1. 01，上活性炭柱，先用水洗4個柱體積，繼用30%乙醇洗 脫，收集醇洗脫液。洗脫液減壓濃縮至相對密度1. 01，濾過，濾液上H103大孔吸附樹脂，控 制流速約為2BV/h ;用2. 0BV20 %乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至相對密度，1. 01，噴 霧干燥，得地黃葉提取物210克。取黃葉提取物50g投入100mL50°C用1:1丙酮：水配成過 飽和溶液（地黃葉提取物與丙酮水溶液的體積比1:2)，4°C放置24h，析出晶體，過濾收集晶 體，即得22. Og梓醇，用HPLC測定（同實施例1)其中梓醇含量為93%。
[0036] 實施例3
[0037] 地黃葉提取物急性毒性試驗
[0038] 取昆明種小鼠70只，體質(zhì)量18-22g，雌雄各半。隨機分成7組，以實施例1制得的 提取物混懸液按不同劑量一次性灌胃，然后觀察14d。記錄逐日小鼠毒性反應(yīng)及死亡數(shù)，用 Bliss法以DAS3. 0程序計算小鼠的半數(shù)致死量，結(jié)果表明，小鼠經(jīng)口服LD50為4. 5g/kg。
[0039] 實施例4
[0040] 地黃葉提取物及梓醇對甘油誘導(dǎo)的小鼠急性腎損傷的影響
[0041] (1)實驗動物ICR小鼠，清潔級，雄性，體重23~25g，由浙江省實驗動物中心提 供，動物質(zhì)量合格證號：SCXK (浙）2008-0033。
[0042] (2)造模、分組與給藥
[0043] 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后，隨機化分組分成空白組，模型組，尿毒清（市售）陽性藥對照 組（3. 25g/kg)，給藥組（實施例1樣品為地黃葉提取物組，按100mg/kg給藥；實施例2樣 品為梓醇組按50mg/kg給藥）。動物禁水不禁食18h后，采用肌肉注射的方法在兩條后腿 部注射50 %甘油，注射總量按8ml/kg，每條后腿注射劑量各半。其中甘油用生理鹽水稀釋 成50%。空白組注射等量的生理鹽水。造模結(jié)束后，動物繼續(xù)禁水不禁食8h，之后自由飲 食飲水并開始給藥。每天1次，連續(xù)3天?？瞻捉M、模型組給藥等量的純水。采用灌胃方式 給藥。
[0044] (3)血樣的采集、處理與指標測定
[0045] 末次給藥24h后，麻醉動物，腹主動脈采血，收集其抗凝全血。然后處死動物，取 兩腎，腎組織用10%甲醛固定24h，常規(guī)酒精脫水，石蠟包埋，切取5 μ m的組織切片，蘇木 素-伊紅（HE)染色，光鏡觀察腎小管管腔內(nèi)管型數(shù)量。
[0046] 抗凝全血離心，按5000r/min，IOmin離心得血漿，冷凍保存。按肌氨酸氧化酶法測 定血漿中肌酐的含量。
[0047] ⑷實驗結(jié)果
[0048] 地黃葉提取物及梓醇對甘油誘導(dǎo)的急性腎損傷小鼠血肌酐的影響
[0049]
【主權(quán)項】
1. 一種地黃葉提取物，由以下方法制備得到：以重量體積比計，地黃葉按1:5-12加 40% -70%乙醇提取1-3次，每次0. 5-2小時，提取液兩次上柱用濃度為10% -30%乙醇的 洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮，干燥；其中所述的兩次柱，分別為大孔吸附樹脂H103 柱和活性碳柱。
2. 如權(quán)利要求1所述的地黃葉提取物，其特征是其中含有梓醇，且梓醇的HPLC含量大 于 50%。
3. 如權(quán)利要求1所述的地黃葉提取物，其特征是其中所述兩次上柱洗脫為：提取液先 上大孔吸附樹脂H103柱洗脫，收集洗脫液，再上活性碳柱洗脫；或者提取液先上活性碳柱 洗脫，再上大孔吸附樹脂H103柱洗脫。
4. 一種含有梓醇的組合物，由以下方法制備得到：以重量體積比計，地黃葉按1:5-12 加40% -70%乙醇提取1-3次，每次0. 5-2小時，提取液兩次上柱用濃度為10% -30%乙 醇的洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮，干燥；將干燥物以1 :2投入丙酮的水過飽和溶液， 4°C放置24h，過濾收集晶體；其中所述的兩次柱，分別為大孔吸附樹脂H103柱和活性碳柱。
5. 如權(quán)利要求4所述的梓醇的組合物，其特征是梓醇的HPLC含量大于50%。
6. 制備如權(quán)利要求1所述的提取物方法，以重量體積比計，地黃葉按1:5-12加 40% -70%乙醇提取1-3次，每次0. 5-2小時，提取液兩次上柱用濃度為10% -30%乙醇的 洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮，干燥；其中所述的兩次柱，分別為大孔吸附樹脂H103 柱和活性碳柱。
7. 制備如權(quán)利要求4所述的組合物質(zhì)的方法，以重量體積比計，地黃葉按1:5-12加 40% -70%乙醇提取1-3次，每次0. 5-2小時，提取液兩次上柱用濃度為10% -30%乙醇的 洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮，干燥；將干燥物以1 :2投入丙酮的水過飽和溶液，4°C 放置24h，過濾收集晶體；其中所述的兩次柱，分別為大孔吸附樹脂H103柱和活性碳柱。
8. 如權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征是其中所述兩次上柱洗脫為：提取液先 上大孔吸附樹脂H103柱洗脫，收集洗脫液，再上活性碳柱洗脫；或者提取液先上活性碳柱 洗脫，再上大孔吸附樹脂H103柱洗脫。
9. 一種藥物組合物，含有如權(quán)利要求1所述的提取物或權(quán)利要求4所述的組合物和藥 學(xué)可接受的輔料。
10. 如權(quán)利要求1所述的提取物或權(quán)利要求4所述的組合物用于制備治療急性腎損傷 的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種地黃葉提取物在用于制備治療急性腎損傷的藥物中的應(yīng)用，以及地黃葉提取物中的梓醇在用于制備治療急性腎損傷的藥物中的應(yīng)用。特別是梓醇對于急性腎損傷具有顯著的治療作用。
【IPC分類】A61K36-804, A61K127-00, A61P13-12, A61K31-7048
【公開號】CN104825634
【申請?zhí)枴緾N201510221353
【發(fā)明人】白海波, 扈榮, 蔣芳萍, 桑瑞艷, 章小永, 傅旭春
【申請人】杭州華東醫(yī)藥集團新藥研究院有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月5日