地黃葉提取物及其在制備治療急性腎損傷藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種地黃葉提取物的新用途，具體說，是涉及一種地黃葉提取物在制 備治療急性腎損傷的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 急性腎損傷（acute kidey injury，AKI)是臨床各科較常見的急重癥。AKI是指 48h內(nèi)至少2次血清肌酐水平升高的絕對值彡26. 5umol/L(0. 3mg/dL)或較原血清肌酐值 上升彡50% ;和（或）持續(xù)6h以上尿量〈0. 5mL/kg/h。多發(fā)生于休克、嚴(yán)重創(chuàng)傷、膿毒血 癥及某些抗腫瘤（鉑類）、抗生素藥物（氨基糖苷類，β內(nèi)酰胺類）使用等因素后，很多時(shí) 候可因病情發(fā)展迅速，治療不及時(shí)而發(fā)展為慢性腎臟?。–KD)以致終身依賴腎臟替代治療 甚至導(dǎo)致患者死亡。國內(nèi)外研宄結(jié)果顯示AKI的發(fā)病率在綜合性醫(yī)院為3%~10%，在重 癥監(jiān)護(hù)病房為30 %~60 %，危重AKI患者死亡率高達(dá)30 %~80 %。既往一直認(rèn)為AKI為 臨床可逆的，若經(jīng)過治療后患者腎功能恢復(fù)正常，則遠(yuǎn)期預(yù)后良好。近年來研宄表明只要發(fā) 生ΑΚΙ，不僅會明顯增加患者短期死亡率，且無論腎功能是否恢復(fù)，都可能對患者遠(yuǎn)期預(yù)后 (包括遠(yuǎn)期生存率、慢性腎臟病的發(fā)病率）產(chǎn)生不良影響。鑒于此，對于AKI的治療就顯得 尤為重要。
[0003] 有文獻(xiàn)認(rèn)為，治療慢性腎損傷藥物對相關(guān)指標(biāo)"改善10%可判斷為陽性"。但目前 為止，一些對慢性腎損傷有確切療效的藥物甚至是激素類藥物，對于AKI均無治療效果。也 就是說改善10%尚不足以對于48h內(nèi)血肌酐升高50%以上的患者獲得有效的保護(hù)，也就是 目前臨床上尚未有可靠的治療AKI的化藥或中藥的主要原因。
[0004] 地黃葉提取物，特別是梓醇可以改善腎功能已有零星文獻(xiàn)報(bào)告，比如專利 200610021877. 4,所述地黃葉提取物（含麥角總甾苷以麥角甾苷計(jì)的含量彡50% )用于制 備治療腎功能疾病的藥物，以及《梓醇對糖尿病大鼠腎臟IGF-I和Akt表達(dá)的影響》（大連 醫(yī)科大學(xué)2009年碩士學(xué)位論文）公開了梓醇可部分下調(diào)糖尿病大鼠腎臟IGF-I和Akt表 達(dá)，一定程度減輕糖尿病腎病病理改變，但對糖尿藥大鼠 24h尿白蛋白，尿MA/Cre及腎功能 指標(biāo)影響不明顯?！读兜攸S丸含藥血清及梓醇對腎小管上皮細(xì)胞HK-2轉(zhuǎn)化生長因子1/ Smad通路的影響》（中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)2011年第7期，P783)中公開了在TGF-β刺激H K-2 細(xì)胞模型中，六味地黃丸含血清拮抗Smad通路活化的作用與HGF相似，梓醇是六味地黃丸 中主要發(fā)揮作用的單體之一。
[0005] 這些報(bào)告或處于分子水平、離體細(xì)胞水平，或雖在慢性腎臟病或糖尿病等誘發(fā)的 慢性腎損傷方面有報(bào)道，但未按照AKI定義采用動物模型以血肌酐為療效指標(biāo)進(jìn)行過評 價(jià)。也就是說，分子水平或離體細(xì)胞水平的指標(biāo)不能作為藥物治療效果的直接指標(biāo)。
[0006]目前地黃葉提取物（梓醇含量彡50% )對于急性腎損傷（AKI)卻一直沒有過報(bào) 導(dǎo)。而且，急性腎損傷與慢性腎損傷、腎功能不全等腎臟疾病概念并不相同，是不同的疾病。 2001年，美國腎臟病基金會首次提出慢性腎臟?。╟hronic kidney diease，CKD)的概念，將 無論何種原因，只要存在腎損害或腎功能下降，且持續(xù)時(shí)間多3個(gè)月都可診斷為CKD。其中 腎損害指腎臟結(jié)構(gòu)或功能異常，伴或不伴腎小球?yàn)V過率（GFR)降低，表現(xiàn)為下列之一：病理 異常；血或尿成分異?；蛴跋駥W(xué)檢查異常；腎功能下降指GFR〈60ml/min，伴或不伴腎損害。 目前應(yīng)用方程依據(jù)血肌酐計(jì)算GFR，并根據(jù)GFR將CKD分為5期，1期彡90, 2期60-89, 3期 30-59, 4 期 15-29, 5 期〈15。
[0007] 雖然CKD患者GFR下降多是恒定的，但是有些臨床因素會加快GFR的下降，特別是 對CKD 2期以后的患者，也即在CKD基礎(chǔ)上發(fā)生AKI。對于某些危險(xiǎn)因素的積極控制有可能 阻止CKD的發(fā)生（如控制自身免疫疾病、系統(tǒng)性和泌尿系感染等）或延緩CKD的進(jìn)展（如 控制高血壓、高血糖等）。
[0008] 地黃為玄參科植物地黃（Rehm annia glutinasa Liboschde.)的新鮮塊莖。作為 常用中藥之一，地黃的臨床應(yīng)用極為廣泛，一般用于熱病煩渴，吐血，發(fā)斑發(fā)瘆等。而地黃葉 為地黃的地上部分，尚未作為藥材使用，通常作為飼料、肥料而被棄用。
[0009] 梓醇（catalpol)是中藥地黃的主要成分之一，是一種環(huán)稀醚貓苷類化合物，分子 式C 15H22Oltl?，F(xiàn)代藥理研宄表明其具有神經(jīng)保護(hù)、降血糖、利尿、緩瀉、抗癌、抗炎等作用。
[0010] 梓醇在地黃中含量較低且性質(zhì)不穩(wěn)定，在加工炮制過程中含量不斷降低。因此，選 擇合適的藥材和純化方法是開發(fā)梓醇的關(guān)鍵。近來研宄表明，地黃葉中也含有梓醇并且含 量甚至比地黃高。從地黃葉中分離純化梓醇能降低開發(fā)成本，對梓醇的深入研宄具有重要 意義。
[0011] 本發(fā)明申請人通過大量實(shí)驗(yàn)和研宄，發(fā)現(xiàn)地黃葉提取物在用于制備治療急性腎損 傷的藥物中的應(yīng)用，特別是地黃葉提取物中的梓醇成分在用于制備治療急性腎損傷藥物中 的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中急性腎損傷無藥可治的缺陷，提供了一種對急性腎損傷 具有治療作用的地黃葉提取物，特別是其中梓醇的含量大于50%的組合物。
[0013] 本發(fā)明公開了一種地黃葉提取物，由以下方法制備得到：以重量體積比計(jì)，地黃 葉按1:5-12加40 % -70 %乙醇提取1-3次，每次0.5-2小時(shí)，提取液兩次上柱用濃度為 10% -30%乙醇的洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮，干燥；其中所述的兩次柱，分別為大 孔吸附樹脂H103柱和活性碳柱。
[0014] 其中所述的兩次上柱，可以先上大孔吸附樹脂H103柱洗脫，收集洗脫液，再上活 性碳柱洗脫；也可以是提取液先上活性碳柱洗脫，再上大孔吸附樹脂H103柱洗脫。
[0015] 在提取液第一次上柱前，可以將提取液濃縮至相對密度為1. 01左右的液體；第二 次上大孔吸附樹脂H103柱時(shí)，也需濃縮至相對密度為I. 01左右的液體。
[0016] 其中所述的地黃葉提取物中，含有梓醇，且梓醇的HPLC含量大于50%。
[0017] 本發(fā)明還公開了一種含有梓醇的組合物，這一組合物可以通過地黃葉提取物經(jīng) 進(jìn)一步的溶劑法結(jié)晶可得到。具體的說，由以下方法制備得到：以重量體積比計(jì)，地黃 葉按1:5-12加40 % -70 %乙醇提取1-3次，每次0.5-2小時(shí)，提取液兩次上柱用濃度為 10% -30%乙醇的洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮，干燥；將干燥物以1 :2投入丙酮的水 過飽和溶液，4°C放置24h，過濾收集晶體；其中所述的兩次柱，分別為大孔吸附樹脂H103柱 和活性碳柱。
[0018] 其中所述的兩次上柱，可以先上大孔吸附樹脂H103柱洗脫，收集洗脫液，再上活 性碳柱洗脫；也可以是提取液先上活性碳柱洗脫，再上大孔吸附樹脂H103柱洗脫。
[0019] 在提取液第一次上柱前，可以將提取液濃縮至相對密度為1. 01的液體；第二次上 大孔吸附樹脂H103柱時(shí)，也需濃縮至相對密度為I. 01左右的液體。
[0020] 其中所述的含有梓醇的組合物中梓醇的HPLC含量大于50%。
[0021] 本發(fā)明還公開了制備地黃葉提取物方法，以重量體積比計(jì)，地黃葉按1:5-12加 40% -70%乙醇提取1-3次，每次0. 5-2小時(shí)，提取液兩次上柱用濃度為10% -30%乙醇的 洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮，干燥；其中所述的兩次柱，分別為大孔吸附樹脂H103 柱和活性碳柱。
[0022] 其中所述的兩次上柱，可以先上大孔吸附樹脂H103柱洗脫，收集洗脫液，再上活 性碳柱洗脫；也可以是提取液先上活性碳柱洗脫，再上大孔吸附樹脂H103柱洗脫。
[0023] 在提取液第一次上柱前，可以將提取液濃縮至相對密度為I. 01的液體；第二次上 大孔吸附樹脂H103柱時(shí)，也需濃縮至相對密度為I. 01左右的液體。
[0024] 本發(fā)明還公開了制備含有梓醇的組合物的方法，以重量體積比計(jì)，地黃葉 按1:5-12加40 % -70 %乙醇提取1-3次，每次0. 5-2小時(shí)，提取液兩次上柱用濃度為 10% -30%乙醇的洗脫，收集第二次乙醇洗脫液，濃縮