碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法；旨在提供一種成本低、使用方便、模型性能穩(wěn)定、適應(yīng)性廣的對(duì)比劑急性腎臟損傷動(dòng)物模型的構(gòu)建方法；本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：一種碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，該方法采用SD大鼠作為動(dòng)物模型，將碘對(duì)比劑靜脈注射于SD大鼠，劑量為100?150mg/kg，一次性大量團(tuán)注給藥，構(gòu)建為動(dòng)物模型。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
砩對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明公開(kāi)了一種急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，具體的說(shuō)，是碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急 性腎損傷動(dòng)物模型建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 至今CIAKI確切的發(fā)病機(jī)制尚不明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為CIAKI是由多種機(jī)制協(xié)同作用 而引發(fā)的疾病，宏觀上其主要發(fā)病機(jī)制大致分為腎血流動(dòng)力學(xué)改變和直接腎細(xì)胞毒性作用 二大類(lèi)。
[0003] 1、腎臟血流動(dòng)力學(xué)變化
[0004] 實(shí)驗(yàn)表明，注射碘對(duì)比劑后對(duì)人體血流動(dòng)力學(xué)的影響呈雙向表現(xiàn)，腎血管首先短 暫擴(kuò)張20mim，然后痙攣性血管收縮4h甚至更長(zhǎng)。臨床早期出現(xiàn)滲透性利尿，繼而腎血流量 降低及腎小球?yàn)V過(guò)率減少。其機(jī)制可能為使用對(duì)比劑后血漿滲透壓增高，導(dǎo)致血容量增加， 血管擴(kuò)張，由于血漿滲透壓增高而產(chǎn)生滲透性利尿，使水鈉及其他電解質(zhì)排泄增加;滲透性 利尿后，血容量減少引起腎素-血管緊張素釋放，從而使腎血管產(chǎn)生收縮。
[0005] 2、直接腎細(xì)胞毒性作用
[0006] 碘對(duì)比劑腎毒性作用的機(jī)制主要包括兩方面:滲透毒性及組分中與黏度相關(guān)的毒 性。多數(shù)文獻(xiàn)認(rèn)為對(duì)比劑滲透壓及黏度可能是導(dǎo)致對(duì)比劑腎病發(fā)生的重要因素。
[0007] ①對(duì)比劑滲透壓對(duì)腎臟的損害:主要表現(xiàn)為直接腎小管毒性。應(yīng)用高滲對(duì)比劑后， 腎組織活檢可見(jiàn)局灶性或彌漫性近端腎小管上皮細(xì)胞空泡形成，這是對(duì)比劑腎細(xì)胞毒性的 最直接證據(jù)，也是滲透性腎病的組織學(xué)特征。Zager等研究表明，含碘對(duì)比劑可以導(dǎo)致腎小 管細(xì)胞線粒體損傷、細(xì)胞色素C釋放和破壞質(zhì)膜完整，使腎髓質(zhì)局部氧分壓降低。對(duì)211名患 者10天內(nèi)行腎動(dòng)脈造影或靜脈腎盂造影，進(jìn)行腎組織活檢，其中47例發(fā)現(xiàn)滲透性腎病變證 據(jù);29例伴有腎小管萎縮和(或)壞死。Herts等臨床研究顯示，靜脈注射高滲對(duì)比劑腎孟造 影后腎血漿流量減少與對(duì)比劑有關(guān)，其減少程度取決于對(duì)氨基馬尿酸清除率，Ih時(shí)影響達(dá) 頂峰，以后逐漸降低，到2h時(shí)基本恢復(fù)正常;低滲對(duì)比劑影響比高滲對(duì)比劑影響輕。
[0008] ②對(duì)比劑黏度對(duì)腎臟的影響:在正常情況下，腎小管內(nèi)液體粘度低于血漿，使用高 粘度對(duì)比劑(特別是二聚體等滲對(duì)比劑)后，集合小管內(nèi)流體阻力及腎小管內(nèi)壓力增加，使 腎小球?yàn)V過(guò)率和髓質(zhì)血流減少。由于超濾作用，腎小管對(duì)黏度變化更為敏感，黏度升高可導(dǎo) 致腎小管尤其是集合管內(nèi)阻力增加，腎間質(zhì)壓力增加，從而影響腎臟濾過(guò)功能。Hardiek等 人研究發(fā)現(xiàn)在體外培養(yǎng)的條件下，滲透壓相同而粘滯度不同的碘帕醇和甘露醇對(duì)腎小管細(xì) 胞的毒性并不相同，碘帕醇對(duì)腎小管的抑制作用強(qiáng)于甘露醇。黏度增加可使對(duì)比劑滯留時(shí) 間延長(zhǎng)，Yamazaki等研究顯示，重度腎皮質(zhì)對(duì)比劑滯留者發(fā)生CIN風(fēng)險(xiǎn)增加，但與CIN發(fā)生率 并非平行。目前，碘對(duì)比劑急性腎臟損傷動(dòng)物模型的建立方法國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚未報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供的目的是提供一種成本低、使用方便、模型性能穩(wěn)定、 適應(yīng)性廣的對(duì)比劑急性腎臟損傷動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。
[0010] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：
[0011] -種碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，該方法采用SD大鼠作為動(dòng)物模 型，將碘對(duì)比劑靜脈注射于SD大鼠，劑量為100-150mg/kg，一次性大量團(tuán)注給藥，構(gòu)建為動(dòng) 物模型。
[0012]優(yōu)選的，上述的碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，所述的SD大鼠重量 為 150-200 克。
[0013]優(yōu)選的，上述的碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，所述的碘對(duì)比劑為 復(fù)方泛影葡胺注射液。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案具有如下技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：
[0015] 1.本發(fā)明針對(duì)碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎臟損傷提供一種良好的動(dòng)物模型；
[0016] 2.本發(fā)明機(jī)理明確、重現(xiàn)性好；
[0017] 3.本發(fā)明成功率高、性能穩(wěn)定；
[0018] 4.可以做病理形態(tài)學(xué)對(duì)比分析，還可以進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理、分析；
[0019] 總而言之，本發(fā)明提供的動(dòng)物模型的建立方法，為腎臟損傷的發(fā)病學(xué)、治療學(xué)和藥 效學(xué)的研究奠定了重要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ);該動(dòng)物模型的建立，將為碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎臟損傷 疾病提供有效的研究載體，為預(yù)防和治療碘對(duì)比劑使用后導(dǎo)致腎臟損害方面疾病取得更大 的突破，提尚治療的有效性。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1注射碘對(duì)比劑后20分鐘后腎臟病理組織學(xué)變化(80X，200X，400X );
[0021] 圖2注射碘對(duì)比劑后24小時(shí)后腎臟病理組織學(xué)變化(80X，200X，400X );
[0022] 圖3注射碘對(duì)比劑后48小時(shí)后腎臟病理組織學(xué)變化(80X，200X，400X );
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì) 本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明 的權(quán)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0024] 實(shí)施例
[0025] 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料
[0026] 30只健康雄性SD大鼠（清潔級(jí)），購(gòu)中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0027] 碘對(duì)比劑(復(fù)方泛影葡胺注射液，370mg/ml，6ml/kg):購(gòu)自無(wú)錫濟(jì)民可信山禾藥業(yè) 股份有限公司。
[0028]二、試驗(yàn)方法
[0029] 將健康SD大鼠隨機(jī)分成兩組，分別為對(duì)照組，模型組各15只。對(duì)照組(Control)在 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注射5%葡萄糖溶液;模型組尾靜脈注射給予碘對(duì)比劑(復(fù)方泛影葡胺注射液， 370mg/ml，6ml/kg)，一次性大劑量團(tuán)注。該試驗(yàn)用于檢測(cè)急性腎臟損傷動(dòng)物模型的制備效 果。
[0030] 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
[0031] I.各組SD大鼠血清中Crea和Bun水平
[0032]分別在注射碘對(duì)比劑20分鐘、24小時(shí)、48小時(shí)，采集各組大鼠血液，分離血清，利用 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組SD大鼠血清中Crea、BUn水平。結(jié)果顯示，注射碘對(duì)比劑后，模型 組血清中Crea和Bun水平明顯高于對(duì)照組，見(jiàn)(表1、2)。
[0033]表1.注射對(duì)比劑前后腎臟Crea值(均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差;umol/L).
[0036] 注：*Ρ〈〇·〇5。
[0037] 表2注射對(duì)比劑前后腎臟Bun值(均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差;mmol/L).
[0039] 注：*Ρ〈0·05。
[0040] 圖1注入碘對(duì)比劑20分鐘腎臟:鏡下觀察腎小球結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)明顯腫脹、萎縮及 纖維化。部分區(qū)近曲小管上皮細(xì)胞濁腫，個(gè)別有溶解。部分區(qū)遠(yuǎn)曲小管管腔變窄，上皮個(gè)別 細(xì)胞溶解、消失。間質(zhì)血管擴(kuò)張、少量充血。集合管未見(jiàn)各類(lèi)管型。
[0041] 圖2注入碘對(duì)比劑24小時(shí)腎臟:鏡下觀察腎小球結(jié)構(gòu)清晰，少量明顯腫脹、未見(jiàn)萎 縮及纖維化。部分區(qū)近曲小管和遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞濁腫，未見(jiàn)脂肪變性、玻璃樣變及壞死等 改變。間質(zhì)多數(shù)血管擴(kuò)張、充血。集合管未見(jiàn)各類(lèi)管型。毛細(xì)血管大部分?jǐn)U張，破裂出血。
[0042] 圖3注入碘對(duì)比劑48小時(shí)腎臟:鏡下觀察腎小球結(jié)構(gòu)清晰，明顯腫脹、萎縮。部分區(qū) 近曲小管和遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞濁腫，脂肪變性、玻璃樣變及壞死等改變。間質(zhì)多數(shù)血管擴(kuò) 張、充血。集合管未見(jiàn)各類(lèi)管型。毛細(xì)血管大部分?jǐn)U張，出血。
[0043] 總之，從圖1至圖3也可以看出，注入碘對(duì)比劑后，大鼠腎小管的損害明顯早于腎小 球的損害，且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。
[0044]以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任 何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，其特征在于，該方法采用SD大鼠 作為動(dòng)物模型，將碘對(duì)比劑靜脈注射于SD大鼠，劑量為100-150mg/kg，一次性大量團(tuán)注給 藥，構(gòu)建為動(dòng)物模型。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，其特征在于，所 述的SD大鼠重量為150-200克。3. 根據(jù)權(quán)利要1所述的碘對(duì)比劑誘導(dǎo)急性腎損傷動(dòng)物模型建立方法，其特征在于，所述 的碘對(duì)比劑為復(fù)方泛影葡胺注射液。
【文檔編號(hào)】A61K49/04GK105963716SQ201610511973
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】張水興, 陳文波, 張斌, 董羽顥
【申請(qǐng)人】廣東省人民醫(yī)院