規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0051] 本發(fā)明提供了一種抗腫瘤中藥提取物的提取方法，其包括以罌粟科、荷青花屬植 物的根莖為原料，進行乙醇回流提取，并將得到的提取液進行濃縮、干燥，得到抗腫瘤中藥 提取物。更具體的，其包括以下步驟：
[0052] Sl:以罌粟科、荷青花屬植物的根莖為原料，用體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所 述原料17-21倍的乙醇回流提取，得到提取液；
[0053] S2 :將所述提取液濃縮，得到稠膏；
[0054] S3 :將所述稠膏烘干，得到抗腫瘤中藥提取物。
[0055] 本發(fā)明提供的這種方法提取的抗腫瘤中藥提取物，能夠提高HT-29和SW620細胞 Gl期細胞的百分率，并且能夠降低該腫瘤細胞S期和G2期細胞的比率，具有誘導(dǎo)HT-29和 SW620細胞發(fā)生Gl期阻滯，并抑制該兩種腫瘤細胞的增殖能力的效果；因此可以很好的應(yīng) 用到抗腫瘤藥物的制備應(yīng)用中。
[0056] 接下來，結(jié)合以上的內(nèi)容，對本發(fā)明提取方法舉出以下具體的實施例。
[0057] 實施例1
[0058] 以荷青花Hylomeconjaponica(Thunb. )pratl的干燥根莖為原料，以體積濃度為 70%、且質(zhì)量為所述原料20倍的乙醇回流提取，得到第一提取液和第一提取藥渣；在所述 第一提取藥渣中加入體積濃度為70%、且質(zhì)量為所述原料18倍的乙醇進行二次提取，得到 第二提取液和第二提取藥渣；在所述第二提取藥渣中加入體積濃度為70%、且質(zhì)量為所述 原料18倍的乙醇進行第三次提取，得到第三提取液和第三提取藥渣；將所述第一提取液、 所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液；將所述提取液濃縮，得到稠膏；將 所述稠膏于70°C烘干后進行粉碎，得到抗腫瘤中藥提取物。
[0059] 實施例2
[0060] 以多裂荷青花H.japonica(Thunb. )pratl.Var.dissecta(Franchsavat.)Fedde 的干燥根莖為原料，以體積濃度為60%、且質(zhì)量為所述原料19倍的乙醇回流提取，得到第 一提取液和第一提取藥渣；在所述第一提取藥渣中加入體積濃度為60%、且質(zhì)量為所述原 料17倍的乙醇進行二次提取，得到第二提取液和第二提取藥渣；在所述第二提取藥渣中加 入體積濃度為70%、且質(zhì)量為所述原料17倍的乙醇進行第三次提取，得到第三提取液和 第三提取藥渣；將所述第一提取液、所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液； 將所述提取液濃縮，得到稠膏；將所述稠膏于65°C烘干后進行粉碎，得到抗腫瘤中藥提取 物。
[0061] 實施例3
[0062] 以銳裂荷青花H.japonica(Thunb. )pratl.Var.SubinciaFedde的干燥根莖為原 料，以體積濃度為80%、且質(zhì)量為所述原料21倍的乙醇回流提取，得到第一提取液和第一 提取藥渣；在所述第一提取藥渣中加入體積濃度為80%、且質(zhì)量為所述原料19倍的乙醇 進行二次提取，得到第二提取液和第二提取藥渣；在所述第二提取藥渣中加入體積濃度為 80 %、且質(zhì)量為所述原料18倍的乙醇進行第三次提取，得到第三提取液和第三提取藥渣； 將所述第一提取液、所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液；將所述提取液 濃縮，得到稠膏；將所述稠膏于70°C烘干后進行粉碎，得到抗腫瘤中藥提取物。
[0063] 實施例4
[0064] 以等質(zhì)量的荷青花Hylomeconjaponica(Thunb. )pratl、多裂荷青花H*japonica(Thunb.) pratl.Var.dissecta(Franchsavat. )Fedde、銳裂荷青花Rjaponica(Thunb. )pratl.Var.Subincia Fedde為原料，以體積濃度為70%、且質(zhì)量為所述原料20倍的乙醇回流提取，得到第一提取液 和第一提取藥渣；在所述第一提取藥渣中加入體積濃度為70%、且質(zhì)量為所述原料18倍的 乙醇進行二次提取，得到第二提取液和第二提取藥渣；在所述第二提取藥渣中加入體積濃 度為70%、且質(zhì)量為所述原料18倍的乙醇進行第三次提取，得到第三提取液和第三提取藥 渣；將所述第一提取液、所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液；將所述提 取液濃縮，得到稠膏；將所述稠膏于70°C烘干后進行粉碎，得到抗腫瘤中藥提取物。
[0065] 實施例5
[0066] 以荷青花Hylomeconjaponica(Thunb. )pratl的干燥根莖為原料，以體積濃度為 70%、且質(zhì)量為所述原料20倍的乙醇回流提取，得到第一提取液和第一提取藥渣；在所述 第一提取藥渣中加入體積濃度為70%、且質(zhì)量為所述原料18倍的乙醇進行二次提取，得到 第二提取液和第二提取藥渣；在所述第二提取藥渣中加入體積濃度為70%、且質(zhì)量為所述 原料18倍的乙醇進行第三次提取，得到第三提取液和第三提取藥渣；將所述第一提取液、 所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液；將所述提取液濃縮，得到稠膏；將 所述稠膏于70°C烘干后進行粉碎，得到抗腫瘤中藥提取物。
[0067] 應(yīng)用例1
[0068] 將本發(fā)明實施例5提供的抗腫瘤中藥提取物（老鼠七組）和以其他原料來源（扣 子和青蛙七）提取的藥物通過HT-29、SW620細胞實驗，對腫瘤細胞的IC50進行了初步研 宄，結(jié)果顯示老鼠七組提取物具有良好的抗腫瘤作用，具體結(jié)果參見表1。
[0069] 需要指出的是，在本發(fā)明中，所示出的老鼠七（又名拐棗七），其作為一種中藥來 源，包括罌粟科、荷青花屬（荷青花、多裂荷青花或銳裂荷青花）的植物。
[0070] 表1不同原料來源的抗腫瘤中藥提取物的IC50檢測結(jié)果
[0071]
【主權(quán)項】
1. 一種抗腫瘤中藥提取物的提取方法，其特征在于，包括以罌粟科、荷青花屬植物的根 莖為原料，進行乙醇回流提取，并將得到的提取液進行濃縮、干燥，得到抗腫瘤中藥提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，具體包括以下步驟： 1) 、以罌粟科、荷青花屬植物的根莖為原料，用體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述原料 17-21倍的乙醇回流提取，得到提取液； 2) 、將所述提取液濃縮，得到稠膏； 3) 、將所述稠膏烘干，得到抗腫瘤中藥提取物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于，在步驟1)中，所述原料包括荷青花、 多裂荷青花或銳裂荷青花中的一種或多種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步驟1)中，所述原料包括等重量的 荷青花、多裂荷青花或銳裂荷青花。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步驟3)中，所述烘干的溫度為 65-75。。。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步驟3)中，具體包括： 將所述稠膏烘干后，進行粉碎，得到粉末狀抗腫瘤中藥提取物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3-6任一項所述的提取方法，其特征在于，在步驟1)中，具體包括： a) 、以罌粟科、荷青花屬植物的根莖為原料，以體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述原料 19-21倍的乙醇回流提取，得到第一提取液和第一提取藥渣； b) 、在所述第一提取藥渣中加入體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述原料17-19倍的乙 醇進行二次提取，得到第二提取液和第二提取藥渣； c) 、在所述第二提取藥渣中加入體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述原料17-19倍的乙 醇進行第三次提取，得到第三提取液和第三提取藥渣； d) 、將所述第一提取液、所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取方法，其特征在于，在步驟d)之后還包括： 將所述第三提取藥渣干燥后回收。
9. 權(quán)利要求1-8任一項所述的提取方法提取的中藥提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng) 用。
10. 權(quán)利要求1-8任一項所述的提取方法提取的中藥提取物在制備通過上調(diào)腫瘤細胞 p21蛋白表達，并抑制Cdk-4/Cdk-6-cyclin Dl復(fù)合物的活性，使細胞周期停滯于G1期的抗 腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抗腫瘤中藥提取物的提取方法和應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。該抗腫瘤中藥提取物的提取方法包括以罌粟科、荷青花屬植物的根莖為原料，進行乙醇回流提取，并將得到的提取液進行濃縮、干燥，得到抗腫瘤中藥提取物。該抗腫瘤中藥提取物能夠提高HT-29和SW620細胞G1期細胞的百分率，并且能夠降低該腫瘤細胞S期和G2期細胞的比率，具有誘導(dǎo)HT-29和SW620細胞發(fā)生G1期阻滯，并抑制該兩種腫瘤細胞的增殖能力的效果；另外，該抗腫瘤中藥提取物處理結(jié)腸癌細胞后，會使得活化形式的caspase-3和caspase-9表達量增加，并且會提高促進細胞凋亡蛋白的表達量，降低抑制細胞凋亡蛋白的表達量。
【IPC分類】A61P35-00, A61K36-66
【公開號】CN104800294
【申請?zhí)枴緾N201510209936
【發(fā)明人】孫靜, 張欣, 孫陽, 唐志書, 郭東艷
【申請人】陜西中醫(yī)學(xué)院, 孫靜
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年4月28日