抗腫瘤中藥提取物的提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域,具體而言,涉及一種抗腫瘤中藥提取物及其提取方法和應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國(guó)幅員遼闊,自然條件多樣,分布著極為豐富的傳統(tǒng)藥物資源,是世界上天然藥 物資源種類最多,栽培歷史最悠久的國(guó)家。且有許多地道藥材馳名中外,并出口到100多個(gè) 國(guó)家和地區(qū)。
[0003] 中草藥具有取材天然,作用平穩(wěn),毒副作用小等西藥無法比擬的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn),隨著社 會(huì)的進(jìn)步,生產(chǎn)力的發(fā)展,人們?cè)絹碓阶非蠼】甸L(zhǎng)壽,現(xiàn)代人越來越把注意力從化合成藥轉(zhuǎn) 向天然藥,希望從天然藥中開發(fā)出更為安全有效的新藥以替代前者,從而減少藥源疾病的 發(fā)生。因此,發(fā)展中草藥不僅傳承了中華民族千百年的精華,也具有廣大的市場(chǎng)前景及經(jīng)濟(jì) 效益。
[0004] 另外,中草藥是天然物質(zhì),保持了各種成分的自然性和生物活性,其成分易被吸收 利用,不能被吸收的也能順利排出體外,在體外被細(xì)菌等分解。其毒副作用小,并且動(dòng)物機(jī) 體不產(chǎn)生抗藥性;而一般的化學(xué)藥物成分會(huì)積累在機(jī)體內(nèi)或長(zhǎng)期殘留;對(duì)動(dòng)物機(jī)體具有較 大的毒副作用。
[0005] 腫瘤是指機(jī)體在各種致瘤因子作用下,局部組織細(xì)胞增生所形成的新生物,是目 前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中頗為難治的疾病,而且隨著人們工作壓力的加大,環(huán)境污染的加劇等因素,月中 瘤呈現(xiàn)出多發(fā)趨勢(shì)。而傳統(tǒng)的腫瘤(惡性腫瘤)治療多采用西藥、放療、化療或手術(shù)等手 段,費(fèi)用昂貴,且對(duì)機(jī)體的損傷很大;因此,從中藥草為出發(fā)點(diǎn),提供一種具有抗腫瘤藥物及 其制備方法是人們亟待解決的一個(gè)技術(shù)問題。
[0006] 有鑒于此,特提出本發(fā)明。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種抗腫瘤中藥提取物的提取方法,該方法以罌粟 科、荷青花屬植物的根莖為原料,實(shí)現(xiàn)了抗腫瘤中藥提取物的制備。該抗腫瘤中藥提取物能 夠提高HT-29和SW620細(xì)胞Gl期細(xì)胞的百分率,并且能夠降低該腫瘤細(xì)胞S期和G2期細(xì) 胞的比率,具有誘導(dǎo)HT-29和SW620細(xì)胞發(fā)生Gl期阻滯,并抑制該兩種腫瘤細(xì)胞的增殖能 力的效果。
[0008] 本發(fā)明的第二目的在于提供上述的方法提取的抗腫瘤中藥提取物的用途。
[0009] 該抗腫瘤中藥提取物處理結(jié)腸癌細(xì)胞后,會(huì)使得活化形式的caspase-3和 caspase-9表達(dá)量增加,并且會(huì)提高促進(jìn)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)量,降低抑制細(xì)胞凋亡蛋白的 表達(dá)量;因此可用于制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用中。
[0010] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的,特采用以下技術(shù)方案:
[0011] 一種抗腫瘤中藥提取物的提取方法,包括以罌粟科、荷青花屬植物的根莖為原料, 進(jìn)行乙醇回流提取,并將得到的提取液進(jìn)行濃縮、干燥,得到抗腫瘤中藥提取物。
[0012] 本發(fā)明的這種提取方法,實(shí)現(xiàn)了抗腫瘤中藥提取物的制備,罌粟科、荷青花屬植物 的根莖富含大量的生物堿,其根莖本身具有祛風(fēng)濕、止血、止痛、舒筋活絡(luò)、散瘀消腫等功 效。而經(jīng)過回流提取后,濃縮以及干燥后,發(fā)現(xiàn)其提取物具有抗腫瘤的效果,該抗腫瘤中藥 提取物能夠提高HT-29和SW620細(xì)胞Gl期細(xì)胞的百分率,并且能夠降低該腫瘤細(xì)胞S期和 G2期細(xì)胞的比率,具有誘導(dǎo)HT-29和SW620細(xì)胞發(fā)生Gl期阻滯,并抑制該兩種腫瘤細(xì)胞的 增殖能力的效果。另外,該提取物還具有提高促進(jìn)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)量,降低抑制細(xì)胞凋 亡蛋白的表達(dá)量的效果,同時(shí)還會(huì)降低結(jié)腸癌細(xì)胞中ERK1/2信號(hào)通路蛋白活性,使得結(jié)腸 癌細(xì)胞中磷酸化的ERK1/2和磷酸化的MEK1/2的表達(dá)量就下降,從而通過抑制ERK1/2信號(hào) 轉(zhuǎn)導(dǎo)通路降低腫瘤細(xì)胞增殖。而且,該提取物的原料來源廣泛,且無副作用,因此可很好的 應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備應(yīng)用中。
[0013] 可選的,該提取方法具體包括以下步驟:
[0014]1)、以罌粟科、荷青花屬植物的根莖為原料,用體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述 原料17-21倍的乙醇回流提取,得到提取液;
[0015]2)、將所述提取液濃縮,得到稠膏;
[0016]3)、將所述稠膏烘干,得到抗腫瘤中藥提取物。
[0017]利用體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述原料17-21倍的乙醇可盡可能充分地將 根莖原料中的有效成分提取完全。
[0018] 可選的,在步驟1)中,所述原料包括荷青花、多裂荷青花或銳裂荷青花中的一種 或多種。
[0019] 上述鎖具的三種具體植物種,其根莖的藥用價(jià)值大,所含的有效成分豐富,因此, 可作為優(yōu)選的提取原料。
[0020] 可選的,在步驟1)中,所述原料包括等重量的荷青花、多裂荷青花或銳裂荷青花。
[0021] 將以上三種原料均按照相同的重量進(jìn)行回流提取,使得得到的提取物的有效成分 豐富全面,具有更佳的抗腫瘤效果。
[0022] 可選的,在步驟3)中,所述烘干的溫度為65-75 °C。
[0023]在該溫度范圍內(nèi)進(jìn)行烘干操作,可減少濃縮液中有效成分的破壞,從而保證了抗 腫瘤提取物的藥效。
[0024] 可選的,在步驟3)中,具體包括:將所述稠膏烘干后,進(jìn)行粉碎,得到粉末狀抗腫 瘤中藥提取物。
[0025]在應(yīng)用的過程中,一般需要將抗腫瘤中藥提取物配置成相應(yīng)的濃度,因此,為了便 于應(yīng)用,將稠膏烘干后進(jìn)行粉碎,以獲得粉末狀的抗腫瘤中藥提取物。
[0026] 可選的,在步驟1)中,具體包括:
[0027]a)、以罌粟科、荷青花屬植物的根莖為原料,以體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述 原料19-21倍的乙醇回流提取,得到第一提取液和第一提取藥渣;
[0028]b)、在所述第一提取藥渣中加入體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述原料17-19倍 的乙醇進(jìn)行二次提取,得到第二提取液和第二提取藥渣;
[0029]c)、在所述第二提取藥渣中加入體積濃度為60-80%、且質(zhì)量為所述原料17-19倍 的乙醇進(jìn)行第三次提取,得到第三提取液和第三提取藥渣;
[0030]d)、將所述第一提取液、所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液。
[0031] 對(duì)原料進(jìn)行三次回流提取,且后兩次回流提取所用的乙醇量較少,這樣便于將原 料中的有效成分提取完全。
[0032] 可選的,在步驟d)之后還包括:將所述第三提取藥渣干燥后回收。
[0033] 回流提取完畢后,由于藥渣中還會(huì)含有一定量的有效抗癌成分依舊木質(zhì)纖維等, 因此將得到的藥渣干燥后回收利用,以實(shí)現(xiàn)資源的合理利用,減少浪費(fèi)。
[0034] 所述的提取方法提取的中藥提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0035] 所述的提取方法提取的中藥提取物在制備通過上調(diào)腫瘤細(xì)胞p21蛋白表達(dá),并抑 制Cdk-4/Cdk-6-cyclinDl復(fù)合物的活性,使細(xì)胞周期停滯于Gl期的抗腫瘤藥物中的應(yīng) 用。
[0036] 與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果為:
[0037](1)、該抗腫瘤中藥提取物具有提高HT-29和SW620細(xì)胞Gl期細(xì)胞的百分率,并且 能夠降低該腫瘤細(xì)胞S期和G2期細(xì)胞的比率,具有誘導(dǎo)HT-29和SW620細(xì)胞發(fā)生Gl期阻 滯,并抑制該兩種腫瘤細(xì)胞的增殖能力的效果。
[0038] (2)、該抗腫瘤中藥提取物處理結(jié)腸癌細(xì)胞后,會(huì)使得活化形式的caspase-3和 caspase-9表達(dá)量增加,并且會(huì)提高促進(jìn)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)量,降低抑制細(xì)胞凋亡蛋白的 表達(dá)量;因此可用于制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用中。
[0039] (3)、該抗腫瘤中藥提取物會(huì)降低結(jié)腸癌細(xì)胞中ERK1/2信號(hào)通路蛋白活性,使得 結(jié)腸癌細(xì)胞中磷酸化的ERK1/2和磷酸化的MEK1/2的表達(dá)量就下降,從而通過抑制ERK1/2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路降低腫瘤細(xì)胞增。
[0040](4)、該抗腫瘤中藥提取物的原料來源廣泛,無副作用,且成本低,因此可很好的應(yīng) 用于抗腫瘤藥物的制備應(yīng)用中。
【附圖說明】
[0041] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案,以下將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。
[0042] 圖1為本發(fā)明提供的中藥提取物的EdU細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖;
[0043] 圖2為本發(fā)明提供的中藥提取物對(duì)HT-29的細(xì)胞凋亡率圖;
[0044] 圖3為本發(fā)明提供的中藥提取物對(duì)SW-620的細(xì)胞凋亡率圖;
[0045] 圖4-6為本發(fā)明提供的中藥提取物對(duì)HT-29的細(xì)胞周期的影響圖;
[0046] 圖7-9為本發(fā)明提供的中藥提取物對(duì)SW-620的細(xì)胞周期的影響圖;
[0047] 圖10為用本發(fā)明提供的中藥提取物對(duì)HT-29和SW-620處理后,凋亡調(diào)控相關(guān)蛋 白表達(dá)結(jié)果圖;
[0048] 圖11為用本發(fā)明提供的中藥提取物對(duì)HT-29和SW-620處理后,細(xì)胞周期調(diào)控相 關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果圖;
[0049] 圖12為用本發(fā)明提供的中藥提取物對(duì)HT-29和SW-620處理后,ERK1/2信號(hào)通路 蛋白表達(dá)結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0050] 下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述,但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì) 理解,下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明,而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件者,按照常