蛋白激酶Stk38在制備治療膿毒癥藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，具體涉及蛋白激酶Stk38在制備治療膿毒 癥藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在病原生物感染機(jī)體的過(guò)程中，機(jī)體的固有免疫應(yīng)答首先被激活。固有免疫應(yīng)答 的激活主要依賴于機(jī)體免疫細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體（Pattern recognition receptors， PRRs)對(duì)病原生物特有成分的識(shí)別。目前發(fā)現(xiàn)的PRR主要分為三類：1、TLRs (Toll-like receptors) ;2、 RLRs(RIG-I-like receptors) ;3、 NLRs(Nucleotide-oligomerization domain-like receptors)〇
[0003] TLRs是一種進(jìn)化上高度保守的胚系編碼的I型跨膜蛋白，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞 內(nèi)區(qū)組成。目前發(fā)現(xiàn)并克隆了十多種哺乳動(dòng)物的TLRs分子，分別選擇識(shí)別不同的病原體相 關(guān)分子模式。TLR2特異性識(shí)別革蘭陽(yáng)性菌的脂磷壁酸（LTA)，TLR3識(shí)別病毒的雙鏈RNA， TLR4識(shí)別格蘭陰性菌的脂多糖（LPS)，TLR9識(shí)別細(xì)菌和病毒的非甲基化CpG DNA等等。TLR2 的活化能夠促進(jìn)Th2型免疫應(yīng)答，而TLR9的活化則能夠促進(jìn)Thl型免疫應(yīng)答。識(shí)別PAMPs 之后，TLRs啟動(dòng)MyD88依賴的或者TRIF依賴的免疫反應(yīng)。在TLRs家族中，TLR2、TLR5、 TLR7、TLR8和TLR9介導(dǎo)的是MyD88依賴的信號(hào)通路。TLR3介導(dǎo)的信號(hào)通路依賴接頭蛋白 TRIF。而TLR4活化的信號(hào)通路則包括以上兩種。MyD88以及TRIF依賴的信號(hào)通路都會(huì)激 活NF-kB與MAPKs，進(jìn)而促進(jìn)促炎因子的釋放。作為識(shí)別保守結(jié)構(gòu)的病原體成分的關(guān)鍵分 子，Toll樣受體如何檢測(cè)病原體侵入，引發(fā)先天免疫反應(yīng)和宿主的抗原特異性的適應(yīng)性免 疫抑制是免疫學(xué)研宄的熱點(diǎn)。TLRs對(duì)于宿主防御至關(guān)重要，TLRs信號(hào)與炎癥和自身免疫性 疾病的發(fā)病也都密切相關(guān)。
[0004] 適度的TLRs活化以及炎癥反應(yīng)有利于機(jī)體清除入侵的病原體，但過(guò)度或者過(guò)長(zhǎng) 的持續(xù)活化以及大量促炎因子的釋放可能導(dǎo)致自身免疫性疫病甚至腫瘤的發(fā)生。因此，為 了避免過(guò)度炎癥帶來(lái)的損傷，機(jī)體的免疫系統(tǒng)能夠通過(guò)多種負(fù)向調(diào)控機(jī)制調(diào)節(jié)TLRs的活 化。近年來(lái)，隨著研宄的不斷深入，不斷有負(fù)向調(diào)控分子被發(fā)現(xiàn)。最近有研宄發(fā)現(xiàn)，組蛋白 甲基轉(zhuǎn)移酶Ashll能夠負(fù)向調(diào)控TLR啟動(dòng)的炎癥反應(yīng)，Ashll缺失的小鼠更易患自身免疫 性疾病。盡管如此，眾多的TLRs信號(hào)通路是如何被特異性活化及調(diào)節(jié)的，仍需要不斷深入 的闡明。
[0005] 絲氨酸 / 蘇氨酸激酶 38(Serine/threonine kinase 38, Stk38),又被成為核 Dbf2p 相關(guān)激酶 I (nuclear Dbf2p_related kinase I, Ndrl),是屬于 AGC 類絲 / 蘇氨酸激 酶中的NDR/LATS激酶家族，在進(jìn)化中高度保守。Stk38對(duì)中心體的精確復(fù)制必不可少，并且 能夠促進(jìn)Fas誘導(dǎo)的凋亡。與正常小鼠相比較，Stk38的缺失會(huì)導(dǎo)致小鼠更易患T細(xì)胞淋 巴瘤。Stk38還能夠穩(wěn)定c-myc蛋白及防止p21的堆積，從而促進(jìn)細(xì)胞周期中Gl期的正常 進(jìn)行。迄今為止，Stk38是否能夠在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用仍然未知（Hergovich，A.等，NDR kinases regulate essential cell processes from yeast to humans，Nat Rev Mol Cell Biol，7 (4):253-64.)。
[0006] 膿毒癥（sepsis)是指由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome, SIRS)，是重癥監(jiān)護(hù)過(guò)程中導(dǎo)致死亡的首要原因。由 于其相對(duì)高發(fā)，且致死率較高，膿毒癥因此成為主要的公共健康問(wèn)題之一。在膿毒癥發(fā)生 發(fā)展過(guò)程中，機(jī)體免疫功能紊亂具有非常重要的作用。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床表現(xiàn)差異 大，治療困難。膿毒癥患者如果診斷延誤或者不能得到及時(shí)恰當(dāng)?shù)闹委?，可能發(fā)展為嚴(yán)重 膿毒癥及膿毒癥休克，甚至導(dǎo)致死亡，病死率高達(dá)30 %以上（Levy, M.M.等，Outcomes of the Surviving Sepsis Campaign in intensive care units in the USA and Europe:a prospective cohort study The Lancet Infectious Diseases, 2012, 12(12)，919 - 924)〇 因此，膿毒癥的早期診斷和治療成為急救醫(yī)學(xué)的研宄熱點(diǎn)之一。為了更加有效地治療和預(yù) 防膿毒癥，目前人們已經(jīng)越來(lái)越關(guān)注膿毒癥的早期診斷、治療及病情發(fā)展預(yù)判。
[0007] TLRs識(shí)別相應(yīng)特異性配體后發(fā)生構(gòu)象變化，活化下游信號(hào)傳導(dǎo)分子，誘導(dǎo)炎癥 細(xì)胞因子、趨化因子等細(xì)胞因子的表達(dá)，啟動(dòng)固有免疫反應(yīng)。如果TLRs信號(hào)傳導(dǎo)途徑過(guò) 度活化，則導(dǎo)致過(guò)度炎癥反應(yīng)，造成組織損傷。腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、白細(xì)胞介素 (IL)-I β、IL-6等炎癥細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)細(xì)胞黏附因子 (ICAM)等黏附分子及一氧化氮（NO)等，招募中性粒細(xì)胞，造成血管內(nèi)皮損傷，激活凝血/ 纖溶系統(tǒng)，導(dǎo)致組織細(xì)胞損傷。組織細(xì)胞損傷釋放的危險(xiǎn)相關(guān)信號(hào)（Danger-associated molecular patterns，DAMP)又進(jìn)一步活化TLRs，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo) 致膿毒性休克、多器官功能障礙，甚至死亡。
[0008] 已有研宄發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者單核/巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞高表達(dá)TLR2、TLR4及 其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，并且高表達(dá)TNF-a、IL-I β等炎癥細(xì)胞因子，表明TLRs信號(hào)途徑異 ?；罨瘏⑴c膿毒癥的發(fā)生發(fā)展。有文獻(xiàn)報(bào)道，膿毒癥發(fā)病依賴于TLR9,抑制TLR9介導(dǎo) 的炎癥反應(yīng)，能夠降低膿毒癥造成的疾病損傷及其病死率（Plitas，G.等，Toll-Iike receptor 9inhibition reduces mortality in polymicrobial sepsis.J Exp Med, 2008, 205 (6) :1277-83. Yasuda，H.等，Chloroquine and inhibition of Toll-like receptor 9protect from sepsis-induced acute kidney injury. Am J Physiol Renal Physiol,2008, 294(5):F105〇-8) 〇
[0009] 雖然本領(lǐng)域中已知某些模式識(shí)別受體與膿毒癥具有一定的相關(guān)性，如TLR2、TLR4 等。但本領(lǐng)域中已知的PRR功能各異，信號(hào)傳導(dǎo)也不相同，如何尋找出特異性調(diào)控某條信號(hào) 通路的關(guān)鍵分子難度很大。
[0010]目前，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)有關(guān)蛋白激酶Stk38與膿毒癥相關(guān)性的研宄報(bào)道。
[0011] 而本領(lǐng)域迫切需要尋找到可有效用于膿毒癥治療、病情發(fā)展預(yù)判的分子，并將其 用于這些用途中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的在于提供該分子在制備治療膿毒癥藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明的另一目 的在于尋找到可有效用于膿毒癥治療及病情發(fā)展預(yù)判的新分子。
[0013] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了對(duì)Toll樣受體9介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)具有調(diào)控作用的分子一蛋白激酶 Stk38,由此本發(fā)明進(jìn)一步提供了 Stk38分子在用于對(duì)象中膿毒癥治療、膿毒癥病情發(fā)展預(yù) 判中的新用途。
[0014] 本發(fā)明提供了蛋白激酶Stk38在制備治療膿毒癥藥物中的應(yīng)用。
[0015] 所述的蛋白激酶Stk38來(lái)自：人、大鼠、小鼠、犬、馬、牛、兔或猴等。
[0016] 所述的蛋白激酶 Stk38, Gene ID: 11329。
[0017] 所述的蛋白激酶Stk38在制備治療膿毒癥藥物中的應(yīng)用，該應(yīng)用具體是指提高蛋 白激酶Stk38表達(dá)量的試劑。
[0018] 所述的提高蛋白激酶Stk38表達(dá)量的試劑，包括但不限于：Stk38分子、Stk38分子 作為活性物質(zhì)的組合物、含有Stk38分子的載體（如質(zhì)粒）等。
[0019] 所述的提高蛋白激酶Stk38表達(dá)量的試劑，具體的給藥方式可采取直接裸DNA 注射法、脂質(zhì)體包裹DNA直接注射法、金包被DNA基因槍轟擊法、繁殖缺陷細(xì)菌攜帶質(zhì)粒 DNA法、復(fù)制缺陷腺病毒攜帶目的DN