包括槲皮素-3-O-β-D-葡糖苷酸的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，包括槲皮素-3-0-β-D-葡糖苷酸 (Q3GA)作為活性成分。
【背景技術(shù)】
[0002] 正常體細(xì)胞揭示了由于細(xì)胞衰老而造成的有限數(shù)量的增殖。細(xì)胞衰老是由多 種因素所誘導(dǎo)的，如由于DNA末端復(fù)制問題造成的端?？s短（Collado et al. ,Cell. (2007) 130:223-233)、腫瘤抑制基因和癌基因的活性改變、炎癥、氧化應(yīng)激化療劑以及暴露 于紫外線照射和電離福射（Kuilman et al.，Genes&Development. (2010)24:2463-2479)。 衰老細(xì)胞顯示出放大和扁平的細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)停滯、在細(xì)胞核中的DNA損傷病灶、衰老 相關(guān)的分泌表型（SASP)和衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（SA-β-gal)活性（Dimri et al.,Proc Natl Acad Sci USA. (1995)92:9363-9367 ；Rodier and Campisi1J Cell Biol. (2011) 192:547-556)。雖然已知不同的因素誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，但2種腫瘤抑制途徑 p53/p21和Rb/pl6在細(xì)胞衰老的調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用（Campisi, Curr Opin Genet Dev. (2011)21:107-112)。
[0003] 越來越多的證據(jù)表明，細(xì)胞衰老有助于組織和有機(jī)體老化、組織修復(fù)和再生、以及 癌癥進(jìn)展和保護(hù)。此外，細(xì)胞衰老是有時(shí)還是多種年齡有關(guān)的疾病，包括癌癥、動(dòng)脈粥樣硬 化、皮膚老化、神經(jīng)變性疾病、肌肉萎縮、骨質(zhì)疏松癥和良性前列腺增生的發(fā)病機(jī)制的起因。 最近的證據(jù)表明在體內(nèi)抑制細(xì)胞衰老或去除衰老細(xì)胞可以防止或延緩與年齡有關(guān)的組織 功能障礙并延長(zhǎng)壽命。端粒酶敲除小鼠披露了過早老化的表型，端粒酶缺失小鼠的端粒酶 恢復(fù)減少了 DNA損傷信號(hào)，并挽救了多個(gè)器官的退行性表型（Jaskelioff et al. ,Nature. (2011)469:102-106)。BUBRl早衰樣小鼠的中的pl6INK4a陽(yáng)性衰老細(xì)胞的消除使年齡相 關(guān)的組織表型和已建立的與年齡有關(guān)的疾病的減毒進(jìn)展延遲發(fā)作（Baker et al.，Nature. (2011) 479:232-236)。在小鼠中，肝星狀細(xì)胞在肝纖維化的過程老化，并且已經(jīng)知道，肝星 狀細(xì)胞的老化抑制過度肝纖維化。人們已經(jīng)知道了不被適當(dāng)控制的過高的P53活性加速衰 老，但與此相反，適當(dāng)?shù)膒53活性抑制衰老。
[0004] 而且，也報(bào)道了一些具有細(xì)胞衰老抑制作用的材料的研宄結(jié)果。藥物或單一 成分，如維生素 C、N-乙酰半胱氨酸、NS398和表無羈萜醇抑制細(xì)胞衰老（Won-Sang et al. , Nutrition Research and Practice. (2007) 1:105-112 ;Kim et al. , Mech Ageing Dev. (2008) 129:706-713;Yang et al·, Planta Med. (2011)77:441-449)。而且，據(jù)報(bào)道， 雷帕霉素在小鼠模型和4, 4' -二氨苯砜在線蟲中抑制老化相關(guān)疾病的產(chǎn)生，以及增大健康 調(diào)整型預(yù)期壽命（Harrison et al·，Nature. (2009)460:392-395 ;Cho et al·，Proc Natl Acad Sci U S A. (2010)107:19326-19331)。
[0005] 篇蓄（Polygoni avicularis Herba)也被稱為篇蓄草并具有抗氧化作用。也已 知它具有各種作用，如：在小鼠模型中提高因電磁波照射所降低的精子流動(dòng)性；恢復(fù)人體 牙齦發(fā)炎；抑制膽管結(jié)扎引起的肝纖維化；恢復(fù)對(duì)乙酰氨基酚引起的腎毒性；和釋放血管 平滑肌細(xì)胞從而擴(kuò)張血管（Milan et al.，Pak J Biol Sci. (2011) 14:720-724 ;Sohn et al., Environ Toxicol Pharmacol. (2009)27:225-230 ;Yin et al.,J EthnopharmacoI. (2005)99:113-117)〇
[0006] 另一方面，本發(fā)明人在韓國(guó)專利公開號(hào)10-2011-0041710中公開了一種用于抑制 老化的藥物組合物，包括大黃（Rhei rhizoma)、大薊（Cirsii Radix)、車前子（Plantaginis semen)、 肉桂(Cinnamoni cortex)、 Cinnamoni cortex spissus、 Euonimi lignum suberalatu、Salicis radicis cortex、篇蓄(Polygoni avicularis herba)和海棠根 (Chaenomelis langenariae radix)中的至少一種的藥草提取物作為活性成分，但沒有提 到本公開內(nèi)容的槲皮素-3-〇-f3_D-葡糖苷酸（Q3GA)化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 【技術(shù)問題】
[0008] 本公開內(nèi)容涉及提供一種用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，包括槲皮素-3-0- β -D-葡 糖苷酸（Q3GA)作為有效成分。
[0009] 本公開內(nèi)容還涉及提供一種用于抑制細(xì)胞衰老的藥物組合物，包括槲皮 素-3-0-β-D-葡糖苷酸（Q3GA)作為活性成分，其可對(duì)于皮膚老化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié) 炎、肝炎、慢性受損的皮膚組織、動(dòng)脈硬化、前列腺增生、肝癌等賦予治療效果。
[0010] 本公開內(nèi)容還涉及槲皮素-3-0-β -D-葡糖苷酸（Q3GA)在制備用于抑制細(xì)胞衰 老的組合物或用于抑制細(xì)胞衰老的方法中的應(yīng)用，其包括向受試者給予治療有效量的槲皮 素-3_〇-|3-D-匍糖昔酸（Q3GA)的步驟。
[0011]【技術(shù)方案】
[0012] 作為一個(gè)總的方面，在本公開內(nèi)容中，檢查了在人成纖維細(xì)胞和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 中，12種從篇蓄（Polygoni avicularis herba)提取物分離并純化的單組分的細(xì)胞衰老抑 制作用。結(jié)果是，發(fā)現(xiàn)其中槲皮素-3-〇-f3_D-葡糖苷酸（Q3GA)抑制在人成纖維細(xì)胞和人 靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中的阿霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老，并且也抑制在復(fù)制性衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞中的細(xì)胞 衰老，從而完成本公開內(nèi)容。
[0013] 本公開內(nèi)容提供了一種抑制細(xì)胞衰老的組合物，包括由以下化學(xué)式1表示的槲 皮素-3-0- β -D-葡糖苷酸（Q3GA)作為活性成分。具體地，槲皮素-3-0- β -D-葡糖苷酸 (Q3GA)可以從篇蓄（Polygoni avicularis Herba)提取物分離，并且更具體地，篇蓄提取物 可以通過向篇蓄甲醇提取物中加入蒸餾水和己烷（η-己烷）后分餾，向蒸餾水層中加入乙 酸乙酯（EtOAc)后分流，向蒸餾水層中加入丁醇（n-BuOH)后分餾來制備。
[0014] 〈化學(xué)式1>
[0015]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，包括由以下化學(xué)式1表示的槲皮素-3-0-e-D-葡 糖苷酸（Q3GA)作為活性成分
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其中所述槲皮素-3-0-0 -D-葡糖苷 酸（Q3GA)是從篇蓄（PolygoniavicularisHerba)提取物分離的。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其中所述篇蓄提取物是通過向篇蓄 甲醇提取物中加入蒸餾水和己烷（n-己烷）后分餾，向蒸餾水層中加入乙酸乙酯（EtOAc) 后分流，向蒸餾水層中加入丁醇（n-BuOH)后分餾來制備的。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其中所述細(xì)胞衰老是成纖維細(xì)胞或 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的衰老或復(fù)制性衰老。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其中成纖維細(xì)胞或臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 的衰老是阿霉素誘導(dǎo)的。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其中抑制細(xì)胞衰老的效果是通過測(cè) 量抑制衰老相關(guān)的0 -半乳糖苷酶（SA-0 -gal)活性或抑制p53表達(dá)來確定的。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其是藥物組合物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其中所述藥物組合物用于治療選自 皮膚老化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肝炎、慢性損傷的皮膚組織、動(dòng)脈硬化、前列腺增生和 肝癌的組中的任意一種疾病。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1的用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，其是食品組合物。
10. 由以下化學(xué)式1表示的槲皮素-3-0- 0 -D-葡糖苷酸（Q3GA)在制備用于抑制細(xì)胞 衰老的組合物中的應(yīng)用
11. 一種抑制細(xì)胞衰老的方法，包括向有需要的受試者給予治療有效量的由以下化學(xué) 式1表不的懈皮素-3-0-0 -D-匍糖苷酸（Q3GA)的步驟
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于抑制細(xì)胞衰老的組合物，包括槲皮素-3-O-β-D-葡糖苷酸(Q3GA)作為有效成分，并且提供一種用于抑制成纖維細(xì)胞或臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞衰老或復(fù)制性衰老的組合物，成纖維細(xì)胞或臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞衰老可通過阿霉素誘導(dǎo)，槲皮素-3-O-β-D-葡糖苷酸(Q3GA)表征為從萹蓄提取物中分離。該組合物通過抑制成纖維細(xì)胞或臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞衰老過程，可用于治療老化相關(guān)的疾病，例如皮膚老化、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肝炎、慢性受損的皮膚組織、動(dòng)脈硬化、前列腺增生、肝癌。
【IPC分類】A61P17-00, A61K31-352, A61K31-35, A61P19-02
【公開號(hào)】CN104717965
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380046714
【發(fā)明人】金栽龍, 孫種根, 梁孝賢, 皇甫敬
【申請(qǐng)人】嶺南大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)
【公開日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2013年9月5日
【公告號(hào)】WO2014038873A1