重組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制品領域，特別是涉及一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用 凝膠及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 喊性成纖維細胞生長因子（Basic fibroblast growth factor，簡寫為bFGF)主 要分布于垂體、腦和神經組織及視網膜、腎上腺、胎盤等，主要作用在起源于中胚層和神經 外胚層的骨骼細胞、成纖維細胞和骨細胞，是重要的促有絲分裂因子，也是形態(tài)發(fā)生和分化 的誘導因子，促進創(chuàng)傷愈合與組織修復，促進組織和神經再生，特別是對燒傷角膜上皮的再 生、角膜基質層和內皮層的修復均有促進作用。
[0003] 自1972年DNA重組技術誕生以來，生命科學進入了一個嶄新的發(fā)展時期，以基因 工程為核心的現代生物技術已應用到農業(yè)、醫(yī)藥、輕工、化工、環(huán)境等各個領域。重組牛堿 性成纖維細胞生長因子（Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，簡寫為 rb-bFGF)是由含有高效表達牛堿性成纖維細胞生長因子基因的大腸桿菌，經發(fā)酵、分離和 高度純化后得到的活性因子，是一種新型的重組基因工程制品。經研究發(fā)現，rb-bFGF可治 療各種原因引起的角膜上皮缺損和點狀角膜病變：復發(fā)性淺層點狀角膜病變、輕中度干眼、 角膜擦傷、輕中度化學燒傷、角膜手術及術后愈合不良、地圖狀（或營養(yǎng)性）單疤性角膜潰 瘍和大皰性角膜炎等眼部疾病。
[0004] 眼睛是人體十分脆弱的器官，對于眼部的藥物的輔料和用量要求嚴格，尤其對眼 用藥物的涂展性要求十分嚴格，眼部用藥一般有滴眼液、眼用凝膠等，為了獲得較持久的藥 效，一般選用眼用凝膠。中國專利CN102389392B公開了一種重組牛堿性成纖維細胞生長因 子眼用凝膠，凝膠基質為羥丙基甲基纖維素和卡波姆，PH值調節(jié)劑為氫氧化鈉或鹽酸，該眼 用凝膠劑具有刺激小，易涂布、藥效持久的優(yōu)點，但是，該眼用凝膠的凝膠基質中的羥丙基 甲基纖維素溶于水后有輕微乳光，而且在熱水中溶解度較小，易析出，含有羥丙基甲基纖維 素的凝膠基質不適合高溫滅菌，該眼用凝膠對眼部存在一定的安全性問題，而且卡波姆是 一種高度親水性陰離子聚合物，與酸性原料配伍會降低其粘性，從而影響該眼用凝膠劑的 涂展性，不利于臨床志愿者使用。

【發(fā)明內容】

[0005] 針對現有技術眼用凝膠的安全性較低，藥效質量難以保證的缺陷，本發(fā)明的目的 是提供一種穩(wěn)定性高、刺激性小、藥效持久、安全而且利于工業(yè)化生產的重組牛堿性成纖維 細胞生長因子眼用凝膠及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的發(fā)明目的通過以下的實施方式來實現。
[0007] -種重組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠，所述眼用凝膠的組分及用量為： 重組牛堿性成纖維細胞生長因子1500-1800 IU; 人血白蛋白〇. 05-0. 20 mg ; 卡波姆 0. 6-1. O mg ; pH調節(jié)劑適量； 注射用水加至〇. 4 ml ; 其中，所述的pH調節(jié)劑為氫氧化鈉或三乙醇胺。
[0008] 本發(fā)明的重組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠，所述眼用凝膠優(yōu)選的組分及 用量為： 重組牛堿性成纖維細胞生長因子1680 IU; 人血白蛋白〇. Img ; 卡波姆0. 8mg ; pH調節(jié)劑適量； 注射用水加至〇. 4ml ; 其中，所述的pH調節(jié)劑為氫氧化鈉或三乙醇胺。
[0009] 另外，本發(fā)明還提供了一種重組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠的制備方 法，包含以下步驟： (1) 將注射用水倒入不銹鋼桶中，攪拌下加入處方量的卡波姆，溶脹過夜，得凝卡波姆 溶液備用； (2) 將處方量的pH調節(jié)劑加入步驟（1)中得到的卡波姆溶液，調節(jié)pH值為6. 5-7. 5后 攪拌均勻，倒入稀配罐； (3) 加入適量注射用水蕩洗不銹鋼桶，蕩洗后的注射水一并倒入稀配罐，在121°C熱壓 下滅菌30min，冷卻至37°C得透明凝膠備用； (4) 將處方量重組牛堿性成纖維細胞生長因子和人血白蛋白溶于適量的注射用水中， 用0. 22 μ m濾膜過濾除菌； (5 )在無菌條件下將步驟（3 )得到的透明凝膠和步驟（4 )得到的溶液混合均勻，得凝膠 藥液； (6)檢測步驟（5)所得的凝膠藥液，合格后，在百級環(huán)境下，使用三合一灌封設備灌裝藥 液至容積為〇. I-Iml的單劑量包裝容器即得成品。
[0010] 本發(fā)明的卡波姆基質是一種水性凝膠基質，能耐受低溫貯存和高溫濕熱滅菌的作 用，避免了因不耐高溫滅菌析出造成延展性能差，難于涂抹的問題，而且卡波姆基質具有良 好的生物相容性，對眼睛和皮膚沒有刺激，是理想的凝膠基質。
[0011] 本發(fā)明通過試驗例6的穩(wěn)定性試驗證明在2°C?8°C下，12個月內各項指標符合標 準，其中本發(fā)明的重組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠的涂展性最佳，說明本發(fā)明的 凝膠基質最好，利于該組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠的使用。
[0012] 本發(fā)明通過試驗例7的刺激性試驗證明本發(fā)明單次及多次給藥后各只家兔各時 間點均未發(fā)現受試藥物對受試動物眼有明顯刺激作用，其眼刺激綜合平均值均為〇,每只家 兔給藥及觀察期間均未見躁動、嗜睡等異常行為活動。說明本發(fā)明的重組牛堿性成纖維細 胞生長因子眼用凝膠對眼部無刺激性，安全性高，質量完全達到國家標準，有利于該重組牛 堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠的推廣和應用。
[0013] 本發(fā)明通過臨床試驗得出采用本發(fā)明重組牛堿性成纖維細胞生長因子眼用凝膠， 在治療各種角膜炎中取得了最佳療效。用本發(fā)明眼用凝膠治療120例，其中痊愈94例，顯 效23例，無效3例，有效率97. 5%。經長期臨床觀察，無毒、無副作用，并不產生耐藥性。
[0014] 總之，與現有技術相比，本發(fā)明具有以下的優(yōu)點： 1) 本發(fā)明的眼用凝膠劑細膩均勻、使用舒適、藥效持久； 2) 本發(fā)明的眼用凝膠劑對眼部安全、無刺激，沒有副作用； 3) 本發(fā)明的眼用凝膠劑穩(wěn)定性高，質量有保障，利于該眼用凝膠劑的工業(yè)化生產。
[0015]
【具體實施方式】
[0016] 下面結合本發(fā)明較佳的實施例做進