專利名稱：喹唑啉化合物在治療多囊腎病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及某些喹唑啉化合物在治療多囊腎病中的應(yīng)用。
多囊腎病以兩種類型發(fā)生常染色體隱性(ARPKD)和常染色體顯性多囊腎病(ADPKD)。這兩種類型的疾病有著不同的遺傳基礎(chǔ)，現(xiàn)已鑒別出導(dǎo)致ADPKD的兩種基因，但還未能識別導(dǎo)致ARPKD的基因。然而這兩種疾病的表征非常相似。它們都是腎小管上皮細(xì)胞過度增生的結(jié)果，細(xì)胞增生最終形成囊而破壞腎小管的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致慢性腎衰。囊形成的原因越來越清楚，那就是，有足夠的證據(jù)表明在所述病變組織的囊液中生長因子EGF/TGFα(這兩種生長因子共享同一種細(xì)胞受體)的水平大大提高了。此外，人們還注意到在ARPKD和ADPKD中EGF受體錯位，它出現(xiàn)在鄰近囊液的腔表面，與底外側(cè)區(qū)相對，就像在正常腎小管上皮細(xì)胞與底外側(cè)區(qū)相對一樣。據(jù)顯示，TGFα和EGF還在體外誘發(fā)腎組織中囊的形成。另外，轉(zhuǎn)基因小鼠中TGFα的過度表達(dá)是一種體內(nèi)細(xì)胞發(fā)生，即TGFα連續(xù)過度表達(dá)的動物將發(fā)展為腎囊。此外，腎囊液含有致有絲分裂濃度的EGR和EGF樣肽，最終囊樣腎組織具有增加了的TGFα的表達(dá)。
EP-A-0787722公開了下文定義的用作抗腫瘤劑的式1化合物。
本發(fā)明涉及一種治療或抑制哺乳動物的多囊腎病的方法，包括給需此治療的哺乳動物施用式1化合物
其中X是可任意地被一個或多個選自下述取代基取代的苯基鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、2-7個碳原子的烷氧羰基、2-7個碳原子的烷基羰基、氨基和1-6個碳原子的鏈烷酰氨基；
R和R1各自獨立地是氫、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基或三氟甲基；R2是氫、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基、三氟甲基；Y是選自下述的基團(tuán)
R3獨立地是氫、1-6個碳原子的烷基、羧基、1-6個碳原子的烷氧羰基、苯基或2-7個碳原子的烷基羰基；n＝2-4；或其可藥用鹽，條件是Y的各個R3可以相同或不同。
可藥用鹽由例如下述的有機酸和無機酸衍生乙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、馬來酸、丙二酸、葡糖酸、氫氯酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸和類似的公知可藥用酸。
烷基、烷氧基、烷氧羰基、烷基羰基和鏈烷酰氨基取代基的烷基部分包括直鏈和支鏈的碳鏈。羧基被定義為-CO2H基團(tuán)。2-7個碳原子的烷氧羰基被定義為-CO2R”基團(tuán)，其中R”是1-6個碳原子的烷基。烷基羰基被定義為-COR”基團(tuán)，其中R”是1-6個碳原子的烷基。當(dāng)X被取代時，它優(yōu)選為單、雙或三取代的，單取代是最優(yōu)選的。當(dāng)本發(fā)明的化合物包含非對稱中心時，本發(fā)明包括各種R和S對映體單體以及這類化合物的外消旋體。
本發(fā)明的化合物中，優(yōu)選的化合物包括其中R、R1和R2是氫的那些化合物；和其中R、R1和R2是氫并且X是未取代的或是被鹵素或1-6個碳原子的烷基單取代的那些化合物。
流程圖A中描述了式9所包括的本發(fā)明化合物的制備，其中R、R1、R2、R3、X和n定義如上并且R4是1-6個碳原子的烷基(優(yōu)選異丁基)，Y’是選自下述的基團(tuán)
其中各個R’3獨立地是1-6個碳原子的烷基、羧基、1-6個碳原子的烷氧羰基、苯基或2-7個碳原子的烷基羰基。根據(jù)流程圖A中所描述的反應(yīng)順序，于約100℃在有或沒有含過量二甲基甲酰胺醛縮二甲醇的溶劑的存在下，將式2的5-硝基氨茴腈加熱轉(zhuǎn)化為式3的脒。將脒3和苯胺4的乙酸溶液加熱1-5小時得到式5的6-硝基-4-苯氨基喹唑啉。使用還原劑如鐵在乙酸-醇混合液中在升高的溫度下還原式5的硝基，得到式6的6-氨基-4-苯氨基喹唑啉。用式7的酰氯或式8的混合酸酐(由相應(yīng)的羧酸制備)在惰性溶劑，如四氫呋喃(THF)中，在有機堿，如吡啶或三乙胺的存在下，將6酰化得到式9表示的本發(fā)明化合物。在所述情況下，其中7或8具有非對稱碳原子時，可使用它們的外消旋或者R或S對映體單體的形式，此時，本發(fā)明的化合物也將分別是外消旋或者R或S旋光活性形式。制備本發(fā)明化合物所需的式2的5-硝基氨茴腈是本領(lǐng)域已知的或者可采用本領(lǐng)域已知的方法制備，可參見例如下述文獻(xiàn)描述的方法Baudet，Recl.Tray.Chim.Pays-Bas，43，710(1924)；Hartmans，Recl.Trav.Chim.Pays-Bas，65，468，469(1946)；Taylor等，美國化學(xué)協(xié)會雜志(J.Amer.Chem.Soc.)，82，6058，6063(1960)；Taylor等，美國化學(xué)協(xié)會雜志(J.Amer.Chem.Soc.)，82，3152，3154(1960)；Deshpande；Seshadri，化學(xué)雜志(Indian J.Chem.)，11.538(1973)；Katritzky，Alan R.；Laurenzo.Kathleen S.，有機化學(xué)雜志(J.Org.Chem.)，51(1986)；Niclas，Hans-Joachim；Bohle，Matthias；Rick，Jens-Detlev；Zeuner，F(xiàn)rank；Zoelch，Lothar，Z.Chem.，25(4)，137-138(1985)。
流程圖A
流程圖B中描述了式12所包括的本發(fā)明化合物的制備，其中R、R1、R2、X和n如上所述。各個R5獨立地是氫、苯基或1-6個碳原子的烷基。按照流程圖B所描述的反應(yīng)，用式11的環(huán)酐在惰性溶劑如四氫呋喃中在堿性催化劑如吡啶或三乙胺的存在下，將式10的6-氨基-4-苯氨基喹唑啉(按流程圖A制備)?；Ａ鞒虉DB
用數(shù)種標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)試驗方法評價本發(fā)明的代表性化合物，表明本發(fā)明的化合物具有蛋白酪氨酸激酶抑制劑的顯著活性，同時也是抗增殖劑。基于在標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)試驗過程中所顯示的活性，本發(fā)明化合物因而可用作抗腫瘤劑。采用的試驗方法和獲得的結(jié)果如下所述。
流程圖C中描述了式19所包括的本發(fā)明化合物的制備，其中Y’、R4和X如上所述。按照流程圖C所描述的反應(yīng)，使用還原劑如亞硫酸氫鈉在四氫呋喃和水組成的兩相體系中在少量相轉(zhuǎn)移催化劑的存在下，將4-氯-6-硝基喹唑啉，13(Morley，JS.和Simpson，化學(xué)協(xié)會雜志(J.Chem.Soc.)，360(1948))還原為6-氨基-4-氯喹唑啉，14。用式15的酰氯或式16的混合酸酐(由相應(yīng)的羧酸制備)在惰性溶劑，如四氫呋喃(THF)中在有機溶劑，如吡啶或N-甲基嗎啉的存在下將14?；?，得到式17化合物。在所述情況下，其中15或16具有非對稱碳原子時，可使用它們的外消旋或者R或S對映體單體形式，此時本發(fā)明的化物也將分別是外消旋或者R或S旋光活性形式。將式17的化合物與式18的苯胺在惰性溶劑，如異丙醇中加熱，得到式19表示的本發(fā)明的化合物。流程圖C
流程圖D中描述了式26所包括的本發(fā)明化合物的制備，其中Y’、R4和X如上所述。按照流程圖D所描述的反應(yīng)，使用鈀催化劑和氫源(可以是氫本身或環(huán)己烯)，將20(按流程圖A制備)的硝基還原為相應(yīng)的氨基化合物21。用式22的酰氯或式23的化合物酸酐(由相應(yīng)的羧酸制備)在惰性溶劑，如四氫呋喃(THF)中在有機堿，如吡啶或N-甲基嗎啉的存在下將21?；玫绞?4的化合物。在所述情況下，當(dāng)22或23具有非對稱碳原子時，可使用它們的外消旋體或者R或S對映體單體形式，此時本發(fā)明的化物也將分別是外消旋或者R或S旋光活性形式。將式24的化合物與式25的苯胺在惰性溶劑，如乙酸中加熱，得到式26表示的本發(fā)明的化合物。流程圖D
采用如下所述的體外和體內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)試驗方法證明本發(fā)明化合物治療或抑制多囊腎病的能力。采用模擬人多囊腎病的這些方法來評價作為本發(fā)明代表性化合物的實施例9的化合物。
體外評價后腎器官培養(yǎng)該體外標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)試驗方法測定了在胚胎小鼠后腎細(xì)胞培養(yǎng)中試驗化合物抑制EGF受體結(jié)合(免疫沉淀的活化RGF-R的蛋白質(zhì)分析)和抑制腎小管囊腫形成(囊腫指數(shù))的能力。采用的胚胎鼠后腎無血漿培養(yǎng)方法先前已有詳細(xì)描述[Avner，E.D.，兒科腎病學(xué)(Pediatr.Nephrol.)292(1989)；Avner，E.D.，Kidney Int.36960(1989)；兒科腎病學(xué)Pediatr.nephrol.)4372(1990)；Sweeney，W.E.，組織培養(yǎng)方法學(xué)雜志(J.Tiss.Cult.Meth.)13163(1991)；Pugh，J.P.，Kidney Int.47774(1995)]。概括地說，就是將由瑞士Webster白鼠胚胎中取出的完整后腎(受孕E13±0.4天)或從E-15到P-14天的整個腎臟切成150μm薄切片，使其在特定的化學(xué)培養(yǎng)液中在Trowell類的器官培養(yǎng)箱中于36±0.5℃和95％濕度的混合空氣-5％CO2中培養(yǎng)。該基礎(chǔ)培養(yǎng)液由等體積的Dublecco改性的Eagle培養(yǎng)液和Ham F-12培養(yǎng)液組成，其中補充有胰島素(8.3×10-7M)、前列腺素E1(7.1×10-8M)、硒(6.8×10-9M)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(6.2×10-8M)和三碘甲狀腺原氨酸(2.9×10-9M)。
向由基礎(chǔ)培養(yǎng)液組成的培養(yǎng)液中加入EGF(15ng/ml)或者EGF(15ng/ml)與濃度0.1nM或1nM(在DMSO中增溶)實施例9化合物的混合物。第14天，將囊腫(BPK)和對照(Balb/C)分離塊在下列條件下培養(yǎng)120小時1、基礎(chǔ)培養(yǎng)液，并加入DMSO作為藥物溶劑的對照2、EGF(15ng/ml)3、EGF(15ng/ml)培養(yǎng)120小時，實施例9的化合物(0.1nM)每天培養(yǎng)2小時4、EGF(15ng/ml)和實施例9的化合物(0.1nM)培養(yǎng)120小時5、EGF(15ng/ml)和實施例9的化合物(1.0nM)培養(yǎng)120小時對于每個培養(yǎng)物，每24小時用新鮮配制的培養(yǎng)液置換組織培養(yǎng)液一次。
于120小時時收獲組織培養(yǎng)物，勻化并使其通過21號針沖破碎細(xì)胞[Donaldson，R.W.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA898477(1992)；Honegger，A.M.，細(xì)胞生物學(xué)雜志J.Cell Biol.)1101541(1990)]。將細(xì)胞碎片沉淀，將上清液轉(zhuǎn)移到microfuge管，按每μm總蛋白加入4.0μm抗-EGFR按。將該混合物培養(yǎng)1小時，加入50μl蛋白A/G和瓊脂糖，并將該混合物于4℃再孵育12小時。該管于4℃離心20分鐘，收集免疫沉淀物。摒棄上清液，沉淀用1ml含蛋白酶抑制劑的RIPA緩沖液洗滌兩次。洗滌后，將沉淀再懸浮于25μl RIPA中，加入5倍的Lanelli樣品緩沖液。將混合物煮沸5分鐘，然后用抗磷酸酪氨酸抗體的蛋白質(zhì)分析程序進(jìn)行分析。該試驗方法的結(jié)果表明EGF受體的磷酰化發(fā)生在EGF的存在下，但在實施例9化合物的存在時該磷?；灰种?，在全部的三種方案中，1.0nM顯示出最大抑制作用。這一發(fā)現(xiàn)與受體功能的抑制是一致的。
利用囊腫指數(shù)定量近曲小管囊腫形成的程度。該指數(shù)由基礎(chǔ)光形態(tài)測量法得到[Loud，A.V.，Lab Invest.50250(1984)]并被標(biāo)準(zhǔn)化為器官培養(yǎng)體系中囊腫形成的定量工具[Pugh，J.P.，Kidney Int.47774(1995)；Avner，E.D.，Kidney Int.28447(1985)；AvnerE.D.，J.Lab.Clin.Med.109441(1987)]。在常規(guī)組織學(xué)制備后，用目鏡測微計對完整培養(yǎng)物的8-10份3μM切片進(jìn)行分級，囊腫形成以Lotus tetragonolobus-陽性小管片段和Dolichos biflorus-陽性小管片段顯示，分為0(觀察不到囊腫)-5級(大于0.20mm的多個囊腫)。在孵育120小時后，對每個處理組的6-8份分離塊按照下面的分級測定囊腫指數(shù)。
囊腫指數(shù)0-未觀察到囊腫1-一個或多個囊腫0.05mm2-多個囊腫 ＞0.05mm；≤0.10mm3-多個囊腫 ＞0.10mm；≤0.15mm4-多個囊腫 ＞0.15mm；≤0.20mm5-多個囊腫 ＞0.20mm下表概述了觀察到的結(jié)果。
這些結(jié)果顯示出實施例9的化合物以劑量依賴方式減少了腎集合管囊腫，證實了囊腫形成的抑制與多囊腎病有關(guān)。
孵育120小時后，對對照組和處理組的完整分離塊進(jìn)行組織學(xué)評價。將組織在4℃的4.0％多聚甲醛磷酸緩沖液(pH7.4)固定30分鐘。然后洗滌分離塊，經(jīng)梯度丙酮脫水，在塑性包埋介質(zhì)中包埋。在超微切刀上以3μM切片，放在載玻片上，用蘇木精或片段特異性凝集素染色。按照先前描述的方法組織學(xué)鑒別腎小球[Sweeney W.E.，組織培養(yǎng)方法學(xué)雜志(J.Tiss.Cult.Meth.)13163(1991)]。腎曲小管用凝集素Lotus tetragonolobus(LTA)鑒別，腎集合管用凝集素Dolichos biflorus(DBA)鑒別[Pugh J.P.，Kidney.Int.47774(1995)；Nauta，兒科腎病學(xué)雜志(J.，Pediatr.Nephrol.)7163(1993)]。這些研究證實了培養(yǎng)液中EGF(15ng/ml)的存在維持了后腎的囊腫結(jié)構(gòu)。這些囊腫用DBA染色-指示了它們的集合管起源。在15ng/ml EGF和1.0nM實施例9的化合物的存在下生長的相同后腎顯示出集合管囊腫的明顯縮小，同時在周圍的后腎中幾乎未觀察到毒性。
體內(nèi)評價將小鼠分為4組；第一組是用在第7、14和21天用0.25mg實施例9的化合物處理的BPK(常染色體隱性PKD小鼠模型)動物(膠腔注射給藥)；第二組是未加處理的BPK對照組；第三組是處理的正常對照組(與上面的劑量方案相同)；第四組是未加處理的正常對照組。未加處理的BPK鼠仔到第17天有兩個可見的囊腫塊。在第24天收取各組的組織。將收取的鼠仔的腎和肝在4％多聚甲醛中固定30分鐘，沖洗并用梯度丙酮脫水。將組織在免疫床(immunobed)上放置40小時，然后進(jìn)行包埋。
對處理BPK組的新鮮腎進(jìn)行粗略分析顯示出8只動物中的3只具有多囊腎，這是在動物剖開后才觀察到的。該組腎的大小大于其它各處理組，但比未處理組的多囊腎小得多(約是未處理組多囊腎的40％)。處理組的對照腎比未處理組稍小。
對全部四組的總腎體積進(jìn)行評價。未處理BPK組的腎約是未處理對照組腎大小的6倍。處理BPK組的腎約是未處理BPK組腎大小的2被，但比未處理BPK組的腎小3倍。處理對照組的腎與未處理對照組的腎相比，體積稍小，但形態(tài)學(xué)上沒有明顯差別。在用實施例9化合物處理的正常鼠中未觀察到腎毒性。
對無論是處理組(用實施例9的化合物)還是未處理組的對照組(非囊的)腎的組織學(xué)評價均顯示出正常的形態(tài)學(xué)外觀。這些處理組或未處理組的非囊腎的三色染色(觀察纖維化)顯示出沒有纖維化跡象(膠原沉積)。
第24天的未處理組的囊腎組織學(xué)切片顯示出數(shù)種囊腫疾病，伴隨正常腎結(jié)構(gòu)的小島受到擴(kuò)張囊腫病變的壓迫。DBA和LTA的染色顯示出在囊腫形成的后期幾乎完全是腎集合管起源。值得注意的是，囊腫病變的腎集合管起源是人類ARPKD的特征。
與這些未處理的腎相比，用實施例9的化合物注射處理(每周三次，30mg/kg)的腎僅顯示出輕度至中度的囊腫疾病，并清楚地顯示了在殘余的近曲小管囊腫中存在有正常的腎集合管。此外，對用實施例9的化合物處理過的腎的三色染色(觀察纖維化)顯示出膠原沉積的明顯減少，并具有良好的小管組織排列。
未處理對照組動物肝臟的組織學(xué)染色揭示出正常的肝三元入門組。相反，BPK組動物的肝臟顯示出多膽管異常和明顯的膽囊上皮增生。用實施例9的化合物處理過的BPK動物的肝臟在形態(tài)學(xué)上顯示出大大改善，僅有輕微膽囊(上皮)增殖。實施例9的化合物在肝臟中的作用首次證明了它在該PKD鼠標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)試驗方法中具有潛在的肝臟疾病的可逆性作用。
根據(jù)本發(fā)明的代表性化合物獲得的結(jié)果，本發(fā)明的化合物可用于治療或抑制多囊腎病。
本發(fā)明的化合物可單獨配制或可與一種或多種可藥用載體聯(lián)合施用。例如溶劑、稀釋劑等配制給藥，可口服給藥，例如以片劑、膠囊、可分散性粉末、顆?；驊腋∫?含有，例如約0.05-5％助懸劑的)、糖漿(含有，例如約10-50％糖)、酏劑(含有，例如約20-50％乙醇)等形式給藥；或者以在等滲介質(zhì)中的無菌注射溶液或懸浮液(含有約0.05-5％助懸劑)形式經(jīng)非胃腸給藥。這類藥物制劑可含有，例如約0.05-90％(重量)的活性成分和載體，更通常是含有約5-60％(重量)的活性成分。
活性成分的有效使用劑量可隨使用的特定化合物、給藥方式和所治療的適應(yīng)癥的嚴(yán)重程度而變化。但一般來說，當(dāng)本發(fā)明化合物的每日給藥劑量為約0.5～1000mg/kg動物體重時可獲得令人滿意的效果，該每日劑量可任選地分2～4次給藥或者以緩釋形式給藥。對于較大哺乳動物而言，每日總劑量為約1～1000mg，優(yōu)選為約2-500mg。適于內(nèi)服的劑型含有約0.5～1000mg的本發(fā)明化合物和固體或液體可藥用載體的精細(xì)混合物?？蓪o藥方案進(jìn)行調(diào)整以獲得最佳治療反應(yīng)。例如每日可分?jǐn)?shù)次給藥或者根據(jù)治療情況的急迫性按比例減少劑量。
這些化合物可口服以及通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑給藥。固體載體包括淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和高嶺土，液態(tài)載體包括無菌水、聚乙二醇、非離子表面活性劑和食用油，如玉米油、花生油和芝麻油，只要它們與活性成分的性質(zhì)相適應(yīng)并可配制成所需的給藥形式。也可包括在藥物組合物的配制過程中常用的輔劑，如芳香劑、著色劑、防腐劑和抗氧劑，例如維生素E、抗壞血酸、BHT和BHA。
基于易于制備和給藥的觀點，優(yōu)選的藥物制劑是固體制劑，尤其是片劑和固體或液體填充的膠囊?？诜o藥的化合物是優(yōu)選的。
在某些情況下，理想地是將給藥化合物以氣霧劑形式直接給藥于呼吸道。
這些活性化合物也可經(jīng)非胃腸或經(jīng)腹膜內(nèi)給藥。這些游離堿或其可藥用鹽形式的活性化合物的溶液或懸浮液在適當(dāng)混有表面活性劑，如羥丙基纖維素的水中制備。分散體可在甘油、液態(tài)聚乙二醇和它們在油中的混合物中制備。在常規(guī)貯存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以防止微生物的生長。
適于注射用的藥物形式包括無菌水溶液或分散液以及臨時配制無菌注射溶液或懸浮液用的無菌粉末。在各種情況下，藥物形式須是無菌的和可流動的，以易于注射操作。在制造和貯存條件下須是穩(wěn)定的，同時須防止微生物，如細(xì)菌和真菌的污染。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其中含有例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)、其適宜的混合物和植物油。
下面描述本發(fā)明化合物的代表性實例的制備。
實施例1N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒將40.8g 5-硝基氨茴腈和40ml N，N-二甲基甲酰胺縮二甲醛在蒸汽浴上加熱2小時。減壓除去溶劑，將殘余物加到二氯甲烷中。使該溶液通過酸式硅酸鎂后，除去溶劑。用乙醚洗滌后，獲得50.8g N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒。
實施例2N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-喹唑啉胺將23.74ml 3-溴苯胺和40.5g N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒在100ml冰醋酸中的溶液攪拌并在148℃的油浴中加熱1.5小時。冷卻，過濾所得固體，得到定量收率的N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-喹唑啉胺熔點＝267-270℃；質(zhì)譜(m/e)345。
實施例3N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺將34.5g N-(3-溴苯基)-6-硝基-4-喹唑啉胺和16.8g鐵粉在150ml乙醇和150ml冰醋酸中的混合物在120℃的油浴中加熱2小時。濾除固體后，往濾液中加入固體碳酸鈉，得到一固體。過濾，用甲醇萃取固體兩次。萃取液用木炭處理兩次，蒸發(fā)，得到固體。用乙醚洗滌該固體后，得到27.5g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺質(zhì)譜(m/e)315。
實施例44-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸將15ml吡啶加到1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺和0.6g馬來酸酐中。攪拌過夜后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。將固體加到約400ml熱乙醇中，濾出不溶性物質(zhì)，得到0.33g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸質(zhì)譜(m/e)M+H413，415。
實施例54-[[4-[(3-溴苯基)氧基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯將N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷卻，滴加1.22g乙基富馬酰氯的10ml二氯甲烷溶液。攪拌1.5小時后，使該反應(yīng)回溫至室溫。在減壓下除去溶劑，用水處理殘余物。濾出紅色固體并用熱的丙酮萃取。濾除不溶性物質(zhì)后，濃縮濾液，得到0.45g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯熔點＝259-263℃，質(zhì)譜(m/e)M+H 441，443。
實施例6N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺將1.58g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷卻并滴加0.67ml 3，3-二甲基丙烯酰氯的7ml乙醚溶液。攪拌冷卻2小時后，減壓下除去溶劑。用水處理殘余物，所得固體在甲基溶纖素中重結(jié)晶，得到0.97g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺熔點＝300-301℃，質(zhì)譜(m/e)396，398。
實施例7N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺將1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷卻并滴加0.57ml反式-巴豆酰氯的6ml乙醚溶液。攪拌冷卻2小時后，減壓下除去溶劑。用水處理殘余物，將所得固體在正丁醇中重結(jié)晶，得到0.69g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺熔點＝153-160℃，質(zhì)譜(m/e)M+H 383，385。
實施例8N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺將1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的15ml吡啶溶液在冰浴中冷卻并滴加0.59ml甲基丙烯酰氯的6ml乙醚溶液。攪拌冷卻2小時后，減壓下除去溶劑。用水處理殘余物，將所得固體加到正丁醇中(溫?zé)?。向該冷卻的溶液中加入乙醚，得到0.44g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺熔點＝40-245℃，質(zhì)譜(m/e)M+H 383，385。
實施例9N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺(butynamide)將0.50g 2-丁炔酸的10ml四氫呋喃溶液在冰浴中冷卻。加入0.79ml氯甲酸異丁基酯后，再加入0.66ml N-甲基嗎啉。約1分鐘后，加入1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液。使該反應(yīng)回溫至室溫并攪拌過夜。減壓除去溶劑，固體在正丁醇中重結(jié)晶，得到1.07g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺質(zhì)譜(m/e)381，383。
實施例104-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酰胺將2.5ml 10N氫氧化鈉水溶液加到2.3g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸乙酯(實施例5)的25ml乙醇溶液中。攪拌1小時后，加入2.1ml濃鹽酸，該反應(yīng)再攪拌2小時。所得固體在正丁醇中重結(jié)晶，得到0.97g 4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酰胺質(zhì)譜(m/e)M+H 413。
實施例11N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺將0.67g 2，4-己二烯酸的10ml四氫呋喃溶液在冰浴中冷卻。加入0.79ml氯甲酸異丁基酯后，再加入0.66ml N-甲基嗎啉。約1分鐘后，加入1.6g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液。使該反應(yīng)回溫至室溫并攪拌過夜。減壓除去溶劑，固體重結(jié)晶，得到1.0g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺熔點＝258-260℃。
實施例12N-[4-[(3-溴苯基)氧基]-6-喹唑啉基]-2-環(huán)戊烯酰胺將0.43g 2-環(huán)戊酸的5ml四氫呋喃溶液在冰浴中冷卻。加入0.49ml氯甲酸異丁基酯后，再加入0.41ml N-甲基嗎啉。約1分鐘后，加入1.0g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液。使該反應(yīng)回溫至室溫并攪拌過夜。再加入0.5當(dāng)量混合酸酐。將該混合物攪拌5小時。減壓除去溶劑，固體經(jīng)硅膠色譜純化，得到0.30gN-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-環(huán)戊烯酰胺質(zhì)譜(m/e)409(M+H，EI)。
實施例13N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺將2.0g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的10ml吡啶溶液在冰浴中冷卻并在0℃滴加0.61ml丙烯酰氯的30ml乙醚溶液。在室溫攪拌3.5小時后，減壓下除去溶劑。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化，得到0.2gN-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺質(zhì)譜(m/e)M+H369。
實施例14N-[4-[(3-溴苯基)氫基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)將0.93g 3-苯基-2-丙炔酸的10ml四氫呋喃溶液在冰浴中冷卻。加入0.82ml氯甲酸異丁基酯后，再加入0.69ml N-甲基嗎啉。約1分鐘后，加入1.0g N-(3-溴苯基)-4，6-喹唑啉二胺的7ml吡啶溶液。使該反應(yīng)在0℃進(jìn)行1小時。減壓除去溶劑，固體經(jīng)硅膠色譜純化，得到0.01g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)質(zhì)譜(m/e)443.2，445.2(M+H，電子噴霧)。
實施例156-氨基-4-氯喹唑啉將3.25g 4-氯-6-硝基喹唑啉、10.8g亞硫酸氫鈉和0.3g相轉(zhuǎn)移催化劑(C8H17)3NCH3+Cl-在97ml四氫呋喃和32ml水中的混合物快速攪拌2小時。該混合物用乙醚稀釋，分離有機層。有機溶液用鹽水洗滌，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。使該溶液通過一小硅膠柱。于30℃減壓除去溶劑，得到6-氨基-4-氯喹唑啉，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可用于下步反應(yīng)。
實施例16[4-氯-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺將1.64g 2-丁炔酸的46ml四氫呋喃溶液在冰浴中冷卻。加入2.34ml氯甲酸異丁基酯后，再加入4.13ml N-甲基嗎啉。約10分鐘后，將其傾入6-氨基-4-氯喹唑啉的46ml四氫呋喃溶液中。將該混合物在室溫攪拌2小時。將混合物傾入鹽水和飽和碳酸氫鈉的混合液中并用乙醚萃取。乙醚溶液經(jīng)硫酸鎂干燥并過濾。除去溶劑，得到有色油狀的[4-氯-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可用于下步反應(yīng)。
實施例17N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺將1.76g[4-氯-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺和1.23g 3-溴苯胺在23ml異丙醇中的溶液在惰性氣氛下回流40分鐘。該混合物冷卻到室溫并加入200ml乙醚，得到0.4g鹽酸鹽形式的N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺。用碳酸氫鈉溶液中和，乙酸乙酯萃取，除去溶劑，用1-丁醇重結(jié)晶，得到游離堿形式的N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺。
實施例18N’-[4-氨基-2-氰基苯基]-N，N-二甲脒將6.0g(27.5mmol)N’-(2-氰基-4-硝基苯基)-N，N-二甲脒、33.9g(41.8ml，412.4mmol)環(huán)己烯和0.6g 10％Pd/C在360ml甲醇中的溶液回流4小時。將該熱的混合物濾過硅藻土。除去溶劑，殘余物用氯仿-四氯化碳重結(jié)晶，得到4.9g(95％)淺灰色結(jié)晶固體的標(biāo)題化合物。質(zhì)譜(m/e)188.9(M+H，電子噴霧)。
實施例19N-[3-氰基-4-[[(二甲氨基)亞甲基]氨基]苯基]-2-丁炔酰胺在0℃、氮氣氛和攪拌下，用3分鐘時間向2.01g(23.9mmol)2-丁炔酸和2.9ml(22.3mmol)氯甲酸異丁基酯在30ml四氫呋喃中的溶液中加入2.42g(2.63ml，22.3mmol)N-甲基嗎啉。攪拌15分鐘后，用4分鐘時間加入N’-(4-氨基-2-氰基苯基)-N，N-二甲脒和1.6g(1.75ml，15.9mmol)N-甲基嗎啉的25ml四氫呋喃溶液。將該混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫攪拌30分鐘。該混合物用70ml乙酸乙酯稀釋后，傾入鹽水和飽和碳酸氫鈉的混合液中。有機層經(jīng)硫酸鎂干燥并濾過硅膠濾墊。除去溶劑，殘余物與50ml乙醚攪拌。收集懸浮的固體，得到3.61g(89％)米白色固體。質(zhì)譜(m/e)255.0(M+H，電子噴霧)。
實施例20N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺將3.0g(11.8mmol)N-[3-氰基-4-[[(二甲氨基)亞甲基]氨基]苯基]-2-丁炔酰胺和2.23g(12.98mmol)3-溴苯胺的18ml乙酸溶液在攪拌和氮氣氛下輕輕回流1小時15分鐘。將該混合物在冰浴中冷卻，形成固體。過濾收集固體并用1∶1的乙醚-乙腈洗滌，得到黃色固體，經(jīng)乙醇重結(jié)晶后，得到2.51g N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺質(zhì)譜(m/e)381，383。
權(quán)利要求
1.一種治療或抑制哺乳動物的多囊腎病的方法，包括給需此治療的哺乳動物施用式1化合物
其中X是可任意地被一個或多個選自下述的取代基取代的苯基鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、2-7個碳原子的烷氧羰基、2-7個碳原子的烷基羰基、氨基和1-6個碳原子的鏈烷酰氨基；R和R1各自獨立地是氫、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基或三氟甲基；R2是氫、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基、三氟甲基；Y是選自下述的基團(tuán)
R3獨立地是氫、1-6個碳原子的烷基、羧基、1-6個碳原子的烷氧羰基、苯基或2-7個碳原子的烷基羰基；n＝2-4；或其可藥用鹽，條件是Y的各個R3可以相同或不同。
2.權(quán)利要求1的方法，其中R、R1和R2是氫，或者其可藥用鹽。
3.權(quán)利要求2的方法，其中X未取代或者被鹵素或1-6個碳原子的烷基取代。
4.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺或其可藥用鹽。
5.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺或其可藥用鹽。
6.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺或其可藥用鹽。
7.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺或其可藥用鹽。
8.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺或其可藥用鹽。
9.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸或其可藥用鹽。
10.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸或其可藥用鹽。
11.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯或其可藥用鹽。
12.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-環(huán)戊烯酰胺或其可藥用鹽。
13.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺或其可藥用鹽。
14.權(quán)利要求1的方法，其中施用的是N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)或其可藥用鹽。
15.下式1化合物在制備治療或抑制哺乳動物腎痛的藥物中的應(yīng)用，
其中X是可任意地被一個或多個選自下述的取代基取代的苯基鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、2-7個碳原子的烷氧羰基、2-7個碳原子的烷基羰基、氨基和1-6個碳原子的鏈烷酰氨基；R和R1各自獨立地是氫、鹵素、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基或三氟甲基；R2是氫、1-6個碳原子的烷基、1-6個碳原子的烷氧基、羥基、三氟甲基；Y是選自下述的基團(tuán)
16.權(quán)利要求15的應(yīng)用，其中R、R1和R2是氫，或者其可藥用鹽。
17.權(quán)利要求15或16的應(yīng)用，其中X未取代或者被鹵素或1-6個碳原子的烷基取代。
18.權(quán)利要求15的應(yīng)用，其中的化合物是下列化合物之一N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-甲基-2-丙烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2，4-己二烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(E)-2-丁烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-3-甲基-2-丁烯酰胺；4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(Z)-2-丁烯酸；4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸；4-[[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]氨基]-4-氧代-(E)-2-丁烯酸，乙酯；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-環(huán)戊烯酰胺；N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丙烯酰胺；和N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-(3-苯基-2-丙炔酰胺)或者它們的可藥用鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療或抑制哺乳動物多囊性腎病的方法,該方法包括對需此治療的哺乳動物施用式(1)的化合物,其中X是可任意被取代的苯基;R和R
文檔編號A61P13/00GK1255062SQ98804838
公開日2000年5月31日 申請日期1998年4月28日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月6日
發(fā)明者P·弗洛斯特 申請人:美國氰胺公司