本發(fā)明具體涉及地稔植物和地稔提取物的制備方法及其在預(yù)防或/和治療微生物感染及抗炎的藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：：1.地稔地稔(melastomadodecandrunlour)為野牡丹科植物地稔的全草，又名山地稔、地葡萄、金頭石榴、鋪地錦、落地稔、地茄等。分布于廣西、廣東、湖南、江蘇、浙江、福建、貴州等地區(qū)，生于酸性土壤的山坡路旁矮草叢中。其味甘、澀，性涼，具有活血止血，消腫祛瘀，清熱解毒之功效。臨床用于治療高熱、腫痛、咽喉腫痛、牙痛、赤白血痢疾、水腫、痛經(jīng)、崩漏、帶下、產(chǎn)后腹痛、癰腫、療瘡、痔瘡、毒蛇咬傷等病癥。現(xiàn)代臨床研究報(bào)道，將地稔制成制劑，治療消化道出血、止血功效顯著，另有報(bào)道地稔有抗腫瘤、抗衰老、降血糖、降血脂等作用，而對正常細(xì)胞沒有毒副作用。本專利中涉及的地稔迄今未見其抗幽門螺旋桿菌(簡稱hp)、結(jié)核菌報(bào)道；還未見甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌s.aureus(methicllin-resistant，mrsa)、甲氧西林耐藥表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis，mrse)、大腸埃希菌(esbls)escherichiacoli，eco+、肺炎克雷伯(esbls)k.penumonia，kpn+的報(bào)道，也未見甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(s.aureus(methicin-suseptable，mssa)、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis，msse)、大腸埃希菌(非esbls)escherichiacoli，eco-、肺炎克雷伯(非esbls)k.penumonia，kpn-、銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa，pae)的報(bào)道；也未見胃腸致病菌的福氏志賀菌ⅱa、副溶血性弧菌、鼠傷寒沙門氏菌、羅森沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、大腸埃希菌，金黃色葡萄球菌的報(bào)道。本專利中涉及的地稔迄今未見其具有殺滅、阻斷和抑制流感病毒作用，及抗皰疹病毒的報(bào)道；也未見其抗炎報(bào)道。2.致病菌2.1.幽門螺旋桿菌幽門螺旋桿菌(helicobacterpylori，簡稱h.pylori、hp或hp)普遍存在于人胃黏膜中的一種微需氧革蘭氏陰性菌。hp感染可引起多種慢性胃病，如消化性潰瘍、胃炎、以至胃癌，研究顯示h.pylori的感染潛在增加2.7-12.0倍的胃癌危險(xiǎn)。1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(who/iarc)將幽門螺桿菌定為ⅰ類致癌原。目前國際上推薦的一線治療方案主要以質(zhì)子泵抑制劑(ppi)或鉍劑為基礎(chǔ)，合并兩種抗生素組成的三聯(lián)療法，根除率達(dá)90％。但目前其毒副反應(yīng)大、易繼發(fā)耐藥、產(chǎn)生二重感染、患者依從性等問題。2.2.結(jié)核桿菌結(jié)核病(tuberculosis，tb)是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacteriumtuberculosis，mtb)引起的一種慢性致死性疾病，是危害人類健康和導(dǎo)致人類死亡的重大傳染性疾病，其致死率僅次于艾滋病(acquiredimmunodeficiencysyndrome，aids)。由于抗結(jié)核藥物的大量使用和抗結(jié)核作用位點(diǎn)的突變，導(dǎo)致耐多藥結(jié)核病(multidrug-resistanttuberculosis，mdr-tb)不斷出現(xiàn)。2011年全球有870萬人罹患tb，并有140萬人死亡(其中非艾滋病患者約100萬)。我國是全球22個(gè)tb流行最嚴(yán)重的國家之一，據(jù)2010年全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查估計(jì)年發(fā)病人數(shù)為130萬，占全球新發(fā)病人數(shù)的14.3％，是全球第二大結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家。目前結(jié)核病的治療周期較長，患者順應(yīng)性較差。一線抗結(jié)核藥物和二線抗結(jié)核藥物在臨床上廣泛使用，出現(xiàn)耐多藥結(jié)核桿菌，不能達(dá)到有效控制結(jié)核病。中藥的資源豐富、治療時(shí)重視整體協(xié)同、毒副作用小以及不易產(chǎn)生耐藥等特點(diǎn)和優(yōu)勢,使得抗結(jié)核中藥在日益嚴(yán)峻的結(jié)核治療方面展現(xiàn)出了越來越光明的應(yīng)用前景。2.3.耐藥菌近年來，濫用化藥抗菌藥情況普遍，致使耐藥性越來越嚴(yán)重，臨床治療難度增大，療效差，嚴(yán)重威脅患者生命健康。2.3.1.革蘭氏陽性菌耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(mrsa)，能產(chǎn)生多種毒素、酶及抗原蛋白，具有較強(qiáng)的致病力，能引起皮膚軟組織感染，血液及全身各臟器感染。該菌具有廣譜耐藥性，對β-內(nèi)酰胺類抗生素如青霉素g和頭孢類抗生素如頭孢吡肟、頭孢唑啉、頭孢噻肟的耐藥率均為100％，對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素如克林霉素、氨基糖苷類抗生素如慶大霉素、四環(huán)素的耐藥率均高于60％，對利福平的耐藥性已上升且大于50％。表皮葡萄球菌(mrse)是機(jī)會(huì)致病菌，可引發(fā)尿路感染、菌血癥、術(shù)后傷口感染和心肌炎、瓣膜修復(fù)術(shù)后心內(nèi)膜炎、骨髓炎、透析性腹膜炎等，死亡率可達(dá)63％-74％。近年來發(fā)現(xiàn)，耐甲氧西林表皮葡萄球菌占表皮葡萄球菌的2/3，對頭孢氨芐、頭孢唑林、頭孢哌酮、頭孢噻肟、去甲萬古霉素均有耐藥性。2.3.2.革蘭氏陰性菌耐藥的肺炎克雷伯菌是腸桿菌科克雷伯氏菌屬中最為重要的一類菌(俗稱肺炎桿菌)，在院內(nèi)感染的敗血癥中，病死率較高。產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌是嚴(yán)重的耐藥致病菌，耐藥機(jī)制復(fù)雜，其中致病菌能夠打開β-內(nèi)酰胺環(huán)，使具該結(jié)構(gòu)的抗生素如青霉素類、頭孢類失去活性。2.4.胃腸致病菌2.4.1.福氏志賀氏菌福氏志賀菌(shigellaflexneri)，是志賀菌的一種，有14個(gè)血清型或亞型，是一類不形成芽孢的細(xì)菌，能夠侵襲大腸引起典型菌痢癥狀(發(fā)熱、腹痛、腹瀉)，是一種具有高度傳染性和嚴(yán)重危害性的腸道傳染病，嚴(yán)重危害人類的健康和生命安全。是發(fā)展中國家的主要感染菌株，2a是主要的血清型，近幾年來我國每年大約有2000萬人次感染痢疾，年累計(jì)發(fā)病數(shù)一直位于第三位。由于志賀氏菌感染劑量極低(10-100個(gè)細(xì)菌)，最常見的擴(kuò)散形式是人與人之間的傳播，5歲以下兒童和免疫障礙的人為主要感染人群。2.4.2.副溶血性弧菌副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus，vp)是一種噬鹽性弧菌，呈弧狀、桿狀、絲狀等多種形狀，無牙孢。廣泛分布于海水、海底泥沙、浮游生物和魚貝中的海洋性細(xì)菌，為海產(chǎn)食品引起急性胃腸炎的重要病原菌之一，尤其是在夏秋季節(jié)的沿海地區(qū)，經(jīng)常由于食用帶有副溶血性弧菌的海產(chǎn)食品，引起爆發(fā)性食物中毒。在非沿海地區(qū)，因食用此菌污染的食品而引起中毒者亦時(shí)有發(fā)生。2.4.3.鼠傷寒沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌(s.typhimurium)屬多價(jià)o抗血清的b群，是一種重要的人畜共患病原菌，其感染發(fā)病率居沙門菌感染的首位，占40％～80％，且多見于嬰幼兒，可導(dǎo)致醫(yī)院感染和暴發(fā)性食物中毒，病死率較高。2.4.4.腸炎沙門氏菌腸炎沙門氏菌是引起急性胃腸炎的主要病原菌，感染后的典型癥狀包括發(fā)熱、腹瀉和嘔吐等。4.炎癥：是人類的一種多發(fā)病、常見病，嚴(yán)重影響人類健康和勞動(dòng)者生產(chǎn)效率的疾?。挥行┓磸?fù)發(fā)作并漸續(xù)加重的會(huì)成慢性炎性疾病，給患者帶來極大痛苦。臨床治療的藥物主要包括甾體(said)和非甾體(nsaid)兩類抗炎藥，雖然可供使用的藥物很多，但多存在著較嚴(yán)重副作用。甾體類抗炎藥有產(chǎn)生激素依賴性、免疫抑制及影響全身代謝的副作用；非甾體類抗炎藥又抑制花生四烯酸環(huán)氧酶，減少前列腺素(pg)的生成，易造成胃腸粘膜損傷。因此尋找高效、低毒副作用低的新藥是醫(yī)藥行業(yè)關(guān)注熱點(diǎn)，其中對天然來源抗炎藥也寄予厚望。3.病毒3.1流感病毒流感病毒，屬于正粘病毒科，為極易變異的負(fù)鏈rna病毒，可引起急性呼吸道傳染病，即流感。流感病毒主要通過空氣飛沫傳播，分為甲、乙、丙三型，由于甲型更容易發(fā)生變異，流行最為廣泛和嚴(yán)重。流感一旦流行，傳播快，波及面廣，對人民健康和勞動(dòng)生產(chǎn)力有很大影響，而且對年老體弱多病者及嬰幼兒的威脅很大，常因?qū)е虏l(fā)癥而死亡。目前，流感是我國重點(diǎn)監(jiān)測疾病，在我國《傳染病防治法》中列為丙類傳染病進(jìn)行管理。禽流感(avianinfluenza，ai)，是由甲型流感病毒引起家禽和野禽的一種從呼吸道疾病到嚴(yán)重?cái)⊙Y等多種癥狀的綜合病癥。我國農(nóng)業(yè)部已將禽流感列為甲類傳染病。在亞洲流行的h5n1型，可以由禽鳥傳人，對人有很高的致病性，我國《傳染病防治法》中列為乙類傳染病進(jìn)行管理。長期的流感病人抗病毒藥治療易產(chǎn)生耐藥性，另外，由于病毒只能在活細(xì)胞生長的特殊性以及流感病毒的亞型變異速度很快，使得化學(xué)藥物和流感病毒疫苗難以發(fā)揮其最佳治療和預(yù)防效果。中醫(yī)藥對流感的治療，具有獨(dú)特的療效，是開發(fā)抗流感病毒藥物的一種新的嘗試。3.2.皰疹病毒單純皰疹病毒(herpessimplexvirus，hsv)感染是一種常見的傳染病，其感染部位廣泛，常發(fā)于癌癥或其他慢性病應(yīng)用各種免疫抑制劑的患者中。近年來，hsv發(fā)病率急劇增高，嚴(yán)重威脅著人類公共衛(wèi)生健康。目前，國內(nèi)外研究的抗病毒藥物接近50種，應(yīng)用到臨床治療全身性感染的僅無環(huán)鳥苷有效，但已被發(fā)現(xiàn)有耐藥株發(fā)生。因此，大力開發(fā)研制新的低毒、高效的抗病毒藥物刻不容緩。中草藥來源廣泛，現(xiàn)已成為研究熱點(diǎn)。水痘-帶狀皰疹病毒(zvz)為一種α-皰疹病毒，它在人類可引起水痘和帶狀皰疹兩種常見疾病。帶狀皰疹的臨床表現(xiàn)以沿周圍神經(jīng)分布的群集皰疹和以神經(jīng)痛為特征。vzv通過神經(jīng)系統(tǒng)感染人體，經(jīng)歷兩次病毒血癥后，病毒到達(dá)皮膚表層，而產(chǎn)生典型的皰疹樣皮損。隨后病毒又進(jìn)入周圍神經(jīng)系統(tǒng)，并潛伏在脊神經(jīng)節(jié)。vzv具有高度的種屬特異性，其自然感染僅發(fā)生于人與大猩猩。4.炎癥炎癥是人類的一種多發(fā)病、常見病，嚴(yán)重影響人類健康和勞動(dòng)者生產(chǎn)效率的疾?。挥行┓磸?fù)發(fā)作并漸續(xù)加重的會(huì)成慢性炎性疾病，給患者帶來極大痛苦。臨床治療的藥物主要包括甾體(said)和非甾體(nsaid)兩類抗炎藥，雖然可供使用的藥物很多，但多存在著較嚴(yán)重副作用。甾體類抗炎藥有產(chǎn)生激素依賴性、免疫抑制及影響全身代謝的副作用；非甾體類抗炎藥又抑制花生四烯酸環(huán)氧酶，減少前列腺素(pg)的生成，易造成胃腸粘膜損傷。因此尋找高效、低毒副作用低的新藥是醫(yī)藥行業(yè)關(guān)注熱點(diǎn)，其中對天然來源抗炎藥也寄予厚望。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明概述本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種新的藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一種地稔植物、地稔提取物。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的中藥提取物為以下一種或多種：(1)水提物；(2)醇水混合提取物；(3)超臨界二氧化碳提取物。本發(fā)明第二方面提供了上述地稔提取物的制備方法。本發(fā)明第三方面提供了一種地稔提取物制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的制劑。本發(fā)明第四方面提供了地稔植物、地稔植物提取物用于制備抗感染和炎癥的藥物用途，特別是在抗幽門螺旋桿菌、結(jié)核菌、耐藥致病菌、胃腸致病菌及流感病毒、皰疹病毒的用途。發(fā)明詳述本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種新的藥物，具體而言，本發(fā)明提供了一種地稔植物、地稔提取物在制備藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明中所述的藥材或原藥材是地稔。本發(fā)明中所述的生藥也是地稔。本發(fā)明的地稔的鮮品或干品；地稔的藥用部位選自全草。本發(fā)明的第二方面提供了地稔提取物的制備方法。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述的地稔提取物為以下用水提、醇提及超臨界二氧化碳提取一種或多種：(1)水提物；(2)醇提物；(3)超臨界二氧化碳提取物。為了加快提取速度，提高提取收率，可以對地稔原藥材進(jìn)行粉碎，粉碎后的平均粒徑優(yōu)選10-80目，更優(yōu)先是20-65目，最優(yōu)選是30-50目。本發(fā)明提供的提取物的第一種制備方法：所述提取物是按照包括如下步驟制備：地稔加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。所述的溶劑：本領(lǐng)域常用的溶劑均可以用于本發(fā)明。優(yōu)選溶劑水和c1-c5的醇類。c1-c5的醇類選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇或其混合物。選自水、無水乙醇、乙醇水溶液；更優(yōu)選溶劑選自乙醇水溶液。乙醇或乙醇水溶液和其他溶劑相比，具有低毒，防腐，污染小，價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，更適合于本發(fā)明應(yīng)用于藥物產(chǎn)品工業(yè)化大生產(chǎn)。乙醇水溶液的濃度(乙醇水溶液中含有的乙醇的體積百分比)：優(yōu)選30％-100％的乙醇水溶液，更優(yōu)選50％-95％的乙醇水溶液，進(jìn)一步優(yōu)選60％-80％的乙醇水溶液，最優(yōu)選75％的乙醇水溶液。溶劑的量是指提取每公斤原藥材所用的溶劑量，即提取每公斤藥材計(jì)使用溶劑的重量(單位kg)或體積(單位l)。溶劑用量是原藥材用量的2-30倍；更優(yōu)選5-16倍；進(jìn)一步優(yōu)選6-15倍；最優(yōu)選8-10倍。提取的溫度：優(yōu)選是室溫到溶劑回流的溫度；更優(yōu)選是40℃-溶劑回流的溫度；進(jìn)一步優(yōu)選是50℃-溶劑回流的溫度；最優(yōu)選是溶劑回流的溫度。提取的次數(shù)：可以是1～5次；優(yōu)選是2～3次。提取的時(shí)間：每次0.5～5小時(shí)；優(yōu)選每次0.5～3小時(shí)；更優(yōu)選每次1～3小時(shí)。濃縮的溫度：可以是55～90℃；優(yōu)選62～80℃；更優(yōu)選65～75℃。濃縮后稠膏的相對密度為1.1～1.5，優(yōu)選1.2～1.4。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的提取物是地稔經(jīng)水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)3-30倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)5-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)8-16倍的水提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)乙醇提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)3-30倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)3-30倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)3-30倍的65％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)5-15倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)5-15倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)5-15倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)8-10倍的30％-100％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)8-10倍的50％-95％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是地稔經(jīng)8-10倍的60％-80％的乙醇水溶液提取并獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加入5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的水、無水乙醇、乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并合并提取液，經(jīng)濃縮至相對密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述提取物是按照包括如下步驟制備：原藥材加5～30倍(包括5～15倍，包括6～16倍)的30～99％的乙醇水溶液回流提取1～5次(包括2～3次)，每次0.5～5小時(shí)(包括0.5～3小時(shí)，包括1～3小時(shí))，過濾并合并提取液，60～90℃(包括65～75℃)濃縮至相對密度為1.1～1.5(包括1.2～1.4)的稠膏，減壓干燥，即得。本發(fā)明提供的提取物的第二種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)超臨界二氧化碳提取并獲得。本發(fā)明的超臨界提取物，其特征在于，所述提取物是地稔經(jīng)二氧化碳超臨界提取，在分離釜中獲得提取物，提取的條件可以是一種或多種，例如：(1)不加夾帶劑的提取物；(2)加夾帶劑的提取物；(3)不加夾帶劑提取后再加夾帶劑的提取物。超臨界二氧化碳提取的條件如下：萃取釜:萃取溫度為30-70℃；優(yōu)選為30-60℃；更優(yōu)選為30-50℃；最優(yōu)選35-45℃。萃取溫度可以選自35℃，37℃，40℃，42℃，45℃，47℃，50℃。萃取壓力為10-45mpa；優(yōu)選為13-35mpa；優(yōu)選為16-24mpa；更優(yōu)選為18-22mpa。萃取壓力可以選自15mpa，16mpa，20mpa，20.6mpa，29.6mpa，30mpa，40mpa，45mpa，。萃取釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)萃取釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)。為了盡量節(jié)約原藥材的加料和卸料時(shí)間，提高生產(chǎn)效率，優(yōu)選是多個(gè)萃取釜并聯(lián)。在一部分萃取釜加料或卸料的時(shí)候，另外的萃取釜同時(shí)進(jìn)行萃取。萃取劑流速：萃取劑二氧化碳的流速會(huì)對本發(fā)明的生產(chǎn)效率產(chǎn)生重大的影響。如果二氧化碳的流速過快，二氧化碳和萃取溶質(zhì)不能充分接觸，會(huì)降低每體積二氧化碳的萃取效率；如果二氧化碳的流速過慢，會(huì)降低單位時(shí)間的生產(chǎn)效率。因此，萃取劑二氧化碳的流速需要一個(gè)合適的流速。萃取劑二氧化碳的流速為每公斤藥材每小時(shí)20-300升(以每公斤藥材每小時(shí)計(jì)，單位為l/h·kg生藥)，即20-300l/h·kg；優(yōu)選的萃取劑二氧化碳的流速為40-260l/h·kg；更優(yōu)選為60-230l/h·kg；進(jìn)一步優(yōu)選為80-200l/h·kg；最優(yōu)選為100-175l/h·kg，或者100-150l/h·kg，125-175l/h·kg。萃取劑二氧化碳的流速可以選自20l/h·kg；40l/h·kg；60l/h·kg；80l/h·kg；100l/h·kg；125l/h·kg；150l/h·kg；175l/h·kg；200l/h·kg；230l/h·kg；260l/h·kg；280l/h·kg；300l/h·kg。萃取時(shí)間分鐘(min)：30-400min，優(yōu)選40-160min，更優(yōu)選50-160min，最優(yōu)選65-106min。萃取時(shí)間可以是60-70min，70-80min，80-100min，110-120min，120-130min，140-150min，155-165min。例如萃取時(shí)間可以是62min，65min，70min，75min，82min，90min，94min，95min，98min，100min，101min，105min，106min，110min，120min，132min，145min，160min。夾帶劑:本發(fā)明的超臨界提取方案中，可以選擇性的使用夾帶劑或不使用夾帶劑；優(yōu)先是使用夾帶劑。本領(lǐng)域常用的溶劑均可以作為本發(fā)明的夾帶劑。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：0％-100％v/v的乙醇水溶液、甲醇，乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本文中100％v/v的乙醇水溶液表示無水乙醇；本文中0％v/v的乙醇水溶液表示沒有醇的水。例如本發(fā)明的夾帶劑可以選自：水、無水乙醇、30％-100％v/v的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮。優(yōu)選的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％v/v的乙醇水溶液。更優(yōu)選的夾帶劑選自75％-100％v/v的乙醇水溶液。最優(yōu)選的夾帶劑選自100％v/v的乙醇水溶液。夾帶劑的量(以每公斤藥材計(jì)為l/kg，kg/kg；或以每克藥材計(jì)為ml/g，g/g)：夾帶劑的量為0.10-2.5l/kg；；優(yōu)選0.20-1.5l/kg；，更優(yōu)選0.30-0.80l/kg；最優(yōu)選0.40-0.60l/kg；分離釜：分離釜的溫度為25-70℃，優(yōu)選為30-60℃；更優(yōu)選為35-55℃分離釜的溫度可以選自25℃，26℃，27℃，28℃，29℃，30℃，31℃，32℃，33℃，34℃，35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃，41℃，42℃，43℃，44℃，45℃，46℃，47℃，48℃，49℃，50℃，51℃，52℃，53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜的壓力為2-17mpa；優(yōu)選為3-15mpa；更優(yōu)選為4-12mpa；最優(yōu)選為4.5-10mpa。分離釜的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa，5.6mpa，5.7mpa，5.8mpa，6mpa，7mpa，7.5mpa，8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜可以是1個(gè)或多個(gè)分離釜，例如1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多。如果是多個(gè)分離釜的，可以是并聯(lián)或串聯(lián)，為了盡量提高提取物的回收率，優(yōu)選是多個(gè)分離釜串聯(lián)。分離釜i壓力和溫度：分離釜i的溫度為30-70℃，優(yōu)選為50-60℃；更優(yōu)選為53-57℃；最優(yōu)選為55℃。分離釜i的溫度可以選自53℃，54℃，55℃，56℃，57℃。分離釜i的壓力為4-17mpa；優(yōu)選為5-15mpa；更優(yōu)選為6-12mpa；最優(yōu)選為8-10mpa。分離釜i的壓力可以選自7mpa，7.5mpa，8mpa，8.5mpa，9mpa，9.5mpa，10mpa。分離釜ii壓力和溫度：分離釜ii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜ii的溫度可以選自30℃，31℃，32℃，33℃，34℃，35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜ii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜ii的壓力可以選自4.3mpa，4.5mpa，4.65mpa，4.7mpa，4.9mpa，5.0mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜iii壓力和溫度：分離釜iii的溫度為25-50℃，優(yōu)選為30-45℃；更優(yōu)選為32-42℃；最優(yōu)選為35-40℃。分離釜iii的溫度可以選自35℃，36℃，37℃，38℃，39℃，40℃。分離釜iii的壓力為2-8mpa；優(yōu)選為3-7mpa；更優(yōu)選為4-6mpa；最優(yōu)選為4.5-5.5mpa。分離釜iii的壓力可以選自4.65mpa，4.9mpa，5.1mpa，5.2mpa，5.3mpa，5.4mpa，5.5mpa。分離釜中的得到的提取物，就是本發(fā)明的地稔提取物。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對原藥材不加夾帶劑的進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為37℃-50℃，壓力為10mpa-40mpa，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為20-300kg/小時(shí)，萃取時(shí)間為60-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為32℃-47℃，壓力為4.0mpa-6mpa，分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對原藥材加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為37℃-50℃，壓力為10mpa-40mpa,加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為20-300l/h·kg生藥，萃取時(shí)間為60-300分鐘，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為32℃-47℃，壓力為4.0mpa-6mpa；分離釜中的得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，是對原藥材先不加夾帶劑進(jìn)行超臨界提取后再加夾帶劑的進(jìn)行提取，原藥材加入萃取釜，萃取釜溫度為37℃-50℃，壓力為10mpa-40mpa，分離釜i的溫度為50℃-60℃，壓力為7.5mpa-9mpa，分離釜ii的溫度為32℃-47℃，壓力為4.0mpa-6mpa；二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的流量為20-300l/h·kg生藥，萃取時(shí)間為60-300分鐘；放出分離釜中的提取物；再加入夾帶劑，二氧化碳?xì)怏w通過萃取釜的保持流量為20-300l/h·kg生藥，再萃取60-300分鐘；分離釜中再次得到的提取物即為本發(fā)明的提取物。所述的夾帶劑選自水、無水乙醇、30％-99％的乙醇水溶液、乙酸乙酯、丙酮等中至少一種，即作為帶劑的溶劑可以是單一溶劑，或其中任何一種溶劑與另一種、及多種溶劑間的彼此混合溶劑等。本領(lǐng)域常用的干燥均可以用于本發(fā)明，例如：減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、熱風(fēng)干燥、遠(yuǎn)紅外線干燥或微波干燥?；蚵?lián)合使用上述一種或多種干燥方式。本發(fā)明提供的提取物的第四種制備方法：所述提取物是原藥材經(jīng)二氧化碳超臨界提取后，其剩余的藥材再加入溶劑提取，過濾并濃縮濾液，干燥獲得。具體的提取方法可以第一種方式相同。在本發(fā)明中，術(shù)語“提取”可以是常溫下的浸漬，或者超臨界狀態(tài)下的提取，或者在升高的溫度下的提取(例如煎煮和/或回流)，或者這些操作方式的結(jié)合。還可以進(jìn)一步包括對提取物進(jìn)行進(jìn)一步處理，例如進(jìn)一步純化，例如除溶劑、沉淀除雜質(zhì)、溶劑萃取、樹脂吸附分離等。如本文所述的，術(shù)語“提取物”將包括可用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明任何目的的任何純度的提取物，提取物的提取純度可以在較大的范圍內(nèi)變化。本發(fā)明第三方面公開含有地稔提取物的制劑，所述的藥物與藥學(xué)上接受的輔料制成藥劑學(xué)上接受的制劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述的制劑的組合物還包含一種或多種無毒生理學(xué)可接受的載體。所述的可接受的載體包括本領(lǐng)域公知的任何輔料及起控釋作用的輔料。常用的輔料包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、致孔劑、增塑劑、填充劑、增溶劑和乳化劑。稀釋劑可以是但不限于淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是但不限于水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是但不限于干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是但不限于滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇；增溶劑和乳化劑可以是但不限于乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯及它們的混合物。起緩控釋作用的輔料可以選自親水性凝膠材料、蠟脂類材料和不溶性材料的一種或多種。所述的親水性凝膠材料可以選自羥丙基甲基纖維素、卡波普、羧甲基纖維素鈉和海藻酸鹽，所述的蠟脂類材料可以選自十六醇、十八醇、蜂蠟、山崳酸甘油酯、硬脂酸和巴西棕櫚蠟，所述的不溶性材料可以選自乙基纖維素、丙烯酸樹脂、聚氧乙烯和聚乙烯。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，可向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑包含地稔的提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑。可通過將組合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動(dòng)物使用的任何劑型。該制劑可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。本發(fā)明第三方面的制劑，其特征在于，所述制劑優(yōu)選口服制劑、噴霧劑、注射劑。本發(fā)明第四方面提供了地稔植物在制備抗感染藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明第四方面還提供了地稔提取物在制備抗感染藥物中的應(yīng)用。所述的感染是由細(xì)菌或病毒引起。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的細(xì)菌選自革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的細(xì)菌選自不動(dòng)桿菌屬、桿菌屬、彎曲桿菌屬、衣原體、披衣菌屬、梭菌屬、檸檬酸菌屬、埃希桿菌屬、腸道菌屬、腸球菌屬、弗朗西斯氏菌屬、嗜血桿菌屬、纏繞桿菌屬、克雷白石桿菌屬、李斯特菌屬、莫拉均屬、分枝桿菌屬、奈瑟是菌屬、變形菌屬、假單胞菌屬、沙門氏菌屬、沙雷菌屬、志賀菌屬、寡養(yǎng)單胞菌屬、葡萄球菌屬、連鎖狀球菌屬或涅爾森菌屬。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的病菌選自革蘭氏陽性菌甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌s.aureus(methicllin-resistant，mrsa)、甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌s.aureus(methicin-suseptable)、甲氧西林耐藥表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis，mrse)、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis，msse)，還選自革蘭氏陰性菌多耐藥銅綠假單胞菌、多耐藥肺炎克雷伯菌、多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌、大腸埃希菌(esbls)eco+、肺炎克雷伯(esbls)kpn+、大腸埃希菌(非esbls)eco-、銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa，pae)、腸炎沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌、羅森沙門氏菌、福氏志賀氏、鮑曼不動(dòng)桿菌。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的細(xì)菌選自幽門螺旋桿菌、結(jié)核桿菌，及其耐藥菌。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的病毒選自流感病毒、皰疹病毒中任意一種或多種。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的流感病毒選自h1n1、h3n2、h5n1、h7n1、h7n2、h7n3、h7n7、h7n9、h9n2、h10n8；在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的皰疹病毒選自單純皰疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒；本發(fā)明第四方面還提供了地稔提取物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明第四方面的應(yīng)用，其特征在于，所述的炎癥包括微生物感染引起的也包括非微生物感染引起的，非微生物感染引起炎癥的因子包括：物理性因子、化學(xué)性因子、壞死組織、免疫反應(yīng)。本發(fā)明第四方面的應(yīng)用，其特征在于，所述的炎癥癥狀包括但不限于如下局部表現(xiàn)和全身性反應(yīng)：局部表現(xiàn)，體表紅、腫、熱、痛和功能障礙，全身性反應(yīng)，發(fā)熱、白細(xì)胞增多、單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞增生、實(shí)質(zhì)器官的病變。本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述的炎癥包括但不限于如：癤、癰、皮下膿腫；口腔炎、牙齦炎；鼻炎、咽炎、慢性支氣管炎、支氣管炎、肺炎、重癥肺炎、呼吸道感染、；心包肝、肝周炎、氣囊炎、心肌炎、心內(nèi)膜炎、心包炎、瓣膜修復(fù)術(shù)后心內(nèi)膜炎；腸炎、直腸炎、偽膜性腸炎、結(jié)腸炎、慢性胃炎、闌尾炎；術(shù)后傷口感染和透析性腹膜炎、新生兒腦膜炎、化膿性腦膜炎；敗血癥、濃血癥、菌血癥、毒血癥、內(nèi)毒素性休克、全身臟器感染、眼部感染、非淋性尿路感染、創(chuàng)傷感染；膽囊炎、膽道感染；膀胱炎、腎炎、前列腺炎、尿道炎、闌尾炎、輸卵管炎、慢性子宮頸炎、陰道炎、盆腔炎、附件炎；腎盂腎炎、前列腺炎、腎小球腎炎、腎盂腎炎、急性腎衰伴多器官功能不全；皮膚軟組織感染、燙傷樣皮膚綜合征、剝脫性皮炎；；急性腹瀉；發(fā)熱癥；骨髓炎；關(guān)節(jié)炎等。有益技術(shù)效果：對地稔全草水、醇、超臨界不同提取方法獲得提取物研究中，首次發(fā)現(xiàn)具有抑制幽門螺旋桿菌hp、結(jié)核菌、耐藥致病菌和胃腸致病菌作用，還首次發(fā)現(xiàn)抗流感病毒和皰疹病毒的作用，為從畬藥民族藥尋找嚴(yán)重危害人類健康與生命的hp、結(jié)核菌、流感病毒、皰疹病毒等預(yù)防/治療用藥提供新途徑，外還發(fā)現(xiàn)消炎作用。而超臨界提取在地稔提取物中應(yīng)用也是首次。其中：1.抗病原菌效果1.1.幽門螺旋桿菌：全草水提物dqs、全草醇提物dqc均有效。dqs、dqc對標(biāo)準(zhǔn)菌株atcc700392的mic均為8mg/ml，對標(biāo)準(zhǔn)菌株ssi的mic分別為8mg/ml、4mg/ml，對多重耐藥株的mic均為8mg/ml。1.2.結(jié)核：醇提物dqc、超臨界加夾帶劑樣品dqlj(1-1)均有效。1.3.革蘭氏菌：全草水提物dqs、全草醇提物dqc均有效。對革蘭氏陽性菌：dqs、dqcmic范圍分別為2-16mg/ml、0.06-32mg/ml。對革蘭氏陰性菌：dqs、dqcmic范圍均為8-32mg/ml。1.4.胃腸道致病菌：全草水提物dqs、全草醇提物dqc均有效。dqs、dqcmic范圍分別為16mg/ml、0.5-16mg/ml。2.抗病毒效果2.1.流感病毒：醇提物dqc(140706)在殺滅和治療模型均有效，超臨界樣品dq151009-膏、dq151009-液在殺滅模型有效。2.1.1.在體外殺滅模型試驗(yàn)中dqc(140706)濃度為15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml、500.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為53.42％、82.77％、52.13％、28.13％、29.29％、4.65％。dq151009-膏濃度為15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml、500.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為2.32％、8.00％、17.10％、48.58％、95.94％、43.48％。dq151009-液濃度為31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為17.10％、16.65％、34.06％、24.13％。2.1.2.在體外治療模型試驗(yàn)中dqc(140706)在濃度為31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)抑制率分別為2.04％、14.77％、32.38％、17.87％。2.2.皰疹病毒：全草水提物dqs、全草醇提物dqc、全草超臨界加夾帶劑樣品dqlj(1-1)有效。在體外篩選實(shí)驗(yàn)中，dqs100ug/ml、50ug/ml時(shí)抑制率均為25％；dqc100ug/ml時(shí)抑制率均為25％；dqlj(1-1)12.5ug/ml時(shí)抑制率均為25％。提示該3個(gè)樣品具有抗單純皰疹病毒(hsv-i)作用。3.抗炎：全草水提物dqs、全草醇提物dqc均有效。dqs，4329mg/kg時(shí)，抗炎率最高為36.5％；dqc，7340mg/kg時(shí)，抗炎率最高為20.0％。化藥治療雖見效快，但一般以對癥治療為主，且副作用大，停藥后病癥易反彈；中藥復(fù)方治療藥物服用量大，療程長，病人服藥不方便。本發(fā)明克服西藥和中藥復(fù)方治療缺點(diǎn)，提供一種科學(xué)合理、副作用小、服用方便的單味中藥作為抗病毒、抗菌和抗炎的理想藥物。附圖說明圖1.抗hp實(shí)驗(yàn)菌株驗(yàn)證圖圖1顯示：兩株幽門螺桿菌atcc700392和ss1及臨床分離株在普通哥倫比亞血平板上置于微需氧條件下培養(yǎng)48h，菌落呈針尖狀無色透明，光滑濕潤，邊緣整齊，凸起，呈小水滴樣，菌苔灰白色，發(fā)油光。a，在顯微鏡油鏡下觀察，典型的海鷗狀，s狀，革蘭染色陰性；b，氧化酶試驗(yàn)陽性；c，尿素酶試驗(yàn)陽性；d，過氧化氫酶試驗(yàn)陽性。e，耐藥株的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：將臨床已收集分離的h.pylori同時(shí)耐阿莫西林株、h.pylori耐克拉霉素株、h.pylori耐甲硝唑株臨床耐藥株進(jìn)行復(fù)蘇，并對耐藥情況核實(shí)。在藥物濃度為甲硝唑256μg/ml，克拉霉素256μg/ml，阿莫西林256μg/ml是均生長狀態(tài)良好,與空白組無區(qū)別。圖2.流感病毒篩選結(jié)果圖殺滅模型對照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：空白對照沒有細(xì)胞死亡，形態(tài)沒有發(fā)生變化。病毒對照大多數(shù)細(xì)胞死亡并脫落且細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。對照藥達(dá)菲顯示出明顯的體外殺滅h3n2活性，濃度為3.91ug/ml、7.81ug/ml、15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好，僅少量細(xì)胞死亡且細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生變化，相應(yīng)殺滅率分別為60.39％、61.74％、56.84％、49.68％、53.68％。對照藥板藍(lán)根顆粒濃度為62.50ug/ml、125.00ug/ml、250ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為15.42％、33.16％、21.16％。地稔醇提物dqc(140706)濃度為15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml、500.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為53.42％、82.77％、52.13％、28.13％、29.29％、4.65％。地稔超臨界樣品dq151009-膏濃度為15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml、500.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為2.32％、8.00％、17.10％、48.58％、95.94％、43.48％。地稔超臨界樣品dq151009-液濃度為31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為17.10％、16.65％、34.06％、24.13％。治療模型對照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明：病毒對照細(xì)胞幾乎全部死亡和脫落?？瞻讓φ占?xì)胞幾乎沒有脫落和死亡，細(xì)胞狀態(tài)很好。達(dá)菲在濃度為3.91ug/ml、7.81ug/ml、15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)抑制率分別為32.60％、32.72％、35.06％、29.57％、31.28％、14.55％、1.70％。板藍(lán)根顆粒在濃度為62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)抑制率分別為28.30％、18.13％、15.06％。地稔醇提物dqc(140706)在濃度為31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)抑制率分別為2.04％、14.77％、32.38％、17.87％；具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)施例地稔提取實(shí)施例實(shí)施例1水提取粉碎后藥材600g，加10倍水6000g于10l圓底燒瓶中，加熱沸騰，保溫1小時(shí)，過濾。再加8倍水4800g，加熱至沸騰，保溫1小時(shí)，過濾，合并濾液用水浴鍋濃縮，然后干燥粉碎，得浸膏粉146g,收率24.33％，編號(hào)dqs。實(shí)施例2醇提稱取粉碎后藥材600g，加10倍75％乙醇6000g于10l圓底燒瓶中，加熱沸騰，保溫2小時(shí)，過濾。再加8倍75％乙醇4800g，加熱至沸騰，保溫2小時(shí)，過濾，合并濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無醇味，然后干燥粉碎，得浸膏粉85.8g，得率14.3％，編號(hào)dqc。實(shí)施例3-8不加夾帶劑超臨界二氧化碳萃取稱取200g粉碎好的地稔全草，放入到萃取釜中。當(dāng)溫度穩(wěn)定，通入二氧化碳。當(dāng)萃取釜的壓力達(dá)到設(shè)定壓力，調(diào)節(jié)分離釜i和ii的壓力，穩(wěn)定，循環(huán)，開始計(jì)錄萃取時(shí)間。不同的萃取條件如：實(shí)施例9稱取1.164kg粉碎的地稔全草置于5l的萃取釜中。萃取釜、分離釜i、分離釜ii、分離釜iii的壓力分別為20.6mpa、7.5mpa、5.5mpa、5.5mpa，溫度分別為40℃、55℃、35℃、35℃，二氧化碳流速為25-35l/h，萃取120min，收集到樣品6.54g,收率0.56％，編號(hào)dqlw(1-1)。實(shí)施例10-14加夾帶劑超臨界二氧化碳萃取稱取200g粉碎好的地稔全草，放入到萃取釜中。當(dāng)溫度穩(wěn)定，開啟主泵，通入二氧化碳。通過控制閥，調(diào)節(jié)萃取釜、分離釜i、分離釜ii、到設(shè)定值。開啟副泵，加入50％投料量的夾帶劑，每半個(gè)小時(shí)內(nèi)加30％g、40％、30％的夾帶劑，進(jìn)行萃取。每隔10-20分鐘，從出料口收集混合物，視性狀選擇過濾或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去夾帶劑，收集到超臨界萃取產(chǎn)物，詳細(xì)參數(shù)如下：實(shí)施例14稱取粉碎后藥材1.434kg，裝入5l萃取釜中。萃取釜、分離釜i、分離釜ii的壓力分別為20mpa、8mpa、5.4mpa，溫度分別為40℃、55℃、35℃，二氧化碳流速為22-30l/h。開啟副泵，在110min內(nèi)加入199.2g無水乙醇，萃取170min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去夾帶劑后，收集到青黑色膏狀物6.538g，收率0.46％，編號(hào)dqlj(1-1)。藥理實(shí)驗(yàn)例實(shí)驗(yàn)例1：抗病原菌篩選實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)例1-1：抗幽門螺桿菌(h.pylori)hp1.菌種2株標(biāo)準(zhǔn)株：atcc700392和悉尼株ss1；1株臨床多重耐藥株：耐甲硝唑、耐阿莫西林株、耐克拉霉素。2.對照品對照藥為頭花蓼單方制劑和西藥阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、奧美拉唑。3.樣品試驗(yàn)樣品：實(shí)施例1和2所得地稔提取物浸膏。4.方法：4.1.幽門螺旋桿菌標(biāo)準(zhǔn)株及臨床耐藥株的復(fù)蘇培養(yǎng)及菌株的鑒定從-80℃冰箱中取出幽門螺旋桿菌atcc700392和幽門螺旋桿菌ss1菌株及臨床h.pylori耐阿莫西林株、h.pylori耐克拉霉素株、h.pylori耐甲硝唑株，置于37℃水浴箱中溶解，用接種環(huán)醮取菌液均勻涂布于含混合抗生素的哥倫比亞血平板上，置于37℃三氣培養(yǎng)箱(85％n2，10％co2，5％o2)中培養(yǎng)48h。對這兩株標(biāo)準(zhǔn)菌株及三株臨床株進(jìn)行培養(yǎng)特性、革蘭染色、尿素酶鑒定、過氧化氫酶鑒定、氧化酶鑒定。4.1.1.菌液配制：將血平板上的菌落或菌苔刮至預(yù)冷含15ml腦心浸液肉湯管中,離心洗滌一次后，重懸于4℃腦心浸液肉湯中,將此菌液作10倍、100倍、1000倍稀釋后，在紫外分光光度計(jì)上測菌液的od600值,結(jié)果位于0.1～1.0之間的od值與菌液濃度有較好的線性關(guān)系,菌液含量的計(jì)算公式如下：菌量/ml＝2.2×108×od600值×稀釋倍數(shù)，將菌液稀釋得到108cfu/ml。在15min內(nèi)完成菌液配制和接種，接種過程中菌液需保持在4℃。4.1.2.臨床耐藥株驗(yàn)證試驗(yàn)：將培養(yǎng)72h的幽門螺桿菌臨床菌株用腦心浸液肉湯制備菌懸液，調(diào)配其濃度在1～9×108cfu/ml，分別用無菌棉簽沾取菌懸液均勻涂布于濃度為甲硝唑256μg/ml，克拉霉素256μg/ml，阿莫西林256μg/ml的藥物培養(yǎng)皿及空白培養(yǎng)皿上，每個(gè)藥物濃度涂抹兩個(gè)平皿，置于微需氧環(huán)境中37℃培養(yǎng)72h。以空白培養(yǎng)皿上h.pylori生長良好的情況下,以觀察其生長情況，并對所生長細(xì)菌做革蘭氏染色和生化鑒定試驗(yàn)。4.2.樣品的體外抗菌活性實(shí)驗(yàn)4.2.1.菌液涂布與培養(yǎng)：用一次性棉棒蘸取濃度為108cfu/ml菌液，在瓊脂表面均勻涂布。按每種樣品每個(gè)濃度均涂布2塊平板。同時(shí)設(shè)陰性對照(即不加菌)、生長對照(即不加實(shí)驗(yàn)樣品)、溶劑對照各兩塊平板。置于37℃三氣培養(yǎng)箱(85％n2，10％co2，5％o2)中培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。每個(gè)樣品的每種菌株體外抗菌活性實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。4.2.2.抑菌效果判定：在空白對照及溶劑對照培養(yǎng)皿細(xì)菌生長均良好的情況下，以含藥平皿上未見細(xì)菌生長的最低藥物濃度為該藥物對h.pylori的mic，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。并通過尿素酶、觸酶和氧化酶、革蘭染色實(shí)驗(yàn)鑒定所生長細(xì)菌。5.結(jié)果：地稔全草水提物dqs、地稔全草醇提物dqc均有效。dqs、dqc對標(biāo)準(zhǔn)菌株atcc700392的mic均為8mg/ml，對標(biāo)準(zhǔn)菌株ssi的mic分別為8mg/ml、4mg/ml，對多重耐藥株的mic均為8mg/ml。表1.初篩hp2個(gè)樣品活性表試驗(yàn)例1-2：抗結(jié)核菌篩選1.菌種：毒力自主發(fā)光結(jié)核菌mtbh37ra(alra)。使用的是實(shí)驗(yàn)室制備的自主發(fā)光標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核菌autoluminescenth37ra(簡稱alra)2.對照品、樣品及核心儀器陽性對照藥：利福平(rif)，失效日期2017.11，批號(hào)：r0808，amresco公司產(chǎn)品，純度>95％(hplc)，紅色粉末狀。貯存方法：-20℃保存。核心儀器：發(fā)光檢測儀為美國promega公司的glomax2020；生化培養(yǎng)箱：上海恒科儀器(lrh-70)，臺(tái)式恒溫振蕩器：太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠(thz-d)；電子天平：上海浦春儀器(je3002)。3.樣品：實(shí)驗(yàn)例1和4所得地稔提取物浸膏。4.方法37℃培養(yǎng)alra菌液至對數(shù)期。用7h9培養(yǎng)基稀釋菌液，使發(fā)光值在15000-25000rlu/ml之間。取稀釋后的菌液195ul+5ul樣品稀釋后的母液，每個(gè)樣品的每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)，并設(shè)置陽性對照(rif：母液濃度為40ug/ml，終濃度1ug/ml)和陰性對照(dmso)。檢測陰性空白對照的發(fā)光值作為第0天的發(fā)光值并記錄。5.結(jié)果：地稔醇提物dqc、超臨界加夾帶劑樣品dqlj(1-1)均有效。表2.抗結(jié)核菌篩選結(jié)果表序號(hào)編號(hào)ic50(ug/ml)說明1dqc2271.5002dqlj(1-1)2500實(shí)施例1-3：抗革蘭氏菌篩選1.普通致病菌1.1.試驗(yàn)菌株1.1.1.受試菌株甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌s.aureus(methicllin-resistant，mrsa)6株、甲氧西林耐藥表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis，mrse)5株、甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(s.aureus(methicin-suseptable，mssa)6株、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis，msse)5株、大腸埃希菌(esbls)escherichiacoli，eco+6株、肺炎克雷伯(esbls)k.penumonia，kpn+6株、大腸埃希菌(非esbls)escherichiacoli，eco-6株、肺炎克雷伯(非esbls)k.penumonia，kpn-6株、銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa，pae)5株。以上菌株均為2013年6月至2014年10月在四川地區(qū)、北京地區(qū)、上海等收集的臨床分離致病菌。在收集單位經(jīng)vitek-60自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定。1.1.2.質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌cmcc26003；大腸埃希菌atcc25922；銅綠假單胞菌atcc27853。購自中華人民共和國衛(wèi)生部臨床檢測中心。1.2.對照品頭孢吡肟(標(biāo)準(zhǔn)品)源自中國食品藥品檢定研究院標(biāo)準(zhǔn)品。1.3.樣品：實(shí)施例1和2所得地稔提取物浸膏。1.4.方法以頭花蓼單方、炒黃連單方、頭孢吡肟為對照藥材，用瓊脂二倍稀釋法進(jìn)行樣品體外抗菌的最低抑菌濃度。1.4.1.頭孢吡肟對照品稱取藥品9.5mg，加入4.1ml的生理鹽水，混勻，各吸取1ml于兩個(gè)培養(yǎng)皿中，再加入15ml的培養(yǎng)基，使其終濃度為145ug/ml，再吸取2ml于西林瓶中，再在該西林瓶中加入2ml的生理鹽水，混勻，各吸取1ml加入兩個(gè)平皿中，再加入15ml的培養(yǎng)基，使其終濃度為72.4ug/ml，依照此法倍比稀釋，使平皿內(nèi)所含藥物終濃度依次為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008ug/ml。待冷卻后用多點(diǎn)接種儀(mit-p,sukuma)接種細(xì)菌，接種菌量約為104cfu/ml，每皿接種27株菌，2個(gè)皿接種54株菌，蓋上皿蓋。置于35-37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-20h，觀察記錄結(jié)果。以平皿內(nèi)未見細(xì)菌生長的藥物最低濃度，判斷為最低抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentration，mic)。1.4.2.頭花蓼單方、黃連浸膏及地稔樣品配制方法取滅菌燒杯，加入已稱量好的中藥樣品7.68g，再定量加入約50℃的已融化的m-h瓊脂培養(yǎng)基60ml，混勻后分別吸取15ml于兩個(gè)平皿中，使其濃度為128mg/ml，再在剩余的30ml培養(yǎng)基中加入30ml培養(yǎng)基，混勻，分別再從中吸取15ml于2個(gè)培養(yǎng)皿中，使其濃度為64mg/ml，依照此法倍比稀釋，使每皿內(nèi)所含藥物終濃度依次為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008mg/ml。待冷卻后用多點(diǎn)接種儀(mit-p,sukuma)接種細(xì)菌，接種菌量約為104cfu/ml，每皿可接種27株菌，2個(gè)皿共接種43株菌，蓋上皿蓋。置于35-37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-20h，觀察記錄結(jié)果。1.5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.5.1.對革蘭氏陽性菌：地稔全草水提物dqs、地稔全草醇提物dqc均有效。dqs、dqcmic范圍分別為2-16mg/ml、0.06-32mg/ml。表3.4個(gè)樣品對22株革蘭氏陽性菌mic值表1.5.2.對革蘭氏陰性菌：地稔全草水提物dqs、地稔全草醇提物dqc有效。dqs、dqcmic范圍均為8-32mg/ml。表4.2個(gè)地稔樣品對29株革蘭氏陰性菌的mic值表2.抗腸道致病菌2.1.試驗(yàn)菌株2.1.1.受試菌株大腸埃希菌4株，金黃色葡萄球菌、志賀福氏ⅱa、副溶血性弧菌、鼠傷寒沙門氏菌、羅森沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、斯坦利沙門氏菌各1株。2.2.對照品頭花蓼、黃連、雙黃連口服液。2.3.樣品：實(shí)施例1和2所得地稔提取物浸膏。2.4.方法2.4.1.雙黃連口服液分別移取藥品10ml于燒杯中，加入20ml的培養(yǎng)基，混勻，吸取15ml于培養(yǎng)皿中，使其終濃度為0.33ml/ml，再在燒杯中加入15ml的培養(yǎng)基，再吸取15ml于培養(yǎng)皿中，使其終濃度為0.17ml/ml，依照此法倍比稀釋，使藥物終濃度依次為0.33、0.17、0.083、0.042、0.021、0.010、0.005、0.003ml/ml。待冷卻后用多點(diǎn)接種儀(mit-p,sukuma)接種細(xì)菌，接種菌量約為104cfu/ml，每皿接種13株菌，蓋上皿蓋。置于35-37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-20h，觀察記錄結(jié)果。以平皿內(nèi)未見細(xì)菌生長的藥物最低濃度，判斷為最低抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentration，mic)。2.4.2.對照品tqs-1、hgj-1和中藥浸膏樣品配制方法取滅菌燒杯，加入已稱量好的中藥樣品3.84g，再定量加入約50℃的已融化的m-h瓊脂培養(yǎng)基30ml，混勻后吸取15ml于平皿中，使其濃度為128mg/ml，再在剩余的15ml培養(yǎng)基中加入15ml培養(yǎng)基，混勻，再從中吸取15ml于培養(yǎng)皿中，使其濃度為64mg/ml，依照此法倍比稀釋，使每皿內(nèi)所含藥物終濃度依次為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008mg/ml。待冷卻后用多點(diǎn)接種儀(mit-p,sukuma)接種細(xì)菌，接種菌量約為104cfu/ml，每皿接種13株菌，蓋上皿蓋。置于35-37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18-20h，觀察記錄結(jié)果。以平皿內(nèi)未見細(xì)菌生長的藥物最低濃度，判斷為最低抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentration，mic)。2.5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：地稔全草水提物dqs、地稔全草醇提物dqc均有效。dqs、dqcmic范圍分別為16mg/ml、0.5-16mg/ml。表5.對胃腸道致病菌的mic值表實(shí)施例2：抗病毒篩選試驗(yàn)例2-1：流感病毒篩選1.實(shí)驗(yàn)病毒株流感病毒h3n2，由浙江省麗水市疾控中心從臨床分離鑒定所得。2.實(shí)驗(yàn)試劑、材料、設(shè)備和場地試劑：dmem(1x)；fbs；hbss(1x)；pbs(1x)；0.25％trypsin-edta(1x)；均為gibco產(chǎn)品。l-glutamine,liquid；青鏈霉素混合液(100x)；均為solarbio產(chǎn)品。材料：96孔板；10ml一次性移液管；6孔板；均為costar產(chǎn)品。50ml離心管；15ml離心管；25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶；均為corning產(chǎn)品。血凝滴度板；移液槍及槍頭。設(shè)備：co2培養(yǎng)箱；倒置顯微鏡；二級(jí)生物安全柜。場地：細(xì)胞培養(yǎng)bsl-2實(shí)驗(yàn)室。3.樣品：本發(fā)明一部分實(shí)施例所得提取物；實(shí)施例2和3所得地稔提取物浸膏。4.實(shí)驗(yàn)方法樣品配制：稱取樣品0.0200g于1.5mlep管中，用1mldmso溶解后吸取100ul用900ul維持液稀釋后即濃度為2mg/ml，于4℃冷藏備用。培養(yǎng)病毒：將狀態(tài)良好細(xì)胞洗去胎牛血清，加入病毒液于35℃，5％co2培養(yǎng)箱中孵育1-2小時(shí)后將病毒液棄去，加入維持液于35℃，5％co2培養(yǎng)3-7天，待70％的細(xì)胞死亡，將該病毒培養(yǎng)液凍融3次后進(jìn)行ha試驗(yàn)。待測定tcid50之后將病毒液稀釋分裝于-80℃冰箱中凍存以備用。ha試驗(yàn)方法：將o型血血清棄去，取200ul的血紅細(xì)胞于1.5mlep管中，用1ml的pbs清洗3次，吸取100ul的紅細(xì)胞用pbs稀釋至10ml混勻?yàn)?％的血紅細(xì)胞。將培養(yǎng)好的病毒液倍比稀釋為數(shù)個(gè)濃度1:1、1:2、1:4、1:8、1:16等，每個(gè)濃度的病毒液取50ul分別加入50ul的1％血紅細(xì)胞混勻，待40分鐘后查看結(jié)果，若紅細(xì)胞分散即為有病毒，若紅細(xì)胞聚集成一點(diǎn)即為無病毒。樣品最大無毒濃度確定：將狀態(tài)良好的濃度約為105個(gè)/ml的細(xì)胞均勻鋪于96孔板中，培養(yǎng)至第二天長成單層后，將配制好的樣品加入細(xì)胞并倍比稀釋為8個(gè)濃度，于37℃、5％co2條件下培養(yǎng)48小時(shí)后觀察細(xì)胞的狀態(tài)。樣品抗病毒實(shí)驗(yàn)步驟：cck-8細(xì)胞顯色法。①預(yù)防模型：將濃度為105個(gè)/ml的細(xì)胞液100ul/孔鋪于96孔板，待第二天細(xì)胞長至單層后用hbss50ul/孔將細(xì)胞板洗一次，再加入配制好的樣品，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中孵育2h后棄去，再加入病毒液(ha＝1)10ul，再于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中孵育2h后棄去，再加入100ul維持液培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。阻斷率(％)＝[(給藥組平均值－病毒對照平均值)/(正常細(xì)胞對照平均值－病毒對照平均值)]×100％②治療模型：將濃度為105個(gè)/ml的細(xì)胞液100ul/孔鋪于96孔板，待第二天細(xì)胞長至單層后用hbss50ul/孔將細(xì)胞板洗一次，再加入ha＝1的h3n2病毒液10ul/孔，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中孵育2小時(shí),孵育之后將病毒液棄去，再加入配制好的藥液100ug/孔，培養(yǎng)48小時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)。抑制率(％)＝[(給藥組平均值－病毒對照平均值)/(正常細(xì)胞對照平均值－病毒對照平均值)]×100％③殺滅模型：將濃度為105個(gè)/ml的細(xì)胞液100ul/孔鋪于96孔板，待第二天細(xì)胞長至單層備用。第二天用ha＝1的病毒液將樣品稀釋為試驗(yàn)濃度，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中孵育2小時(shí)后加入用hbss清洗后的細(xì)胞板,于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。殺滅率(％)＝[(給藥組平均值－病毒對照平均值)/(正常細(xì)胞對照平均值－病毒對照平均值)]×100％結(jié)果判斷方法：通過cck-8細(xì)胞顯色法測定顯色液的od值，再結(jié)合倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的狀態(tài)，綜合評價(jià)樣品的抗h3n2的效果。5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：地稔醇提物dqc(140706)在殺滅和治療模型均有效，地稔超臨界樣品dq151009-膏、dq151009-液在殺滅模型有效。5.1.在體外殺滅模型試驗(yàn)中，dqc(140706)濃度為15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml、500.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為53.42％、82.77％、52.13％、28.13％、29.29％、4.65％。地稔超臨界樣品dq151009-膏濃度為15.63ug/ml、31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml、500.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為2.32％、8.00％、17.10％、48.58％、95.94％、43.48％。地稔超臨界樣品dq151009-液濃度為31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)殺滅率分別為17.10％、16.65％、34.06％、24.13％。5.2.在體外治療模型試驗(yàn)中，地稔醇提物dqc(140706)在濃度為31.25ug/ml、62.50ug/ml、125.00ug/ml、250.00ug/ml時(shí)相應(yīng)抑制率分別為2.04％、14.77％、32.38％、17.87％。試驗(yàn)例2-2：抗皰疹病毒活性檢測實(shí)驗(yàn)1.材料1.1.實(shí)驗(yàn)病毒株病毒：單純皰疹病毒hsv-i，為復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院抗病毒藥物研究室保存，臨用時(shí)新鮮制備。細(xì)胞：非洲綠猴腎細(xì)胞(vero)。1.2.樣品：為制備實(shí)施例1、2、4所得樣品：dqs、dqc、dqlj(1-1)。1.3.主要儀器：co2細(xì)胞培養(yǎng)箱：mco-15ac型，日本三洋(sanyo)公司；電子天平：sartorius1700型，德國w-germany；超凈工作臺(tái)：sw-cj-1f型，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；離心機(jī)：ld5-2a型，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；酸度計(jì)：orionstara211，thermo公司；酶標(biāo)儀：bio-rad680型，美國伯樂bio-rad公司；生物倒置顯微鏡：xds-1b型，重慶光學(xué)儀器廠；電熱恒溫水浴鍋：dk-s26型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；微量振蕩儀：mh-1型，江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司；漩渦混合器：wh-861型，江蘇太倉華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。1.4.試劑：3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(mtt)、dmem培養(yǎng)基購自sigma公司；二甲基亞砜(dmso)購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；0.25％胰酶購自吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司；胎牛血清購自gibco公司；完全培養(yǎng)液(含10％胎牛血清以及雙抗的dmem培養(yǎng)液)；細(xì)胞維持液(含2％胎牛血清的dmem培養(yǎng)液)；磷酸緩沖液(pbs，ph7.4)，本實(shí)驗(yàn)室自制。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1.樣品配制方法測試樣品溶解于dmso中，預(yù)先配置成40mg/ml濃度，然后用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，按照常規(guī)測試濃度，以200ug/ml開始倍比稀釋。2.2.樣品細(xì)胞毒性試驗(yàn)vero細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24小時(shí)，形成細(xì)胞單層后，加入不同濃度的樣品稀釋液，繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)后，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化并用mtt法測定細(xì)胞活性，確定樣品對細(xì)胞的毒性濃度。2.3.體外抗病毒試驗(yàn)細(xì)胞活性大于90％以上的最大藥物濃度作為藥效測試的最大起始濃度，倍比稀釋5個(gè)濃度進(jìn)行藥效活性檢測。vero細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24小時(shí)，形成細(xì)胞單層后，加入相應(yīng)病毒液感染細(xì)胞，然后換入對細(xì)胞最大無毒濃度及以下的5個(gè)樣品稀釋液，再經(jīng)72小時(shí)培養(yǎng)后，顯微鏡下觀察細(xì)胞病變(cpe)，確定樣品對病毒的抑制作用。2.4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定方法mtt法測定樣品對細(xì)胞的毒性，觀察細(xì)胞病變作用cpe(cytopathiceffect)確定樣品對病毒的抑制作用。tc50和ic50值按照reed-muench法原理進(jìn)行計(jì)算。3.抗單純皰疹病毒病毒篩選結(jié)果3.1樣品對vero細(xì)胞的毒性表6.地稔對vero細(xì)胞的毒性結(jié)果表3.2)樣品體外抗單純皰疹病毒hsv-i作用表7.地稔抗皰疹病毒hsv-1篩選結(jié)果表實(shí)施例3.抗炎1.受試動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為km雄性小鼠，18-22g，spf級(jí)。2.對照品陽性對照藥，抗炎為地塞米松片劑。3.樣品：本發(fā)明一部分實(shí)施例所得提取物；實(shí)施例1和2所得地稔提取物浸膏。4.方法每組動(dòng)物連續(xù)給藥5-6天，所有小鼠在末次給藥后右耳涂上致炎劑，致炎劑為巴豆油。4小時(shí)后，處死動(dòng)物，剪下左右兩耳，用打孔器于同一部位沖下兩耳片。計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率，與空白對照組統(tǒng)計(jì)比較。5.結(jié)果：全草水提物dqs、全草醇提物dqc均有效。dqs，4329mg/kg時(shí)，抗炎率最高為36.5％；dqc，7340mg/kg時(shí)，抗炎率最高為20.0％表8.小鼠巴豆油耳腫脹模型初篩4個(gè)樣品活性表當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12