本發(fā)明涉及一種復合多層多孔支架及其制備方法，屬于生物醫(yī)用人工骨移植材料技術運用領域。

背景技術：

組織工程最早的研究材料是天然材料，隨著時間的流逝，科學家進一步研究了天然材料和合成材料的復合，以及現(xiàn)在合成材料與生物材料的雜化交聯(lián)等，同時，人們還合成了類天然材料，即仿生材料，但是這些材料由于種種缺陷而不能滿足組織工程的需要。材料的降解率、生物相容性、理化性能、毒性、生物活性以及支架制備方法和工藝，都要滿足特定的組織要求，尤其是生物相容性更是材料選擇的關鍵，因為組織工程支架使細胞黏附與增殖的外環(huán)境。

魔芋葡甘聚糖kgm是一種天然的帶有短支鏈的高分子多糖，其結構式如下所示：

魔芋葡甘聚糖擁有良好的溶膠凝膠性能，可形成熱不可逆（熱穩(wěn)定）凝膠，有較好的成型性能，具有較好的力學和體內外的降解性能和生物相容性，原因主要有以下幾個方面：（1）魔芋葡甘聚糖是魔芋塊莖中所含的儲備性多糖，一般認為由β-d-葡萄糖和β-d-甘露糖以2：3的摩爾比，主要通過β-1，4糖苷鍵連接起來的高分子多糖。（2）諸多文獻也已對魔芋葡甘聚糖性質進行了研究。魔芋葡甘聚糖的理化性質主要有：①流變性；②增稠性；③凝膠性；④水溶性；（3）近年來采用各種手段對其進行了改性，從而使它具有適合各種用途的新功能，從而擴大其應用范圍，如魔芋葡甘聚糖kgm的脫乙?；男?、交聯(lián)改性、酯化改性、氧化改性及接枝共聚改性等都能很好地改善魔芋葡甘聚糖kgm的使用性能。

魔芋葡甘聚糖擁有良好的溶膠凝膠性能，可形成熱不可逆(熱穩(wěn)定)凝膠，有較好的成型性能，具有較好的力學和體內外的降解性能和生物相容性，原因主要有以下幾個方面：(1)魔芋葡甘聚糖是魔芋塊莖中所含的儲備性多糖，一般認為由β-d-葡萄糖和β-d-甘露糖以2：3的摩爾比，主要通過β-1，4糖苷鍵連接起來的高分子多糖。(2)諸多文獻也已對魔芋葡甘聚糖性質進行了研究。魔芋葡甘聚糖的理化性質主要有：①流變性；②增稠性；③凝膠性；④水溶性；(3)近年來采用各種手段對其進行了改性，從而使它具有適合各種用途的新功能，從而擴大其應用范圍，如魔芋葡甘聚糖kgm的脫乙?；男?、交聯(lián)改性、酯化改性、氧化改性及接枝共聚改性等都能很好地改善魔芋葡甘聚糖kgm的使用性能。

聚己內酯pcl是一種可完全生物降解并且具有良好生物相容性的脂肪族聚酯，而且其降解產物不容易引起炎癥反應，是一種合成的熱塑性半結晶聚合物，柔性鏈段的聚己內酯比剛性鏈段的聚碳酸酯結晶性能強，容易結晶，具有生物活性、生物相容性、生物降解性、滲透性等優(yōu)點，pcl在室溫下具有良好的柔韌性、加工性和較好的熱穩(wěn)定性，可以作為一種良好的軟骨組織工程替代材料。而細胞在其上的繁殖增長、支架的降解率和力學性能是組織工程支架需要同時滿足的三大要求，選區(qū)激光燒結、熔融沉積成型、靜電紡絲、3d打印等技術制備的聚己內酯組織工程支架盡管與細胞外基質結構相似有利于細胞的粘附與生長，但其力學性能較差，很難作為組織工程的承重材料。

聚乳酸pla是一種具有優(yōu)良的生物相容性、無毒和可生物降解的聚合物，具有較好的化學惰性、易加工性及良好的生物相容性，是最有前途的可生物降解高分子材料之一，早在70年代，聚乳酸在人體內的降解性和降解產物的高度安全性得到確認，它作為一種新型可生物降解的應用高分子材料開始備受關注。

聚醚醚酮peek是一種全芳香半結晶高聚物，具有多種優(yōu)良的綜合性能：對氧高度穩(wěn)定，具有堅韌、高強度、高剛性和耐蠕變的特點，以及優(yōu)越的抗疲勞性、生物相容性，而且溶脹率較低，是最佳的骨關節(jié)材料。

聚乙二醇peg是由環(huán)氧乙烷與水或乙二醇逐步加成聚合得到的一類分子量較低的水溶性聚醚，作為一種兩親性聚合物，具有良好的生物相容性，而且具有無毒、免疫原性低等特點，可通過腎排出體外，不會積累在體內，在生物醫(yī)藥領域具有廣泛的應用前景。

透明質酸ha是糖胺聚糖中的一種，屬于酸性粘多糖，廣泛分布于人體各部位，皮膚也含有大量的透明質酸。在機體內，透明質酸是一種多功能基質，顯示出多種重要的生理功能，例如調節(jié)蛋白質，協(xié)助水電解質的擴散及運轉，潤滑關節(jié)，調節(jié)血管壁的通透性，促進傷口愈合等等。尤為重要的是，透明質酸具有特殊的保水作用，是目前發(fā)現(xiàn)的自然界中保濕性最好的物質，被稱為理想的天然保濕因子。透明質酸由于其具有獨特理化性質和生理功能，已經在醫(yī)學、生物材料方面得到了廣泛應用。

羥基磷灰石是目前應用最廣泛的一種良好的生物活性、生物相容性、可降解性、無毒性、骨傳導性等優(yōu)良特性生物活性材料，其化學式為ca10(po4)6(oh)2，與人體的骨骼和牙齒無機成分的化學組成和結構類似，可以加工成三維孔隙結構，有利于成骨細胞的黏附、生長，誘導骨的成長，在體內能夠逐步降解為鈣磷，產生游離的ca²⁺、po4^3-，為身體帶入一定量的活性成分，鈣磷沉積可促進骨的生長。但它的缺點是力學強度不夠，質脆，韌度不夠。相對于羥基磷灰石粉體而言，羥基磷灰石晶須具有更高的的斷裂韌性和抗彎抗壓能力，在制備過程中不易斷裂。這主要是由于材料可依靠晶須的橋接、裂紋偏轉和拔出效應來吸收能量，消除裂紋尖端集中的應力；而材料受力時，通過負荷傳遞使應力作用于晶須，從而降低周圍的基底材料所承受的應力，從而達到提高材料力學性能的目的。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種復合多層多孔支架，支架具有多層結構，且各層降解速率不同，由魔芋葡甘聚糖、人工合成高分子和羥基磷灰石晶須復合而成。

所述人工合成高分子為聚己內酯、聚乳酸、聚醚醚酮、聚乙二醇或透明質酸。本發(fā)明的另一目的在于提供所述復合多層多孔支架的制備方法，具體步驟如下：

(1)按照質量體積比g/ml為4-6︰400的比例，將魔芋葡甘聚糖kgm加入到攪拌速度為500轉/分鐘的溶劑中，魔芋葡甘聚糖順著溶劑攪拌時形成的漩渦緩慢加入，常溫環(huán)境下攪拌3個小時至完全混合均勻，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液，即得到溶液a；

(2)按照質量體積比g/ml為1-3︰20的比例，將人工合成高分子加入到有機溶劑中，常溫環(huán)境下用磁力攪拌器攪拌2個小時至完全混合均勻，攪拌速度為400轉/分鐘，得到溶液b；

(3)按照羥基磷灰石晶須占步驟(2)中人工合成高分子質量5％-15％的比例，將羥基磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶液b中，常溫環(huán)境下攪拌2個小時，超聲震蕩20min，使其混合均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到玻璃皿中，冷凍10h，得到厚度為0.5-1.5mm的魔芋葡甘聚糖膜，再在魔芋葡甘聚糖膜上流延厚度為0.5-1.5mm的溶液c成膜，冷凍10h，經過多次流延，冷凍干燥后得到一層以上魔芋葡甘聚糖膜和一層以上人工合成高分子和羥基磷灰石晶須膜組成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層多孔支架d在交聯(lián)液中交聯(lián)12-24h后，取出置于蒸餾水中浸泡5-10次，每次1-2h，再冷凍干燥，最終得到魔芋葡甘聚糖/人工合成高分子/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架。

步驟(1)所述溶劑為水、乳酸和丙三醇按照體積比為400︰1.8︰1.2混合而成。

步驟(2)所述有機溶劑為甲醇與二氯甲烷按照體積比為1︰3混合的混合物。

步驟(4)所述冷凍干燥是在零下40℃的條件下進行的。

步驟(5)所述交聯(lián)液為質量分數(shù)25％的氨水與無水乙醇按照體積比1︰3混合而成。

本發(fā)明的有益效果：

(1)采用流延法制得復合多層多孔支架，其制備方法簡單易操作，原料來源廣泛，而且成本低廉，同時也不會破壞魔芋葡甘聚糖、聚己內酯(聚乳酸、聚醚醚酮、聚乙二醇、透明質酸)、羥基磷灰石晶須自身的優(yōu)點，在軟骨組織工程領域中具有很大的應用前景。

(2)所得復合多層多孔支架的降解率可調，且層與層的降解速率不同，通過改變膜的厚度、試劑的含量、孔隙率來控制降解速度。

(3)所得復合多層多孔支架植入體內后，在體內能夠逐步降解為鈣磷，產生游離的ca²⁺、po4^3-，為身體帶入一定量的活性成分，鈣磷沉積可促進骨的生長。

(4)所得復合多層多孔支架因具備較高的孔隙率，有利于細胞的黏附與增殖。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例1魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的xrd圖；

圖2是本發(fā)明實施例1魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的ftir圖；

圖3是本發(fā)明實施例1魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的降解曲線；

圖4為本發(fā)明實施例1、實施例2和實施例3復合多層多孔支架的抗壓強度。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于所述內容。

實施例1

本實施例一種復合多層多孔支架，由魔芋葡甘聚糖、聚己內酯和羥基磷灰石晶須復合而成，魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架制備所用的化學物質材料為：魔芋葡甘聚糖、聚己內酯、二氯甲烷、羥基磷灰石晶須、去離子水、丙三醇、乳酸、甲醇、質量分數(shù)25％的氨水、無水乙醇，其準備用量如下：

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)將1.2ml丙三醇和1.8ml乳酸依次加入400ml去離子水中混合均勻得到溶劑，再將5g魔芋葡甘聚糖kgm加入到攪拌速度為500轉/分鐘的溶劑中，魔芋葡甘聚糖順著溶劑攪拌時形成的漩渦緩慢加入，常溫環(huán)境下攪拌3個小時至完全混合均勻，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液，即得到溶液a；

(2)將2g聚己內酯加入到15ml二氯甲烷和5ml甲醇混合而成的有機溶劑中，常溫環(huán)境下用磁力攪拌器以400轉/分鐘的速度攪拌2個小時至完全混合均勻，得到溶液b；

(3)將0.3g羥基磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶液b中，常溫環(huán)境下攪拌2個小時，超聲震蕩20min，使其混合均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到直徑為10cm的玻璃皿中，得到厚度為1mm的魔芋葡甘聚糖kgm膜，冷凍10h，再在魔芋葡甘聚糖膜上流延厚度為1mm的溶液c成膜，冷凍10h；經過多次流延，直至得到由8層kgm膜和7層pcl/haw膜交替流延成膜組成的厚度為15mm的kgm/pcl/haw冷凍未干燥樣品，并在冷凍干燥機中在零下40℃的條件下冷凍干燥得到kgm/pcl/haw復合而成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層多孔支架d在280ml的質量分數(shù)25％的氨水與無水乙醇按照體積比1︰3混合而成的交聯(lián)液中交聯(lián)18h后，取出置于蒸餾水中浸泡10次，每次1h，再冷凍干燥，最終得到kgm/pcl/haw復合多層多孔支架。

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架交聯(lián)前(步驟(5)得到的多層多孔支架d)和交聯(lián)后(步驟(6)最終得到kgm/pcl/haw復合多層多孔支架)的xrd分析，如圖1所示，從圖中可以看出2θ為21.4°和23.8°附近均出現(xiàn)兩個明顯的衍射峰，說明支架中聚己內酯的存在，在2θ為20°可以看出明顯的饅頭峰，表明支架中含有魔芋葡甘聚糖，另外，可以明顯看到ha峰的存在，例如：各衍射峰(2θ＝25.9°，2θ＝31.7°，2θ＝45.6°)的位置與標準卡片(jcpds)相符，說明所制備的kgm/pcl/haw復合多層多孔支架中有ha的存在。

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架交聯(lián)前(步驟(5)得到的多層多孔支架d)和交聯(lián)后(步驟(6)最終得到kgm/pcl/haw復合多層多孔支架)的ftir分析，如圖2所示，由圖2可看出紅外特征峰與kgm、pcl和haw完全吻合，如3440cm^-1附近的峰為-oh，2928cm^-1附近為甲基中的c-h，882cm^-1和807cm^-1附近的kgm特征吸收峰，1637cm^-1附近的吸收峰為c＝o鍵的特征峰，1150cm^-1和573cm^-1附近為p-ocm^-1鍵的吸收峰，說明最后得到的復合多層多孔支架中含有kgm、pcl和haw。

本實施例制備得到的魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架降解曲線如圖3所示，本降解實驗通過把樣品浸泡于人體模擬體液(sbf)溶液中來評價其降解性，由圖3可知復合多層多孔支架在前7天為增重過程，隨著浸泡時間的增加逐漸表現(xiàn)為失重，分析可知增重是由于降解產物的生成，例如羥基磷灰石晶須中鈣磷鹽的沉積；另外一個原因為人體模擬體液中活性物質的沉積，但浸泡7-10天后，支架材料降解導致的失重大于沉積產物造成的增重，因此顯示出失重的降解曲線。

如下表1為用mtt法對實施例1制備得到的kgm/pcl/haw復合多層多孔支架的細胞毒性分析的細胞增殖度(rgr)值，本實驗將293t細胞(轉染腺病毒e1a基因的人腎上皮細胞)作為實驗細胞，依據(jù)國家標準(gb/t16886.12-2005)，檢測細胞在待測材料的培養(yǎng)液中的增殖情況，根據(jù)國家標準(gb/t14233.2-2005)從而判定其毒性等級，細胞毒性結果表明，支架濃度在0.05-0.4g/ml時，細胞增殖度均在100-120之間，細胞毒性為0級，說明制備的魔芋葡甘聚糖/聚己內酯/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架無細胞毒性。

表1復合多層多孔支架的細胞增殖度

如圖4所示，本實施例制備的kgm/pcl/haw復合多層多孔支架抗壓強度高達8.65mpa，滿足軟骨組織要求；另外，采取稱重法測出其孔隙率為82.46％，證明該支架具有較高的孔隙率。

實施例2

本實施例一種復合多層多孔支架，由魔芋葡甘聚糖、聚乳酸和羥基磷灰石晶須復合而成，魔芋葡甘聚糖/聚乳酸/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架制備所用的化學物質材料為：魔芋葡甘聚糖、聚乳酸、二氯甲烷、羥基磷灰石晶須、去離子水、丙三醇、乳酸、甲醇、質量分數(shù)25％的氨水、無水乙醇，其準備用量如下：

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚乳酸/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)將1.2ml丙三醇和1.8ml乳酸依次加入400ml去離子水中混合均勻得到溶劑，再將4g魔芋葡甘聚糖kgm加入到攪拌速度為500轉/分鐘的溶劑中，魔芋葡甘聚糖順著溶劑攪拌時形成的漩渦緩慢加入，常溫環(huán)境下攪拌3個小時至完全混合均勻，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液，即得到溶液a；

(2)將1g聚乳酸加入到15ml二氯甲烷和5ml甲醇混合而成的有機溶劑中，常溫環(huán)境下用磁力攪拌器以400轉/分鐘的速度攪拌2個小時至完全混合均勻，得到溶液b；

(3)將0.05g羥基磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶液b中，常溫環(huán)境下攪拌2個小時，超聲震蕩20min，使其混合均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到直徑為10cm的玻璃皿中，得到厚度為0.5mm的魔芋葡甘聚糖kgm膜，冷凍10h，再在魔芋葡甘聚糖膜上流延厚度為0.5mm的溶液c成膜，冷凍10h，冷凍干燥機中在零下40℃的條件下冷凍干燥得到厚度為1mm的kgm/pla/haw復合而成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層多孔支架d在280ml質量分數(shù)25％的氨水與無水乙醇按照體積比1︰3混合而成的交聯(lián)液中交聯(lián)12h后，取出置于蒸餾水中浸泡5次，每次2h，再冷凍干燥，最終得到kgm/pla/haw復合多層多孔支架。

如下表2為用mtt法對實施例1制備得到的kgm/pla/haw復合多層多孔支架的細胞毒性分析的細胞增殖度(rgr)值，本實驗將293t細胞(轉染腺病毒e1a基因的人腎上皮細胞)作為實驗細胞，依據(jù)國家標準(gb/t16886.12-2005)，檢測細胞在待測材料的培養(yǎng)液中的增殖情況，根據(jù)國家標準(gb/t14233.2-2005)從而判定其毒性等級，細胞毒性結果表明，支架濃度在0.05-0.4g/ml時，細胞增殖度均在100-120之間，細胞毒性為0級，說明制備的魔芋葡甘聚糖/聚乳酸/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架無細胞毒性，同時，

由圖4可知該支架的抗壓強度為11.25mpa，達到了軟骨的強度要求。

表2復合多層多孔支架的細胞增殖度

如圖4所示，最終所得支架的抗壓強度為11.25mpa，達到了軟骨的強度要求；采取稱重法測出其孔隙率為83.15％，說明該支架具有較高的孔隙率。

實施例3

本實施例一種復合多層多孔支架，由魔芋葡甘聚糖、聚醚醚酮、羥基磷灰石晶須復合而成，魔芋葡甘聚糖/聚醚醚酮/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架制備所用的化學物質材料為：魔芋葡甘聚糖、聚醚醚酮、二氯甲烷、羥基磷灰石晶須、去離子水、丙三醇、乳酸、甲醇、質量分數(shù)25％的氨水、無水乙醇，其準備用量如下：

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚醚醚酮/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)將1.2ml丙三醇和1.8ml乳酸依次加入400ml去離子水中混合均勻得到溶劑，再將4g魔芋葡甘聚糖kgm加入到攪拌速度為500轉/分鐘的溶劑中，魔芋葡甘聚糖順著溶劑攪拌時形成的漩渦緩慢加入，常溫環(huán)境下攪拌3個小時至完全混合均勻，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液，即得到溶液a；

(2)將2g聚醚醚酮加入到15ml二氯甲烷和5ml甲醇混合而成的有機溶劑中，常溫環(huán)境下用磁力攪拌器以400轉/分鐘的速度攪拌2個小時至完全混合均勻，得到溶液b；

(3)將0.2g羥基磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶液b中，常溫環(huán)境下攪拌2個小時，超聲震蕩20min，使其混合均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到玻璃皿中，得到厚度為1mm的魔芋葡甘聚糖kgm膜，冷凍10h，再在魔芋葡甘聚糖膜上流延厚度為1mm的溶液c成膜，冷凍10h；經過多次流延，直至得到6層kgm膜和4層peek/haw膜的厚度為10mm的kgm/peek/haw冷凍未干燥樣品，6層kgm膜和4層peek/haw膜是先一層kgm膜，然后一層peek/haw膜，再一層kgm膜，兩種膜交替疊加，最上面是兩層kgm膜，樣品在冷凍干燥機中在零下40℃的條件下冷凍干燥得到kgm/peek/haw復合而成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層多孔支架d在280ml的質量分數(shù)25％的氨水與無水乙醇按照體積比1︰3混合而成的交聯(lián)液中交聯(lián)12h后，取出置于蒸餾水中浸泡8次，每次1.5h，再冷凍干燥，最終得到kgm/peek/haw復合多層多孔支架。

如圖4所示，本實施例制備的kgm/peek/haw復合多層多孔支架由于含有較多的羥基磷灰石晶須，抗壓強度高達12.37mpa，滿足軟骨組織要求；采取稱重法測出其孔隙率為86.29％，說明該支架具有較高的孔隙率。

實施例4

本實施例一種復合多層多孔支架，由魔芋葡甘聚糖、聚乙二醇和羥基磷灰石晶須復合而成，魔芋葡甘聚糖/聚乙二醇/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架制備所用的化學物質材料為：魔芋葡甘聚糖、聚乙二醇、二氯甲烷、羥基磷灰石晶須、去離子水、丙三醇、乳酸、甲醇、質量分數(shù)25％的氨水、無水乙醇，其準備用量如下：

本實施例魔芋葡甘聚糖/聚乙二醇/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)將1.2ml丙三醇和1.8ml乳酸依次加入400ml去離子水中混合均勻得到溶劑，再將6g的魔芋葡甘聚糖kgm加入到攪拌速度為500轉/分鐘的溶劑中，魔芋葡甘聚糖順著溶劑攪拌時形成的漩渦緩慢加入，常溫環(huán)境下攪拌3個小時至完全混合均勻，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液，即得到溶液a；

(2)將3g的聚乙二醇加入到15ml二氯甲烷和5ml甲醇混合而成的有機溶劑中，常溫環(huán)境下用磁力攪拌器以400轉/分鐘的速度攪拌2個小時至完全混合均勻，得到溶液b；

(3)將0.15g羥基磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶液b中，常溫環(huán)境下攪拌2個小時，超聲震蕩20min，使其混合均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到直徑為10cm的玻璃皿中，得到厚度為0.5mm的魔芋葡甘聚糖kgm膜，冷凍10h，再在魔芋葡甘聚糖膜上流延厚度為1mm的溶液c成膜，冷凍10h；經過多次流延，直至得到6層kgm膜和4層peg/haw膜的厚度為20mm的kgm/peg/haw冷凍未干燥樣品，6層kgm膜和4層peg/haw膜是先一層kgm膜，然后一層peg/haw膜，再一層kgm膜，兩種膜交替疊加，最上面是兩層kgm膜，樣品在冷凍干燥機中在零下40℃的條件下冷凍干燥得到kgm/peg/haw復合而成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層多孔支架d在280ml質量分數(shù)25％的氨水與無水乙醇按照體積比1︰3混合而成的交聯(lián)液中交聯(lián)15h后，取出置于蒸餾水中浸泡6次，每次2h，再冷凍干燥，最終得到kgm/peg/haw復合多層多孔支架。

實施例5

本實施例一種復合多層多孔支架，由魔芋葡甘聚糖、透明質酸和羥基磷灰石晶須復合而成，魔芋葡甘聚糖/透明質酸/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架制備所用的化學物質材料為：魔芋葡甘聚糖、透明質酸、二氯甲烷、羥基磷灰石晶須、去離子水、丙三醇、乳酸、甲醇、質量分數(shù)25％的氨水、無水乙醇，其準備用量如下：

本實施例魔芋葡甘聚糖/透明質酸/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)將1.2ml丙三醇和1.8ml乳酸依次加入400ml去離子水中混合均勻得到溶劑，再將6g魔芋葡甘聚糖kgm加入到攪拌速度為500轉/分鐘的溶劑中，魔芋葡甘聚糖順著溶劑攪拌時形成的漩渦緩慢加入，常溫環(huán)境下攪拌3個小時至完全混合均勻，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液，即得到溶液a；

(2)將2g透明質酸加入到15ml二氯甲烷和5ml甲醇混合而成的有機溶劑中，常溫環(huán)境下用磁力攪拌器以400轉/分鐘的速度攪拌2個小時至完全混合均勻，得到溶液b；

(3)將0.3g羥基磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶液b中，常溫環(huán)境下攪拌2個小時，超聲震蕩20min，使其混合均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到直徑為10cm的玻璃皿中，得到厚度為1mm的魔芋葡甘聚糖kgm膜，冷凍10h，再在魔芋葡甘聚糖膜上流延厚度為1.5mm的溶液c成膜，冷凍10h；經過多次流延，直至得到10層kgm膜和10層ha/haw膜交替疊加的厚度為25mm的kgm/ha/haw冷凍未干燥樣品，并在冷凍干燥機中在零下40℃的條件下冷凍干燥得到kgm/ha/haw復合而成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層多孔支架d在280ml的質量分數(shù)25％的氨水與無水乙醇按照體積比1︰3混合而成的交聯(lián)液中交聯(lián)24h后，取出置于蒸餾水中浸泡9次，每次1h，再冷凍干燥，最終得到kgm/ha/haw復合多層多孔支架。

實施例6

本實施例一種復合多層多孔支架，由魔芋葡甘聚糖、透明質酸和羥基磷灰石晶須復合而成，魔芋葡甘聚糖/透明質酸/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架制備所用的化學物質材料為：魔芋葡甘聚糖、透明質酸、二氯甲烷、羥基磷灰石晶須、去離子水、丙三醇、乳酸、甲醇、質量分數(shù)25％的氨水、無水乙醇，其準備用量如下：

本實施例魔芋葡甘聚糖/透明質酸/羥基磷灰石晶須復合多層多孔支架的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)將1.2ml丙三醇和1.8ml乳酸依次加入400ml去離子水中混合均勻得到溶劑，再將6g魔芋葡甘聚糖kgm加入到攪拌速度為500轉/分鐘的溶劑中，魔芋葡甘聚糖順著溶劑攪拌時形成的漩渦緩慢加入，常溫環(huán)境下攪拌3個小時至完全混合均勻，微波加熱4min，真空脫泡，去除表面和杯壁的固化液，即得到溶液a；

(2)將3g透明質酸加入到15ml二氯甲烷和5ml甲醇混合而成的有機溶劑中，常溫環(huán)境下用磁力攪拌器以400轉/分鐘的速度攪拌2個小時至完全混合均勻，得到溶液b；

(3)將0.45g羥基磷灰石晶須加入到步驟(2)制得的溶液b中，常溫環(huán)境下攪拌2個小時，超聲震蕩20min，使其混合均勻，得到溶液c；

(4)取步驟(1)制得的溶液a流延到直徑為10cm的玻璃皿中，得到厚度為1.5mm的魔芋葡甘聚糖kgm膜，冷凍10h，再在魔芋葡甘聚糖膜上流延厚度為1.5mm的溶液c成膜，冷凍10h；經過多次流延，直至得到10層kgm膜和10層ha/haw膜交替疊加的厚度為30mm的kgm/ha/haw冷凍未干燥樣品，并在冷凍干燥機中在零下40℃的條件下冷凍干燥得到kgm/ha/haw復合而成的多層多孔支架d；

(5)將步驟(4)所得的多層多孔支架d在280ml質量分數(shù)25％的氨水與無水乙醇按照體積比1︰3混合而成的交聯(lián)液中交聯(lián)18h后，取出置于蒸餾水中浸泡8次，每次1.5h，再冷凍干燥，最終得到kgm/ha/haw復合多層多孔支架。