一種小分子多肽的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種小分子多肽，所述小分子多肽包含：(a)小分子多肽氨基酸序列：SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；(b)在(a)限定的小分子多肽中經(jīng)過缺失、插入或置換一個或幾個氨基酸且與(a)所述多肽具有相同生物學(xué)功能的由(a)衍生的多肽；所述小分子多肽分子量為2461g/mol，等電點為12.3；其可應(yīng)用于制備抗菌和促進成骨細(xì)胞生長的材料中。本發(fā)明在于提供一種具有抗菌和促進成骨細(xì)胞生長的小分子多肽，同時在于提供該小分子多肽在制備抗菌和促進成骨細(xì)胞生長的材料中的應(yīng)用。
【專利說明】一種小分子多肽

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種小分子多肽。

【背景技術(shù)】
[0002] 種植牙手術(shù)是一個牙槽外科手術(shù)，選用的是與人體相容性極好的生物材料，要求 種植牙對人體不產(chǎn)生任何不良副作用，種植牙的材料分為牙根材料和牙冠材料兩部分，牙 冠材料可以根據(jù)患者意愿靈活處理，而牙根材料則是有嚴(yán)格的規(guī)定。隨著口腔種植治療的 廣泛開展，種植體周圍感染的病例也在逐漸增多，尋找一種和人體能極好的相容，又能提高 種植體性能的材料具有重要的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的之一在于提供一種具有抗菌和促進成骨細(xì)胞生長的小分子多肽；本發(fā) 明目的之二在于提供該小分子多肽在制備抗菌和促進成骨細(xì)胞生長的材料中的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：
[0005] -種小分子多肽，所述小分子多肽包含：
[0006] (a)小分子多肽氨基酸序列：SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列；
[0007] (b)在（a)限定的小分子多肽中經(jīng)過缺失、插入或置換一個或幾個氨基酸且與（a) 所述多肽具有相同生物學(xué)功能的由（a)衍生的多肽。
[0008] 優(yōu)選的是，所述小分子多肽分子量為2461g/mol。
[0009] 優(yōu)選的是，所述小分子多肽等電點為12. 3。
[0010] 優(yōu)選的是，其在制備抗菌和促進成骨細(xì)胞生長的材料中的應(yīng)用。種植體的鈦表面 可用連接子預(yù)處理，并且可將含有-SH基團的氨基酸，例如半胱氨酸引入本發(fā)明小分子多 肽的N末端或C末端中，以結(jié)合所述連接子的官能團。也可用連接子對鈦表面預(yù)處理后連 接多肽中的-NH 2基團，將多肽連接在鈦表面。例如，結(jié)合連接子，本發(fā)明小分子多肽在N 末端含有半胱氨酸以便借助于連接子與半胱氨酸之間的相互作用容易地被引入種植體中； 另外，為了將本發(fā)明小分子多肽穩(wěn)定地引入種植體的鈦（Ti)表面中，優(yōu)選利用硅烷-連接 子-肽的連接關(guān)系將這些小分子多肽引入種植體表面中，這樣處理得到的鈦金屬可作為牙 種植體和骨種植體使用，由于其優(yōu)異的抗菌性能和促進成骨細(xì)胞生長功能，對于避免種植 體細(xì)菌感染和挽救病人生命有重大意義。
[0011] 此外，本發(fā)明的小分子多肽也可簡單應(yīng)用于其他日常使用的材料表面，如塑料、玻 璃和其他金屬表面，可有效預(yù)防日常接觸引起的細(xì)菌感染。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的一種小分子多肽，具有良好的抗菌能力，對于 多種菌種均能有效殺菌，并且殺菌效果能達到99 %，其中對于大腸埃希氏菌殺菌率可達到 99.98% ;本發(fā)明的小分子多肽能有效的提高骨細(xì)胞活性，促進成骨細(xì)胞分化能力，通過小 分子多肽對初始細(xì)胞分化能力與普通培養(yǎng)基對初始細(xì)胞分化能力的比較可知堿性磷酸酶 (ALP)活性提高了 93% ;通過細(xì)胞毒性分析，可知利用本發(fā)明制作的材料無毒，作用于人體 不會造成健康危害；本發(fā)明提供的小分子多肽，穩(wěn)定性強，結(jié)構(gòu)易于調(diào)控，易于與其它化合 物結(jié)合，可以簡單應(yīng)用于各種形式的材料，易于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0013] 本發(fā)明所涉及到的術(shù)語定義
[0014] 除非另外定義，否則本文所用的所有技術(shù)及科學(xué)術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員通常所了解相同的含義。雖然在本發(fā)明的實踐或測試中可使用與本文所述者 類似或等效的任何方法、裝置和材料，但現(xiàn)在描述優(yōu)選方法、裝置和材料。
[0015] 術(shù)語"氨基酸"意指構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)，使 它的分子具有生化活性。蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)重要的活性分子，包括催化新陳代謝的酶，兩個 或兩個以上的氨基酸化學(xué)聚合成肽，一個蛋白質(zhì)的原始片段，是蛋白質(zhì)生成的前體，氨基酸 廣義上是指既含有一個堿性氨基又含有一個酸性羧基的有機化合物，正如它的名字所說的 那樣。但一般的氨基酸，則是指構(gòu)成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)單位。在生物界中，構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的氨 基酸具有其特定的結(jié)構(gòu)特點，即其氨基直接連接在a-碳原子上，這種氨基酸被稱為a-氨 基酸。在自然界中共有300多種氨基酸，其中a-氨基酸21種。a-氨基酸是肽和蛋白質(zhì) 的構(gòu)件分子，也是構(gòu)成生命大廈的基本磚石之一。
[0016] 術(shù)語"多肽"意指a -氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物，它也是蛋白質(zhì)水 解的中間產(chǎn)物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理類推還有三肽、四 肽、五肽等，通常由10?100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于 10000道爾頓，能透過半透膜，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀，也有文獻把由2?10個氨基 酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10?50個氨基酸組成的肽稱為多肽；由50個以上的氨 基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì)。
[0017] 術(shù)語"缺失"意指一個正常染色體斷裂后丟失了一個片段，這片段上的基因也隨之 失去，在本發(fā)明中意指小分子多肽除了為SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列之外，還包括小分 子多肽氨基酸序列中丟失一個或幾個氨基酸的不影響其功能的新的氨基酸序列的小分子 多肽。
[0018] 術(shù)語"插入"意指利用基因操作技術(shù)把一段DNA接入另一段DNA中或克隆載體中 去，在本發(fā)明中意指小分子多肽除了為SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列之外，還包括小分子 多肽氨基酸序列中插入一個或幾個氨基酸的不影響其功能的新的氨基酸序列的小分子多 肽。
[0019] 術(shù)語"置換"意指一種基因重組載體，一般利用同源重組將基因組中的某段基因替 換，而達到基因敲除的目的，在本發(fā)明中意指小分子多肽除了為SEQ ID No. 1所示的氨基酸 序列之外，還包括小分子多肽氨基酸序列中一個或幾個氨基酸被其他種類的氨基酸置換后 的不影響其功能的新的氨基酸序列的小分子多肽。
[0020] 術(shù)語"等電點"意指在某一 pH的溶液中，氨基酸或蛋白質(zhì)解離成陽離子和陰離子 的趨勢或程度相等，成為兼性離子，呈電中性，此時溶液的pH成為該氨基酸或蛋白質(zhì)的等 電點，生物兩性分子如蛋白質(zhì)即含有酸性的，也含有堿性的官能團。組成蛋白質(zhì)的氨基酸可 能是帶正電荷的、帶負(fù)電荷的、中性的或者本生是兩性的，它們的電荷加在一起是蛋白質(zhì)的 電荷，PH值小于等電點時蛋白質(zhì)的總電荷是正的，大于等電點時是負(fù)的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明所述小分子多肽對成骨細(xì)胞增殖活性的影響與普通培養(yǎng)基對成骨 細(xì)胞增殖活性影響的比較結(jié)果對照圖；
[0022] 圖2為本發(fā)明所述小分子多肽對初始細(xì)胞分化能力與普通培養(yǎng)基對初始細(xì)胞分 化能力的比較結(jié)果對照圖。

【具體實施方式】
[0023] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文 字能夠據(jù)以實施。
[0024] 實施例1 :
[0025] -種小分子多肽，氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示；
[0026] SEQ ID No. I ：GSKKPVPIIY CNRRTGKRTR M〇
[0027] 實施例2 :
[0028] 小分子多肽的制備：
[0029] 選用氨基酸-王樹脂作為載體（樹脂），用二氯甲烷將樹脂充分溶脹，用二甲基甲 酰胺清洗幾遍，用適當(dāng)濃度的DBLK，將Fmoc-保護基團脫出，之后用二甲基甲酰胺清洗數(shù) 遍，洗去DBLK，稱取適合的縮合劑苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸鹽和活 化劑甲基嗎啉以及C端第二個Fmoc-保護氨基酸（Fmoc-Pro-OH)進行偶聯(lián)，通過茚三酮檢 測法進行檢測確保連接比較完全，用二甲基甲酰胺清洗幾遍，洗去殘留的各種殘基，活化劑 和縮合劑，依氨基酸序列進行偶聯(lián)，將所有的氨基酸連接結(jié)束后，脫去最后的Fmoc-保護基 團，用切割液裂解，去除樹脂和氨基酸保護基團，得到小分子多肽的粗品，送質(zhì)譜確認(rèn)產(chǎn)品 分子量2461 g/mol符合理論值。
[0030] 實施例3 :
[0031] 抗菌能力實驗：
[0032] 一、實驗方法
[0033] 在滅菌試管中加入ImL濃度為I X IO6個/mL的菌液，加入Img本發(fā)明所提供的小 分子多肽，37°C培養(yǎng)24小時后，培養(yǎng)基收集起來用倍比稀釋，稀釋倍數(shù)為10倍和涂布培養(yǎng) 法檢測活菌數(shù)。
[0034] 二、實驗結(jié)果：
[0035] 表1本發(fā)明所述小分子多肽的殺菌率（％ )
[0036]

【權(quán)利要求】
1. 一種小分子多肽，其特征在于，所述小分子多肽包含： (a) 小分子多肽氨基酸序列：SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列； (b) 在（a)限定的小分子多肽中經(jīng)過缺失、插入或置換一個或幾個氨基酸且與（a)所述 多肽具有相同生物學(xué)功能的由（a)衍生的多肽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小分子多肽，其特征在于，所述小分子多肽分子量為2461g/ mol 〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小分子多肽，其特征在于，所述小分子多肽等電點為12. 3。
4. 權(quán)利要求1所述的小分子多肽，其特征在于，其在制備抗菌和促進成骨細(xì)胞生長的 材料中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61L27/54GK104292309SQ201410512774
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月29日
【發(fā)明者】李培源, 蘇煒, 霍麗妮, 陳睿 申請人:廣西中醫(yī)藥大學(xué)