用于治療咳嗽及減輕氣道炎癥的五味子提取物、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于治療咳嗽及減輕氣道炎癥的五味子提取物的制備方法、及其應(yīng)用。所述的提取物是以五味子為原料，采用乙醇回流提取3次，每次1-3h，合并提取液，靜置后過濾，得提取物A；藥渣水煎煮三次，每次1-3h，合并提取液，靜置后過濾，得提取物B。合并提取物A和B，真空干燥，即得本發(fā)明五味子提取物。本發(fā)明的制備方法加工工藝簡(jiǎn)便，溶劑安全無毒，且價(jià)格低廉。本發(fā)明制備額五味子提取物對(duì)于咳嗽有明確的治療及緩解功效，并能減輕氣道炎癥，可用于制備治療咳嗽及減輕氣道炎癥的藥物和/或保健品。
【專利說明】用于治療咳嗽及減輕氣道炎癥的五味子提取物、其制備方 法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥提取物，具體涉及一種五味子提取物及其制備方法和應(yīng)用， 屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 咳嗽是內(nèi)科門診最常見的癥狀，見于多種呼吸系統(tǒng)及非呼吸系統(tǒng)疾病?？人员旧?是一種防御機(jī)制，清除氣道內(nèi)過多的分泌物及防止異物誤吸入氣道。但持續(xù)長(zhǎng)時(shí)間的慢性 咳嗽卻嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量并造成患者嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)，同時(shí)也顯著增加了個(gè)人及 公共醫(yī)療衛(wèi)生支出。慢性咳嗽在臨床上是指以咳嗽為唯一癥狀或主要癥狀，咳嗽時(shí)間超過8 周，胸部X線檢查無明顯異常的癥狀。廣州呼吸疾病研究所進(jìn)行的一項(xiàng)調(diào)查顯示，慢性咳嗽 患者平均病程為三年，有的長(zhǎng)達(dá)數(shù)十年，就診的平均次數(shù)達(dá)18次，就診醫(yī)療機(jī)構(gòu)平均3間， 其中女性患者因咳嗽誘發(fā)尿失禁比例高達(dá)48%。近年隨著大氣環(huán)境污染的逐漸加重（如 PM2. 5、PM10等）、生活壓力加大，慢性咳嗽的發(fā)病率有升高的趨勢(shì)：多份國(guó)外流行病學(xué)研究 顯示慢性咳嗽在普通人群的發(fā)病率約9%?33%，2003年一項(xiàng)英國(guó)流行病學(xué)調(diào)查顯示，慢 性咳嗽在50-59歲的中年人發(fā)病率達(dá)12%，慢性咳嗽患者約占呼吸專家門診患者的20%。 在我國(guó)，據(jù)廣州呼吸疾病研究所統(tǒng)計(jì)，在青年大學(xué)生人群中慢性咳嗽的患病率超過3%，推 測(cè)社區(qū)人群的咳嗽患病率將遠(yuǎn)高于這一數(shù)據(jù)。慢性咳嗽患者反復(fù)進(jìn)行各種無意義的檢查， 使用各種抗生素和鎮(zhèn)咳藥物治療均無效，嚴(yán)重影響患者的身心健康及工作生活，并造成公 共醫(yī)療資源的極大浪費(fèi)。
[0003] 五味子為木蘭科植物，果實(shí)入藥，味酸、甘，性溫。歸肺、心、腎經(jīng)。中醫(yī)臨床上常將 五味子配伍止咳中藥如麻黃、紫菀、款冬花等，用于咳嗽后期的干咳無痰或久咳不已的肺虛 咳嗽病癥。目前為止，一直未有文獻(xiàn)報(bào)道五味子提取物是否能有效治療咳嗽尤其是久咳。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種五味子提取物的制備方法，本發(fā)明制得的五 味子提取物可應(yīng)用于治療咳嗽及減輕氣道炎癥。
[0005] 本發(fā)明采取如下步驟來制備五味子提取物：
[0006] 1)取五味子藥材，將其干燥后進(jìn)行粉碎，用乙醇溶液回流提取1?3次，每次提取 1?3小時(shí)，每次提取所用的乙醇溶液的體積（ml)為五味子藥材質(zhì)量（g)的4?8倍（即， 每lg五味子藥材加入4?8ml的乙醇溶液進(jìn)行提?。?，合并提取液，然后靜置過濾，得提取 物A ;
[0007] 2)將步驟1)提取留下的藥渣用水煎煮1?3次，每次煎煮1?3小時(shí)，每次煎煮 所用的水的體積（ml)為五味子藥材質(zhì)量（g)的4?8倍，合并提取液，然后靜置過濾，得提 取物B ;
[0008] 3)合并步驟1)提取得到的提取物A和步驟2)提取得到的提取物B，然后進(jìn)行真 空干燥，制得所述五味子提取物。
[0009] 所述五味子藥材為五味子Schisandra chinensis (Turcz. ) Baill.或華中五味子 Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.中的至少一種
[0010] 所述乙醇溶液其為乙醇體積濃度在50-100%之間的乙醇水溶液。
[0011] 進(jìn)一步的，步驟1)中，將五味子藥材干燥后粉碎成10?60目。
[0012] 優(yōu)選的，在步驟1)獲得的提取液合并且靜置過濾后，還具有對(duì)過濾液進(jìn)行減壓濃 縮的步驟；在步驟2)獲得的提取液合并且靜置過濾后還具有對(duì)過濾液進(jìn)行減壓濃縮的步 驟。
[0013] 本發(fā)明的五味子提取物，其制備方法簡(jiǎn)單、設(shè)備成本低、能耗消耗少、溶劑安全無 毒、價(jià)格低廉，能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，易于推廣。
[0014] 本發(fā)明還提供由上述方法制備的五味子提取物或者含有所述五味子提取物的組 合物在制備治療咳嗽的藥物和/或保健品中的應(yīng)用，所述咳嗽包括急性、亞急性或慢性咳 嗽。本發(fā)明制得的五味子提取物具有鎮(zhèn)咳作用、對(duì)咳嗽相關(guān)的氣道炎癥和咳嗽高敏感性具 有抑制作用。
[0015] 本發(fā)明的五味子提取物可以單獨(dú)應(yīng)用，也可加入適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，制成軟膠囊、硬 膠囊、片劑、顆粒劑、滴丸劑、水丸劑、蜜丸劑、口服液等各種藥學(xué)上允許劑型的藥物或保健 品。
[0016] 本發(fā)明的五味子提取物還可以與其它中藥提取物組成中藥組合物，加入適當(dāng)?shù)乃?用輔料，制成軟膠囊、硬膠囊、片劑、顆粒劑、滴丸劑、水丸劑、蜜丸劑、□服液等各種藥學(xué)上 允許劑型的藥物或保健品。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0017] 圖1，為實(shí)施例4豚鼠肺組織和氣道病理切片代表圖（HEX 200)
[0018] 圖2,為五味子提取物不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)檸檬酸煙霧刺激豚鼠咳嗽次數(shù)的影響

【具體實(shí)施方式】
[0019] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范疇。
[0020] 實(shí)施例1 :
[0021] 干燥的北五味子藥材l〇kg，粉碎成30目粗粉，用95% (v/v)乙醇回流提取3次， 每次3h，三次提取所用乙醇的體積（ml)分別為藥材質(zhì)量（g)的8倍、6倍、6倍，合并3次提 取液，靜置后過濾，減壓濃縮，得提取物A ;將提取后留下的藥渣水煎煮2次，每次2h，兩次煎 煮所需水的體積（ml)分別為五味子藥材質(zhì)量（g)的8倍、6倍，合并2次提取液，靜置后過 濾，減壓濃縮，得提取物B。合并提取物A和B，真空干燥，得五味子提取物5. 69kg。
[0022] 實(shí)施例2 :
[0023] 干燥的南五味子藥材10kg，粉碎成40目粗粉，80% (v/v)乙醇水溶液回流提取3 次，每次3h，三次提取乙醇的體積（ml)分別為五味子藥材質(zhì)量（g)的8倍、6倍、6倍，合并 3次提取液，靜置后過濾，減壓濃縮，得提取物A ;提取后留下的藥渣水煎煮2次，每次2h，兩 次煎煮水的體積（ml)分別為五味子藥材質(zhì)量（g)的8倍、6倍，合并2次提取液，靜置后過 濾，減壓濃縮，得提取物B。合并提取物A和B，真空干燥，得五味子提取物5. 28kg。
[0024] 實(shí)施例3 :
[0025] 干燥的北五味子藥材10kg，粉碎成50目粗粉，60% (v/v)乙醇水溶液回流提取2 次，每次3h，，兩次提取乙醇的體積（ml)分別為五味子藥材質(zhì)量（g)的8倍、6倍，合并提取 液，靜置后過濾，減壓濃縮，得提取物A ;提取留下的藥渣水煎煮2次，每次2h，兩次煎煮水的 體積（ml)分別為五味子藥材質(zhì)量（g)的8倍、6倍，合并提取液，靜置后過濾，減壓濃縮，得 提取物B。合并提取物A和B，真空干燥，得五味子提取物5. 42kg。
[0026] 實(shí)施例4 :
[0027] 實(shí)駘動(dòng)物
[0028] 純白Hartly豚鼠，普通級(jí)，雄性，體重300±50 g，購(gòu)自廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可 證號(hào)：SCXK (粵）2008-0002。飼養(yǎng)于廣州呼吸疾病研究所國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中心，許可證 號(hào)：SYXK(粵）2008-0093。豚鼠飼養(yǎng)在相對(duì)清潔、安靜、恒溫（23±3°C )、恒濕（55±15% ) 環(huán)境中，日夜周期為12:12小時(shí)/天，分籠飼養(yǎng)，5只/籠，可自由獲得食物和水。
[0029] 藥物與試劑
[0030] 五味子水提取物（按照如下流程制得：五味子藥材粉碎一8倍量水煎煮2h，共煎 煮3次一煎煮液濃縮，干燥一五味子水提取物）；0. 9%氯化鈉注射液：東莞普濟(jì)藥業(yè)有限公 司。戊巴比妥鈉：美國(guó)Merck公司?？纱颍簢?guó)藥集團(tuán)工業(yè)股份有限公司。"紅玫"牌過濾 嘴香煙：廣州中煙工業(yè)有限公司。其它常規(guī)試劑：廣州化學(xué)試劑廠。

【具體實(shí)施方式】 [0031] 中所有數(shù)據(jù)用"均值土標(biāo)準(zhǔn)差"表示，各組間比較采用SPSS13. 0進(jìn) 行單因素方差分析，方差齊用最小顯著差異法（LSD)，方差不齊或非正態(tài)的數(shù)據(jù)采用秩和檢 驗(yàn)，P < 0. 05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0032] 實(shí)駘儀器
[0033] PM型單腔非限制型小動(dòng)物體描儀（1. 0 L):美國(guó)Buxco公司；數(shù)碼攝影一體化系 統(tǒng)：日本Nikon公司；0. 6mX0. 6mX lm香煙煙霧染毒箱：本實(shí)驗(yàn)室自制；A1003電子天平：德 國(guó)Satorius公司；MDF-U53V-80°C低溫冰箱：日本三洋公司；3-18K SIGMA高速冷凍離心機(jī)： 美國(guó)Beckman公司；22 G靜脈留置針：蘇州醫(yī)療器械有限公司；Anke TGL-16B型普通高速 離心機(jī)：上海安停科學(xué)儀器廠；400型臺(tái)式低溫離心機(jī)：德國(guó)Heraeus公司；XW80A型旋渦振 蕩器：上海精密儀器儀表有限公司；DK8A恒溫水浴鍋：上海精宏試驗(yàn)儀器有限公司。
[0034] (一）實(shí)施例1制各的五味子提取物對(duì)呑煙煙霧刺激致晐嗽敏感件增高豚鼠 （CS 豚鼠）的藥理作用
[0035] 煙熏方法：豚鼠于實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性安靜飼養(yǎng)一周后，置于自制香煙染毒箱內(nèi)，每次點(diǎn) 燃10根香煙于煙熏槽內(nèi)（烤煙型，焦油含量12mg，煙氣煙堿含量1. lmg，煙氣一氧化碳含量 15mg)，通過三通閥將香煙煙霧打入染毒箱內(nèi)，自香煙燃完開始計(jì)時(shí)。每次熏煙20分鐘，每 天熏煙2次，每二次熏煙間隔時(shí)間大于6小時(shí)，連續(xù)熏煙14天。
[0036] 實(shí)驗(yàn)：豚鼠完全隨機(jī)分成正常組、模型組、溶劑對(duì)照組（0. 5%的PEG400)、可待因 組、水提取物高劑量組（劑量500mg/kg豚鼠/天，藥物濃度50mg/mL)、五味子提取物高劑 量組（劑量500mg/kg豚鼠/天，藥物濃度50mg/mL)、五味子提取物中劑量組（劑量250mg/ kg豚鼠/天，藥物濃度25mg/mL)、五味子提取物低劑量組（劑量125mg/kg豚鼠/天，藥物 濃度 12. 5mg/mL)。
[0037] 除正常組外，其余各組動(dòng)物均采用上述煙熏方法刺激。除正常組及可待因組外， 其余各組豚鼠從煙熏第一天開始，于每天的第二次煙熏前2小時(shí)經(jīng)口給予相應(yīng)的藥物或溶 齊U，連續(xù)14天?？纱蚪M于檸檬酸咳嗽敏感性檢查前1小時(shí)，經(jīng)口給藥（30mg/kg豚鼠，可 待因濃度3mg/mL)。正常組正常飼養(yǎng)，不作任何處理。第15天將豚鼠置于體描箱內(nèi)，適應(yīng) 2min后，霧化0. 4mol/L檸檬酸進(jìn)行咳嗽激發(fā)，lOmin后霧化結(jié)束，繼續(xù)觀察lOmin，記錄自霧 化開始的20min內(nèi)豚鼠咳嗽總次數(shù)及咳嗽潛伏期。
[0038] 咳嗽激發(fā)實(shí)驗(yàn)24h后，3%戊巴比妥鈉溶液（lmL/kg)腹腔注射麻醉動(dòng)物，心臟取血 10mL。取6mL 0. lmol/L預(yù)冷的PBS緩沖液，分3次進(jìn)行肺泡灌洗，統(tǒng)一灌洗左肺，每次反 復(fù)灌洗3次，得肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid, BALF)。將所得BALF震蕩混 懸，抽取0. 5mL，用紅細(xì)胞裂解液充分裂解，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取10 μ L上清液滴 入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，光學(xué)顯微鏡下計(jì)算BALF炎癥細(xì)胞總數(shù)（細(xì)胞總數(shù)/mL =(四大格細(xì)胞總 數(shù)/4) X 104/mL);抽取0. 5mL后剩余的BALF于3000rpm離心10min，沉淀用lmLPBS混懸， 取100yL制作細(xì)胞涂片，自然風(fēng)干，浸泡于10%中性甲醛中過夜固定，取出后依次進(jìn)行流 水沖洗l〇min、蘇木素染色15sec、流水沖洗lmin、l%鹽酸酒精脫色2sec、流水沖洗10min、 伊紅染色5 sec、流水沖洗10min、烘干，得中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下連續(xù)隨機(jī)抽取20個(gè) 400倍視野進(jìn)行連續(xù)計(jì)數(shù)，每張涂片連續(xù)計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，計(jì)算其中中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì) 胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的比例。
[0039] 豚鼠抽取BALF后，從心臟注入50mL PBS進(jìn)行灌洗，從氣管注入2. 5mL4%多聚甲 醛，然后剪取一塊右下肺組織及一段氣管，10%中性甲醛固定24h以上。取出已固定好的肺 組織，依次進(jìn)行乙醇梯度脫水、生物透明劑處理、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、梯度酒精水化、雙 蒸水短暫漂洗，最后進(jìn)行HE染色后，中性樹膠封片，進(jìn)行病理觀察。
[0040] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與正常組比較，各實(shí)驗(yàn)組豚鼠氣道阻力未見明顯差異，提示本實(shí)驗(yàn)建模 方法未造成豚鼠氣道阻力增加，有別于慢性阻塞性肺疾病動(dòng)物模型。
[0041] 各實(shí)驗(yàn)組豚鼠檸檬酸激發(fā)咳嗽次數(shù)見表1。結(jié)果表明，與模型組比較，五味子提取 物（高、中、低劑量組）均能顯著減少模型豚鼠的咳嗽次數(shù)。
[0042] 表1實(shí)施例1制備的五味子提取物對(duì)CS豚鼠咳嗽次數(shù)的影響（) (η = 7)
[0043]

【權(quán)利要求】
1. 一種制備用于治療咳嗽及緩解氣道炎癥的五味子提取物的方法，其特征在于，包括 如下步驟： 1) 取五味子藥材，將其干燥后進(jìn)行粉碎，用乙醇溶液回流提取1?3次，每次提取1? 3小時(shí)，每次提取所用的乙醇溶液的體積（ml)為五味子藥材質(zhì)量（g)的4?8倍，合并提取 液，然后靜置過濾，得提取物A ; 2) 將步驟1)提取留下的藥渣用水煎煮1?3次，每次煎煮1?3小時(shí)，每次煎煮所用 的水的體積（ml)為五味子藥材質(zhì)量（g)的4?8倍，合并提取液，然后靜置過濾，得提取物 B ； 3) 合并步驟1)提取得到的提取物A和步驟2)提取得到的提取物B，然后進(jìn)行真空干 燥，制得所述五味子提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述五味子藥材為五味子Schisandra chinensis (Turcz. )Baill.或華中五味子 Schisandra sphenanthera Rehd. et ffils.中的 至少一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙醇溶液其為乙醇體積濃度在 50-100 %之間的乙醇水溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)中，將五味子藥材干燥后粉碎成 10?60目。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)和/或步驟2)在各自獲得的提取 液靜置過濾后還具有對(duì)過濾液進(jìn)行減壓濃縮的步驟。
6. -種由權(quán)利要求1?5任一項(xiàng)所述的方法制得的五味子提取物。
7. 權(quán)利要求1?5任一項(xiàng)所述的方法制得的五味子提取物在制備用于治療急性、亞急 性或慢性咳嗽的藥物或保健品中的應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述五味子提取物在制備用于鎮(zhèn)咳、緩解 咳嗽或緩解氣道炎癥的藥物或保健品中應(yīng)用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述五味子提取物制成藥學(xué)上允許的 劑型。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述劑型為片劑、硬膠囊、軟膠囊、散劑、 酊劑、口服液、糖漿、顆粒劑、丸劑或注射劑。
【文檔編號(hào)】A61P11/00GK104138450SQ201410387092
【公開日】2014年11月12日 申請(qǐng)日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】賴克方, 鐘山, 甘振勇, 劉曉東, 聶怡初, 鐘南山 申請(qǐng)人:廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院, 廣州呼吸疾病研究所, 呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室