寡核苷酸螯合物方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明描述了藥物組合物和用寡核苷酸螯合物治療病毒感染、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、阿爾茨海默病、朊病毒病和杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】寡核苷酸螯合物方法
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2012年5月18日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/648, 694的優(yōu)先權(quán)，所述 臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)柕娜績(jī)?nèi)容以引用的方式并入本文。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003] 本發(fā)明涉及牽涉施用或使用寡核苷酸（ON)螯合物的疾病治療方法。這些疾病可 以包括病毒感染、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、阿爾茨海默病（Alzheimer's disease)、 朊病毒病或杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥（Duchene' s muscular dystrophy)。

【背景技術(shù)】
[0004] ON螯合物是分子間通過(guò)二價(jià)或多價(jià)金屬陽(yáng)離子連接的兩個(gè)或兩個(gè)以上ON。ON螯 合物中和ON的可能造成這些化合物的施用相關(guān)副作用的固有螯合性質(zhì)。施用ON螯合物 是對(duì)受試者施用ON的新方法，其中減輕了與非螯合ON(它們是以本領(lǐng)域常用的鈉鹽形式 施用的0N)有關(guān)的施用相關(guān)副作用。這些副作用可能包括伴隨靜脈內(nèi)輸注的發(fā)抖、發(fā)熱 和寒戰(zhàn)或伴隨皮下施用的注射部位硬化、炎癥和疼痛。此外，通過(guò)將ON制備為螯合絡(luò)合 物，可以改善它們的藥動(dòng)學(xué)特性，與國(guó)際申請(qǐng)公布號(hào)WO 2012/0 2198 5和美國(guó)申請(qǐng)公布號(hào) 2012/0046348(所述公布號(hào)以全文引用方式并入本文）中描述的非螯合ON相比用相似的劑 量可提供更1?的治療性能。
[0005] 因此希望提供通過(guò)序列相關(guān)或序列無(wú)關(guān)的機(jī)制起作用的ON螯合物，它將對(duì)包括 病毒感染、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、阿爾茨海默病或朊病毒病在內(nèi)的許多疾病病況 有治療作用并且引起對(duì)ON來(lái)說(shuō)常見(jiàn)的施用相關(guān)副作用減少或消除。
[0006] 因此，本領(lǐng)域需要提供一種用于治療上述疾病病況的方法，這種方法包括對(duì)需要 治療的受試者施用包含ON螯合物的藥物組合物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 概述
[0008] 根據(jù)本說(shuō)明書(shū)，現(xiàn)在提供一種通過(guò)施用呈螯合物形式的寡核苷酸來(lái)治療可以通過(guò) 用寡核苷酸治療進(jìn)行影響的任何疾病病況的方法。
[0009] 根據(jù)本說(shuō)明書(shū)，現(xiàn)在提供配制為螯合物的寡核苷酸用于治療可以通過(guò)用所述寡核 苷酸治療進(jìn)行影響的任何疾病病況的用途。
[0010] 根據(jù)本說(shuō)明書(shū)，現(xiàn)在提供配制為螯合物的寡核苷酸在制造用于治療可以通過(guò)用所 述寡核苷酸治療進(jìn)行影響的任何疾病病況的藥劑中的用途。
[0011] 提供一種治療病毒感染的方法，所述方法包括對(duì)需要治療的受試者施用抗病毒ON 螯合物的步驟。
[0012] 提供抗病毒ON螯合物用于治療病毒感染的用途。
[0013] 提供抗病毒ON螯合物在制造用于治療病毒感染的藥劑中的用途。
[0014] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗病毒寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)選自SEQ ID NO: 1-6或10-18的寡核苷酸。
[0015] 提供一種治療高膽固醇血癥的方法，所述方法包括對(duì)需要治療的受試者施用抗膽 固醇ON螯合物的步驟。
[0016] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗膽固醇寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)選自SEQ ID N0:l、2、3、5、6、10、ll、12、15、16 或 17 的寡核苷酸。
[0017] 提供一種治療高甘油三酯血癥的方法，所述方法包括對(duì)需要治療的受試者施用抗 甘油三酯ON螯合物的步驟。
[0018] 在一個(gè)實(shí)施方案中，抗膽固醇寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)選自SEQ ID NO: 1、2、 3、5、6、10、11、12、15、16 或 17 的寡核苷酸。
[0019] 提供一種治療阿爾茨海默病的方法，所述方法包括對(duì)需要治療的受試者施用抗阿 爾茨海默ON螯合物的步驟。
[0020] 提供一種治療朊病毒病的方法，所述方法包括對(duì)需要治療的受試者施用抗朊病毒 ON螯合物的步驟。
[0021] 提供一種治療由mRNA成熟期間不正確剪接引起的疾病的方法，所述疾病包括杜 馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD)，所述方法包括施用設(shè)計(jì)成糾正DMD中的不正確剪接的ON螯合 物的步驟。
[0022] 提供抗病毒ON螯合物用于治療病毒感染的用途。
[0023] 提供抗病毒ON螯合物在制造用于治療病毒的藥劑中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述抗病毒寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)選自SEQ ID NO: 1-6或10-18的寡核苷酸。
[0024] 提供抗膽固醇ON螯合物用于治療高膽固醇血癥的用途。
[0025] 提供抗膽固醇ON螯合物在制造用于治療高膽固醇血癥的藥劑中的用途。
[0026] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗膽固醇寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)選自SEQ ID N0:l、2、3、5、6、10、ll、12、15、16 或 17 的寡核苷酸。
[0027] 提供抗甘油三酯ON螯合物用于治療高甘油三酯血癥的用途。
[0028] 提供抗甘油三酯ON螯合物在制造用于治療高甘油三酯血癥的藥劑中的用途。
[0029] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗甘油三酯寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)選自SEQ ID N0:l、2、3、5、6、10、ll、12、15、16 或 17 的寡核苷酸。
[0030] 提供抗阿爾茨海默ON螯合物用于治療阿爾茨海默病的用途。
[0031] 提供抗阿爾茨海默ON螯合物在制造用于治療阿爾茨海默病的藥劑中的用途。
[0032] 提供抗朊病毒ON螯合物用于治療朊病毒病的用途。
[0033] 提供抗朊病毒ON螯合物在制造用于治療朊病毒病的藥劑中的用途。
[0034] 提供設(shè)計(jì)成糾正DMD中的不正確剪接的ON螯合物用于治療由mRNA成熟期間的不 正確剪接引起的疾病的用途，所述疾病包括杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD)。
[0035] 提供設(shè)計(jì)成糾正DMD中的不正確剪接的ON螯合物在制造用于治療由mRNA成熟期 間的不正確剪接引起的疾病的藥劑中的用途，所述疾病包括杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD)。
[0036] 提供一種用于治療高膽固醇血癥的方法，所述方法包括施用包含SEQ ID N0:20的 寡核苷酸螯合物。
[0037] 提供包含SEQ ID NO:20的寡核苷酸螯合物用于治療高膽固醇血癥的用途。
[0038] 提供包含SEQ ID NO:20的寡核苷酸螯合物在制造用于治療高膽固醇血癥的藥劑 中的用途。
[0039] 提供一種用于治療杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥的方法，所述方法包括施用包含SEQ ID NO: 19的寡核苷酸螯合物。
[0040] 提供包含SEQ ID NO: 19的寡核苷酸螯合物用于治療杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥的用 途。
[0041] 提供包含SEQ ID NO: 19的寡核苷酸螯合物在制造用于治療杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良 癥的藥劑中的用途。
[0042] 提供一種用于治療丙型肝炎感染的方法，所述方法包括施用包含SEQID N0:7的寡 核苷酸螯合物。
[0043] 提供包含SEQ ID NO:7的寡核苷酸螯合物用于治療丙型肝炎感染的用途。
[0044] 提供包含SEQ ID N0:7的寡核苷酸螯合物在制造用于治療丙型肝炎感染的藥劑中 的用途。
[0045] 提供一種藥物制劑，其包含抗病毒寡核苷酸螯合物用于治療病毒感染。
[0046] 提供一種藥物制劑，其包含抗膽固醇寡核苷酸螯合物用于治療高膽固醇血癥。
[0047] 提供一種藥物制劑，其包含抗甘油三酯寡核苷酸螯合物用于治療高甘油三酯血 癥。
[0048] 提供一種藥物制劑，其包含抗阿爾茨海默寡核苷酸螯合物用于治療阿爾茨海默 病。
[0049] 提供一種藥物制劑，其包含抗朊病毒寡核苷酸螯合物用于治療朊病毒病。
[0050] 提供一種藥物制劑，其包含含有SEQ ID NO:20的螯合物用于治療高膽固醇血癥。
[0051] 提供一種藥物制劑，其包含含有SEQ ID NO: 19的螯合物用于治療杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng) 不良癥。
[0052] 提供一種藥物制劑，其包含含有SEQ ID NO:7的螯合物用于治療丙型肝炎感染。
[0053] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物是用二價(jià)金屬陽(yáng)離子制備的。
[0054] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物是用鈣制備的。
[0055] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物是用鎂制備的。
[0056] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物是用鐵（2+)、錳、銅和/或鋅制備的。
[0057] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含兩種或兩種以上不同二價(jià)金屬陽(yáng) 離子。
[0058] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含鈣和鎂。
[0059] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)雙鏈寡核苷酸。
[0060] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)具有至少一個(gè)硫代磷酸 酯鍵的寡核苷酸。
[0061] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)完全硫代磷酸酯化的寡 核苷酸。
[0062] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)具有一個(gè)2'修飾的核糖 的寡核苷酸。
[0063] 在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)每個(gè)核糖都被2' 0-甲 基化的寡核苷酸。
[0064] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)具有至少一個(gè)5'甲基 胞嘧啶的寡核苷酸。
[0065] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)其中每個(gè)胞嘧啶都是5' 甲基胞嘧啶的寡核苷酸。
[0066] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物含有至少一個(gè)完全硫代磷酸酯化的寡 核苷酸并且所有核糖具有2' 0甲基修飾并且所有胞嘧啶以5'甲基胞嘧啶形式存在。
[0067] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè)選自SEQID NO: 1-6或 10-18的寡核苷酸。
[0068] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，將所述寡核苷酸螯合物配制成用于皮下施用。
[0069] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，將所述寡核苷酸螯合物配制成用于靜脈內(nèi)輸注。
[0070] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，將所述寡核苷酸螯合物配制成用于選自由以下方式組成的 組的施用：眼內(nèi)、口服、腸道、吸入、肌內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射、鞘內(nèi)輸注、氣管內(nèi)、靜 脈內(nèi)注射和局部。
[0071] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，將所述寡核苷酸螯合物配制成用于通過(guò)氣霧劑進(jìn)行施用。
[0072] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，引起感染的病毒是乙型肝炎病毒。
[0073] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，引起感染的病毒是嗜肝DNA病毒。
[0074] 在又一個(gè)實(shí)施方案中，引起感染的病毒是肝炎δ病毒。
[0075] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，引起感染的病毒是流感病毒。
[0076] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，引起感染的病毒選自由以下病毒組成的組：逆轉(zhuǎn)錄病毒科 的成員、HIV-1、HIV-2、皰疹病毒科的成員、HSV-1、HSV-2、巨細(xì)胞病毒、痘病毒科的成員、副 粘病毒科的成員、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、布尼亞病毒科的成員、漢坦病毒、絲狀病毒 科的成員、埃博拉病毒（Ebola virus)、馬爾堡病毒（Marburg virus)、黃病毒科的成員、黃 熱病毒、登革熱病毒、西尼羅病毒、丙型肝炎病毒、正粘病毒科的成員、披膜病毒科的成員、 冠狀病毒科的成員、彈狀病毒科的成員和砂粒病毒科的成員。
[0077] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含SEQ ID NO: 2 (REP2055)。
[0078] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含SEQ ID NO: 18 (REP2139)。
[0079] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸螯合物包含SEQ ID NO: 11 (REP2148)。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0080] 現(xiàn)在參考附圖：
[0081] 圖1說(shuō)明ON的共同理化特征。A)通過(guò)高效液相色譜法共同分離REP2006和具有 定義序列的21聚體硫代磷酸酯化ON。B)通過(guò)質(zhì)譜法鑒別所述21聚體ON中的物質(zhì)。C)通 過(guò)質(zhì)譜法鑒別所述REP 20060N中的物質(zhì)。
[0082] 圖2A說(shuō)明不依賴于ON序列的ON的一般化學(xué)特征。與其序列無(wú)關(guān)，任何ON作為 同時(shí)具有疏水和親水活性的聚合物存在。硫代磷酸酯化（在這個(gè)圖中的化學(xué)結(jié)構(gòu)中描繪） 用來(lái)提高ON聚合物的疏水性但是不影響親水性。圖2B示意性表示二價(jià)和三價(jià)金屬陽(yáng)離子 的ON螯合性質(zhì)。金屬陽(yáng)離子（由實(shí)心圈表示）通過(guò)磷酸二酯鍵中的兩個(gè)或三個(gè)非橋接氧 或硫原子之間的金屬離子橋（由省略號(hào)表示）分子間連接ON聚合物的親水性表面。
[0083] 圖3說(shuō)明在不同ON和二價(jià)金屬陽(yáng)離子濃度下存在二價(jià)或多價(jià)金屬陽(yáng)離子時(shí)的ON 的溶液特性模型。A)低二價(jià)/三價(jià)金屬陽(yáng)離子，低ON濃度產(chǎn)生二聚體或低階ON螯合物。 B)提高二價(jià)/三價(jià)金屬陽(yáng)離子濃度在溶液中形成更完全的ON螯合物。C)在二價(jià)或三價(jià)金 屬存在下進(jìn)一步提高ON濃度能夠隨著金屬濃度提高產(chǎn)生較高階ON螯合物。由于親水性表 面仍然暴露于含水環(huán)境而維持溶解度，因此（A)至（C)中的所有螯合物均可溶于水溶液。D) 在足夠的ON和金屬濃度下，所有親水性表面現(xiàn)將限制在ON螯合物內(nèi)，僅使疏水表面暴露于 含水環(huán)境。這導(dǎo)致ON螯合物的沉淀。
[0084] 圖4說(shuō)明熒光-ON螯合物的溶液特性對(duì)熒光偏振的影響。隨著金屬濃度提高，ON 螯合物形成的大?。ê唾|(zhì)量）也增加（參見(jiàn)圖3)并且因此在溶液中翻滾更緩慢。絡(luò)合物 在溶液中的這種較慢的翻滾導(dǎo)致熒光偏振升高和mP值升高。

【具體實(shí)施方式】
[0085] 如國(guó)際申請(qǐng)公布號(hào)WO 2012/021985和美國(guó)申請(qǐng)公布號(hào)2012/0046348所述（所述 公布號(hào)的內(nèi)容以全文引用方式并入本文），ON在含有任何二價(jià)簡(jiǎn)單金屬陽(yáng)離子（例如但不 限于，Ca 2+、Mg2+和Fe2+)的水溶液中都不以鹽的形式存在，而是以O(shè)N的螯合絡(luò)合物形式存 在。這些絡(luò)合物由ON二聚體或較高階分子組織組成，其中ON是通過(guò)二價(jià)金屬離子橋連接 于它們的磷酸二酯骨架（參見(jiàn)圖2B)。在特定的ON和金屬陽(yáng)離子濃度下，這些螯合絡(luò)合物 是穩(wěn)定并且可溶于水溶液中，并且使ON螯合物中的任何二價(jià)陽(yáng)離子有效地隔離溶液相互 作用。這種螯合物形成也可能在帶有3+電荷或更高電荷的簡(jiǎn)單金屬陽(yáng)離子情況下發(fā)生（如 圖2B中描繪的）。因此ON起多價(jià)金屬陽(yáng)離子螯合劑（chelaters)的作用并且不與多價(jià)金 屬陽(yáng)離子形成鹽。
[0086] ON螯合物可以含有各種多價(jià)金屬陽(yáng)離子，包括鈣、鎂、鈷、鐵、錳、鋇、鎳、銅、鋅、鎘、 汞和鉛。進(jìn)一步顯示這些多價(jià)金屬陽(yáng)離子的螯合導(dǎo)致形成由兩個(gè)或兩個(gè)以上通過(guò)金屬陽(yáng)離 子連接的ON構(gòu)成的ON螯合物并且在長(zhǎng)度大于6個(gè)核苷酸的ON的情況下和在具有磷酸二 酯或硫代磷酸酯鍵的存在下發(fā)生。ON可以任選每個(gè)鍵都被硫代磷酸酯化。螯合也在于核 糖上含有2'修飾（如2' 0甲基）或含有諸如5'甲基胞嘧啶或4-硫代尿嘧啶等修飾堿基 的ON的情況下發(fā)生。這些2'修飾可以存在于一個(gè)或多個(gè)或所有核糖上并且修飾的堿基可 以存在于一個(gè)或多個(gè)堿基上或普遍存在于每個(gè)堿基上（即所有胞嘧啶都以5'甲基胞嘧啶 的形式存在）。此外，ON螯合物可以包含含有多個(gè)修飾如每個(gè)鍵都被硫代磷酸酯化、每個(gè)核 糖都被2'修飾和每個(gè)堿基都被修飾的0N。下文進(jìn)一步定義與ON螯合物形成相容的ON修 飾。此外，金屬陽(yáng)離子的螯合與存在的核苷酸序列無(wú)關(guān)，而是依賴于所有ON共同的理化特 征（參見(jiàn)圖2A)。
[0087] 雖然ON螯合物的形成可以用任何二價(jià)金屬陽(yáng)離子實(shí)現(xiàn)，但是意圖用作藥物的ON 螯合物應(yīng)該優(yōu)選僅含有鈣和或鎂，但是也可以含有痕量的鐵、錳、銅或鋅，并且不應(yīng)該包括 鈷、鋇、鎳、鎘、汞、鉛或任何這里未列出的其他二價(jià)金屬。
[0088] 重要的是，ON螯合物的形成不發(fā)生在諸如Na+、K+或NH4+等單價(jià)陽(yáng)離子上并且因此 不可能發(fā)生在任何單價(jià)陽(yáng)離子上。因此，術(shù)語(yǔ)"0N鹽"更準(zhǔn)確地僅限于ON與單價(jià)陽(yáng)離子或 與不與ON形成螯合物的陽(yáng)離子的鹽。
[0089] 至少一部分已知的ON與血液中蛋白質(zhì)組分的瞬時(shí)相互作用可能是由ON與諸如白 蛋白等金屬結(jié)合蛋白和鈣依賴性凝血級(jí)聯(lián)的蛋白質(zhì)的相互作用介導(dǎo)的。因此以螯合絡(luò)合物 形式施用ON(這顯著降低或消除它們與二價(jià)金屬結(jié)合蛋白相互作用的傾向）可以減少這些 蛋白質(zhì)在血液中的相互作用并且使伴隨ON施用的副作用（如瞬時(shí)抗凝血）較少并且與非 螯合ON相比還可能提高到達(dá)靶器官（例如肝臟、肺或脾臟）的ON劑量分?jǐn)?shù)。在本公開(kāi)之 前，這種蛋白質(zhì)相互作用減少對(duì)治療活性的影響是未知的并且從未描述過(guò)。
[0090] 熒光偏振是用于研究分子間相互作用的常見(jiàn)方法。在這種技術(shù)中，用熒光標(biāo)記物 (例如FITC)標(biāo)記待測(cè)物（即任何0N)。在溶液中，待測(cè)物分子由于布朗運(yùn)動(dòng)而在溶液中自 由翻滾，這使得用恰當(dāng)波長(zhǎng)的光激發(fā)待測(cè)物時(shí)偏振熒光發(fā)射很弱。使用足夠分子量的配體 (至少和待測(cè)物一樣大?。?，待測(cè)物和配體之間的相互作用帶來(lái)對(duì)所述絡(luò)合物在溶液中翻 滾的實(shí)質(zhì)性抑制。由于抑制了溶液中的這種翻滾，因此在激發(fā)時(shí)熒光發(fā)射被顯著偏振。因此 使用這種技術(shù)，可以在溶液中測(cè)量相互作用而對(duì)任何一個(gè)結(jié)合配偶體都沒(méi)有物理限制。熒 光偏振報(bào)告為無(wú)量綱的mP，它與反應(yīng)中的結(jié)合型待測(cè)物分子的分?jǐn)?shù)成正比。例如，如果非常 小的比例的待測(cè)物分子被特定配體結(jié)合，那么熒光偏振將會(huì)極少并且因此mP值也小。另一 個(gè)極端，如果大部分待測(cè)物分子被特定配體結(jié)合（或用較高濃度的配體），將有相當(dāng)大的熒 光偏振并且因此mP值也大。用這種方式，可以通過(guò)在固定量的熒光標(biāo)記待測(cè)物的存在下改 變配體濃度來(lái)產(chǎn)生特定待測(cè)物-配體相互作用的結(jié)合等勢(shì)線。
[0091] 本文中使用不同的熒光標(biāo)記ON來(lái)研究它們?cè)诙鄡r(jià)金屬陽(yáng)離子存在下的絡(luò)合物形 成。雖然通過(guò)熒光偏振監(jiān)測(cè)絡(luò)合物形成需要這些ON被熒光標(biāo)記，但是這種標(biāo)記固定在ON 的3'端上，以便不干擾所討論的ON的含氮堿基或磷酸二酯骨架。此外，為了進(jìn)一步排除溶 液中的正常ON行為的任何擾動(dòng)，熒光標(biāo)記物通過(guò)剛性的3碳接頭與ON保持遠(yuǎn)離。因此本 文中使用熒光偏振用熒光標(biāo)記ON觀察到的任何ON絡(luò)合物形成都是未標(biāo)記ON(無(wú)論是否形 成絡(luò)合物）溶液行為的準(zhǔn)確表現(xiàn)。
[0092] 本領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)清楚地用ON鈉鹽教導(dǎo)了對(duì)需要治療的受試者施用ON的做法。這 通過(guò)在臨床試驗(yàn)中施用眾多鈉鹽形式的ON示范過(guò)，它們包括Fomivirisen(ISIS 2922)、 Mipomersen (ISIS 301012)、Trecovirsen (GEM91)、Custirsen (0GX-011/ISIS 112989)、 Genasense (G3139)、Aprinocarsem (ISIS 3531/LY 900003)、PRO-51 (GSK 2402968)和 ALN-RSV01 (Geary 等，2002, Clin. Pharmacokinetics, 41: 255-260 ;Yu 等，2009, Clin. Pharmacokinetics, 48:39-50 ;Sereni 等，1999, J. Clin. Pharmacol.，39:47-54 ;Chi 等， 2005, J. Nat. Cane. Inst.，97:1287-1296 !Marshall 等，2004, Ann. Oncol.，15:1274-1283 ; Grossman 等，2004，Neur〇-0ncol, 6:32-40 ;Goemans 等，2011NEJM 364:1513-1522)。目前 沒(méi)有公開(kāi)數(shù)據(jù)教導(dǎo)使用鈣或鎂或任何其他二價(jià)金屬的任何腸胃外施用途徑的寡核苷酸制 劑。
[0093] 與鈉鹽ON的施用有關(guān)的許多副作用都可以歸因于它們的螯合效應(yīng)。ON的抗凝血 至少部分是由血清鈣被ON螯合從而削弱鈣依賴性凝血級(jí)聯(lián)引起的。血清鈣的螯合以及它 能夠?qū)е碌臐撛谘宓脱}還與通過(guò)IV施用來(lái)施用ON觀察到的副作用一致，所述副作用 包括發(fā)熱、發(fā)抖、虛弱和動(dòng)脈血壓下降（后者伴隨快速I(mǎi)V輸注或注射）。伴隨皮下注射ON 觀察到的注射部位反應(yīng)（硬化、炎癥、脆弱和疼痛）至少部分歸因于在注射部位的ON對(duì)鈣 和可能的其他二價(jià)陽(yáng)離子（如鎂）或多價(jià)陽(yáng)離子的局部螯合。已顯示施用螯合絡(luò)合物形式 的ON可減輕許多這些副作用（參見(jiàn)WO 2012/021985)。
[0094] 術(shù)語(yǔ)寡核苷酸（ON)是指核糖核酸（RNA)和/或脫氧核糖核酸（DNA)的寡聚物或 聚合物。這個(gè)術(shù)語(yǔ)包括由修飾的核堿基（包括5'甲基胞嘧啶和4'硫代尿嘧啶）、糖和共價(jià) 核苷間（骨架）鍵聯(lián)構(gòu)成的ON以及具有功能類(lèi)似的非天然存在的部分的0N。由于所希望 的特性，例如降低的免疫反應(yīng)性、增強(qiáng)的細(xì)胞攝取、增強(qiáng)的對(duì)核酸靶標(biāo)的親和力以及增加的 在核酸酶的存在下的穩(wěn)定性，這類(lèi)修飾或取代的ON可能比天然形式優(yōu)選。ON也可以是雙鏈 的。
[0095] ON可以包括各種修飾，例如，穩(wěn)定化修飾，并且因此可以在磷酸二酯鍵和/或在糖 上和/或在堿基上包括至少一個(gè)修飾。例如，ON可以包括（但不限于）一個(gè)或多個(gè)修飾， 或者被完全修飾以便含有具有所述修飾的所有鍵或糖或堿基。修飾的鍵可以包括硫代磷酸 酯鍵、二硫代磷酸酯鍵和/或甲基膦酸酯鍵。雖然修飾的鍵是有用的，但是ON可以包括磷 酸二酯鍵。其它有用的修飾包括（但不限于）在糖的2'位的修飾，包括2' -0-烷基修飾， 如2' -0-甲基修飾、2' 0-甲氧基乙基（2' M0E)、2' -氨基修飾、2' -齒代修飾，如2' -氟； 和/或非環(huán)核苷酸類(lèi)似物。其他2'修飾也是本領(lǐng)域已知的并且可以使用，如鎖核酸。具體 來(lái)講，ON到處都具有修飾的鍵或者每個(gè)鍵都被修飾，例如，硫代磷酸酯化；具有3' -和/或 5'_帽子；包括末端3'-5'鍵；所述ON是或者包括由通過(guò)接頭連接的兩個(gè)或兩個(gè)以上ON組 成的多聯(lián)體。堿基修飾可以包括胞嘧啶堿基的5'甲基化（5'甲基胞嘧啶或在核苷酸的環(huán)境 中，5'甲基胞苷）和/或尿嘧啶堿基的4'硫化（4'硫脲嘧啶或在核苷酸的環(huán)境中，4'硫代 尿苷）。當(dāng)合成條件在化學(xué)上相容時(shí)，如具有帶有硫代磷酸酯鍵、2'核糖修飾（如2' 0-甲 基化）和修飾堿基（如5'甲基胞嘧啶），可以合并不同化學(xué)相容的修飾的鍵。ON可以用 所有這些不同修飾進(jìn)一步完全修飾（例如每個(gè)鍵都被硫代磷酸酯化、每個(gè)核糖都被2'修飾 以及每個(gè)堿基都被修飾）。
[0096] 在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)"抗病毒0N"是指借助于其特定的生化活性（無(wú)論是序列相關(guān) 或序列無(wú)關(guān)的）能夠直接或間接抑制病毒復(fù)制的一些方面或直接或間接增強(qiáng)宿主通過(guò)免 疫或其他機(jī)制清除感染的能力的任何0N。
[0097] 在本公開(kāi)中，術(shù)語(yǔ)"抗病毒ON螯合物"是指在溶液中分子間通過(guò)多價(jià)金屬陽(yáng)離子 連接的兩個(gè)或兩個(gè)以上抗病毒ON的絡(luò)合物。所述抗病毒ON螯合物可以包含兩個(gè)或兩個(gè)以 上具有不同序列的0N。
[0098] 在本公開(kāi)中，術(shù)語(yǔ)"抗膽固醇ON"是指借助于其特定的生化活性（無(wú)論是序列相關(guān) 或序列無(wú)關(guān)的）能夠直接或間接降低受試者的異常升高的總血清膽固醇和或低/極低密度 脂蛋白血清水平的任何0N。
[0099] 在本公開(kāi)中，術(shù)語(yǔ)"抗膽固醇ON螯合物"是指分子間通過(guò)多價(jià)金屬陽(yáng)離子連接的 兩個(gè)或兩個(gè)以上抗膽固醇ON的絡(luò)合物。所述抗膽固醇ON螯合物可以包含兩個(gè)或兩個(gè)以上 具有不同序列的0N。
[0100] 在本公開(kāi)中，術(shù)語(yǔ)"抗甘油三酯ON"是指借助于其特定的生化活性（無(wú)論是序列相 關(guān)或序列無(wú)關(guān)的）能夠直接或間接降低受試者的異常升高的血清甘油三酯水平的任何0N。
[0101] 在本公開(kāi)中，術(shù)語(yǔ)"抗甘油三酯ON螯合物"是指分子間通過(guò)多價(jià)金屬陽(yáng)離子連接 的兩個(gè)或兩個(gè)以上抗甘油三酯ON的絡(luò)合物。所述抗甘油三酯ON螯合物可以包含兩個(gè)或兩 個(gè)以上具有不同序列的0N。
[0102] 在本公開(kāi)中，術(shù)語(yǔ)"抗阿爾茨海默ON"是指借助于其特定的生化活性（無(wú)論是序列 相關(guān)或序列無(wú)關(guān)的）具有以下能力的任何ON :
[0103] A.直接或間接終止、延緩或逆轉(zhuǎn)淀粉狀蛋白_β在腦內(nèi)的積累或表達(dá)；
[0104] Β.直接或間接終止、延緩或逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默斑在腦內(nèi)的形成或生長(zhǎng)；和/或 [0105] C.直接或間接終止、延緩或逆轉(zhuǎn)與阿爾茨海默病發(fā)展有關(guān)的神經(jīng)功能障礙。
[0106] 在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)"抗阿爾茨海默ON螯合物"是指分子間通過(guò)多價(jià)金屬陽(yáng)離子 連接的兩個(gè)或兩個(gè)以上抗阿爾茨海默ON的絡(luò)合物。
[0107] 在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)"抗朊病毒0Ν"是指借助于其特定的生化活性（無(wú)論是序列相 關(guān)或序列無(wú)關(guān)的）具有以下能力的任何ON :
[0108] A.直接或間接終止、延緩或逆轉(zhuǎn)朊蛋白在外周或腦內(nèi)的形成；和/或 [0109] B.直接或間接終止、延緩或逆轉(zhuǎn)與朊病毒病有關(guān)的神經(jīng)功能障礙。
[0110] 在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)"抗朊病毒ON螯合物"是指分子間通過(guò)多價(jià)金屬陽(yáng)離子連接 的兩個(gè)或兩個(gè)以上抗朊病毒ON的絡(luò)合物。所述抗朊病毒ON螯合物可以包含兩個(gè)或兩個(gè)以 上具有不同序列的0N。
[0111] 在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)"簡(jiǎn)并ON"意指在每個(gè)位置上都具有擺動(dòng)堿基（N)的單鏈0N，如 NNNNNNNNNN。每個(gè)堿基都合成為擺動(dòng)堿基，以使這個(gè)ON實(shí)際上作為一群具有相同長(zhǎng)度和理 化性質(zhì)的不同隨機(jī)生成的序列存在。例如，對(duì)于長(zhǎng)度為40個(gè)堿基的簡(jiǎn)并0N，在所述群中的 任何特定序列理論上僅表示總分?jǐn)?shù)的1/4 4°或8. 3X ΚΓ25。假定1摩爾=6. 022X1023個(gè)分 子，1摩爾40聚體ON的質(zhì)量實(shí)際上大約為12-14kg (取決于存在的序列和修飾），任何具有 有效存在的特定序列的ON在任何制劑中不出現(xiàn)多于一次。因此在這種制劑中觀察到的任 何螯合物形成或生物活性必定是由于ON的非序列相關(guān)（或與所述序列無(wú)關(guān)）的理化性質(zhì)， 因?yàn)椴荒芷谕哂卸x序列的任何特定ON(在所述制劑中是獨(dú)特的）貢獻(xiàn)來(lái)源于其特定核 苷酸序列的任何活性。
[0112] 作為這個(gè)概念的再一個(gè)示例，實(shí)施例I通過(guò)高壓液相色譜法和質(zhì)譜法比較REP 2006(具有簡(jiǎn)并的完全硫代磷酸酯化的序列的40聚體0N)與具有定義序列（也完全被硫 代磷酸酯化）的21聚體ON的表征，并明確顯示具有相似大小和化學(xué)修飾（即硫代磷酸酯 化）的任何ON將具有不受存在的核苷酸序列影響的高度相似的（如果不相同）理化特征 (參見(jiàn)圖1A-C)。
[0113] 在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)"核酸聚合物"或NAP意圖用來(lái)鑒別不包含序列特異性功能的任 何單鏈ON。NAP的生化活性不依賴于ON的Toll樣受體識(shí)別、與靶核酸的雜交或需要來(lái)源 于存在的核苷酸的特定順序的特定二級(jí)三級(jí)ON結(jié)構(gòu)的適體相互作用。NAP可以包括如上所 述的堿基和或鍵和或糖修飾。
[0114] ON可以通過(guò)序列相關(guān)或序列無(wú)關(guān)的眾多機(jī)制來(lái)發(fā)揮它們的作用。序列相關(guān)的機(jī)制 是其活性需要特定的核酸序列并且其中所述活性因存在的核苷酸序列中的一個(gè)或多個(gè)改 變而降低的那些機(jī)制。這個(gè)特定的序列可能涵蓋ON的整個(gè)長(zhǎng)度或只有它的一部分（序列 基序）。序列相關(guān)的ON的實(shí)例包括：
[0115] 1.反義ON(單鏈或雙鏈（例如小干擾RNA (siRNA)或小發(fā)夾RNA (shRNA))與疾病 病況（即病毒感染或膽固醇的調(diào)節(jié)）中涉及的信使RNA(mRNA)(即病毒mRNA或宿主mRNA) 的特定部分互補(bǔ)并且當(dāng)引入細(xì)胞時(shí)，它們通過(guò)RNA酶H或RNA誘導(dǎo)的沉默絡(luò)合物（RISC)引 導(dǎo)這些目標(biāo)mRNA降解。
[0116] 2.空間阻斷（Stearic blocking) ON是與mRNA的特定部分互補(bǔ)但被工程改造成不 活化RNA酶H的單鏈反義0N。這些ON與它們的靶mRNA的雜交產(chǎn)生對(duì)通常作用于所述mRNA 的蛋白質(zhì)提供位阻（stearic hindrance)的雙鏈結(jié)構(gòu)。這些ON可以用于阻斷特定mRNA的 翻譯或者用于干擾特定mRNA的轉(zhuǎn)錄后剪接和成熟。這些ON可被工程改造成通過(guò)遍及其中 或在存在于ON中的每個(gè)核糖上的2'核糖修飾（如2' 0甲基化）來(lái)阻斷RNA酶H的活化 (因?yàn)镽NA酶H的活化與這些ON的作用機(jī)制不是一個(gè)整體）。
[0117] 3.適體是采取能夠進(jìn)行特異性蛋白質(zhì)相互作用（即與病毒蛋白質(zhì)或宿主蛋白質(zhì)） 的特定三維構(gòu)象并且不容易與宿主DNA或RNA相互作用的0N。適體也可以包括鏡像異構(gòu) 體，它使用L-核苷酸以賦予所述ON對(duì)核酸酶降解的抗性。
[0118] 4.免疫刺激性O(shè)N使用特定的6聚體核酸基序（XXCGXX)來(lái)刺激哺乳動(dòng)物中的免疫 應(yīng)答。最佳的基序隨物種的改變而改變，但是嚴(yán)格依賴于與XXCGXX基序一致的特定序列。
[0119] 5.微型RNA(miRNA)結(jié)合并阻斷疾病病況（即病毒復(fù)制或膽固醇調(diào)節(jié)）中涉及的 天然存在miRNA的功能。
[0120] 反義ON可以應(yīng)用于各種疾病病況，如通過(guò)催化病毒mRNA的降解而靶向病毒活性 (例如 ALN-RSV01 ;Zamora 等，2011，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 183:531-538)或通過(guò)催 化 ApoBlOOmRNA 的降解而祀向 LDL 和 VLDL 的產(chǎn)生（例如 mipomersen [Kynamro?] ;Raal 等， 2010, Lancet 375:998-1006)。反義ON也可以用于糾正基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的錯(cuò)誤剪接，基因轉(zhuǎn) 錄產(chǎn)物的錯(cuò)誤剪接可以產(chǎn)生異常的蛋白質(zhì)，如糾正發(fā)生在杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥中的肌萎 縮蛋白基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的錯(cuò)誤剪接（例如PR0-051，Goemans等，2011，NEJM 364:1513-1522)。
[0121] miRNA可以應(yīng)用于各種疾病病況，如與細(xì)胞內(nèi)的天然存在miR-122雜交并催化 其降解，所述miR-122在LDL和VLDL產(chǎn)生的調(diào)節(jié)以及丙型肝炎的產(chǎn)生中均涉及到（例如 miravirsen :Janssen等2013年3月27日NEJM，在印刷之前的電子出版）。
[0122] 唯一報(bào)告的序列無(wú)關(guān)的ON的實(shí)例是硫代磷酸酯化的NAP，它以大?。ㄩL(zhǎng)度）相關(guān) 的方式借助于兩親聚合物的理化性質(zhì)選擇性地與兩親蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相互作用（參見(jiàn)例如美 國(guó)專(zhuān)利號(hào)8, 008, 269)。
[0123] 任何0N，無(wú)論它在生理環(huán)境中如何發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，都預(yù)期會(huì)在所述寡核苷酸 進(jìn)入血液循環(huán)中時(shí)形成二價(jià)陽(yáng)離子介導(dǎo)的相互作用，在血液循環(huán)中包含一些游離的二價(jià)或 三價(jià)陽(yáng)離子，但是其中大部分血清二價(jià)金屬是與蛋白質(zhì)結(jié)合的（例如鈣與諸如白蛋白、凝 血酶和纖維蛋白原等鈣結(jié)合蛋白結(jié)合）。因此，在體內(nèi)環(huán)境中大部分二價(jià)金屬介導(dǎo)的寡聚 物相互作用很可能是與蛋白質(zhì)發(fā)生的，而不是與另一個(gè)寡核苷酸（在螯合物中）。因?yàn)橐?經(jīng)證明眾多ON在按照其設(shè)計(jì)（無(wú)論作為單鏈反義、siRNA、shRNA抑或miRNA)在體內(nèi)施用 時(shí)具有可預(yù)測(cè)的功能，所以這些鈣介導(dǎo)的蛋白質(zhì)相互作用雖然具有ON的耐受性方面的影 響（如國(guó)際申請(qǐng)公布號(hào)W02012/021985和美國(guó)申請(qǐng)公布號(hào)2012/0046348中所述），但是似 乎是可逆的，以便不妨礙ON的器官積累、ON的胞內(nèi)運(yùn)輸和這些ON與其體內(nèi)核酸靶標(biāo)的相 互作用。能夠合理地預(yù)測(cè)這些相互作用的可逆性是與這些二價(jià)金屬介導(dǎo)的寡聚物-蛋白質(zhì) 相互作用有關(guān)。因?yàn)槭┯霉押塑账狎衔锟赡軙?huì)干擾這些蛋白質(zhì)相互作用（如美國(guó)申請(qǐng)公 布號(hào)2012/0046348中所述），所以本領(lǐng)域技術(shù)人員將合理地預(yù)測(cè)，施用ON螯合物會(huì)改變ON 的藥動(dòng)學(xué)特性（和器官積累），特別是已知在腎臟、肝臟、肺和脾臟中積累并且在本領(lǐng)域中 公認(rèn)與ON-蛋白質(zhì)相互作用有關(guān)的硫代磷酸酯化ON(PS-ON)。
[0124] 此外，如美國(guó)申請(qǐng)公布號(hào)2012/0046348中所述的ON螯合物的制備涉及在不存在 任何蛋白質(zhì)以及存在比通常存在于血液循環(huán)中的濃度高的濃度的二價(jià)金屬陽(yáng)離子的情況 下的ON相互作用，并且根據(jù)如美國(guó)申請(qǐng)公布號(hào)2012/0046348中所描述教導(dǎo)的技術(shù)可以合 理地預(yù)測(cè)，這些ON螯合物會(huì)喪失其通常與血液中的蛋白質(zhì)相互作用的能力（所有ON必須 通過(guò)血液循環(huán)轉(zhuǎn)移，無(wú)論其在體內(nèi)的最終命運(yùn)如何）。因此，雖然施用ON螯合物會(huì)防止或 減輕ON在體內(nèi)的螯合特性并且因此減輕源于寡聚物螯合效應(yīng)的副作用，但是在本發(fā)明提 供能夠?qū)崿F(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容之前用于制備ON螯合物制劑（它們是在體外和非生理環(huán)境中形成 的）的ON在以螯合物形式施用（與以鈉鹽形式對(duì)受試者施用時(shí)的ON活性相比）是否會(huì)保 留其特異性器官積累和功能是不可預(yù)測(cè)或不明顯的。因?yàn)镺N螯合物不是在體內(nèi)形成的，所 以可能不能解離和或轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)和或接納正確的蛋白質(zhì)和或在體內(nèi)發(fā)生其他生化相互 作用以發(fā)揮其功能（例如與互補(bǔ)DNA或RNA鏈退火或與蛋白質(zhì)中的兩親螺旋相互作用或與 特定的蛋白質(zhì)形成序列特異性適體相互作用）。此外，與以簡(jiǎn)單ON鹽形式施用時(shí)的相同ON 相比，施用預(yù)先形成的ON螯合物可能會(huì)導(dǎo)致宿主受試者體內(nèi)的需要部位中的積累減少。因 此，在本文中的公開(kāi)內(nèi)容之前，并不清楚當(dāng)引入生理環(huán)境中時(shí)或當(dāng)對(duì)受試者施用時(shí)任何特 定的ON螯合物會(huì)保留其非螯合ON鹽前體（progenitor)的生化功能。
[0125] 此外，因?yàn)樵谌芤褐信c二價(jià)金屬形成螯合物的螯合性質(zhì)和能力是任何ON所固有 的，所以當(dāng)以螯合物形式施用時(shí)任何特定的ON保留生物活性的驗(yàn)證將提供明確的證據(jù)和 教導(dǎo)，即當(dāng)以螯合物形式施用時(shí)任何ON的生物活性將被保留，而無(wú)論其特定的作用方式或 靶標(biāo)疾病如何。
[0126] 若干基于抗病毒ON的藥物目前正在開(kāi)發(fā)用于治療病毒感染，包括用于治療HBV 的 NAP REP 9AC(REP 2055 或 SEQ ID N0:2, REP 9AC'（REP2139 或 SEQ ID N0:18)和 REP 9AC-m(REP 2148或SEQ ID勵(lì)：11)，用于治療!1(^的1^四￥化8611和用于治療呼吸道合胞病 毒（RSV)的ALN-RSV01。這些ON各有不同的作用機(jī)制：基于核酸的聚合物阻斷HBV病毒進(jìn) 入并且還阻止HBV表面抗原蛋白（HBsAg)釋放進(jìn)入血液（一種抑制免疫功能的蛋白質(zhì)）， miravirsen ( 一種miRNA)阻斷微型RNA mir-122的作用，已知mir-122在HCV復(fù)制中發(fā)揮 作用，以及ALN-RSV01 (-種siRNA)阻斷RSV衣殼蛋白的合成，從而防止RSV病毒粒子產(chǎn) 生。所有這些ON藥物可在受試者中非常有效地引起其預(yù)期作用：REP 9AC/REP 9AC'對(duì)于從 血液中清除HBsAg非常有效，miravirsen對(duì)于抑制mir-122功能非常有效，而ALN-RSV-Ol 對(duì)于阻斷衣殼蛋白質(zhì)生產(chǎn)非常有效。然而，在腸胃外施用這些基于ON的化合物的任何情況 下，當(dāng)通過(guò)靜脈內(nèi)輸注施用時(shí)，它們與諸如發(fā)熱、寒戰(zhàn)、發(fā)抖等施用相關(guān)的副作用有關(guān)，或者 當(dāng)通過(guò)皮下施用進(jìn)行施用時(shí)與注射部位的疼痛、炎癥或硬化有關(guān)。
[0127] 已經(jīng)證明若干ON在治療人患者的高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥中有效。它們 是mipomersen (Kynamro?)，一種祀向Apo B100合成的第二代反義寡核苷酸；PCS-GalNAc， 一種靶向PCSK9和NAP的糖綴合siRNA (參見(jiàn)實(shí)施例V)。
[0128] 還在動(dòng)物中在體外和體內(nèi)證明了 NAP能夠阻止朊病毒病的發(fā)展（Kocisko等， 2006,Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50:1034-1044)。
[0129] 使用寡核苷酸來(lái)糾正疾病病況中的異常RNA剪接也是各種疾病病況中公認(rèn)的治 療干預(yù)（Du 和 Gatti, 2009, Curr. Op. Mol. Ther.，11:116-123)。在杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良 癥的情況下，寡核苷酸PR0-051被設(shè)計(jì)成在成熟期間結(jié)合肌萎縮蛋白R(shí)NA并且誘導(dǎo)跳過(guò) 成熟mRNA中的外顯子51，從而恢復(fù)患病肌纖維中的正常肌萎縮蛋白產(chǎn)生（Goemans等， 2011，NEJM 364:1513-1522)。然而，傳統(tǒng)的PR0-051施用伴隨有注射部位反應(yīng)，這至少部分 是由于美國(guó)申請(qǐng)公布號(hào)2012/0046348中所述的ON的螯合介導(dǎo)的性質(zhì)。
[0130] 為了使其施用相關(guān)的副作用最小化，希望任何這些基于ON的藥物被制備為ON螯 合物，前提是它們能夠保留其生化功能。本公開(kāi)證明ON可以被制備成螯合物并且仍然保留 其生化功能。制劑中的ON螯合物可以來(lái)源于具有抗病毒活性的任何0N，其實(shí)例在表1中提 供。
[0131] M 1
[0132] 可以制備成螯合物的ON的實(shí)例。
[0133]

【權(quán)利要求】
1. 一種藥物制劑，其包含抗病毒寡核苷酸螯合物用于治療病毒感染。
2. -種藥物制劑，其包含抗膽固醇寡核苷酸螯合物用于治療高膽固醇血癥。
3. -種藥物制劑，其包含抗甘油三酯寡核苷酸螯合物用于治療高甘油三酯血癥。
4. 一種藥物制劑，其包含抗阿爾茨海默寡核苷酸螯合物用于治療阿爾茨海默病。
5. -種藥物制劑，其包含抗朊病毒寡核苷酸螯合物用于治療朊病毒病。
6. 如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物是用二價(jià)金 屬陽(yáng)離子制備的。
7. 如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物是用鈣制備 的。
8. 如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物是用鎂制備 的。
9. 如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物是用鐵 (2+)、錳、銅或鋅制備的。
10. 如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含兩種或 兩種以上不同二價(jià)金屬陽(yáng)離子。
11. 如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含鈣和 鎂。
12. 如權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)雙鏈寡核苷酸。
13. 如權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)具有至少一個(gè)硫代磷酸酯鍵的寡核苷酸。
14. 如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)完全硫代磷酸酯化的寡核苷酸。
15. 如權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)具有一個(gè)2'修飾的核糖的寡核苷酸。
16. 如權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)每個(gè)核糖都被2' 0-甲基化的寡核苷酸。
17. 如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)具有至少一個(gè)5'甲基胞嘧啶的寡核苷酸。
18. 如權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)其中每個(gè)胞嘧啶都是5'甲基胞嘧啶的寡核苷酸。
19. 如權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物含有至少 一個(gè)完全硫代磷酸酯化并且所有核糖都具有2' 0甲基修飾并且所有胞嘧啶都以5'甲基胞 嘧啶形式存在的寡核苷酸。
20. 如權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少 一個(gè)選自SEQIDN0:1-6或10-18的寡核苷酸。
21. -種藥物制劑，其包含含有SEQIDN0:20的螯合物用于治療高膽固醇血癥。
22. -種藥物制劑，其包含含有SEQIDN0:19的螯合物用于治療杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良 癥。
23. -種藥物制劑，其包含含有SEQIDN0:7的螯合物用于治療丙型肝炎感染。
24. 如權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中將所述寡核苷酸螯合物配制成 用于皮下施用。
25. 如權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中將所述寡核苷酸螯合物配制成 用于靜脈內(nèi)輸注。
26. 如權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中將所述寡核苷酸螯合物配制成 用于選自由以下方式組成的組的施用：眼內(nèi)、口服、腸道、吸入、肌內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、鞘內(nèi) 注射、鞘內(nèi)輸注、氣管內(nèi)、靜脈內(nèi)注射和局部。
27. 如權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)所述的藥物制劑，其中將所述寡核苷酸螯合物配制成 通過(guò)氣霧劑進(jìn)行施用。
28. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中引起所述感染的病毒是乙型肝炎病毒。
29. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中引起所述感染的所述病毒是嗜肝DNA病毒。
30. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中引起所述感染的所述病毒是肝炎S病毒。
31. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中引起所述感染的所述病毒是流感病毒。
32. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中引起所述感染的所述病毒選自由以下病毒組 成的組：逆轉(zhuǎn)錄病毒科的成員、HIV-1、HIV-2、皰疹病毒科的成員、HSV-1、HSV-2、巨細(xì)胞病 毒、痘病毒科的成員、副粘病毒科的成員、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、布尼亞病毒科的成 員、漢坦病毒、絲狀病毒科的成員、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、黃病毒科的成員、黃熱病毒、登 革熱病毒、西尼羅病毒、丙型肝炎病毒、正粘病毒科的成員、披膜病毒科的成員、冠狀病毒科 的成員、彈狀病毒科的成員和砂粒病毒科的成員。
33. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含SEQIDNO:2。
34. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含SEQIDNO: 18。
35. 如權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其中所述寡核苷酸螯合物包含SEQIDNO: 11。
36. 抗病毒寡核苷酸螯合物用于治療病毒感染的用途。
37. 抗膽固醇寡核苷酸螯合物用于治療高膽固醇血癥的用途。
38. 抗甘油三酯寡核苷酸螯合物用于治療高甘油三酯血癥的用途。
39. 抗阿爾茨海默寡核苷酸螯合物用于治療阿爾茨海默病的用途。
40. 抗朊病毒寡核苷酸螯合物用于治療朊病毒病的用途。
41. 如權(quán)利要求36至40中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物是用二價(jià)金屬 陽(yáng)離子制備的。
42. 如權(quán)利要求36至41中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物是用鈣制備 的。
43. 如權(quán)利要求36至42中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物是用鎂制備 的。
44. 如權(quán)利要求36至43中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物是用鐵（2+)、 錳、銅或鋅制備的。
45. 如權(quán)利要求36至44中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含兩種或兩 種以上不同二價(jià)金屬陽(yáng)離子。
46. 如權(quán)利要求36至45中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含鈣和鎂。
47. 如權(quán)利要求36至46中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 雙鏈寡核苷酸。
48. 如權(quán)利要求36至47中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 具有至少一個(gè)硫代磷酸酯鍵的寡核苷酸。
49. 如權(quán)利要求36至48中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 完全硫代磷酸酯化的寡核苷酸。
50. 如權(quán)利要求36至49中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 具有一個(gè)2'修飾的核糖的寡核苷酸。
51. 如權(quán)利要求36至50中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 每個(gè)核糖都被2' 0-甲基化的寡核苷酸。
52. 如權(quán)利要求36至51中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 具有至少一個(gè)5'甲基胞嘧啶的寡核苷酸。
53. 如權(quán)利要求36至52中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 所有胞嘧啶都是5'甲基胞嘧啶的寡核苷酸。
54. 如權(quán)利要求36至53中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含至少一個(gè) 完全硫代磷酸酯化并且所有核糖都具有2' 0甲基修飾并且所有胞嘧啶都以5'甲基胞嘧啶 形式存在的寡核苷酸。
55. 如權(quán)利要求36至40中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含選自SEQ IDN0:1-6或10-18的寡核苷酸。
56. 包含SEQIDN0:20的寡核苷酸螯合物用于治療高膽固醇血癥的用途。
57. 包含SEQIDN0:19的寡核苷酸螯合物用于治療杜馨氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥的用途。
58. 包含SEQIDN0:7的寡核苷酸螯合物用于治療丙型肝炎感染的用途。
59. 如權(quán)利要求36至58中任一項(xiàng)所述的用途，其中將所述寡核苷酸螯合物配制成用于 皮下施用。
60. 如權(quán)利要求36至58中任一項(xiàng)所述的用途，其中將所述寡核苷酸螯合物配制成用于 靜脈內(nèi)輸注。
61. 如權(quán)利要求36至58中任一項(xiàng)所述的用途，其中將所述0N螯合物配制成用于選自 由以下方式組成的組的施用：眼內(nèi)、口服、腸道、吸入、肌內(nèi)注射、腹膜內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射、鞘 內(nèi)輸注、氣管內(nèi)、靜脈內(nèi)注射和局部。
62. 如權(quán)利要求36至58中任一項(xiàng)所述的用途，其中將所述寡核苷酸螯合物配制成用于 通過(guò)氣霧劑進(jìn)行施用。
63. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中引起所述感染的所述病毒是乙型肝炎病毒。
64. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中引起所述感染的所述病毒是嗜肝DNA病毒。
65. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中引起所述感染的所述病毒是肝炎S病毒。
66. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中引起所述感染的所述病毒是流感病毒。
67. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中引起所述感染的所述病毒選自由以下病毒組成的 組：逆轉(zhuǎn)錄病毒科的成員、HIV-1、HIV-2、皰疹病毒科的成員、HSV-1、HSV-2、巨細(xì)胞病毒、痘 病毒科的成員、副粘病毒科的成員、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、布尼亞病毒科的成員、漢 坦病毒、絲狀病毒科的成員、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、黃病毒科的成員、黃熱病毒、登革熱 病毒、西尼羅病毒、丙型肝炎病毒、正粘病毒科的成員、披膜病毒科的成員、冠狀病毒科的成 員、彈狀病毒科的成員和砂粒病毒科的成員。
68. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含由SEQIDN0:2組成的 寡核苷酸。
69. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含由SEQIDNO: 18組成的 寡核苷酸。
70. 如權(quán)利要求36所述的用途，其中所述寡核苷酸螯合物包含由SEQIDNO: 11組成的 寡核苷酸。
【文檔編號(hào)】A61K31/7088GK104379152SQ201380025475
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2013年5月17日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月18日
【發(fā)明者】米歇爾·巴齊內(nèi), 安德魯·瓦利恩特 申請(qǐng)人:里普利科股份有限公司