血纖維蛋白溶酶的溶栓治療方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及新穎血纖維蛋白溶酶的溶栓治療方法。更具體地，為血纖維蛋白溶酶的受體具有高親和力，其特征在于：純化、克隆和表達(dá)。這種受體可用于在給藥之前，與此同時或在給藥之后的血纖維蛋白溶酶原活化劑的組合療法。此外，這種受體可以綁定纖溶酶和管理需要纖溶活性的人或動物。此外，本發(fā)明涉及一種新型的固定化形式的血纖維蛋白溶酶，抗纖維蛋白溶解活性，在這一點上還需要更多有利地積累。
【專利說明】血纖維蛋白溶酶的溶栓治療方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是一種血纖維蛋白溶酶的溶栓治療方法。

【背景技術(shù)】
[0002]十年前，食品和藥物管理局批準(zhǔn)使用的纖維蛋白溶酶原激活劑溶栓治療。它最初被推薦用于治療深靜脈血栓形成和嚴(yán)重的肺動脈栓塞。這種方法現(xiàn)在也用于治療急性周圍動脈血栓和急性冠狀動脈血栓形成和溶解血栓的導(dǎo)管和分流。
[0003]隨著重組DNA技術(shù)和組織型纖溶酶原激活劑(TPA)的克隆和表達(dá)的發(fā)展，我們現(xiàn)在已經(jīng)進入了一個新時代的溶栓劑具有獨特的生理特性和治療承諾。原來的血纖維蛋白溶酶原活化劑，已被用于臨床，鏈激酶和尿激酶。生產(chǎn)這些藥物在患者的廣義有各種副作用，并沒有直接針對溶解纖維蛋白凝塊溶解狀態(tài)。組織型纖溶酶原激活劑，因為它的血纖維蛋白的結(jié)合能力，提高纖維蛋白降解的這些藥物的選擇性。因此，這是正在大張旗鼓地迎接新一代的纖維蛋白溶解劑。
[0004]組織型纖溶酶原激活劑是不是沒有它的潛在的副作用，此外，在許多環(huán)境中使用它的成本過高。例如，V.A.在蓋恩斯維爾不會授權(quán)組織型纖溶酶原激活劑溶栓治療，因為治療過其巨大的成本。此外，本溶栓治療家畜或食品生產(chǎn)的動物中的應(yīng)用是有限的成本巨大。
[0005]很顯然，大多數(shù)專家組織型纖溶酶原激活劑特效藥性質(zhì)已被高估。TPA已發(fā)現(xiàn)有一個在體內(nèi)的半衰期很短。此外，組織血纖維蛋白溶酶原激活劑的藥理劑量的產(chǎn)生顯著的出血風(fēng)險的患者，和冠狀動脈血栓形成的情況下，凝塊成功溶解后的血管再發(fā)生閉塞的患者是一個相當(dāng)?shù)臄?shù)量。一種廉價的，甚至更好的治療形式的需要是顯而易見的。由此以新穎的方式與新的材料和程序是緊密相連的現(xiàn)有的組合物和方法進行的聯(lián)合療法的使用可提高血纖維蛋白溶酶原活化劑的有效性，并可能減少所需量的血纖維蛋白溶酶原活化劑，以達(dá)到所期望的結(jié)果。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本申請涉及用于溶栓治療的新的組合物和方法。人類血纖維蛋白溶酶A受體已被鑒定，純化，其特征在于，克隆和表達(dá)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這種受體結(jié)合血纖維蛋白溶酶的非常高的親和力。當(dāng)與受體結(jié)合，纖溶酶保留其酶活性，但不規(guī)范。α-2抗纖溶酶。
[0007]血纖維蛋白溶酶的受體蛋白質(zhì)的分離和純化，使得它可以管理來實現(xiàn)纖溶活性的新的組合物和治療方法。具體而言，受體蛋白可以在提高的血纖維蛋白溶酶原活化劑的有用性，同時最大限度地減少對這些藥物的消極方面的方法與現(xiàn)有的纖維蛋白溶酶原活化劑組合使用。例如，通過同時或順序給藥的血纖維蛋白溶酶原活化劑的受體蛋白，它能夠延長的血纖維蛋白溶酶原活化劑的影響。延長的結(jié)果的受體分子的結(jié)合所產(chǎn)生的血纖維蛋白溶酶的血纖維蛋白溶酶原激活劑的活性。一旦受體結(jié)合具有高親和力的纖維蛋白溶酶，血纖維蛋白溶酶是不再抑制。α-2抗纖溶酶。以這種方式，所需的血纖維蛋白溶酶原活化劑的量可以減少的短半衰期的血纖維蛋白溶酶原活化劑的不利影響可以被最小化，以達(dá)到預(yù)期的纖溶酶活性。
[0008]固定或可用于受體結(jié)合的纖維蛋白溶酶，鏈激酶，尿激酶，組織纖溶酶原激活劑，或其他的血纖維蛋白溶酶原活化劑的給藥結(jié)合。在這樣的治療方案可以使用我們的新型纖溶酶結(jié)構(gòu)有助于防止血管再閉塞的纖維蛋白溶酶原激活劑的濃度降低，而降低了出血的危險。
[0009]此外，該受體分子可以是共軛的纖維蛋白特異的單克隆抗體。以這種方式，可以針對需要的纖維蛋白溶解活性的血纖維蛋白凝塊的纖維蛋白溶酶。此外，這將有助于減少纖維蛋白溶在血液系統(tǒng)自由流通的量。
[0010]在本發(fā)明的另一個實施例中，血纖維蛋白溶酶可以綁定到給藥前需要血栓溶解活性的人類或動物的受體。沒有迅速被抑制。α-2抗纖溶酶，纖溶酶與受體結(jié)合，將提供的纖溶活性。
[0011]本發(fā)明還涉及一種方法，它包括治療有需要的人或動物的纖維蛋白溶解活性，包括血纖維蛋白溶酶，人類和其他的選擇性，高親和力受體與細(xì)菌。這里所列舉的是使用一組A鏈球菌受體結(jié)合人血纖維蛋白溶酶，有利的是，一個非常高的親和力，非常慢的解離速率。具有這種形式的固定化的纖維蛋白溶酶，不僅在人，溶栓治療的潛在的應(yīng)用，而且在動物。
[0012]本發(fā)明主題的其它方面涉及的基本上純的血纖維蛋白溶酶受體的DNA，這種蛋白質(zhì)的代碼(如下文所述)。本發(fā)明的血纖維蛋白溶酶受體的某些細(xì)菌可被純化。也可以通過使用新穎的克隆，表達(dá)受體的重組技術(shù)。受體是一種Μ.sub.r的apprxeq.41,000道爾頓的蛋白這是不同于M.sub.r的。apprxeq.47,000相同的細(xì)菌所產(chǎn)生的鏈激酶分子。與鏈激酶，纖溶酶受體蛋白缺乏型纖溶酶原激活劑活性。
[0013]再一個方面，本發(fā)明涉及使用的血纖維蛋白溶酶受體作為A群鏈球菌(GAS)感染和一個潛在的廣闊范圍內(nèi)的感染病原體表達(dá)GAPDH或磷酸甘油醛脫氫酶樣蛋白相關(guān)的免疫應(yīng)答的疫苗，以提高在細(xì)胞表面。

【具體實施方式】
與血纖維蛋白溶酶原激活劑給藥的主要問題之一是溶解的狀態(tài)，伴隨著高濃度的注入鏈激酶或在較小的程度，組織血纖維蛋白溶酶原激活劑。這是由于生成的血纖維蛋白溶酶的血纖維蛋白溶酶原活化劑循環(huán)在人或動物。組織型纖溶酶原激活劑為血纖維蛋白具有一定的親和力，允許激活優(yōu)先發(fā)生在該區(qū)域的凝塊。
[0014]可用于本發(fā)明主題的純化的纖維蛋白溶酶受體與血纖維蛋白溶酶原活化劑的組合，以產(chǎn)生所需的血栓溶解活性。有利的是，使用纖維蛋白溶酶的受體，可以使用，以減少所需的血纖維蛋白溶酶原活化劑的量，實現(xiàn)必要的活動。通過結(jié)合所產(chǎn)生的血纖維蛋白溶酶原激活劑與纖維蛋白溶酶，受體是能夠大大延長的血纖維蛋白溶酶原活化劑的效果。血纖維蛋白溶酶原活化劑的半衰期短的不利影響，從而最小化。當(dāng)受體結(jié)合纖溶酶，纖溶酶保留其酶活性，但不抑制。α-2抗纖溶酶。此外，該受體可以結(jié)合到抗體的服務(wù)目標(biāo)的血纖維蛋白溶酶的酶活性的活性是必要的地方的血塊。使用這種聯(lián)合治療的血纖維蛋白溶酶原激活劑和纖維蛋白溶酶受體促進血塊一種更有效的治療。合并后的治療目前溶栓治療伴隨的有害影響降到最低。
[0015]另一種形式的治療涉及纖溶酶已經(jīng)與受體結(jié)合的管理?？梢赃M行純化的受體，或仍與細(xì)菌表面。纖維蛋白溶酶與細(xì)菌自由地在血液中循環(huán)，直到被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，由憑借其粒度，可以積累在血塊形成的地方。一旦有，細(xì)菌結(jié)合酶可以降解纖維蛋白，清除血塊。細(xì)菌，然后繼續(xù)循環(huán)，直到網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除生物體。我們的研究發(fā)現(xiàn)，纖維蛋白溶酶受體極其穩(wěn)定，是目前非活菌使得這種方法特別有吸引力。它使微摩爾量的血纖維蛋白溶酶被固定在通過吸附的細(xì)菌。然后，可以靜脈給藥無明顯毒性細(xì)菌結(jié)合的纖溶酶。非存活的生物體不帶來任何危險的人類或動物患者，生物體后，在血漿中的半衰期合理的潛在的間隙，將根據(jù)預(yù)期的正常網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞功能在人或動物。
[0016]雖然致病A組鏈球菌，這里所列舉的，纖溶酶受體也被認(rèn)定上的其他生物，包括數(shù)量，即使當(dāng)可行的，是不是人類的病原體菌株。可用于實踐本發(fā)明的其他生物包括其他組包括B，C和G。另外，牛，溶血巴斯德氏菌，金黃色葡萄球菌以及微生物可用于鏈球菌。這些生物體已知在現(xiàn)有技術(shù)中是說明性的，而不是詳盡無遺的，本發(fā)明主題的范圍內(nèi)的微生物。
[0017]使用綁定細(xì)菌的纖維蛋白溶酶的主要優(yōu)點是能夠產(chǎn)生一種纖維蛋白溶解劑，具有選擇性向血塊，并不會導(dǎo)致一種普遍的溶解狀態(tài)，所有這一切都可以實現(xiàn)在一個非常溫和的成本。此外，細(xì)菌血纖維蛋白溶酶的受體已被證明不僅綁定人類的，但其他種類的纖維蛋白溶酶，從而使這種方法要延伸到國內(nèi)和食品動物溶栓治療。
[0018]在這方面，特別感興趣的是一個重大的經(jīng)濟在牛的疾病涉及血纖維蛋白性肺炎，發(fā)生在與溶血巴斯德氏菌感染的奶牛。這是一個主要殺手的動物，特別是那些患有免疫抑制病毒感染的后果。在飼料中大量的牛被安置在一起的條件下，這一點尤為重要。有一個很大的需要的能力來治療纖維蛋白沉積在肺，最終窒息的動物，氣霧劑治療與纖溶酶細(xì)菌的復(fù)雜。此外，現(xiàn)在可以被應(yīng)用溶栓療法已被用于人類醫(yī)學(xué)的情況，在動物中類似的情況。
[0019]在使用涂有血纖維蛋白溶酶的細(xì)菌的優(yōu)點，包括:(1)增加取得的選擇性固定在顆粒上的非調(diào)節(jié)的形式，分發(fā)具有可預(yù)測的個體動物的血清中的半衰期的血纖維蛋白溶酶及(2 )成本低，然后將啟用的方法，可用于動物以及人。
[0020]我們已經(jīng)分離和分析PLR，該基因編碼的A組鏈球菌纖溶酶受體.lambda, gtlI表達(dá)抗纖溶酶受體抗體庫篩選，我們確定了纖溶酶受體基因的2.7 kb的鏈球菌DNA片段內(nèi)。將該片段亞克隆到低拷貝數(shù)質(zhì)粒，并假定鏈球菌啟動子元件的控制下穩(wěn)定地在大腸桿菌中表達(dá)的受體蛋白。重組受體蛋白表現(xiàn)出免疫反應(yīng)性和纖維蛋白溶酶結(jié)合活性。我們確定PLR的上游元件的結(jié)構(gòu)基因的堿基序列。被確定為1008 bp的開放閱讀框。40.5%的G+ C含量PLR 略高于報道組 A 鏈球菌染色體 DNA (Hardie, J.M.
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[0021]重組體血纖維蛋白溶酶的受體蛋白質(zhì)(PLR)的推導(dǎo)的氨基酸序列與其他蛋白質(zhì)序列比較。PLR的糖酵解酶磷酸甘油醛脫氫酶，報告了一些原核和真核有機體顯示出顯著的相似性。與枯草芽孢桿菌(56%相同，73%保守的氨基酸殘基)的最佳匹配。GAPDH從鏈球菌尚未分離或特征的纖維蛋白溶酶的受體的glycolytically活性的酶的關(guān)系還有待進一步研究。然而，廣泛的氨基酸同源性和相似的疏水性重復(fù)PLR和枯草芽孢桿菌的GAPDH的強烈表明，PLR的GAPDH的蛋白質(zhì)家族的成員。此外，重組蛋白的初步分析表明，PLR磷酸甘油醛脫氫酶的酶活性。
[0022]已被轉(zhuǎn)變的克隆，并在大腸桿菌中表達(dá)。大腸桿菌含有克隆的主機將存入永久收藏的美國菌種保藏中心(ATCC)，12301 Parklawn驅(qū)動，羅克維爾，馬里蘭州20852 USA。文化已經(jīng)分配了以下號:
_文化ATCC指定存款日期_大腸桿菌Chl 6060 69415 December 9,
1993 (pRL015)__
將存放條件下，確保文化，將可在本專利申請由專利和商標(biāo)事務(wù)專員有權(quán)投票者根據(jù)37 CFR 1.14和35 USC 122未決的主題文化。押金將在其中同行的課題申請，或其后代的國家的外國專利法所要求的，被提起。然而，應(yīng)該理解的可用性的存款并不構(gòu)成執(zhí)業(yè)許可證減損政府的行動所授出專利權(quán)的發(fā)明主題。
[0023]此外，受文化底蘊將被存儲和符合的微生物，即存款的布達(dá)佩斯條約的規(guī)定，向公眾提供，他們將被存儲所有必要的照顧，讓他們可行一段未被污染至少五年后，最近要求為提供存款(S)的樣本，在任何情況下，一段時間的日期后的存款或強制執(zhí)行的生活至少30(30)歲任何專利可能發(fā)出公開文化。儲戶承認(rèn)責(zé)任，以取代存款保管人應(yīng)請求時，無法提供一份樣品，由于存款的條件。所有限制向公眾的主題文化底蘊的可用性將不可撤銷地披露他們的專利授予后去除。
[0024]除了本文所公開的血纖維蛋白溶酶受體的氨基酸序列，本發(fā)明還包括等效的纖維蛋白溶酶的受體，這里所列舉的具有相同或類似的生物活性的受體蛋白質(zhì)(相當(dāng)于蛋白質(zhì)編碼的核苷酸序列)。這些等效的蛋白質(zhì)可能具有與蛋白質(zhì)的氨基酸序列同源性本文所公開并要求保護。該氨基酸的同源性通常大于75%,優(yōu)選大于90%,最優(yōu)選大于95%的氨基酸同源性最高的蛋白質(zhì)的三維配置，最終是負(fù)責(zé)的生物活性測定中所涉及的生物活性或在某些關(guān)鍵區(qū)域。在這方面，某些氨基酸取代是可以接受的，可以預(yù)期，如果這些取代現(xiàn)在的位置是不活動的關(guān)鍵或保守的氨基酸取代，并不影響該分子的三維結(jié)構(gòu)的區(qū)域。例如氨基酸可以被放置在下面的類:非極性的，不帶電荷的極性，基本的和酸性。從而一個類的相同類型的本發(fā)明的范圍之內(nèi)，所以只要替換成其他氨基酸取代的氨基酸的保守性替換不實質(zhì)性地改變的化合物的生物活性。表I提供了屬于每個類的氨基酸的例子的列表。
[0025]表I _類氨基酸氨基酸_無極性的Ala, Val, Leu,
He, Pro, Met，Phej Trp Uncharged Polar Glyj Serj Thrj Cysj Tyrj Asnj Gln AcidicAsp, Glu Basic Lysj Argj His _
在某些情況下，非保守取代也可制成。關(guān)鍵的因素是，這些替換必須不顯著削弱的生物活性的蛋白質(zhì)。它已被證明可以構(gòu)造確定的結(jié)構(gòu)與功能，蛋白質(zhì)的氨基酸序列改變，如果這種變化不改變蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)(Kaiser, E.T.and Kezdy, F.J.
[1984] Science223:249-255)。因此，本發(fā)明包括此處所描述的，不改變蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)，或如果結(jié)構(gòu)發(fā)生變化時，基本上保留生物活性的氨基酸序列的突變體。
[0026]根據(jù)本發(fā)明的基因和蛋白質(zhì)，不僅包括本文所公開，而且這些序列，或融合蛋白，保留本文中具體例舉的蛋白質(zhì)的特征受體結(jié)合或GAPDH活性片段的全長序列。
[0027]它應(yīng)該是編碼的受體結(jié)合蛋白的基因，可以識別并通過一些手段得到本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的。如本文所述，特定的基因可從培養(yǎng)存管。另外，這些基因中，或者其部分可以被構(gòu)造合成，例如，通過使用基因機。這些基因的變化，可以很容易地用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進行點突變。另外，這些基因的片段，可以按照標(biāo)準(zhǔn)方法，使用市售的核酸外切酶或核酸內(nèi)切酶。例如，可以使用酶如Bal31核酸酶位點定向誘變系統(tǒng)切斷核苷酸從這些基因的端部。此外，使用各種其它的限制性內(nèi)切酶時，可以通過以下方式獲得基因的活性片段的代碼。蛋白水解酶可用于直接獲得這些蛋白質(zhì)的活性片段。
[0028]材料與方法
菌株，質(zhì)粒和媒體。A組鏈球菌菌株64/14是一個M-untypeable的臨床分離株,在小鼠體內(nèi)傳代 14次(Reis, K.J., M.YarnalI, E.M.Ayoub, Μ.D.P.Boyle
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[1991]，同上)約18小時，在室溫下溫育，洗滌，然后與山羊抗小鼠免疫球蛋白G (Cappel, Organon Teknika)溫育3至4小時。洗漆過濾器上的抗原抗體復(fù)合物進行檢測。sup.125 1-鏈球菌蛋白G產(chǎn)生的放射自顯影柯達(dá)XAR-5膠片與增感屏于-70°C，然后使用自動膠片顯影曝光洗過的硝酸纖維素濾膜。免疫反應(yīng)斑塊進行分離純化，通過兩個額外的放映。
[0034]PAGE和蛋白質(zhì)印跡。進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和10% (重量/體積)聚丙烯酰胺分離膠和4% (重量/體積)的聚丙烯酰胺積層凝膠，按照Laemmli的方法(Laemmli, U.K.
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[1991]，同上λΝΕΤ的凝膠緩沖液中的血纖維蛋白溶酶結(jié)合的研究，硝酸纖維素膜，在室溫下I小時，阻止。印跡在室溫下進行2小時，然后孵育。sup.125 1-人類血纖維蛋白溶酶,纖維蛋白溶酶結(jié)合的蛋白條帶(Broder et al.,同上文)來識別。洗滌印跡在NET凝膠和在_70°C下進行放射自顯影。
[0035]在體外轉(zhuǎn)錄翻譯。質(zhì)粒編碼的蛋白質(zhì)在體外用DNA指導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄-翻譯試劑盒(Amersham)產(chǎn)生。標(biāo)記的蛋白產(chǎn)物[sup.35 S]甲硫氨酸(比活性1000次/毫摩爾，Amersham)上進行 SDS-PAGE 和突光自顯影，水楊酸納(Chamberlain, J.P.
[1979] Anal.B1chem.98:132—135)。
[0036]純化重組鏈球菌血纖維蛋白溶酶的受體蛋白質(zhì)。大腸桿菌.lambda.6060(pRL015)與法國的壓力細(xì)胞裂解。離心分離所得到的材料在10，000.times, g，離心30分鐘，上清液進行硫酸銨分級分離。連續(xù)加入硫酸銨，在室溫下進行，通過離心除去沉淀物以10，000.times, g,離心30分鐘,透析磷酸鹽緩沖鹽水,并用SDS-PAGE和Western印跡分析。55%硫酸銨飽和度，重組.apprxeq.41，000-M.sub.r血纖維蛋白溶酶受體蛋白質(zhì)保持在上清液中，而大多數(shù)的大腸桿菌蛋白質(zhì)沉淀。
[0037]DNA測序和分析。進行DNA測序雙脫氧鏈終止使用的測序試劑盒(United StatesB1chemical Corp., Cleveland, Oh1)。a - sup.35 S-ATP (具體活動〉1000 次 / 毫摩爾；Amersham公司)，通過以下的制造商的指示。序列進行測定用套件附帶普遍正向引物，凹陷的M13引物，序列特異性寡核苷酸合成佛羅里達(dá)跨學(xué)科研究中心大學(xué)的生物技術(shù)研究DNA核心實驗室。序列進行了分析與遺傳學(xué)計算機集團計劃(美國威斯康星大學(xué)-麥迪遜)(Devereux, J., P.Haeberli, 0.Smithies
[1984] Nucleic Acids Res.12:387-395)。
[0038]氨基酸序列分析。變?nèi)芫靥崛〉牡鞍踪|(zhì)(Broder et al.
[1991]，同上)從菌株64/14,進行SDS-PAGE。將蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜(Immobilon-P; MilliporeCorp., Bedford, Mass.)通過使用1mM的2 - (N-嗎啉代)乙磺酸-20%甲醇的轉(zhuǎn)移緩沖液(pH 6.0)中?？捡R斯亮藍(lán)染色蛋白條帶被切除。apprxeq.41，000-M.sub.r蛋白帶，以前被證明綁定纖溶酶。在Applied B1systems 470A型氣相定序器與一上線12A PTH分析儀(華盛頓大學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)實驗室)進行自動Edman化學(xué)，電腦軟件。溴化氰.apprxeq.41,000-M.sub.r蛋白碎片進行浸潰的聚偏二氟乙烯膜結(jié)合蛋白在70%甲酸中，并用溴化氰處理，在室溫下過夜。片段，通過SDS-PAGE分離，并轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜如上述。四肽PTH分析儀上線使用Applied B1systems公司的470型音序測序大學(xué)的佛羅里達(dá)州的跨學(xué)科研究中心生物技術(shù)研究蛋白質(zhì)化學(xué)核心設(shè)施。
[0039]以下是實施例中示出的程序，包括用于實施本發(fā)明的最佳模式。在這些實施例不應(yīng)被解釋為限制。所有的百分?jǐn)?shù)都是按重量計，除非另有說明，所有溶劑混合物的比例(體積)。
[0040]實施例1
人纖溶酶
瓊脂糖凝膠賴氨酸(Sigma Chem.C0., St.Louis, M0., U.S.A.)的Sephadex G-1OO分子篩色譜法(Lottenberg, R., F.R.Dolly, C.S.Kitchens
[1985] Am.J.Hemato1.19:181-193)。純化的蛋白的銀染色的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳上呈單一條帶。孤立的纖維蛋白溶酶原激活后與鏈激酶一個給定的濃度表明預(yù)測的理論酰胺分解活性，從而孤立的人纖溶酶原確認(rèn)的純度。
【權(quán)利要求】
1.一種血纖維蛋白溶酶的溶栓治療，受體結(jié)合具有高親和力的纖維蛋白溶酶，血纖維蛋白溶酶是不再抑制；α-2抗纖溶酶受體蛋白可以在提高的血纖維蛋白溶酶原活化劑的有用性，同時最大限度地減少對這些藥物的消極方面的方法與現(xiàn)有的纖維蛋白溶酶原活化劑組合使用，施用至所述哺乳動物的一個孤立的蛋白含有的氨基酸序列顯示于SEQ IDN0.2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，血纖維蛋白溶酶的溶栓治療，其中使用的血纖維蛋白溶酶受體作為A群鏈球菌(GAS)感染和一個潛在的廣闊范圍內(nèi)的感染病原體表達(dá)GAPDH或磷酸甘油醛脫氫酶樣蛋白相關(guān)的免疫應(yīng)答的疫苗，以提高在細(xì)胞表面。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，血纖維蛋白溶酶的溶栓治療，其中組織型纖溶酶原激活劑為血纖維蛋白具有一定的親和力，允許激活優(yōu)先發(fā)生在該區(qū)域的凝塊。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，血纖維蛋白溶酶的溶栓治療，其中分離和分析PLR，該基因編碼的A組鏈球菌纖溶酶受體.lambda, gtlI表達(dá)抗纖溶酶受體抗體庫篩選，我們確定了纖溶酶受體基因的2.7 kb的鏈球菌DNA片段內(nèi)，將該片段亞克隆到低拷貝數(shù)質(zhì)粒。
【文檔編號】A61K38/02GK104511010SQ201310448688
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月28日
【發(fā)明者】陳晴川 申請人:上海滿益科技有限公司