透明質(zhì)酸組合物以及使用方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于治療特征為干燥的病癥的組合物，所說的病癥包括干眼和口干燥。該組合物通常包含透明質(zhì)酸和聚賴氨酸的軛合物。用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，優(yōu)選內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶將這些軛合物連接到受影響的機(jī)體組織或表面上。
【專利說明】透明質(zhì)酸組合物以及使用方法
[0001]本申請是母案為中國發(fā)明專利申請201110071276.5的分案申請。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及用于緩解與可以由使用透明質(zhì)酸獲益的病癥有關(guān)的癥狀的組合物和方法，所說的癥狀非限制性地包括干眼和口干燥。
【背景技術(shù)】
[0003]干眼是一種眼睛持續(xù)干燥的情況，包括角膜和結(jié)膜持續(xù)干燥。其是由眼淚形成異?；虿蛔?、以及粘蛋白分泌不足導(dǎo)致的(即，干性角膜結(jié)膜炎)。可能由于損害分泌眼淚的(即產(chǎn)生眼淚的)腺體的基礎(chǔ)性病癥如自身免疫性病癥而出現(xiàn)干眼癥狀，所說的病癥如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、斯耶格倫綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、和系統(tǒng)性硬化癥以及肉樣瘤病?？赡茉谘劬κ中g(shù)，如Lasik?手術(shù)后誘發(fā)干眼。估計在美國，一千三百萬以上的人口受到干眼的影響。
[0004]不管基礎(chǔ)的病理學(xué)是什么，干眼通常涉及眼睛前的淚膜迅速分解，從而使得暴露的外表面脫水。需要正常形成眼淚以使角膜和結(jié)膜保持濕潤，這反過來又有助于防止角膜和結(jié)膜的潰瘍和維持角膜的透明度。此外，眼淚有助于眼瞼在眼睛表面上的活動(例如，眨眼)和從眼睛上除去異物。眼淚通常還包含有助于防止眼睛感染的溶菌酶。
[0005]干眼可能伴有輕度至嚴(yán)重的眼睛疼痛。當(dāng)其長期發(fā)生時，其可造成視力模糊、沙礫感和/或灼燒感、以及瘙癢 。如果不進(jìn)行治療地使該情況持續(xù)下去，其將進(jìn)一步導(dǎo)致角膜潰瘍和/或瘢痕化。
[0006]迄今為止，干眼最常見的治療形式是使用人工淚液?？梢酝ㄟ^商業(yè)途徑獲得的人工淚液產(chǎn)品包括 Bion Tears (Alcon) >Lacriset (Merck) >Tears Naturale (Alcon)和 TearsNaturale II (Alcon)。但是，使用人工淚液的一個缺點(diǎn)是需要頻繁使用，尤其是因?yàn)槿斯I液制劑提供的緩解通常不能持久而更需要頻繁使用。
[0007]口干燥(也被稱為口部干燥)是一種特征為唾液產(chǎn)生不足的情況。其可能是一種由壓力(例如，恐懼)、分泌唾液的(即，產(chǎn)生唾液的)腺體的感染、或者使用某些藥物如抗膽堿能藥、利尿劑、抗組胺藥、可樂定、左旋多巴、甲基多巴、和三環(huán)抗抑郁劑造成的臨時情況。其還可能是一種病因?qū)W未知的持久情況。斯耶格倫綜合征和系統(tǒng)性硬化癥、以及嘴、頸和頭的放療(例如在口腔癌的治療中)也可能伴有口干燥。口干燥通常還會導(dǎo)致吞咽、講話的困難和痛苦，并且其可能會干擾味覺。在一些情況中，其還可能會造成牙齒腐蝕。
[0008]口干燥目前是通過口腔清洗、局部敷用、唾液替代品、或唾液分泌刺激劑如無糖的糖果來進(jìn)行治療的。目前可以通過商業(yè)途徑獲得的唾液刺激劑包括膽堿能激動劑如 EvoxacTM(西維美林 HCl, DaiichiPharmaceutical Corp.)和 SalagCII? (皮羅卡品HCl1MGI Pharma, Inc.)?？梢酝ㄟ^商業(yè)途徑獲得的唾液替代品包括Moi_Stir、Orex和Salivart0緩解口干燥的大多數(shù)普通治療是用人工唾液噴灑在口腔中。但是，與人工淚液一樣，人工唾液需要頻繁應(yīng)用，其對于受影響的個體而言是一種累贅。[0009]以前已經(jīng)報道過透明質(zhì)酸可用于治療干眼。但是，該類報道都將注意力放在使用游離透明質(zhì)酸上，與上面所討論的人工淚液治療相似，其必需頻繁應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的概述
[0011]因?yàn)榭梢钥朔B續(xù)和頻繁應(yīng)用的需要，所以希望對干眼和口干燥以及將從使用透明質(zhì)酸受益的其它情況進(jìn)行長期有效治療。
[0012]本發(fā)明提供了用于治療干眼、口干燥、和與干燥有關(guān)的其它情況的作為連續(xù)和頻繁應(yīng)用的供替代的選擇的治療劑。本發(fā)明部分是以將透明質(zhì)酸共價連接到受影響的機(jī)體表面或組織可以增強(qiáng)透明質(zhì)酸緩解干眼和口干燥的功效的發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的。因?yàn)?，透明質(zhì)酸在眨眼或吞咽的過程中比較不易被清洗掉，所以該類連接減少了重復(fù)和頻繁使用干眼或口干燥物質(zhì)的需要。根據(jù)本發(fā)明，透明質(zhì)酸通過一種是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子被連接到受影響的機(jī)體表面上。該連接分子可包括是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的氨基和/或甲酰胺基團(tuán)。所說的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶優(yōu)選地是內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，但其也可以是外源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。 [0013]但是，這里所提供的組合物并不僅僅限于應(yīng)用于干眼和口干燥中。而是其還可用于特征為其它組織干燥的其它病癥，所說的其它組織包括其它粘膜組織如陰道、直腸、和鼻(包括其它組織)、以及外部表面如皮膚、頭發(fā)、指甲、和嘴唇。此外，發(fā)現(xiàn)該組合物還可用于其它機(jī)體組織如內(nèi)皮(尤其是主動脈內(nèi)皮)、和骨關(guān)節(jié)軟骨。當(dāng)用于血管內(nèi)皮時，該透明質(zhì)酸組合物提供了長期持續(xù)的以前報道所給出的透明質(zhì)酸可以抑制血小板凝固的預(yù)防和/或治療益處。以前還報道了透明質(zhì)酸可以降低關(guān)節(jié)結(jié)合點(diǎn)疼痛，從而將透明質(zhì)酸附著在骨關(guān)節(jié)軟骨上將提供長期緩解關(guān)節(jié)炎的作用。當(dāng)用于由于皮膚干燥而造成的皺紋中時，透明質(zhì)酸將被局部應(yīng)用，并且將減少非連接性透明質(zhì)酸制劑頻繁應(yīng)用的需要。本發(fā)明打算包括為上述各種情況所量身定做的透明質(zhì)酸-連接分子軛合物制劑。
[0014]因此，本發(fā)明一方面提供了一種包含透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物的連接分子、以及游離透明質(zhì)酸的組合物，其中所說的游離透明質(zhì)酸和軛合物是以至少2的摩爾比存在的。
[0015]本發(fā)明的各種實(shí)施方案平等地適用于這里所公開的各個方面。因此，雖然這些實(shí)施方案僅敘述一次，但是應(yīng)當(dāng)清楚的是，正如本發(fā)明說明書和權(quán)利要求所教導(dǎo)的那樣，其可應(yīng)用于各種方面。
[0016]在一個實(shí)施方案中，該連接分子具有至少兩個相連的脂族胺、至少三個相連的脂族胺、至少四個相連的脂族胺、至少五個脂族胺、或至少六個脂族胺。在另一個實(shí)施方案中，所說的連接分子是天然的聚賴氨酸。在另一個實(shí)施方案中，聚賴氨酸選自聚-L-賴氨酸、聚-D-賴氨酸、和聚-DL-賴氨酸。在另一個實(shí)施方案中，所說的連接分子是聚賴氨酸的衍生物。
[0017]在一個實(shí)施方案中，該連接分子具有至少兩個相連的甲酰胺、至少三個相連的甲酰胺、至少四個相連的甲酰胺、至少五個甲酰胺、或至少六個甲酰胺。在另一個實(shí)施方案中，所說的連接分子是天然的聚谷氨酰胺。在另一個實(shí)施方案中，所說的連接分子選自聚-L-谷氨酰胺、聚-D-谷氨酰胺、和聚-DL-谷氨酰胺。還是在另一個實(shí)施方案中，所說的連接分子是聚谷氨酰胺的衍生物。
[0018]在一個實(shí)施方案中，該透明質(zhì)酸是天然的透明質(zhì)酸。在另一個實(shí)施方案中，該透明質(zhì)酸是選自透明質(zhì)酸可藥用的鹽、透明質(zhì)酸酯、和硫酸化的透明質(zhì)酸的透明質(zhì)酸衍生物。[0019]該摩爾比可選自至少2.0和至少4.0。
[0020]在另一個實(shí)施方案中，該組合物是以選自滴眼管、隱形眼鏡溶液、眼用軟膏、眼睛填塞物、和隱形眼鏡的形式被提供的。在另一個實(shí)施方案中，該組合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。
[0021]在一個實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸具有至少100，000的分子量。在一些重要的實(shí)施方案中，該軛合物具有高于1.0的負(fù)電荷:正電荷比。[0022]在另一個實(shí)施方案中，該組合物還包含可藥用的載體。在一些重要的實(shí)施方案中，所說的可藥用的載體具有至少280m0sm的重量滲克分子濃度。在其它實(shí)施方案中，該可藥用的載體具有至少6.5的pH。
[0023]該可藥用的載體可包含眼用防腐劑。在一些實(shí)施方案中，所說的眼用防腐劑選自有機(jī)汞制劑、季銨化合物、對羥基苯甲酸酯、被取代的醇和苯酚類物質(zhì)。在一個相關(guān)的實(shí)施方案中，所說的有機(jī)汞制劑選自硝酸苯汞、醋酸苯汞、硼酸苯汞、和硫柳汞。在另一個相關(guān)的實(shí)施方案中，所說的季銨化合物選自苯扎氯銨、芐索氯銨、氯化十六烷基吡啶鎗、和聚季鐵-1(polyquaternium-1)(P0LYQUAD)。
[0024]還是在另一個實(shí)施方案中，所說的被取代的醇和苯酚選自氯丁醇、和氯丁醇/苯乙醇。該眼用防腐劑可以是抗生素。
[0025]還是在另一個實(shí)施方案中，該組合物還可以包含選自矯味劑、著色劑和香料的物質(zhì)。在另一個實(shí)施方案中，該組合物還包含精氨酸或氟化物。
[0026]在一個實(shí)施方案中，該軛合物具有選自至少90%、至少95%、和至少99%的重量t匕。在另一個實(shí)施方案中，所說的連接分子是非絡(luò)合的。
[0027]在另一方面，本發(fā)明提供了一種包含被共價連接到一種是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物的連接分子上的透明質(zhì)酸的藥物組合物，其中所說的連接分子是非絡(luò)合的。在一個實(shí)施方案中，該組合物包含游離透明質(zhì)酸。在另一個實(shí)施方案中，該組合物是以選自滴眼管、隱形眼鏡溶液、眼用軟膏、眼睛填塞物、和隱形眼鏡的形式被提供的。還是在另一個實(shí)施方案中，該組合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。
[0028]還是在另一方面，本發(fā)明提供了一種位于滴眼管瓶中的包含透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物。在一個實(shí)施方案中，該組合物還包含可藥用的載體。在另一個實(shí)施方案中，提供了使用說明，其任選地位于所說滴眼管瓶的外表面上。在一個重要的實(shí)施方案中，該組合物還包含游離透明質(zhì)酸。在其它實(shí)施方案中，該可藥用的載體具有至少280m0sm的重量滲克分子濃度和/或至少6.5的pH。在另一個實(shí)施方案中，該可藥用的載體包含精氨酸或溶菌酶。在一個重要的實(shí)施方案中，所說的連接分子是非絡(luò)合的。
[0029]另一方面，本發(fā)明提供了一種包含透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、和選自矯味劑、著色劑和香料的物質(zhì)的組合物。
[0030]在一個實(shí)施方案中，所說的矯味劑選自甘露醇、糖精鈉、麥力甜、薄荷提取物、葉粉或油；留蘭香提取物、葉粉或油；冬青油；香草提取物；歐芹；牛至油；月桂葉油；丁香油；鼠尾草油；黃樟油；檸檬油；橙油；茴香油；苯甲醛；杏仁油；樟腦；雪松葉油；馬郁蘭油；香茅油；熏衣草油；芥子油；松油；松針油；迷迭香油；百里香油；肉桂葉油；薄荷醇；香芹酮；茴香腦；丁香酚；水楊酸甲酯；檸檬烯；傘花烴；正-癸醇；香茅醇；a-松油醇；乙酸甲酯；醋酸香茅酯；甲基丁香酚；桉樹腦；芫荽醇；乙基芳樟醇；香草醛；百里酚；紫蘇子油；冬綠油；桉樹油；咖啡因、酒石酸氫鉀、乳酸、蘋果酸、谷氨酸單鈉、亞硝酸鹽、山梨醇、阿司帕坦、乙酰舒泛、葡萄糖、果糖、環(huán)己基氨基磺酸鈉、斯替維苷、新橙皮苷(neo-hesperidyl)雙氫查耳酮、甘草甜素、紫蘇糖、索馬汀、天冬氨?；交彼峒柞?、和對-甲氧基肉桂醛。
[0031]在另一個實(shí)施方案中，所說的著色劑選自FD&C藍(lán)#1、FD&C黃#5，F(xiàn)D&C黃#10、FD&C紅#3、FD&C紅#40;焦糖色或粉末(#05439)、巧克力色光(#05349)、綠色淀摻合物(#09236)、kowet 二氧化鈦(#03970)、黃色液體色(#00403)、和亞硝酸鹽。
[0032]還是在另一個實(shí)施方案中，所說的香料選自草花提取物、草藥提取物、樹花提取物、植物提取物、和人造香料組成的組。
[0033]在一些重要的實(shí)施方案中，該組合物被制備成用于口部或眼睛給藥的組合物。該組合物可以被制備成舌下片、漱口劑、牙膏、口部凝膠、和糖果形式。該組合物還可以包含精氨酸或氟化物。
[0034]該組合物還可以包含任選地具有至少6.5的pH和/或高于280m0sm的重量滲克分子濃度的可藥用載體。
[0035]本發(fā)明另一方面提供了一種在包含氟化物的載體中包含透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物。在一個實(shí)施方案中，該載體是可藥用的載體。
[0036]在另一個實(shí)施方案中，該可藥用的載體具有至少6.5的pH、和/或高于280m0sm的重量滲克分子濃度。在一個實(shí)施方案中，該軛合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。
[0037]本發(fā)明另一方面還提供了一種舌下片形式的包含透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物。在一個相關(guān)的實(shí)施方案中，該舌下形式還包含選自糖精、阿司帕坦、山梨醇、乙酰舒泛、葡萄糖、果糖、環(huán)己基氨基磺酸鈉、斯替維苷、新橙皮苷雙氫查耳酮、甘草甜素、紫蘇糖、索馬汀、天冬氨?；交彼峒柞?、和對-甲氧基肉桂醛的甜味劑。在另一個實(shí)施方案中，該舌下形式包含維生素或氟化物。
[0038]本發(fā)明另一方面還提供了一種包含透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、以及有效量游離透明質(zhì)酸的藥物組合物，其中所說的游離透明質(zhì)酸和軛合物是以至少2的摩爾比存在的。
[0039]本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防特征為干燥的病癥的方法，其包括給需要其的個體使用有效量的任何一種前述組合物。
[0040]在一個實(shí)施方案中，所說的病癥是干眼。在一個相關(guān)的實(shí)施方案中，該干眼病癥伴有選自非進(jìn)行性結(jié)膜瘢痕形成(斯-約二氏綜合征)、斯耶格倫綜合征、沙眼、和疤痕性類天皰瘡的病癥。在另一個實(shí)施方案中，所說的病癥是口干燥。在另一個病癥中，個體已經(jīng)經(jīng)受或?qū)⒔?jīng)受可能可誘導(dǎo)干眼癥狀的手術(shù)操作如眼睛矯正手術(shù)(例如，Lasik?手術(shù))。
[0041]本發(fā)明另一方面提供了一種對個體進(jìn)行治療的方法，其包括向眼睛干燥或者有出現(xiàn)眼睛干燥風(fēng)險的個體的眼睛使用有效量的透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。在一個實(shí)施方案中，該軛合物是以選自滴眼管、隱形眼鏡溶液、眼用軟膏、眼睛填塞物、和隱形眼鏡的形式被提供的。
[0042]本發(fā)明另一方面提供了一種對個體進(jìn)行治療的方法，其包括給口部干燥或者有口部干燥風(fēng)險的個體的口部使用有效量的透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。在一個實(shí)施方案中，該軛合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。
[0043]本發(fā)明另一方面提供了一種對個體進(jìn)行治療的方法，其包括給關(guān)節(jié)不適或有關(guān)節(jié)不適風(fēng)險的個體的關(guān)節(jié)使用有效量的透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。
[0044]本發(fā)明另一方面提供了一種對個體進(jìn)行的方法，其包括給凝血過度或有凝血過度的風(fēng)險、或者血凝風(fēng)險升高的個體的血管使用有效量的透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。
[0045]本發(fā)明另一方面還提供了一種對個體治療的方法，其包括給有皺紋或者有出現(xiàn)皺紋風(fēng)險的個體的皮膚使用有效量的透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。
[0046]上述組合物和軛合物適于這里所提供的方法。
[0047]下面的實(shí)施方案可相等地用于上述方法。在一個實(shí)施方案中，所說的有效量每天小于 0.05 μ g/kgo
[0048]在這里將對這些方面和其它方面以及實(shí)施方案進(jìn)行更詳細(xì)的描述。
[0049]附錄和附圖簡要說明
[0050]附錄I是列出了可用于本發(fā)明軛合物的各種聯(lián)結(jié)子的表。
[0051]圖1A是以滴眼劑的形式將FITC-標(biāo)記的聚賴氨酸最后一次給藥后I小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。
[0052]圖1B是以滴眼劑的形式將FITC-標(biāo)記的聚賴氨酸最后一次給藥后36小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。
[0053]圖1C是以滴眼劑的形式將PCS-101(軛合到透明質(zhì)酸上的FITC-標(biāo)記的聚賴氨酸、游離透明質(zhì)酸、和緩沖劑)最后一次給藥后I小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。
[0054]圖1D是以滴眼劑的形式將PCS-101 (軛合到透明質(zhì)酸上的FITC-標(biāo)記的聚賴氨酸、游離透明質(zhì)酸、和緩沖劑)最后一次給藥后36小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。
[0055]圖1E是以滴眼劑的形式將對照載體單獨(dú)最后一次給藥后I小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。
[0056]圖1F是以滴眼劑的形式將對照載體單獨(dú)最后一次給藥后36小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。
[0057]圖2是應(yīng)用到人手指上的軛合物的體內(nèi)時間過程。
[0058]圖3是表示在不存在外源性加入的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的情況下重復(fù)向兔角膜上應(yīng)用后PCS-10-FITC的吸收的照片匯編。
[0059]圖4是表示在不存在外源性加入的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的情況下重復(fù)向兔角膜(橫截面)上應(yīng)用后PCS-10-FITC的吸收的照片匯編。
[0060]圖5是結(jié)合到豬腭上的PCS-201的照片匯編。
[0061]圖6是結(jié)合到豬舌上皮的下表面上的PCS-201的照片匯編。
[0062]圖7是結(jié)合到豬齦上皮上的PCS-201的照片匯編。[0063]圖8是結(jié)合到豬齦上皮和豬舌上皮上的PCS-201的照片匯編。
[0064]圖9是結(jié)合到豬腭、豬齦上皮和豬舌上皮上的PCS-201的照片匯編。
[0065]圖10是結(jié)合到豬口腔上皮上的PCS-201的照片匯編。
[0066]圖11是豬主動脈內(nèi)層上的交聯(lián)的PCS-201和聚賴氨酸(二者都用FITC進(jìn)行了標(biāo)記)的照片匯編。
[0067]圖12表示了 NaCl濃度對透明質(zhì)酸聚賴氨酸FITC在不存在外源性加入的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶情況下向兔角膜的角化層上的偶合的影響。
[0068]圖13表示了 PCS-101和游離HA對兔角膜淺層的結(jié)合的比較。
[0069]圖14是對兔角膜模型中與PLL-TRITC軛合的HA-FITC和HA-FITC以及未進(jìn)行處理的細(xì)胞的進(jìn)行了校正的平均熒光強(qiáng)度進(jìn)行比較的柱狀圖。
[0070]這些圖并不是實(shí)現(xiàn)要求保護(hù)的本發(fā)明所必需要求的。
[0071]本發(fā)明的詳細(xì)描述
[0072]本發(fā)明提供了一些用于治療將從存在的透明質(zhì)酸受益的病癥的新穎組合物和方法，所說的病癥包括特征為干燥的病癥。特征為干燥的病癥包括干眼和口干燥，其可能分別是由于眼淚和唾液產(chǎn)生不足而導(dǎo)致的。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明利用其能吸引和保留水分子的能力用透明質(zhì)酸作為能潤濕受影響的粘膜或外部組織的活性物質(zhì)。正如這里更詳細(xì)討論的那樣，據(jù)報道，已經(jīng)成功地用透明質(zhì)酸來潤濕經(jīng)歷干眼的個體的角膜和結(jié)膜。
[0073]本發(fā)明部分地是以可以用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶-介導(dǎo)的反應(yīng)將透明質(zhì)酸連接到受影響的表面如粘膜(例如，角膜或口腔)、內(nèi)皮、或外部(例如，頭發(fā)或指甲)表面上的發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶是介導(dǎo)特定的肽結(jié)合的Y —谷氨?；鶜埢妥鳛榘饭w底物的肽結(jié)合的賴氨酸或聚胺的各種伯氨基之間的共價交聯(lián)反應(yīng)的鈣-依賴性酶族的酶(Davies等人，Adv.Exp.Med.Biol.250, 391-401, 1988)。在哺乳動物中已經(jīng)確定、克隆和測序了至少五種酶活性的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。本發(fā)明包括使用能影響例如谷氨酰胺的甲酰胺基團(tuán)和例如賴氨酸的氨基之間的共價結(jié)合的任何和所有轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶以及其酶衍生物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，影響該軛合物與機(jī)體組織的結(jié)合的該轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶是一種內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，但是在一些實(shí)施方案中也可以使用外源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。
[0074]透明質(zhì)酸不是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的固有底物，這是因?yàn)槠洳话c轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)的氨基或甲酰胺基團(tuán)。但是，根據(jù)本發(fā)明可以對其進(jìn)行修飾以使其易于被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶作用。例如，可以通過向透明質(zhì)酸的適宜反應(yīng)基團(tuán)上加上甲酰胺或氨基側(cè)基來實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)(即，“改性的”透明質(zhì)酸)。這一點(diǎn)還可以通過將谷氨酰胺、賴氨酸或谷氨酸和賴氨酸兩者與透明質(zhì)酸共價偶合從而形成一種是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的軛合物來實(shí)現(xiàn)。最優(yōu)選的方法是將一種連接分子，如聚谷氨酰胺、聚賴氨酸、外皮蛋白(一種天然的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物)、或外皮蛋白片斷偶合到透明質(zhì)酸上從而形成一種適宜的軛合物。然后，存在于上皮組織如角膜上皮或口腔上皮中的內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶能夠催化連接分子(具有連接到其上的透明質(zhì)酸)與眼睛或口腔中的氨基或甲酰胺底物共價連接。
[0075]天然的透明質(zhì)酸一種D-葡萄糖醛酸和N-乙?；鵇-葡萄糖胺的二糖重復(fù)單體所組成的線形聚合物。 除非特別說明，否則這里所用的術(shù)語“透明質(zhì)酸”指的是包括天然的透明質(zhì)酸以及其衍生物(即，類似物)，非限制性地包括鹽和酯。透明質(zhì)酸的鹽包括可藥用的鹽如鈉鹽和季銨鹽。透明質(zhì)酸衍生物包括已經(jīng)用其它化學(xué)反應(yīng)如酯化作用改性的透明質(zhì)酸，因此包括透明質(zhì)酸酯以及硫酸化透明質(zhì)酸(如US6，339，074B1所述)。透明質(zhì)酸衍生物的一個實(shí)例是hylan。透明質(zhì)酸衍生物還包括合成或半合成的變型如US4, 851，521;4，965，353;和5，202，431中所述的透明質(zhì)酸和脂族、芳脂族、雜環(huán)、和環(huán)脂族醇的酯(例如，透明質(zhì)酸的芐酯或乙酯)。
[0076]本發(fā)明的組合物除共軛形式的透明質(zhì)酸外還包括游離形式的透明質(zhì)酸。以前已經(jīng)有使用游離透明質(zhì)酸的報道。現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以通過轉(zhuǎn)谷氨酰胺-介導(dǎo)的鍵合將透明質(zhì)酸連接到眼睛或其它受影響的表面上。該類連接延長了透明質(zhì)酸在眼睛(或其它受影響表面)上的存在時間，從而降低或完全消除了向該類表面上重復(fù)應(yīng)用透明質(zhì)酸的需要。因此，應(yīng)當(dāng)清楚的是，該組合物的治療益處主要是得自所存在的軛合的透明質(zhì)酸，其一旦被應(yīng)用到機(jī)體組織上，就會立即變得共價連附在該組織上。存在于組合物中的游離透明質(zhì)酸不會出現(xiàn)這種情況，這是因?yàn)橹耙呀?jīng)證明了游離透明質(zhì)酸僅具有有限的治療益處。
[0077]這里所用的術(shù)語“軛合物”既包括該連接分子直接連接到透明質(zhì)酸上又包括該連接分子間接連接到透明質(zhì)酸上。間接連接一般指的是在連接分子和透明質(zhì)酸之間存在一種間隔物(即，聯(lián)結(jié)子)。在這里對適宜的間隔物進(jìn)行了描述。
[0078]雖然不希望受到任何特定理論或機(jī)理的束縛，但透明質(zhì)酸是用于治療特征為干燥的病癥(非限制性地如干眼、口干燥和陰道干燥)的，這是因?yàn)槠淠茏鳛樵鰸駝┖?或濕潤劑。這里所用的增濕劑是一種可以形成膜從而可以捕獲水分子并防止或限制其蒸發(fā)程度的物質(zhì)。這里所用的濕潤劑是一種可以增加組織、表面或其它區(qū)域的水含量的物質(zhì)。透明質(zhì)酸在中性PH下通常荷負(fù)電，并且具有能吸引和保留水分子的親水性羥基。透明質(zhì)酸既可以形成膜又可以吸引和保留水分子。因此，其既可以作為增濕劑，又可以作為濕潤劑。
[0079]還已經(jīng)報道了透明質(zhì)酸可以抑制血小板聚集，其這種機(jī)理被用在本發(fā)明血管給藥制劑的實(shí)施方案中。
[0080]透明質(zhì)酸可以通過商業(yè)途徑獲得，并且其在以各種商標(biāo)名進(jìn)行銷售，包括Healon、Hyalastine、Hyalectin、Hyloran (透明質(zhì)酸鈉)、和 Hyaloftil (高分子量的透明質(zhì)酸)?；蛘?，如 US3, 396，081; 3, 862，003; 4，141，973 ; 4，517，296; 5，316，926; 6，090，596等等中所述的那樣，可以通過合成或通過由動物來源純化(如公雞冠，以Hyalform的形式商業(yè)銷售)或體外發(fā)酵(如細(xì)菌發(fā)酵，以Restylane的形式商業(yè)銷售)來獲得透明質(zhì)酸。
[0081]所用透明質(zhì)酸的長度對本發(fā)明而言并不關(guān)鍵，只要其長度足以將受影響的機(jī)體表面或組織水化即可。為此，在一些實(shí)施方案中，與較短的透明質(zhì)酸鏈(即，具有低于2000的分子量)相比，更優(yōu)選更長的透明質(zhì)酸鏈(即，具有高于100，000的分子量)，除非有一些該類較短的鏈被連接到連接分子上。在其中軛合物僅包含一個連接分子和一個透明質(zhì)酸鏈的情況中，至少為了將可以被保留的水分子數(shù)目最大化，優(yōu)選更長的透明質(zhì)酸鏈。生產(chǎn)或分離低和高分子量透明質(zhì)酸的方法是已知的并且已經(jīng)在US4，141, 973 (MW至少 750，000) ; 5，079, 236 (MW50, 000 至 200，000) ; 5，316，926 (MffI, 100, 000 至4，000，000) ; 5，925，626 (MW 在 50，000 至 100，000 之間;和在 500，000 至 730，000 之間);6，090，596 (MW 高于 6，000，000);和 6，194，392 (MW 在 150，000 至 750，000 之間)中進(jìn)行了報道。
[0082]透明質(zhì)酸鏈的長度將被稱為二糖單元的數(shù)目(各單元具有約401道爾頓的分子量)或該鏈的分子量。例如，分子量為200，000的透明質(zhì)酸鏈由498個二糖單體單元組成。在一些重要的實(shí)施方案中，該透明質(zhì)酸鏈具有高于50，000、高于60，000、高于75，000、高于100，000、高于150，000、和高于200，000的分子量。在另一些實(shí)施方案中，該透明質(zhì)酸可以具有高于300，000、高于400，000、高于500，000、高于600，000、高于700，000、高于800，000、高于900，000、和高于1，000，000的更高分子量。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，該透明質(zhì)酸是至少200，000、至少210，000、至少220，000、至少230，000、至少240，000、或至少250，000 。
[0083]在一些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的軛合物與游離透明質(zhì)酸一起提供給個體。這里所用的“游離”透明質(zhì)酸沒有與連接分子軛合。本發(fā)明并不依賴于透明質(zhì)酸與其特定受體(例如，CD44)的結(jié)合來獲得治療結(jié)果。而是一般通過直接給藥和轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶界介導(dǎo)的鍵合來控制透明質(zhì)酸向受影響部位的定位。本發(fā)明的方法并不需要透明質(zhì)酸與其受體的結(jié)合。存在的游離透明質(zhì)酸并不成問題，這是因?yàn)槠洳粫c軛合透明質(zhì)酸競爭結(jié)合同源受體，所以其不會降低所說軛合物的功效。此外，只要其包含足夠水平的內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶和轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物，不管其是否還表達(dá)透明質(zhì)酸受體，本發(fā)明的軛合物都可以連接到任何表面或組織上。
[0084]在一些實(shí)施方案中，使用以低于天然透明質(zhì)酸與透明質(zhì)酸受體親合力的親合力結(jié)合到透明質(zhì)酸受體上的透明質(zhì)酸衍生物(游離形式和/或軛合形式)。在一些實(shí)施方案中，其親合力比天然透明質(zhì)酸的結(jié)合親合力低2-倍、低5-倍、低10-倍、低20-倍、低50-倍、或低100-倍。
[0085]在一些實(shí)施方案中，組合物中游離透明質(zhì)酸與軛合透明質(zhì)酸的摩爾比為至少10、至少5、至少4、至少3.5、至少3、至少2.5、至少2、至少1.5、至少1.2、至少1、至少0.9、至少0.8、至少0.7、至少0.6、至少0.5、至少0.4、至少0.3、至少0.2、或至少0.1。在一些特定的實(shí)施方案中，游離透明質(zhì)酸與軛合透明質(zhì)酸的摩爾比高于1，優(yōu)選地高于1.5，并且更優(yōu)選地高于2。如這里所用的這樣，游離透明質(zhì)酸與軛合透明質(zhì)酸的摩爾比是未與連接分子軛合的透明質(zhì)酸(包括所有MW變型)的摩爾數(shù)和與連接分子軛合的透明質(zhì)酸(相同或不同麗的透明質(zhì)酸)的摩爾數(shù)的比例。因此，在一些實(shí)施方案中，游離透明質(zhì)酸的數(shù)量足以與軛合透明質(zhì)酸競爭與透明質(zhì)酸受體的結(jié)合。
[0086]本發(fā)明的連接分子是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物。因此，其具有脂族胺或甲酰胺，但是優(yōu)選地不會同時具有脂族胺或甲酰胺。優(yōu)選的連接分子是帶有多個是轉(zhuǎn)谷氨酰胺底物的反應(yīng)性甲酰胺和/或脂族胺的聚合物。是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物的包含甲酰胺的化合物是眾所周知的并且包括谷氨酰胺。是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物的脂族胺也是眾所周知的，并且在例如US5, 490，980給出了其實(shí)例，該專利文件的內(nèi)容在這里被引入作為參考。但是，與描述了單脂族胺部分的該’980專利不同，本發(fā)明在一方面包括使用多個脂族胺。該脂族胺(或多個脂族胺)可以是相連的，或者其可以以一定的離散間隔被間隔開，優(yōu)選地沿著分支或無分支聚合物的長度被間隔開。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)部分的間距對于將該軛合物連接到特定的機(jī)體組織上而言是很重要的。
[0087]一個實(shí)施方案包括是具有多個單元的聚合物的連接分子，各單元帶有是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物的脂族胺。該聚合物可以是均聚物或雜聚物。正如這里在涉及連接分子時所述的那樣，轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的聚脂族胺底物是一種具有至少三個沿著連接分子的骨架以離散間隔彼此間隔開的脂族胺的連接分子，所說的脂族胺被一個或多個骨架原子分離開。這是最易于想象的，例如，富含賴氨酸的聚合物，而聚合物的離散單元帶有脂族胺，其各自獨(dú)立地是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物。該連接分子本身可以是相連的賴氨酸的聚合物，優(yōu)選地是至少2、至少3、至少4、和至少5個或更多個該類相連賴氨酸的聚合物。優(yōu)選各自帶有脂族胺的相連單元的聚合物。在一些實(shí)施方案中，該連接分子可以具有少至兩個相連的賴氨基酸殘基，并且這些殘基優(yōu)選地位于該連接分子的任何一個末端上。
[0088]同樣地，其它重要的連接分子是具有多個單元的聚合物，各單元帶有轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性甲酰胺基團(tuán)。該聚合物可以是均聚物或雜聚物。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的聚甲酰胺底物是一種具有至少兩個沿著連接分子的骨架以離散間隔彼此間隔開的甲酰胺的連接分子，所說的甲酰胺被一個或多個骨架原子分離開。該類連接分子可以是相連甲酰胺的聚合物，優(yōu)選地是至少2、至少3、至少4、或至少5個或更多個相連甲酰胺的聚合物。在一些重要的實(shí)施方案中，該相連的甲酰胺位于所說連接分子的任何一個末端上。
[0089]最優(yōu)選的連接分子是富含甲酰胺部分或脂族胺部分的聚合物，如谷氨酰胺或賴氨酸、或谷氨酰胺和賴氨酸。富含甲酰胺的聚合物是一種其中其單元的至少20%是攜帶甲酰胺的單元的聚合物。富含脂族胺的聚合物是一種其中其單元的至少20%是攜帶脂族胺的單元的聚合物。因此，這些聚合物還包括這些具有至少30%、至少40%、至少50%、或更多其所定義的單元的物質(zhì)。富含谷氨酰胺或賴氨酸的聚合物是一種其單元的至少20%為谷氨酰胺或賴氨酸、或谷氨酰胺和賴氨酸的聚合物。富含甲酰胺或脂族胺的聚合物還可以是一種包括至少3，優(yōu)選4，并最優(yōu)選5或更多個獨(dú)立件并被規(guī)則距離的甲酰胺或脂族胺離散地間隔開的聚合物，如存在鄰接的連接到一起的谷氨酰胺或賴氨酸。但是，應(yīng)當(dāng)清楚地是，可以將少至兩個谷氨酰胺或賴氨酸連接或束縛到透明質(zhì)酸上以使其成為轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該連接分子和包含其的軛合物是內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物(即，其具有被內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷 氨酰胺酶作用的足夠的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性基團(tuán))。
[0090]其它優(yōu)選的連接分子是聚賴氨酸。聚賴氨酸包括聚-L-賴氨酸、聚-D-賴氨酸、和聚-DL-賴氨酸。另一種重要的連接分子是聚-谷氨酰胺。聚-谷氨酰胺包括聚-L-谷氨酰胺、聚-D-谷氨酰胺、和聚-DL-谷氨酰胺。
[0091]因此，該連接分子包括天然或衍生物形式的聚賴氨酸和聚谷氨酰胺。聚賴氨酸的一種天然形式是賴氨酸單體的聚合物。聚賴氨酸的衍生物形式是其中一種或多種單體可以被改性(化學(xué)改性或其它改性)的賴氨酸單體的聚合物。
[0092]在一些實(shí)施方案中，該排列分子是不能被蛋白酶水解的分子。這些后面所說的肽衍生物可包括不可水解的骨架變型。
[0093]所說連接分子的長度通常不受限制，本發(fā)明既可以使用短鏈連接分子又可以使用長鏈連接分子。因此，可以有效使用短至三個殘基(三個賴氨酸或三個谷氨酰胺)的連接分子。所說連接分子的分子量范圍為小于200Da至高于100，000Da，相應(yīng)殘基的數(shù)目取決于連接分子的組成。根據(jù)實(shí)施方案，該連接分子可以具有至少500、至少1000、至少5000、至少10，000、至少25，000、至少50，000、至少75，000、至少100，000或更高的分子量。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能根據(jù)連接分子的分子量以及其組成來確定所說連接分子單體單位的數(shù)目。實(shí)施例所用的連接分子具有181個賴氨酸殘基的平均長度，因此，其具有約23，000的平均分子量。
[0094]在一些重要的實(shí)施方案中，所說的連接分子是非絡(luò)合的，如果其是聚賴氨酸的話尤其如此?！胺墙j(luò)合的”連接分子指的是未與本發(fā)明的透明質(zhì)酸外的化合物、和/或鹽或載體溶液的氨基酸進(jìn)行連接的那些。在一些重要的實(shí)施方案中，非絡(luò)合的連接分子例如沒有與治療劑如藥物或核酸復(fù)合。已經(jīng)報道了聚賴氨酸能與核酸結(jié)合形成一種離子復(fù)合物。因?yàn)榫圪嚢彼嵩谥行訮H下荷正電荷，所以其傾向于與荷負(fù)電的物質(zhì)如核酸發(fā)生離子相互作用。但是，在本發(fā)明的一些方面，不打算用該軛合物來傳遞核酸，因此該類軛合物的連接分子是非絡(luò)合的。
[0095]連接分子如聚賴氨酸可以被維持在非絡(luò)合形式，例如可以通過控制鹽濃度和pH以消除聚賴氨酸和荷負(fù)電物質(zhì)(例如治療劑如藥物或核酸)之間的離子相互作用來將其維持為非絡(luò)合形式。例如，可以增加陰離子濃度以與荷負(fù)電物質(zhì)競爭與聚賴氨酸進(jìn)行的離子結(jié)合。在其它實(shí)施方案中，該軛合物可以以略微高滲的溶液的形式被提供，如其重量滲克分子濃度高于280m0sm。在其它實(shí)施方案中，該制劑的重量滲克分子濃度高于290m0sm、高于 300m0sm、高于 310m0sm、高于 320m0sm、高于 330m0sm、高于 340m0sm、高于 350m0sm、或更高?？梢杂萌魏嘻}(包括單價和二價鹽)、氨基酸或緩沖劑來調(diào)節(jié)該溶液的重量滲克分子濃度。
[0096]該連接分子還可以以包括其它物質(zhì)(非限制性地如精氨酸)的非絡(luò)合形式被提供。在一些實(shí)施方案中，這些物質(zhì)與賴氨酸單體單位競爭與透明質(zhì)酸的結(jié)合，從而防止了該軛合物的透明質(zhì)酸和聚賴氨酸組分之間形成離子復(fù)合物。因此，在一些重要的實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸和聚賴氨酸組分彼此之間不是離子絡(luò)合，而是彼此僅僅在共軛點(diǎn)相接觸(例如，其之間為共價鍵或二者都連接到一種間隔物分子上)。
[0097]在另一些實(shí)施方案中，因?yàn)樵撥椇衔锊粩y帶核酸分子，在該制劑中可以包括核酸酶如DNA酶和RNA酶。
[0098]重要的是必需有足夠數(shù)目的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性基團(tuán)(即，脂族胺或甲酰胺)來通過轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用與組織進(jìn)行反應(yīng)。因此，不能將所有的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性基團(tuán)都絡(luò)合，但是在一些情況中，少至2-3個轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性基團(tuán)就足以進(jìn)行轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶-介導(dǎo)的反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，所說的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性基團(tuán)可以存在于該聚合物的末端，而在一些其它 情況中其可以位于內(nèi)部。
[0099]該軛合物的結(jié)構(gòu)可以根據(jù)透明質(zhì)酸和連接分子而變化，前提是其具有足夠數(shù)目可獲得的氨基或甲酰胺反應(yīng)性基團(tuán)(以使其可以作為轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的底物)，和透明質(zhì)酸可以濕潤受影響的表面或組織。
[0100]就其最簡單的形式而言，該軛合物是透明質(zhì)酸和連接分子1:1的軛合物。即，該軛合物將包含彼此直接或間接連接的一條透明質(zhì)酸鏈和一條連接分子。
[0101]就更復(fù)雜的形式而言，該軛合物包含連接到單一連接分子上的數(shù)個透明質(zhì)酸鏈。透明質(zhì)酸可以在沿著該連接分子長度的相連部位上被連接到連接分子上，或者其可以以固定或隨機(jī)長度的分隔間隔被連接。在后一種實(shí)施方案中，該軛合物將是一種具有作為其骨架的連接分子和具有作為其接枝物的透明質(zhì)酸鏈的接枝共聚物。該連接分子骨架上的透明質(zhì)酸側(cè)鏈的長度、數(shù)目、和位置將影響需要被給藥以賦予治療益處的軛合物的數(shù)量。在一些實(shí)施方案中，可以將透明質(zhì)酸側(cè)鏈接枝到連接分子中幾乎每一個可獲得的反應(yīng)性基團(tuán)上，前提是必需可以獲得足夠的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性基團(tuán)以將該軛合物連接到受影響的機(jī)體組織或表面上。[0102]用于將該軛合物連接到受影響的表面上的位于連接分子上的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶反應(yīng)性基團(tuán)可以位于所說連接分子的末端，但是不是僅限于位于其末端。因此，在一個實(shí)施方案中，該反應(yīng)性基團(tuán)可以位于連接分子的中間，透明質(zhì)酸鏈在一個或兩個側(cè)面連接到其上。
[0103]還可以用透明質(zhì)酸接枝到連接分子上的程度來對該軛合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行描述。這里所用的接枝比率是表示透明質(zhì)酸二糖單體的數(shù)目與連接分子單體數(shù)目的比例。作為實(shí)例，分子量為220，000 (并包含約549個透明質(zhì)酸的二糖單位)的透明質(zhì)酸鏈的一個鏈與分子量為23，000 (并包含約181個賴氨酸殘基)的聚賴氨酸連接分子的軛合相當(dāng)于約3的接枝比(即，549/181)?？梢愿鶕?jù)被接枝到連接分子上的透明質(zhì)酸的數(shù)目和長度以及連接分子本身的長度來改變該接枝比。因此，根據(jù)該實(shí)施方案，接枝比可以從低于0.001到高于10000的范圍內(nèi)變化。在一些重要的實(shí)施方案中，該接枝比率為至少0.001、至少0.005、至少0.01、至少0.1、至少0.5、至少1、至少5、至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、至少95、至少100、至少250、至少500、至少750、至少1000、至少2500、至少5000、至少7500、和至少10000。應(yīng)當(dāng)注意到接枝比率本身不是透明質(zhì)酸和連接分子之間鍵合數(shù)的指示。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸二糖單位的數(shù)目高于連接分子亞單位(例如，賴氨酸殘基)的數(shù)目，因此，該比例高于I。 [0104]同樣可以用表達(dá)為百分比的每軛合物總重量的透明質(zhì)酸總重量比例(即透明質(zhì)酸和連接分子的重量)來對軛合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)性描述。這種重量比同樣在低于0.001至99.9%的范圍內(nèi)。在一些重要的實(shí)施方案中，該重量比為至少0.005%、至少0.01 %、至少0.1%、至少0.5%、至少I %、至少5%、至少10%、至少20%、至少30、至少40%、至少50%、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %、至少95 %、和至少99 %。在其中透明質(zhì)酸二糖單體的數(shù)目比連接分子單體(例如，賴氨酸殘基)的數(shù)目多的優(yōu)選實(shí)施方案中，該重量比優(yōu)選地高于90%。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該重量比高于90%、高于91 %、高于92%、聞于93%、聞于94%、聞于95%、聞于96%、聞于97%、聞于98%、聞于99%、聞于99.5%>和高于99.9%。因此，在一些重要的實(shí)施方案中，軛合物中連接分子的重量一般為10%或更低。
[0105]該軛合物的分子量還可以根據(jù)該軛合物的復(fù)合材料而變化。一種具有一個分子量為220，000的透明質(zhì)酸鏈和分子量為23，000的連接分子的實(shí)例性軛合物具有243，000的分子量。該軛合物的分子量可以在約50，000至高于10，000，000之間變化，優(yōu)選的范圍為75，000至I, 000，000，更優(yōu)選的范圍為100，000至500，000，并且更優(yōu)選的范圍為100，000至 300，000。
[0106]在另一種情況中，可以用透明質(zhì)酸(重量)與聚賴氨酸(重量)的比例(表示為百分比)來對該軛合物進(jìn)行描述。
[0107]還可以用其電荷比例(即，負(fù)電荷與正電荷比)來對該軛合物進(jìn)行描述。小于I的電荷比表明總體荷正電，而高于I的電荷比表明總體荷負(fù)電。在一些重要的實(shí)施方案中，該電荷比可以從高于I至高于10的范圍內(nèi)變化。在一些實(shí)施方案中，該電荷比可高于1、聞于2、聞于3、聞于4、聞于5、聞于6、聞于7、聞于8、聞于9、聞于10、聞于12、或更聞。在其它實(shí)施方案中，該電荷比的范圍為I至10，優(yōu)選地為2至8，更優(yōu)選地為3至7，并且更優(yōu)選地為4至6。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該軛合物在6.5至8的pH范圍內(nèi)總體荷負(fù)電。pH高于6.5時，透明質(zhì)酸將荷負(fù)電。在pH高于約8時，賴氨酸殘基變?yōu)殡姾芍行裕钦麄€軛合物將荷負(fù)電。對于包含聚-谷氨酰胺的軛合物而言，該軛合物在PH高于6.5時將總是荷負(fù)電，這是因?yàn)楣劝滨０窔埢鶠橹行噪姾伞?br> [0108]這里所用的軛合物指的是彼此通過任何化學(xué)或物理化學(xué)方法穩(wěn)定連接到一起的實(shí)體。重要的是該連接的性質(zhì)應(yīng)當(dāng)是其基本不會損害透明質(zhì)酸的效力或連接分子的底物活性的該類連接。在記住這些參數(shù)的情況下，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何連接，包括共價或非共價鍵。優(yōu)選共價鍵。該類手段和方法對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是眾所周知的。
[0109]在用聚賴氨酸作為連接分子的實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸和聚賴氨酸通過還原性胺化反應(yīng)被軛合到一起。實(shí)施例提供了形成聚賴氨酸和HA軛合物的實(shí)驗(yàn)方案。一般而言，透明質(zhì)酸的還原性末端與聚賴氨酸上的氨基殘基偶合從而形成一種希夫氏堿，然后將其還原成亞氨基鍵。在一種實(shí)驗(yàn)性方案中，透明質(zhì)酸和聚賴氨酸被溶解于一種溶劑如硼酸鹽(pH8.5)或磷酸鹽(pH8.3)緩沖劑中。向其中加入還原劑如氰基硼氫化鈉(NaB3HCN)并使該反應(yīng)在O至50°C的溫度下進(jìn)行I小時至5天。通過加入有機(jī)溶劑如二甲基甲酰胺或二甲基亞砜來對該反應(yīng)進(jìn)行控制。其可以通過防止透明質(zhì)酸和聚賴氨酸之間的離子相互作用來得到增強(qiáng)。可以通過加入鹽如氯化鈉或氯化鉀或者通過增加反應(yīng)溫度來減少該類離子相互作用。
[0110]在一些實(shí)施方案中，用于形成軛合物的起始材料的摩爾比為0.5:1至5:1的聚賴氨酸:透明質(zhì)酸。在一個重要的實(shí)施方案中，聚賴氨酸:透明質(zhì)酸的起始摩爾比為1.3:1。這些試劑的摩爾比可給出每個聚賴氨酸軛合較少(例如一個或兩個)透明質(zhì)酸鏈的軛合物。
[0111]在合成反應(yīng)結(jié)束時，可以將該溶液透析以除去未軛合的聚賴氨酸。但是，優(yōu)選地不除去未軛合的透明質(zhì)酸，因此，該分離是一種選擇性除去未軛合的聚賴氨酸而不是未軛合的透明質(zhì)酸的操作。例如，如 果所說的分離技術(shù)是透析，則對透析管的孔徑進(jìn)行選擇，從而使其可以允許進(jìn)行聚賴氨酸(具有例如23，000的MW)的運(yùn)轉(zhuǎn)而不允許進(jìn)行透明質(zhì)酸(具有例如至少100，000的MW)的運(yùn)轉(zhuǎn)。
[0112]在構(gòu)建軛合物時，其希望通過一種間隔物將該連接分子束縛到透明質(zhì)酸上。這可以消除例如可能由空間位阻所導(dǎo)致的任何問題，在所說的空間位阻所導(dǎo)致的問題中，轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶接近所說連接分子反應(yīng)性基團(tuán)的過程受到阻礙。這些間隔物可以是各種分子中的任何分子，優(yōu)選地是無活性的分子，如直鏈或甚至支鏈的飽和或不飽和的C1-C3tl碳鏈、磷脂、氨基酸(例如，甘氨酸)等等，其可以是天然存在或合成的。另外的間隔物包括烷基和鏈烯基碳酸酯、氨基甲酸酯、磷酸酯、和脲。這些物質(zhì)都相關(guān)并且可以為間隔物如上述C1-C3tl間隔物增加極性官能度。適宜的間隔物如附錄A中所提供的這些物質(zhì)，其可以通過商業(yè)途徑獲得，例如可得自Pierce Chemical Co。
[0113]這里所述的軛合或變型使用常規(guī)的化學(xué)過程，其是化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，因此不夠成本發(fā)明的一部分。在文獻(xiàn)中也已經(jīng)對使用保護(hù)基團(tuán)和已知聯(lián)結(jié)子如單-和異-雙官能聯(lián)結(jié)子進(jìn)行了描述，在這里不再重復(fù)敘述。
[0114]因此，本發(fā)明的連接不一定是直接連接?？梢詾楸景l(fā)明的組合物的組分提供官能化基團(tuán)以促進(jìn)其連接和/或可以在這些組合物的組分之間插入聯(lián)結(jié)子基團(tuán)以促進(jìn)其連接。此外，本發(fā)明組合物的組分可以在單一過程中被合成，從而使得這些組分可被看成一種和相同的實(shí)體。例如，可以將透明質(zhì)酸合成為在一個用于通過轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶連接多肽的末端包括聚谷氨酰胺。
[0115] 共價鍵的特定實(shí)例包括這些其中使用雙官能交聯(lián)劑分子的這些物質(zhì)。這些交聯(lián)劑分子可以是均-雙官能或異-雙官能的，其取決于被軛合分子的性質(zhì)。均-雙官能交聯(lián)劑具有兩個相同的反應(yīng)性基團(tuán)。異-雙官能交聯(lián)劑被定義為具有兩個使得可以連續(xù)進(jìn)行軛合反應(yīng)的不同的反應(yīng)性基團(tuán)?？梢酝ㄟ^商業(yè)途徑獲得的各種類型的交聯(lián)劑與一個或多個下面的基團(tuán)反應(yīng):伯胺、仲胺、巰基(sulphydryls)、羧基、羰基和碳水化合物。胺-特異性交聯(lián)劑的實(shí)例有二(磺基琥珀酰亞氨基)辛二酸酯、二 [2-(琥珀酰亞胺氧基羰氧基)乙基]砜、辛二酸二琥珀酰亞胺酯、酒石酸二琥珀酰亞胺酯、己二酸二甲酯-2HC1、di甲基 pimelimidate_2HCl、di 甲基 suberimidate_2HCl、和乙二醇二 -[玻拍酸亞氨基-[玻珀酸酯]]。與巰基反應(yīng)的交聯(lián)劑包括二馬來酰亞氨基己烷、1，4- 二 _[3’ _(2’ -吡啶基二硫基)_丙酰氨基]]丁烷、1_[對-疊氮基水楊酰氨基]-4-[碘乙酰氨基]丁烷、和N-[4-(對-疊氮基水楊酰氨基)丁基]_3’_[2’_吡啶基二硫基]丙酰胺。優(yōu)選地與碳水化合物反應(yīng)的交聯(lián)劑包括疊氮基苯甲?；?。優(yōu)選地與羧基反應(yīng)的交聯(lián)劑包括4-[對-疊氮基水楊酰氨基]丁胺。與胺和巰基反應(yīng)的異雙官能交聯(lián)劑包括N-琥珀酰亞氨基-3-[2-吡啶基二硫基]丙酸酯、琥珀酰亞氨基[4-碘乙?；鵠氨基苯甲酸酯、琥珀酰亞氨基4-[N-馬來酰亞氨基甲基]環(huán)己烷-1-甲酸酯、間-馬來酰亞氨基苯甲?；?N-羥基琥珀酰亞胺酯、磺基琥珀酰亞氨基6-[3-[2_吡啶基二硫基]丙酰氨基]己酸酯、和磺基琥珀酰亞氨基4-[N-馬來酰亞氨基甲基]環(huán)己烷-1-甲酸酯。與羧基和胺反應(yīng)的異雙官能交聯(lián)劑包括1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]-碳二亞胺鹽酸鹽。與碳水化合物和巰基反應(yīng)的異雙官能交聯(lián)劑包括4-[N-馬來酰亞氨基甲基]-環(huán)己烷-1-羧基酰肼? 2HCl、4-(4-N-馬來酰亞氨基苯基)丁酸酰肼CHCl、和3-[2_吡啶基二硫基]丙酰基酰肼。該交聯(lián)劑是二-[(6-4-疊氮基水楊酰氨基]乙基]二硫化物和戊二醛?？梢栽诤铣珊怂岬娜魏魏塑账嵘霞由习被蛄虼蓟鶊F(tuán)從而為雙官能交聯(lián)劑分子提供一種連接點(diǎn)?？梢院铣苫烊肽芄曹椩噭┑暮怂幔f的試劑如Un1-Link氨基改性劑、3’ -DMT-C6-胺-ON CPG、氨基改性劑I1、N-TFA-C6-氨基改性劑、C6-硫醇改性劑、C6- 二硫化物氨基磷酸酯和C6- 二硫化物CPG(Clontech，PaloAlto, CA)。
[0116]用于將透明質(zhì)酸軛合到本發(fā)明的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物上的其它聯(lián)結(jié)子包括US5, 342，770中所述的肽聯(lián)結(jié)子。在US6，303，555B1 (例如具有4_6個碳原子的羧酸、或乙氧基化的多羥基醇、或聚乙烯吡咯烷酮、或MW6000-10，000的聚乙二醇)、US5，952，454(用于將葡萄糖基供體軛合到包含胺的載體上的間隔物)、US6，361，777B1 (氨基硫醇聯(lián)結(jié)子)、US4, 680，338 (雙官能聯(lián)結(jié)子)、US5，034，514等等中對其它化學(xué)聯(lián)結(jié)子組合物進(jìn)行了描述。
[0117]在一些實(shí)施方案中，希望用一種可以在正常生理學(xué)條件下裂解或在使用刺激物如光時被特定裂解的鍵將透明質(zhì)酸連接到該連接分子上，從而使得該物質(zhì)可以被釋放。在某些實(shí)施方案中，透明質(zhì)酸在其軛合形式下是無活性的，并且僅當(dāng)其被釋放時才有活性。在其它情況中，將從遠(yuǎn)離其與機(jī)體組織的連接點(diǎn)的地方釋放透明質(zhì)酸從而使其發(fā)揮活性。在另外一些情況中，將以緩釋方式釋放透明質(zhì)酸，從而與應(yīng)用到皮膚上但是不與其共價結(jié)合的透明質(zhì)酸相比，可以延長透明質(zhì)酸的釋放。易于裂解的鍵包括易于水解的鍵，例如，酯鍵、酰胺鍵和希夫氏堿-型鍵。眾所周知的是這些鍵可以被光裂解。在另一些實(shí)施方案中，可裂解的鍵可以是連接分子的單體單位之間的肽鍵本身。該類鍵可以被蛋白酶如胰蛋白酶裂解，根據(jù)受影響的組織，其可以在各種濃度的溶液中進(jìn)行應(yīng)用。
[0118]還可以使用非共價軛合的方法。非共價軛合包括疏水性相互作用、離子相互作用、高親合力的相互作用如生物素-抗生物素蛋白和生物素-抗生物素蛋白鏈菌素絡(luò)合作用和其它親合力的相互作用。在一個實(shí)施方案中，將一種分子如抗生物素蛋白連接到連接分子如聚谷氨酰胺上。一旦根據(jù)本發(fā)明被連接到組織上，這種軛合物將變成用于被連接到生物素分子上的任何物質(zhì)的通用連接部分。
[0119]該連接分子可以是微粒如微球或毫微球的一部分，并且透明質(zhì)酸可以被包含在微粒中，可以被物理包埋在其中、共價結(jié)合到其上或者物理化學(xué)地連接到微球上。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的微球或毫微球至少在其表面上攜帶著富含谷氨酰胺、賴氨酸、或谷氨酰胺和賴氨酸的聚合物。在文獻(xiàn)中已經(jīng)對制造微粒的方法進(jìn)行了描述并且不構(gòu)成本發(fā)明的基礎(chǔ)。本發(fā)明僅僅在微粒結(jié)構(gòu)本身的聚合物方面與現(xiàn)有技術(shù)不同，該聚合物包含或被衍生化成包含谷氨酰胺和/或賴氨酸、或者谷氨酰胺、賴氨酸的聚合物、或者谷氨酰胺和賴氨酸被包含在形成基質(zhì)的聚合物混合物中，從而使得該類聚合物被包埋在微粒中和/或位于該微粒的表面上。在 US5, 075，019、PCT W095/24929、PCT W094/23738 和 PCT/US96/11990 中可以發(fā)現(xiàn)微球和毫微球以及其制造方法的實(shí)例，所公開內(nèi)容引入作為參考。
[0120]在本發(fā)明的另一個方面，用具有任何數(shù)目聯(lián)結(jié)子分子的透明質(zhì)酸軛合物，包括這里所列舉的和現(xiàn)有技術(shù)中公知的這些物質(zhì)來將各種治療劑傳遞到機(jī)體組織或表面上。在一些重要的實(shí)施方案中，所說的聯(lián)結(jié)子是這里所列舉的包含脂族胺和甲酰胺的聯(lián)結(jié)子。在本發(fā)明的這一方面，用透明質(zhì)酸作為治療劑的載體分子，并且可以賦予透明質(zhì)酸本身治療益處或者可以不賦予其治療益處。在US6，267，957B1中公開了其它的聯(lián)結(jié)子分子。該專利的全部內(nèi)容在這里都被引入作為參考。該專利還公開了可以通過透明質(zhì)酸進(jìn)行給藥的各種治療劑?？梢允褂玫闹委焺┑膶?shí) 例包括腎上腺素能藥；腎上腺皮質(zhì)類固醇；腎上腺皮質(zhì)抑制劑；醇抑制劑；醛固酮拮抗劑；氨基酸；氨解毒劑；組織代謝劑；興奮劑；止痛劑；雄激素；麻醉助劑；麻醉劑；減食欲物質(zhì)；拮抗劑；垂體前葉抑制劑；驅(qū)蟲藥；抗痤瘡藥；抗腎上腺素能；抗變應(yīng)性藥；抗阿米巴蟲藥；抗雄激素物質(zhì)；抗貧血藥；抗心絞痛藥；抗焦慮藥；抗關(guān)節(jié)炎藥；止喘藥；抗動脈粥樣硬化藥；抗菌劑；anticholelithic;抗膽結(jié)石藥；抗膽堿能藥；抗凝劑；anticoccidal;抗驚厥藥；抗抑郁劑；治療糖尿病的藥；止灣劑；制尿劑；解毒劑；止吐劑；抗癲癇劑；抗雌激素藥；抗纖維蛋白溶解劑；殺真菌劑；治療青光眼的物質(zhì)；抗血友病藥；抗出血藥；抗組胺藥；抗高血脂藥；抗高脂蛋白血藥；抗高血壓藥；抗低血壓藥；抗感染藥；局部抗感染藥；抗炎藥；抗角質(zhì)化劑；抗痕藥；抗菌劑；抗偏頭痛藥；抗有絲分裂藥；抗真菌藥、止惡心藥、抗腫瘤藥、抗中性白細(xì)胞減少藥、抗肥胖藥(antiobessional agent);抗寄生蟲劑；抗震顫麻痹藥；抗螺動藥、抗肺囊蟲藥；抗增殖劑；抗前列腺肥大藥；抗原生動物劑；止癢劑；安定藥；抗風(fēng)濕劑；抗血吸蟲劑；抗皮脂溢劑；抗分泌劑；解痙劑；抗血栓形成藥；鎮(zhèn)咳劑；抗?jié)兯帲豢鼓蚴?；抗病毒藥；食欲抑制劑；良性前列腺肥大治療劑；血糖調(diào)節(jié)劑；骨吸收抑制劑；支氣管擴(kuò)張藥；碳酸酐酶抑制劑；心臟抑制藥；保心藥；強(qiáng)心劑；心血管藥；利膽劑；膽堿能藥物；膽堿能激動劑；膽堿酯酶滅活劑；抗球蟲藥；認(rèn)識助劑；認(rèn)識增強(qiáng)劑；抑制劑；診斷輔助藥；利尿劑；多巴胺能藥；殺外寄生蟲藥；催吐藥；酶抑制劑；雌激素；溶纖維蛋白藥；熒光劑；氧自由基清除劑；胃腸蠕動效應(yīng)器；糖皮質(zhì)激素；促性腺物質(zhì)；毛發(fā)生長刺激劑；止血劑；組胺H2受體拮抗劑；激素；膽固醇降低劑；降血糖藥；降血脂藥；低血壓藥；顯像劑；免疫劑；免疫調(diào)節(jié)劑；免疫調(diào)節(jié)藥；免疫促進(jìn)劑；免疫抑制劑；性無能治療輔助劑；抑制劑；溶角蛋白劑；LNRH激動劑；肝病治療劑；黃體溶解素；記憶力佐劑；精神行為增強(qiáng)劑；情緒調(diào)節(jié)劑；粘液溶解藥；粘膜保護(hù)劑；散瞳藥；鼻粘膜減充血劑；神經(jīng)肌肉阻滯劑；神經(jīng)保護(hù)劑；NMDA拮抗劑；非激素留醇衍生物；催產(chǎn)劑；纖維蛋白酶原激活劑；血小板活化因子拮抗劑；血小板聚集抑制劑；中風(fēng)后和頭部損傷后治療；強(qiáng)化因子；孕激素；前列腺素；前列腺生長抑制劑；pro thyrotropin;精神藥物；肺面；放射性試劑；調(diào)節(jié)劑；松弛藥；再分配劑；殺芥螨藥；硬化劑；鎮(zhèn)靜劑；鎮(zhèn)靜劑-安眠劑；選擇性腺苷Al拮抗劑；血清素拮抗劑；血清素抑制劑；血清素受體拮抗劑；類固醇；興奮劑；抑制劑；癥狀性多發(fā)性硬化；增效劑；甲狀腺激素；甲狀腺抑制劑；擬甲狀腺藥；鎮(zhèn)定藥；肌萎縮性側(cè)索硬化的治療；腦局部出血的治療；佩吉特氏病的治療；不穩(wěn)定的絞痛的治療；排尿酸藥；血管收縮藥；血管舒張藥；創(chuàng)傷藥；傷口愈合藥；黃嘌呤氧化酶抑制劑。
[0121]正如對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的那樣，這些后面所說的其中用透明質(zhì)酸作為其它治療劑的載體的軛合物可用于對需要該類治療的個體進(jìn)行治療或預(yù)防的方法中。確定將從使用該類物質(zhì)獲益的個體是醫(yī)學(xué)從業(yè)者的領(lǐng)域。
[0122]本發(fā)明的方法可用于治療這里所述的特定病癥或癥狀或有出現(xiàn)這些病癥或癥狀風(fēng)險的個體的許多方法中。在患病時，患有該類病癥的個體是由醫(yī)學(xué)從業(yè)者診斷或患者自我診斷已經(jīng)確診的個體。該類診斷可以以個體所經(jīng)歷的癥狀為基礎(chǔ)或者可以以實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)為基礎(chǔ)。有患病風(fēng)險的個體是由于環(huán)境、行為或基因因素而可能形成該病癥的個體。對于患病個體的病癥或情況進(jìn)行治療，而對有患病風(fēng)險的個體進(jìn)行預(yù)防。
[0123]該化合物可用于治療或預(yù)防許多病癥，包括那些特征為干燥的病癥。特征為干燥的病癥是一種其中個體經(jīng)歷組織或機(jī)體組織如眼睛或嘴缺乏水分或潤滑的病癥。應(yīng)當(dāng)清楚的是，特征為干燥的病癥可以影響機(jī)體的任何區(qū)域，既可以是內(nèi)部區(qū)域也可以是外部區(qū)域。可以用這里所提供的方法治療的情況的實(shí)例包括干眼、口干燥、干性皮膚(例如，皺紋)、陰道腔干燥等等。該化合物可用于治療和/或預(yù)防以前已經(jīng)報道過的可以用透明質(zhì)酸有益進(jìn)行治療或預(yù)防的任何病癥。以前已經(jīng)對該類病癥進(jìn)行過描述并且其對于一般醫(yī)學(xué)從業(yè)者而言也是公知的
[0124]可以用這里所述的組合物治療的皮膚病癥包括褥瘡、營養(yǎng)不良性潰瘍、燒傷、無痛傷、創(chuàng)傷后潰瘍、靜脈曲張性潰瘍和靜脈炎后潰瘍、放射后壞死、皮膚損害如由單純皰疹病毒誘導(dǎo)的這些皮膚損害和皮膚移植物。在這些實(shí)施方案中，可以用紗布墊、乳膏、噴霧形式將該組合物給藥并且其可以包括乳化劑?？砂诰植恐苿┲械钠渌镔|(zhì)包括甘露醇、聚乙二醇、油酸、甘油、山梨醇，對-羥甲基苯甲酸酯、石蠟?zāi)z、和甘氨酸。
[0125]可以用本發(fā)明的化合物治療的其它病癥包括呼吸病癥如肺氣腫、慢性支氣管炎、哮喘、肺水腫、急性呼吸窘迫綜合征、支氣管肺發(fā)育不良、肺纖維化、和肺不張。對于這些病癥而言，該組合物可以被氣管內(nèi)給藥，包括通過氣霧劑、噴霧器、或滴劑來進(jìn)行給藥。
[0126]間質(zhì)性膀胱炎是可以用本發(fā)明的組合物治療的另一種病癥?；加虚g質(zhì)性膀胱炎的個體具有諸如尿急和排尿頻率增加、可以通過排尿緩解的恥骨弓上性疼痛、關(guān)節(jié)炎、痙攣性結(jié)腸和低度發(fā)熱之類的癥狀。該組合物優(yōu)選地被直接滴注到膀胱和/或相關(guān)的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)中，例如用導(dǎo)管來進(jìn)行滴注。被滴注的體積可以為5ml至100ml，更優(yōu)選地為20ml至70ml。還可以使用經(jīng)腹壁給藥。
[0127]該化合物還可用于經(jīng)歷關(guān)節(jié)不適的個體。經(jīng)歷關(guān)節(jié)不適的個體是關(guān)節(jié)如膝關(guān)節(jié)和臂關(guān)節(jié)出現(xiàn)不適或疼痛的個體。這種不適最常出現(xiàn)在需要進(jìn)行關(guān)節(jié)彎曲的活動中，并且伴有該類關(guān)節(jié)的活動性不足。其常常是關(guān)節(jié)炎的表現(xiàn)。以這種方式進(jìn)行治療的個體包括這些患有關(guān)節(jié)病癥或者有形成關(guān)節(jié)病癥風(fēng)險的個體，所說的關(guān)節(jié)病癥如骨關(guān)節(jié)炎、急性或慢性滑膜炎(synoritis)、關(guān)節(jié)軟骨的變性過程、和慢性絨毛性關(guān)節(jié)炎疾病。這些情況通常伴有的癥狀包括疼痛和關(guān)節(jié)功能受損。在這些實(shí)施方案中，所說的組合物可以以關(guān)節(jié)內(nèi)注射的形式被給藥。該類組合物可包含膠原、蛋白多糖、糖胺聚糖、糖蛋白、硫酸灰分、白蛋白、和防腐劑如苯甲酸鈉、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯?？梢韵驒C(jī)體的任何關(guān)節(jié)進(jìn)行注射，非限制性地包括心皮、球節(jié)、蹄槽、或脛骨關(guān)節(jié)、跗骨或跗趾骨關(guān)節(jié)、股脛關(guān)節(jié)的內(nèi)側(cè)囊、或股髕骨關(guān)節(jié)。治療或預(yù)防關(guān)節(jié)病癥的方法特別適用于動物如賽馬。
[0128]所說的化合物還可用于患有過度凝血的患者或形成血塊風(fēng)險升高的個體、具有不利的心血管情況或有出現(xiàn)不利心血管情況風(fēng)險的個體。這些個體之前存在血塊或者由于環(huán)境、行為(例如飲食)或基因因素而傾向于形成血塊。形成血塊的風(fēng)險升高是風(fēng)險高于正常個體群體風(fēng)險的情況。過度凝血是不適當(dāng)?shù)匕l(fā)生凝血，其比正常個體群體所經(jīng)歷的凝血更頻繁或更嚴(yán)重。通常用靜脈內(nèi)或動脈內(nèi)醫(yī)學(xué)裝置如斯滕特固定?；驓饽已艹尚涡g(shù)來給個體使用本發(fā)明的化合物?？梢詫⑺f的化合物涂布到醫(yī)學(xué)裝置上或者可以通過推注或連續(xù)注射來將其進(jìn)行給藥。因此，這里所提供的組合物可用于預(yù)防再狹窄?；蛘?，將任選地與游離透明質(zhì)酸一起使用的軛合物可用于導(dǎo)向通道、旁路、人工靜脈、分流器、以及用于心血管系統(tǒng)的其它生物材料的制備。
[0129]在一些實(shí)施方案中，以具有另一種治療劑的治療制劑形式將組合物用于機(jī)體組織或表面上。已知透明質(zhì)酸可透過組織，因此可用于增加機(jī)體組織對另外的制劑的接受性。所治療的組織可以是正常灌注或由于病理學(xué)狀態(tài)而灌注不足的這些組織。
[0130]這里所提供的組合物可用于治療患有干眼或口干燥的個體，但是其應(yīng)用不僅限于此。干眼可能是由許多基礎(chǔ)情況導(dǎo)致的，所說的基礎(chǔ)情況非限制性地包括損害分泌眼淚的(即產(chǎn)生眼淚的)腺體的自身免疫性 病癥，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、斯耶格倫綜合征、和系統(tǒng)性紅斑狼瘡、以及系統(tǒng)性硬化癥和肉樣瘤病。這些個體中的許多個體形成眼淚的能力下降。被診斷為患有眼睛(包括角膜和/或結(jié)膜)干燥的個體適于用這里所述的治療方法進(jìn)行治療。這些個體通常陳述眼睛感到輕度不適或嚴(yán)重疼痛、視力模糊、沙礫感和/或灼燒感、和瘙癢，并且可能出現(xiàn)角膜潰瘍和/或瘢痕化。
[0131]本發(fā)明還提供了治療患有口干燥的個體的方法?？?即口腔)干燥可能是由壓力、基礎(chǔ)性情況(如斯耶格倫綜合征和系統(tǒng)性硬化癥、分泌唾液的(即產(chǎn)生唾液的)腺體的感染)、使用特定的藥物(如抗膽堿能藥、利尿劑、抗組胺藥、可樂定、左旋多巴、甲基多巴、和三環(huán)抗抑郁劑)、或進(jìn)行放療所導(dǎo)致的?？诟稍锏膫€體通常抱怨吞咽和說話困難和痛苦、味覺受到干擾，并且在一些情況中會出現(xiàn)牙齒腐蝕。由于激素改變，干眼在絕經(jīng)后的婦女中也很常見。
[0132]除緩解干眼和口干燥癥狀外，本發(fā)明的透明質(zhì)酸軛合物還可用于其中需要在組織或表面上維持一定水平的濕度和水分的其它情況。實(shí)例包括眼內(nèi)手術(shù)如白內(nèi)障的切除、眼內(nèi)晶狀體植入和角膜成形術(shù)。[0133]該組合物還可用于緩解其它粘膜組織(例如陰道、直腸、鼻、肛門等等)以及外部組織(例如頭發(fā)、指甲、嘴唇等等)干燥的癥狀。
[0134]在另一些實(shí)施方案中，該軛合物被用于有血小板凝固異常風(fēng)險的個體，這是因?yàn)橐呀?jīng)報道了透明質(zhì)酸可以抑制血小板聚集。該類個體可以是經(jīng)歷侵入性過程如放置斯滕特固定模或氣囊血管成形術(shù)的這些個體，并且本發(fā)明的軛合物可以用這些裝置進(jìn)行給藥，但是給藥并不僅限于這種形式的給藥。
[0135]應(yīng)當(dāng)清楚的是，所提供的組合物可用于治療性方法以及預(yù)防性方法中。當(dāng)用于治療應(yīng)用時，將用該軛合物來緩解個體已經(jīng)存在的癥狀，因此，可以在患者提出出現(xiàn)癥狀后使用。當(dāng)用于治療應(yīng)用時，將用該化合物來防止正在從事或?qū)氖乱阎獣斐稍擃惏Y狀的活動的個體出現(xiàn)癥狀或延遲癥狀的開始。這些活動在干眼的情況中包括例如過度閱讀、過度使用計算機(jī)、并且甚至是可能長期使用隱形眼鏡。
[0136]“個體”指的是人或脊椎動物，非限制性地包括狗、貓、馬、牛、豬、綿羊、山羊、雞、靈
長目動物例如猴、魚(水產(chǎn)養(yǎng)殖種類)例如鮭魚、大鼠、和小鼠。
[0137]本發(fā)明的組合物以有效量來進(jìn)行給藥。術(shù)語“有效量”指的是必需或足以實(shí)現(xiàn)所需生理學(xué)作用的量。例如，如果對患者的該類癥狀進(jìn)行治療，包含透明質(zhì)酸的軛合物的有效量是降低或消除干眼癥狀所必需的數(shù)量。如果被治療的個體是患有或懷疑患有口干燥的個體，則有效量是降低或消除口干燥癥狀所必需的量。這里所用的術(shù)語“治療”指的是降低或完全消除癥狀，非限制性地如與干眼或口干燥有關(guān)的這些癥狀。作為實(shí)例，如果在治療后干眼癥狀的嚴(yán)重程度降低或頻率減少或者被完全消除，則在治療前出現(xiàn)干眼癥狀的個體將被“治療”。在這里對與干眼或口干燥有關(guān)的癥狀進(jìn)行了描述。
[0138]結(jié)合這里所提供 的教導(dǎo)，通過對各種軛合物結(jié)構(gòu)和權(quán)重因子如功效、相對生物利用度、患者體重、不利副作用的嚴(yán)重程度和優(yōu)選的給藥模式、以及計劃進(jìn)行的基本不會造成毒性或刺激性的有效的預(yù)防或治療性處理方案進(jìn)行選擇，可以徹底有效地對特定的個體進(jìn)行治療。
[0139]用于任何特定應(yīng)用的有效劑量可以根據(jù)諸如被治療的疾病或情況或被緩解的癥狀、被給藥的特定軛合物、個體的大小、或疾病、情況或癥狀的嚴(yán)重程度之類的因素來進(jìn)行變化。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以在不必進(jìn)行試驗(yàn)的情況下根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來確定特定軛合物的有效量。
[0140]軛合物的有效量還將取決于軛合物的準(zhǔn)確性質(zhì)，非限制性地包括透明質(zhì)酸與連接分子的比例、以及透明質(zhì)酸和連接分子的長度或分子量。當(dāng)以游離形式應(yīng)用時，已經(jīng)以0.1%溶液(w/v)(即，lmg/ml)的形式將透明質(zhì)酸鈉給藥到眼睛上。但是，考慮到本發(fā)明的透明質(zhì)酸可以通過連接分子被連接到眼睛表面上的能力，其認(rèn)為本發(fā)明制劑中需要較低數(shù)量的透明質(zhì)酸。該劑型每個劑量優(yōu)選地將效力與0.1%透明質(zhì)酸溶液相當(dāng)?shù)能椇衔飻?shù)量進(jìn)行給藥。通常建議該軛合物應(yīng)被制備為如果應(yīng)用到眼睛上時每次給藥可以傳遞至少50 y g透明質(zhì)酸，并且如果用于口腔時每次給藥可以傳遞至少Img透明質(zhì)酸。用于口部給藥的制劑應(yīng)當(dāng)比用于眼睛上的這些制劑的濃度更高，這是因?yàn)榭谇恢斜恢委煹拿娣e更大。
[0141]這里所述化合物的個體劑量一般為約0.0Olmg/天至16，OOOmg/天，更典型地為約0.05mg/天至8000mg/天，并且最典型地為約0.1mg/天至4000mg/天。在用個體體重進(jìn)行表述時(假定平均體重為80kg)，典型的劑量范圍為約0.00001至200mg/kg/天，更典型地為約0.0006至100mg/kg/天，并且最典型地為約0.001至50mg/kg/天。
[0142]同樣，被傳遞軛合物的體積將根據(jù)給藥部位而變化。如果被傳遞到眼睛中，則該體積優(yōu)選地小于2ml、小于lml、小于0.5ml、小于0.25ml、小于0.lml、小于0.05ml、小于0.025ml、或更低。如果被傳遞到口腔中，則該體積可以更大，特別是如果該軛合物是在大體積制劑如漱口劑中被傳遞時更是如此?；蛘?，如果該軛合物以噴霧劑的形式被傳遞到口腔中，則該體積將可以是眼睛給藥體積的規(guī)模。
[0143]可以以任何方式將該軛合物給藥于個體，但是，優(yōu)選的方式與被治療的情況和癥狀有關(guān)。例如，當(dāng)用于治療干眼癥狀時，該軛合物被給藥于眼睛。當(dāng)用來治療口干燥癥狀時，該軛合物被給藥到口腔中。當(dāng)被口給藥時，該軛合物將被直接傳遞到口腔中(在一些情況中包括咽喉區(qū)域)而不是被傳遞到胃或胃腸道的其它區(qū)域中。其它給藥途徑非限制性地包括鼻內(nèi)給藥、氣管內(nèi)給藥、吸入給藥、陰道給藥、直腸給藥、局部給藥、關(guān)節(jié)內(nèi)給藥、和靜脈內(nèi)給藥。 [0144]根據(jù)病癥和給藥方式，該化合物將在不同的容器、基質(zhì)或制劑中被提供。例如，并如這里更詳細(xì)描述的那樣，對用于口部應(yīng)用而言，該化合物可以以舌下片、橡皮糖、漱口劑、牙膏、糖果、凝膠、薄膜等等形式被給藥；對于眼睛應(yīng)用而言，可以為滴眼管中的滴眼劑、目艮睛軟膏、眼睛凝膠、眼睛填塞物、隱形眼鏡或眼內(nèi)透鏡上的涂層的形式、隱形眼鏡儲存中的溶液或清洗溶液等等形式；對于局部應(yīng)用而言，可以為洗劑、軟膏、凝膠、乳膏、噴霧、薄織物、藥簽、擦拭物等等形式；對于關(guān)節(jié)內(nèi)給藥而言，可以為關(guān)節(jié)內(nèi)傳遞的可注射溶液等等形式；對于血管應(yīng)用而言，可以為位于醫(yī)學(xué)裝置上的涂層、可注射溶液等等形式；對于陰道或直腸應(yīng)用而言，可以為軟膏、塞子、栓劑、粘膜粘著制劑等等形式。
[0145]本發(fā)明的軛合物可以以各種適于眼睛給藥的組合物和物理形式給藥于患有干眼的個體。用于眼睛給藥的組合物必需可以與眼睛的環(huán)境相容，至少在pH、鹽組分和濃度方面與之相容。這些組合物不應(yīng)當(dāng)刺激眼睛。
[0146]可以以各種物理形式給藥于眼睛的組合物非限制性地包括液體溶液、眼用軟膏或凝膠、或眼睛填塞物如棉拭子。液體溶液方便地在滴眼管的幫助下被給藥并且可以在滴眼管瓶中被提供。
[0147]滴眼管瓶是一種包括用于從容器中取出液體的滴眼管的容器。其可以是玻璃或塑料的，并且其大小可以根據(jù)液體體積以及其保存期的不同而不同。不包含防腐劑如眼用防腐劑的溶液的保存期一般較短，因此，通常被制備成較小體積。因此，在一些重要的實(shí)施方案中，該組合物是在包含最多0.5ml體積或5.0ml體積的滴眼管小瓶中被提供的。后面的這些實(shí)施方案相當(dāng)于單次應(yīng)用或單周應(yīng)用單位，并且其任選地不包含眼用防腐劑?？梢栽谠噭┖兄刑峁┒鄠€該類體積的瓶(例如，用吹-填-封方法制備的小瓶)，所說的試劑盒可任選地包含一種外殼如盒或袋、或襯墊如薄板紙或塑料襯墊。如這里所述的這樣，所說的試劑盒可以包含用于說明組合物的應(yīng)用的使用說明，如此處所概括。
[0148]該組合物還可以在常用于眼睛護(hù)理并且可以通過商業(yè)途徑獲得的溶液中被提供。例如，可以將該組合物與隱形眼鏡溶液，如隱形眼鏡清潔液、隱形眼鏡儲存液、或用于隱形眼鏡佩戴者的滴眼劑混合在一起。隱形眼鏡溶液在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的并且通常指的是用于儲存或清潔隱形眼鏡的溶液、或隱形眼鏡佩戴者所用的溶液如滴眼劑或人工淚液制劑。當(dāng)一起被提供給隱形眼鏡佩戴者時，該組合物可以降低角膜和隱形眼鏡之間的摩擦。該組合物還可以以薄膜的形式被提供，并且該類膜可以被涂布到隱形眼鏡上，例如，可以由隱形眼鏡制造商將其涂布到隱形眼鏡上，以在沒有干眼或眼睛刺激的情況下延長隱形眼鏡的使用。同樣，該組合物可以被包含在隱形眼鏡被商品化地提供在其中的溶液中。[0149]該組合物同樣可以被制備成眼用凝膠或軟膏的形式，如現(xiàn)有技術(shù)中公知的這些形式。
[0150]用于眼睛給藥的組合物可以包含在眼用溶液、凝膠等等中已經(jīng)描述過或者已知存在于眼淚中的其它物質(zhì)。一個實(shí)例是已知存在于眼淚中的溶菌酶。
[0151]在一些涉及眼睛給藥的實(shí)施方案中，可以對該組合物進(jìn)行處理以消除顏色(從而使得該溶液澄清無色)。或者，希望為該組合物增加顏色或改變其顏色，特別是如果用顏色來確認(rèn)該組合物是傳遞到眼睛的組合物時更是如此。
[0152]在一些實(shí)施方案中，眼用組合物不包含防腐劑，而是過濾滅菌(例如，用0.22iim濾器過濾)并將其以單次應(yīng)用量進(jìn)行包裝。因此，在一些情況中，本發(fā)明的組合物可以被制備和/或包裝成使用量的單位。使用量的單位是一次給藥或一天給藥、一周給藥、一個月給藥或一段更長時間給藥所需的數(shù)量。使用數(shù)量的單位優(yōu)選地是一次給藥或最多幾天給藥(但是小于一周)所需的數(shù)量。用單位使用包裝來防止溶液的污染，這是因?yàn)槠錅p少了個體必需接觸溶液的次數(shù)。
[0153]本發(fā)明的軛合物同樣可以以用于口部和頰給藥的各種組合物和物理形式被給藥于患有口干燥的個體。術(shù)語“口部”和“頰”在這里可以互換使用，指的是口部，包括嘴唇、牙齒、口腔、舌頭、腭、和咽喉上部區(qū)域。用于口部或頰給藥的組合物必需與口腔的環(huán)境相容。與用于傳遞到眼睛的制劑相比，對口部或頰傳遞制劑的要求通常較低。但是，味道和氣味方面的考慮對于口或頰制劑而言很重要，而且對于眼用制劑而言可能是最不重要的。
[0154]在優(yōu)選的實(shí)施方案中，不管其物理形式如何，該組合物被傳遞和保留在口腔中。因此，該組合物優(yōu)選地以可以留在口中不被攝取到胃腸道中的形式如錠劑、噴霧、橡皮糖、舌下片、漱口劑、口部凝膠、牙膏、粘膜粘附貼劑等等的形式被提供。
[0155]當(dāng)口部傳遞時，該軛合物與口部粘膜(包括舌下粘膜)進(jìn)行接觸?！罢衬ぁ敝傅氖钦骋盒阅?。這里所用的“口部粘膜”指的是嘴和上咽喉區(qū)域的粘膜?！吧嘞隆敝傅氖巧囝^下面的口腔區(qū)域。
[0156]一種適宜的口用形式是舌下片。舌下片將軛合物傳遞到舌下粘膜上。這里所用的“片劑”指的是通過壓縮或模塑制備的藥物劑型。舌下片是用于放置在舌下的扁平小片，并被設(shè)計成可以迅速，幾乎瞬時崩解并將軛合物釋放到舌下粘膜上。術(shù)語“崩解”指的是破碎開。本發(fā)明的舌下片優(yōu)選地在5分鐘內(nèi)，并且更優(yōu)選地在2分鐘的時間內(nèi)崩解釋放軛合物。然后所釋放的軛合物可以通過口腔中存在的內(nèi)源性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用結(jié)合到口部粘膜上。
[0157]口部傳遞制劑的其它形式包括錠劑、橡皮糖和可溶解的薄膜。
[0158]口用制劑還可以以液體形式存在。該液體可以以噴霧或滴劑的形式被給藥到包括所選擇的區(qū)域如舌下區(qū)域的整個口腔內(nèi)?？梢杂眠m于口給藥或舌下給藥的標(biāo)準(zhǔn)噴霧瓶或滴瓶將本發(fā)明的噴霧劑和滴劑進(jìn)行給藥。該液體制劑優(yōu)選地被盛放在噴霧瓶、細(xì)霧化瓶、或氣霧劑容器中以使得易于進(jìn)行口腔給藥?？梢詫⒁后w制劑盛放在被定刻度的滴瓶或噴霧瓶中以將預(yù)定數(shù)量的組合物傳遞到口腔中。具有定刻度的噴霧器或滴瓶在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。
[0159]本發(fā)明的軛合物還可以被制備成口部凝膠。作為一個實(shí)例，該軛合物可以在在一種粘膜粘附的非水溶性凝膠中被給藥。該凝膠是由至少一種水不溶性的烷基纖維素或羥基烷基纖維素、揮發(fā)性非水性溶劑、和軛合物制得的。雖然可以加入生物粘附性聚合物，但其并不是必需的。一旦該凝膠與粘膜表面相接觸，主要由于揮發(fā)性或非水性溶劑的蒸發(fā)而形成一種粘性膜。該凝膠保留在粘膜表面上的能力與其薄膜稠度和所存在的不溶性組分有關(guān)?？梢酝ㄟ^噴霧、浸潰、或用手指或藥簽直接敷用來將該凝膠應(yīng)用到粘膜表面。 [0160]本發(fā)明的軛合物還可以被制備成漱口劑或牙膏形式。
[0161]在需要的情況中，傳遞制劑可以包含矯味劑、著色劑和/或香料。矯味劑、著色劑和/或香料有助于改善使用者對該組合物的接受性。
[0162]矯味劑是為一種沒有味道的制劑提供味道的物質(zhì)、增強(qiáng)之前存在味道但是味道較弱的制劑的味道的物質(zhì)、或掩蓋之前存在的令人不愉快的味道或?qū)⑵渥優(yōu)楦m口的味道的物質(zhì)。矯味劑在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的并且可以從許多供應(yīng)商那里通過商業(yè)途徑獲得，所說的供應(yīng)商如Warner-Jenkinson Company, Inc0矯味劑的實(shí)例包括薄荷提取物、葉粉或油；留蘭香提取物、葉粉或油；冬青油；香草提取物；歐芹；牛至油；月桂葉油；丁香油；鼠尾草油；黃樟油；檸檬油；橙油；茴香油；苯甲醛；杏仁油；樟腦；雪松葉油；馬郁蘭油；香茅油；熏衣草油；芥子油；松油；松針油；迷迭香油；百里香油；肉桂葉油；薄荷醇；香芹酮；茴香腦；丁香酚；水楊酸甲酯；檸檬烯；傘花烴；正-癸醇；香茅醇；α -松油醇；乙酸甲酯；醋酸香茅酯；甲基丁香酚；桉樹腦；芫荽醇；乙基芳樟醇；香草醛；百里酚；紫蘇子油；冬綠油；桉樹油；咖啡因、酒石酸氫鉀、乳酸、蘋果酸、谷氨酸單鈉、亞硝酸鹽、山梨醇等等。在該制劑用于頰或口部給藥的情況中，最希望使用矯味劑。矯味劑還包括甜味劑(即，增甜劑)如阿司帕坦、乙酰舒泛、糖精、葡萄糖、果糖、環(huán)己基氨基磺酸鈉、斯替維苷、新橙皮苷雙氫查耳酮、甘草甜素、紫蘇糖、索馬汀、天冬氨?；交彼峒柞?、對-甲氧基肉桂醛等等。
[0163]同樣，著色劑是為沒有顏色的制劑提供顏色的物質(zhì)、增強(qiáng)之前存在顏色但是顏色較弱的制劑的顏色的物質(zhì)、或掩蓋或改變之前存在但是可能令人不愉快的顏色的物質(zhì)。著色劑還包括可以將一種顏色的制劑轉(zhuǎn)化成無色制劑的物質(zhì)。著色劑在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的并且可以購自矯味劑的供應(yīng)商如上面所列的這些供應(yīng)商。眼用以及口用制劑都希望使用著色劑。適宜著色劑的實(shí)例是二氧化鈦。適宜的口用著色劑包括FD&C藍(lán)#1、FD&C黃#5和#10、FD&C紅#3和#40;焦糖色或粉末(#05439)、巧克力色光(#05349)、綠色淀混合物(#09236) > kowet 二氧化鈦(#03970)、黃色液體色(#00403)、和亞硝酸鹽。
[0164]香料是為無嗅制劑提供氣味(即，香味)的物質(zhì)、增強(qiáng)之前存在香味但是香味弱的制劑的香味的物質(zhì)、或掩蓋之前存在但是可能令人不愉快的香味的制劑的香味的物質(zhì)。香料還包括可以將有味的制劑轉(zhuǎn)化成沒有氣味的制劑的物質(zhì)。香料在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的并且可以購自矯味劑供應(yīng)商如上面所列的這些供應(yīng)商那里。香料的實(shí)例包括天然香料如草花、草藥、樹花或植物提取物，和人造香料。眼用以及口用制劑都希望使用香料。
[0165]適宜舌下片的實(shí)例是根據(jù)下面的配方來進(jìn)行制備的:透明質(zhì)酸和聚賴氨酸軛合物(制備成為每片Img軛合物)；甘露醇USP (DC級)31.5mg;微晶纖維素40.35mg;羥乙酸淀粉鈉 NF2.6mg;糖精鈉，USP0.5mg;香料 S.D.薄荷，F(xiàn)CC0.75mg;麥力甜 MM188M0.5mg;香草香料 #8000.2mg;D&C 黃 #10,鋁色淀 0.2mg;硬脂酸鎂，NF0.5mg; aerosi 12000.4mg。
[0166]適宜舌下片的另一個實(shí)例是按照下面的配方制備的:透明質(zhì)酸和聚賴氨酸軛合物(被制備成每片Img軛合物);甘露醇30.30mg;微晶纖維素(FMC) 4.0034.0Omg;羥乙酸淀粉鈉(EXPLS TABMendell) 2.60;硬脂酸鎂 NF0.50mg;糖精鈉(Mallinckrodt) 2.0Omg;阿司帕坦(Neutrasweet) 4.0Omg;薄荷(Virginia Dare HF82SD#517) 0.40mg;香草(VirginiaDare800NAT) 0.30mg;MAFCO 麥力甜 I88M0.25mg; prosweet#560 (MM54) 0.75mg;巧克力香料#6822.00mg;D&C 黃 #10。
[0167]本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到易于對這些制劑進(jìn)行變化。應(yīng)當(dāng)清楚地是，可以向本發(fā)明的制劑中加入其它組分，包括其本身對于個體而言具有治療作用或是有益的組分。例如，本發(fā)明的口用制劑可以包含維生素或氟化物，并且如現(xiàn)有技術(shù)中公知的那樣，眼用制劑可以包含治療劑如治療青光眼的藥。
[0168]在上面的制劑中，甘露醇、糖精鈉、薄荷、麥力甜和香草是能掩蓋所說軛合物味道或者至少提供美好的味道的矯味劑。刪除該矯味劑不會犧牲功效。但是，患者的順從性可能會更差?？梢愿淖兂C味劑以適應(yīng)個體需要和味覺。用D&C黃作為著色劑?？梢匀菀椎貏h除著色劑或代之以其它染料。硬脂酸鎂和Aeix)Sil-200是用于將片劑從壓片設(shè)備中釋放出來的潤滑劑。根據(jù)制造過程，可以對這些成分進(jìn)行替代或?qū)⑵渫耆∠?。微晶纖維素、甘露醇和羥乙酸淀粉鈉提供了片核。纖維素和淀粉促進(jìn)了核成分的結(jié)合并且促進(jìn)了存在水分時片劑的崩解?？梢愿淖冞@些成分的相對數(shù)量以調(diào)整片劑的崩解。 [0169]對所有組分?jǐn)?shù)量進(jìn)行稱重，并將除甘露醇和Avicel之外的所有成分都用80目不銹鋼篩篩分。將這些物質(zhì)在大小適宜的聚乙烯袋中混合約5分鐘，然后將其轉(zhuǎn)移到適宜的混合器，如PK混合器中。將所需數(shù)量的甘露醇和Avicel用40目不銹鋼篩篩分并將其加入到該具有其它成分的PK混合器中。將該混合物在該P(yáng)K混合器中混合10分鐘，然后將其卸載。對該混合物樣品的效能和其它決定品質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢查。在叩擊100次的基礎(chǔ)上用堆密度裝置在該混合物上測量堆密度。用指定的沖進(jìn)行壓片，將該混合物壓縮成片重為80mg的片劑。
[0170]通過將一片片劑放置在舌下來將該片劑進(jìn)行給藥。使該片劑崩解并釋放然后會附著在口部粘膜上的包含透明質(zhì)酸的軛合物。
[0171]可以用蒸餾滅菌來制備口用溶液，其可以根據(jù)下面的配方來進(jìn)行制備:透明質(zhì)酸和聚賴氨酸軛合物(被制備成每次給藥提供lmg/ml軛合物)；氯化鈉0.9% ;和苯扎氯銨0.1至0.2%。該制劑代表了可以通過滴劑、或以細(xì)煙霧形式被給藥的口用溶液，但是其并不限于其該給藥途徑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易地意識到易于對該制劑進(jìn)行變化。
[0172]在上面的配方中，用氯化鈉來使該溶液等滲。對于使用者而言，該類溶液更舒服；但是，如果需要的話，可以不使用氯化鈉。還是在上面的配方中，用苯扎氯銨作為防腐劑。
[0173]但是，在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選地使用略微高滲例如高于280m0sm的配方，以使該軛合物本身或與其它荷電化合物一起保持非絡(luò)合形式。在這里對這些實(shí)施方案進(jìn)行了詳細(xì)描述。
[0174]還可以用粘膜粘附裝置或系統(tǒng)來完成口服給藥。這種類型的優(yōu)選系統(tǒng)是這些在應(yīng)用后可以自然侵蝕的系統(tǒng)。適宜的可生物侵蝕的粘膜粘附裝置或系統(tǒng)的一個實(shí)例是BEMA?，其可以被制備成凝膠、盤或薄膜并且可以被用于任何粘膜表面上?？缮锴治g的粘膜粘附裝置是使得可以將活性物質(zhì)傳遞到粘膜表面如口或陰道粘膜上的以聚合物為基礎(chǔ)的系統(tǒng)。可生物侵蝕的粘膜粘附裝置一般包含一種可以采取許多形式的膜。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該可生物侵蝕的粘膜粘附裝置是一種半柔軟的小盤形式。在形成后，可以將可生物侵蝕的粘膜粘附裝置如BEMA?盤用軛合物浸滲。將這些裝置粘附在粘膜表面，如嘴、陰道、直腸、或肛門的粘膜表面上。因?yàn)樵撃な巧锴治g性的，所以其中所包含的軛合物被釋放出來并附著在鄰近的粘膜上。因?yàn)樵摫P基本溶解于粘膜表面的水分中，所以不需要除去該盤?？缮锴治g的粘膜粘附裝置的一個優(yōu)點(diǎn)是將釋放到周圍的組織或腔中而不粘附到粘膜上的軛合物最小化。一般而言，該膜(例如盤形式)僅有一側(cè)粘附在粘膜表面上。對于應(yīng)用到陰道或肛門的應(yīng)用而言，其建議將該裝置(例如盤)卷起，然后將其插入到所說的腔中，特別注意該裝置粘性側(cè)的位置。
[0175]可以特定地合成該可生物侵蝕的粘膜粘附裝置以控制該裝置中軛合物的保留時間、生物侵蝕動力學(xué)(并從而控制活性物質(zhì)的釋放時間和速率)、該裝置的味道(特別適于口服給藥的情況)、以及形狀和盤的厚度。
[0176]可生物侵蝕的粘膜粘附系統(tǒng)和裝置可以由Atrix Laboratories (FortCollins, Colorado), Epic Therapeutics, Inc., Takeda Chemical Industries.Ltd., ALZACorp.,和 Alkermes Control Therapeutics, Inc.通過商業(yè)途徑獲得?？梢詤⒖?US5，650,173 ; 5，656，297; 5，679，377; 5，800，832; 5，888，533; 5，955，097; 5，962，006; 6，103，266 ; 6，I10，503; 6，156，331; 6，159，498 ; 6，261，584; 6，265，389; 6，267，981; 6，268，053 ; 6，275，728;和 6，290，984 等等。
[0177]該軛合物可為該裝 置的0.001至30重量％并且更優(yōu)選地為0.005至20重量％之間。在該BEMA?盤中還可以存在其它組分，包括增塑劑、矯味劑(口服應(yīng)用優(yōu)選)、香料(例如香料)、著色劑、和防腐劑。這些后面的組分可以加入到該盤粘性層和非粘性層的任何一種中或者二者中都加入。
[0178]該盤可以采取各種形狀或大小。該盤的厚度可以為0.05mm至Imm,或0.1mm至5mm,膠粘層或非膠粘層中的任何一種占總厚度的10至90%。如這里所述的這樣，可以用任何數(shù)目的適宜溶劑或溶劑組合對該軛合物進(jìn)行制備以將其裝載到BEMA?盤上，所說的溶齊?和溶劑組合非限制性地包括單獨(dú)使用或組合使用的水、甲醇、乙醇、或低級烷基醇如異丙醇。
[0179]可以用任何數(shù)目公知的現(xiàn)有技術(shù)來完成盤的制備，所說的現(xiàn)有技術(shù)非限制性地包括膜浸潰、膜涂布、薄膜鑄塑、自旋涂布(spin coating)、或噴霧干燥。該盤的兩層可以一起形成或者可以分別形成然后使之彼此接觸。該盤可以被成形成橢圓形、正方形、和矩形，但是并不僅限于這些形式。
[0180]本發(fā)明的組合物可以在可藥用載體中被給藥，所說的可藥用載體通常包含可藥用濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、可相容的載體、助劑、和任選的其它治療劑。術(shù)語“可藥用的載體”指的是一種或多種適于給藥于個體的可相容的固體或液體填充劑、稀釋劑或包封物質(zhì)。術(shù)語“載體”表示天然或合成的有機(jī)和/或無機(jī)成分，其可結(jié)合活性成分以有助于個體應(yīng)用。該藥物組合物的組分還能以其中沒有將會損害所需的藥學(xué)功效的相互作用的方式與本發(fā)明的軛合物和組合物混合以及彼此混合。可藥用的載體在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。
[0181]該載體的形式將隨著給藥部位的不同而不同。但是，該載體必需適用于轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性。雖然轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶傾向于在微堿性PH (例如6.5至9的pH)環(huán)境下發(fā)揮功效，但是特別是對于眼睛給藥而言，這一點(diǎn)可能不合適。因此，必需通過增加鹽濃度來抵銷轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的這種PH依賴性。還必需確保透明質(zhì)酸和連接分子不會彼此離子復(fù)合至使得連接分子難以接近轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶和/或使透明質(zhì)酸不能發(fā)揮增濕劑功效的程度。在最大轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性、透明質(zhì)酸和連接分子之間的最小離子相互作用、以及受影響表面或組織最低刺激的基礎(chǔ)上來確定PH和鹽濃度。
[0182]與轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性相容的適宜防腐劑包括kathon和尼泊金甲酯。與轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性相容的適宜去污劑和/或表面活性劑包括hampene led、吐溫20、chemophorRH-40、和DC190。與轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶活性相容的適宜濕潤劑包括丙二醇、丁二醇、和glucacamE-20。應(yīng)當(dāng)避免的防腐劑包括glydant、Dowicil200、BTC2125M、和碘代乙酰胺。應(yīng)當(dāng)避免的去污劑和/或表面活性劑包括Bioterge AS-40、CTAB、monomate CPA40、和SDS。
[0183]透明質(zhì)酸以及其它被給藥的化合物可以以本身的形式(凈品)或其可藥用鹽的形式被給藥。當(dāng)用于藥品時，該鹽應(yīng)當(dāng)是可藥用的，但是可以方便地用不可藥用的鹽來制備其可藥用的鹽。該類鹽非限制性地包括這些由下面的酸制備的鹽:鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、醋酸、水楊酸、對-甲苯磺酸、酒石酸、枸櫞酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸、和苯磺酸。該類鹽還可以被制備成堿金屬鹽或堿土金屬鹽，如羧酸基團(tuán)的鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。
[0184]適宜的緩沖劑包括:醋酸和鹽(l_2%w/v);枸櫞酸和鹽(l_3%w/v);硼酸和鹽(0.5-2.5 % w/v);以及磷酸和鹽(0.8-2% w/v)。適宜的防腐劑包括苯扎氯銨(0.003-0.03% w/v);氯丁醇(0.3-0.9% w/v);尼泊金酯類(0.01-0.25% w/v)和硫柳萊(0.004-0.02% w/v)。
[0185]該藥物組合物還可以包含適宜的固體或膠化相載體或賦形劑。該類載體或賦形劑的實(shí)例非限制性地包括碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠、和聚合物如聚
乙二醇。
[0186]適宜的液體或固態(tài)藥物制劑形式有，例如，用于吸入的水溶液或生理鹽水溶液、微囊化、encochleated、被涂布到極微小金顆粒上、被包含在脂質(zhì)體中、被噴灑、氣霧劑、用于植入到皮膚中的丸劑、或被干燥到尖銳的物體上以擦刻到皮膚中的物質(zhì)。該藥物組合物還包括顆粒、粉末、片劑、包衣片、(微)膠囊、栓劑、糖漿、乳劑、混懸液、乳膏、滴劑或具有活性化合物的拖延釋放的制劑，在這些制劑中通常使用上述賦形劑和添加劑和/或輔助劑如崩解劑、粘合劑、包衣劑、膨脹劑、潤滑劑、矯味劑、增甜劑或增溶劑。該藥物組合物適用于各種藥物傳遞系統(tǒng)。對于用于藥物傳遞的本發(fā)明方法的綜述可參見Langer, Science249:1527-1533，1990，其在這里被引入作為參考。
[0187]該組合物可以方便地存在于單位劑型中并且可以用藥學(xué)現(xiàn)有技術(shù)中任何眾所周知的方法來進(jìn)行制備。所有的方法都包括將化合物與組成一種或多種配合劑的載體放到一起的步驟。一般而言，該組合物可以通過將該化合物與液體載體、分割得很細(xì)的固體載體、或液體載體和分割得很細(xì)的固體載體均勻仔細(xì)進(jìn)行混合，然后，如果需要的話將其成形成產(chǎn)品來進(jìn)行制備。液體劑量單位有小瓶或安瓿。固體劑量單位有片劑、膠囊、膜和栓劑。
[0188]重要地是，該載體必需適用于其所接觸的機(jī)體組織或表面。正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的那樣，適用于眼睛給藥的載體需要對眼睛的刺激性極小，并且優(yōu)選地對眼睛沒有刺激性。眼睛或眼用制劑在藥學(xué)現(xiàn)有技術(shù)中是公知的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參考Remington’s Pharmaceuticals來作為該類載體組成的指導(dǎo)。
[0189]眼用制劑可以采取液體形式，如溶液、乳劑、分散體形式，和半固體形式如凝膠和軟膏。
[0190]眼用制劑可以包含或不包含眼用防腐劑。眼用防腐劑在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。因?yàn)榧?xì)菌感染是給藥于眼睛的物質(zhì)的最常見的副作用，所以該類防腐劑一般是抗生素。眼用防腐劑的實(shí)例包括有機(jī)汞制劑(例如，硝酸苯汞、醋酸苯汞、硼酸苯汞、硫柳汞
(Merthiolatt.⑨，Lilly))；季銨化合物(例如，苯扎氯銨)、芐索氯銨、氯化十六烷基吡
啶鎗、聚季鎗-l(POLYQUAD));對羥基苯甲酸酯；和被取代的醇以及苯酚類物質(zhì)(例如，氯丁醇、氯丁醇/苯乙醇)。其它適宜的防腐劑包括尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。
[0191]如現(xiàn)有技術(shù)中公知的那樣，還可以通過過濾或加熱對這里所提供的制劑進(jìn)行滅菌。
[0192]眼用制劑還可包含等滲劑、緩沖劑、防腐劑(如上所述)、稀釋劑、穩(wěn)定劑、螯合劑、增稠劑等等。等滲劑的實(shí)例包括氯化鈉、硼酸、枸櫞酸鈉等等。緩沖劑的實(shí)例包括硼酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑等等。眼用制劑的PH應(yīng)被維持在5-8的范圍內(nèi)。稀釋劑的實(shí)例包括蒸餾水或無菌水或生理鹽水(對于水性制劑而言)、和植物油、液體石蠟、礦物油、丙二醇、和對-辛基十二烷醇(對于非水性制劑而言)。穩(wěn)定劑的實(shí)例包括亞硫酸鈉和丙二醇。適宜螯合劑的一個實(shí)例是EDTA鈉。增稠劑的實(shí)例包括甘油、羧甲基纖維素、和羧乙烯基聚合物。
[0193]可以包含在眼用制劑中的其它組分包括山梨酸、磷酸二氫鈉、硼酸鈉、氫氧化鈉、氯化鉀、氯化鈣、甘油、溶菌酶等等。
[0194]對于口部給藥而言，該類載體使得本發(fā)明的化合物可以被制備成舌下或頰吸收片、丸劑、糖錠劑、膠囊、液體、凝膠、膜、糖漿、膏劑、混懸液等等?？诓恐苿┻€包括牙膏、粉末、液體牙膏、托牙洗劑、漱口劑、托牙洗劑、口香糖、糖果、和其它食品。用于口部應(yīng)用的藥物制劑可以以固體賦形劑的形式獲得，任選地將所得的混合物進(jìn)行研磨，如果需要的話，然后在加入適宜的助劑后對顆粒混合物進(jìn)行加工，得到片劑或糖錠劑核。適宜的賦形劑特別是填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇、或山梨醇；纖維素制劑，例如，玉米淀粉、小麥淀粉、稻谷淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要的話，可以加入崩解劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或藻酸或其鹽如藻酸鈉。該口部制劑還任選地在鹽水或緩沖液中進(jìn)行制備以中和內(nèi)部的酸性情況，但是當(dāng)組合物在口腔中被吸收時這一點(diǎn)的關(guān)鍵性沒有當(dāng)其在胃腸道時被吸收那么關(guān)鍵。可以為糖錠劑核提供適宜的包衣。為此，可以使用濃的糖溶液，所說的溶液可以任選地包含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝膠、聚乙二醇、和/或二氧化鈦、漆溶液、以及適宜的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？梢韵蛟撈瑒┗蛱清V劑包衣中加入染料或顏料以標(biāo)明或描繪活性化合物劑量的不同組合。
[0195]口用的藥物制劑包括由明膠制成的推入-配合的膠囊以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制成的密封的軟膠囊。該推入-配合的膠囊可以包含與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉、和/或潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂以及任選的穩(wěn)定劑混合在一起的活性成分。在軟膠囊的情況中，可以將活性化合物溶解或混懸于適宜的液體，如脂肪油、液體石蠟、或液體聚乙二醇中。此外，還可以加入穩(wěn)定劑。還可以使用制備成用于口部給藥的微球。在現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)對該類微球進(jìn)行了明確定義。用于口部給藥的所有制劑都應(yīng)是適于該類給藥的劑量。對于頰給藥而言，該組合物可以采取用常規(guī)方式制備的片劑或錠劑形式。
[0196]適用于口部制劑的防腐劑如抗菌劑包括百里酹、薄荷醇、tricrosan、4-己基間苯二酚、苯酚、桉樹腦、苯甲酸、苯甲酰過氧化物、尼泊金丁酯、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、水楊
酰胺等等。
[0197]用于口部制劑如牙膏等等的增稠劑包括羧基乙烯基聚合物、角叉菜膠、羥乙基纖維素、天然樹膠如刺梧桐樹膠、黃原膠、阿拉伯膠、黃蓍膠等等 。
[0198]口部制劑還包含濕潤劑，所說的潤濕劑非限制性地如甘油、山梨醇、木糖醇、聚乙
二醇、丙二醇等等。
[0199]如果所說的制劑是牙膏或牙齒清潔劑，則其還可包含摩擦劑如硅酸鹽如干凝膠、水凝膠、氣凝膠、碳酸鈣或碳酸鎂、磷酸鈣、氧化鋁及其水合物、硅酸鋁鹽、硅酸鎂和鋯等等。這些制劑還可以包含氟化物，和抗結(jié)石劑如鋅鹽、堿金屬焦磷酸鹽等等。
[0200]對于通過吸入給藥的制劑而言，本發(fā)明所用的化合物可以方便地以氣溶膠噴霧劑的形式在使用適宜的推進(jìn)劑的情況下由加壓包裝或噴霧器進(jìn)行給藥，所說的推進(jìn)劑例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜氣體。在加壓氣霧劑的情況中，可以通過提供一種用于傳遞計量數(shù)量的閥來確定劑量單位。用于吸入器或吹入器的例如明膠膠囊和藥筒可以被制備成包含化合物和適宜粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物。被給藥到鼻腔中的化合物還可以被制備成凝膠或滴鼻劑。
[0201]對于局部給藥而言，該化合物可以以適于外表面的任何標(biāo)準(zhǔn)制劑的形式被提供。例如，如果希望將化合物應(yīng)用于皮膚，則其可以以軟膏、洗劑、噴霧、凝膠、薄織物、擦拭物(例如用于處理尿布疹)等等的形式被提供。對于應(yīng)用到嘴唇的應(yīng)用而言，該化合物可以以唇香脂或唇膏的形式被提供。作為另一個實(shí)例，如果該化合物用于頭發(fā)，則其可以以噴霧、香波、頭發(fā)固定劑如噴發(fā)劑、凝膠或摩絲等等的形式被提供。對于應(yīng)用到指甲上的應(yīng)用而言，該化合物可以以指甲拋光劑或其它指甲護(hù)理產(chǎn)品的形式被提供。
[0202]雖然并不優(yōu)選，但是在一些情況中，如果制備的目的是為了進(jìn)行全身給藥，則該化合物可以被全身給藥。可以通過推注或連續(xù)注射來進(jìn)行胃腸外給藥。注射用制劑可以以單位劑型，例如位于安瓿或具有所加入的防腐劑的多劑量容器中的形式存在。該組合物可以采取諸如位于油性或水性制劑中的混懸液、溶液或乳劑之類的形式，并且可以包含制備物質(zhì)如混懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
[0203]用于胃腸外給藥的藥物制劑包括水溶性形式活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的混懸液可以被制備為適宜的油性注射混懸液。適宜的親脂性溶劑或基質(zhì)包括脂肪油如芝麻油或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯、或脂質(zhì)體。水性注射混懸液可包含能增加混懸液粘度的物質(zhì)如羧甲基纖維素鈉、山梨醇、或葡聚糖。該混懸液還可任選地包含適宜的穩(wěn)定劑或可增加化合物的溶解度從而使得可以制備高濃度溶液的物質(zhì)。或者，該活性化合物可以為在使用前用適宜基質(zhì)如無菌無熱源的水重組的粉末形式。
[0204]該化合物可以被制備為直腸或陰道組合物如栓劑(包括塞子)或保留灌腸劑，例如包含常規(guī)栓劑基質(zhì)如可可豆脂或其它甘油酯的制劑。還可以使用陰道灌洗制劑。還可以用粘膜粘附膜如這里所詳細(xì)描述的這些物質(zhì)來進(jìn)行粘膜給藥。在一些涉及陰道給藥的實(shí)施方案中，其希望提供位于可以暫時增加陰道環(huán)境pH的基質(zhì)中的組合物，暫時增加陰道環(huán)境的PH是為了促進(jìn)軛合物通過陰道轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶連接到陰道粘膜上的過程。這種pH的增加不需要長期持續(xù)，但是希望其僅長至足以將有效量的軛合物連接到所說的組織上。作為一個實(shí)例，可以通過使用可以提供6.5至9的局部pH的粘膜粘附盤、栓劑、或灌洗溶液來控制pH。
[0205]除之前所描述的制劑外，該化合物還可以被制備成儲庫制劑?？梢杂眠m宜的聚合物或疏水性物質(zhì)(例如在可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂來制備該類長期起作用的制劑，或者可以將其制備為微溶性衍生物例如微溶的鹽的形式。
[0206]可以用緩釋裝置將本發(fā)明的組合物進(jìn)行給藥，所說的緩釋裝置例如可生物侵蝕的粘膜粘附系統(tǒng)，如這里所述的這些系統(tǒng)以及現(xiàn)有技術(shù)中眾所周知的這些系統(tǒng)。
[0207]其它傳遞系統(tǒng)包括定時釋放、延遲釋放或緩釋傳遞系統(tǒng)。該類系統(tǒng)可以避免化合物的重復(fù)給藥、增加個體和醫(yī)師的方便性。可以獲得許多類型的釋放傳遞系統(tǒng)，并且這些系統(tǒng)對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是公知的。其包括以聚合物為基質(zhì)的系統(tǒng)如聚(丙交酯-乙交酯)、草酸酯共聚物(copolyoxalates)、聚己內(nèi)酯、聚酰胺酯(polyesteramides)、聚原酸酯、聚羥基丁酸、和聚酐類。
[0208]在例如US5，075, 109中對包含藥物的上述聚合物的微囊進(jìn)行了描述。傳遞系統(tǒng)還包括非聚合物系統(tǒng)，其有:包括留醇如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸或天然脂肪如單_、二 _、和三-甘油酯的液體；水凝膠釋放系統(tǒng)；SylaStic系統(tǒng)；肽基礎(chǔ)的系統(tǒng)；蠟包衣；使用常規(guī)粘合劑和賦形劑的壓制片；部分熔凝的植入物等等。特定的實(shí)例非限制性地包括:(a)侵蝕系統(tǒng)，本發(fā)明的形式以一種位于基質(zhì)內(nèi)的形式被包含在其中如US4，452，775,4, 675，189、和5，736，152所述的這些形式，和(b)擴(kuò)散系統(tǒng)，其中活性組分可以以控釋速率從聚合物散布出來，如可參見US3，854，480、5，133，974和5，407，686的描述。此外，可以使用以泵為基礎(chǔ)的硬體傳遞系統(tǒng)，其中的一些適于植入。
[0209]緩釋組合物可以以例如凝膠、軟膏、乳膏、或貼劑(例如經(jīng)皮貼劑或粘膜貼劑，如BEMA?盤)的形式局部應(yīng)用。作為一個實(shí)例，可以將可生物侵蝕的緩釋顆粒單獨(dú)應(yīng)用到體表，或者可以將其在軟膏、凝膠或乳膏中應(yīng)用到體表。局部給藥包括給藥于皮膚表面和粘膜表面。可以通過唇膏、唇護(hù)理物例如唇香脂、唇皰疹軟膏；防曬軟膏；口部凝膠如用于口瘡(例如輻射或化療誘導(dǎo)的口瘡)的那些凝膠；漱口劑；牙膏；吸入劑；表面貼劑等等形式來完成向粘I旲表面的傳遞。
[0210]或者，其可以被植入。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所說的緩釋裝置是可生物侵蝕的或可生物降解的。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，該緩釋裝置以本發(fā)明可生物侵蝕的粘膜粘附裝置(例如BEMA?)的優(yōu)選形式被粘附在其所應(yīng)用的表面(例如，皮膚或粘膜)上。現(xiàn)有技術(shù)同樣具有該類裝置。
[0211 ] 根據(jù)一些方面，本發(fā)明的組合物可以以試劑盒的形式被提供。正如這里所用的這樣，當(dāng)該組合物在試劑盒中被提供時，有意的將該組合物包裝或包含在第一個容器(例如瓶)中，然后將該容器再包裝在第二個容器(如箱、卡紙盒、或袋)中。在任何一種情況中，希望都包括該組合物的使用說明。該類說明可以被直接提供在第一個容器(即，直接收藏該組合物的容器)的外表面標(biāo)簽上，或可以位于第二個容器(即收藏第一個容器的容器)的外表面標(biāo)簽上?；蛘?，該使用說明可以獨(dú)立于任何一個容器地被提供，如例如可以在位于第二個容器中的獨(dú)立的紙張上被提供。該使用說明將非限制性地包含諸如單劑量傳遞的數(shù)量、對于給定的間隔而言不能超過的最大數(shù)量(例如最大日劑量)、給藥方法和給藥部位、被治療的個體以及不能用該制劑治療的個體、禁忌癥、以及該制劑的活性和無活性成分之類的信息。
[0212]下面的實(shí)施例是為了進(jìn)行說明而不是要對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。
實(shí)施例
[0213]實(shí)施例1:通過還原性胺化進(jìn)行的聚(L-賴氨酸)與透明質(zhì)酸的軛合:
[0214]簡介:
[0215]聚賴氨酸(PLL)與透明質(zhì)酸(HA)的共軛是以透明質(zhì)酸末端糖殘基的醛基與聚賴氨酸的氨基形成希夫氏堿的能力為基礎(chǔ)的。所形成的希夫氏堿不穩(wěn)定并且易于通過水解而被反轉(zhuǎn)?？梢杂迷S多還原劑來將希夫氏堿轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定的仲胺。氰基硼氫化鈉(sodiumcyanoborohydrate)可以最好地促進(jìn)該還原反應(yīng),這是因?yàn)檫@種試劑對希夫氏堿的反應(yīng)性
高而對醛基的反應(yīng)性低。
[0216]
【權(quán)利要求】
1.一種包含透明質(zhì)酸和是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、以及游離透明質(zhì)酸的組合物，其中所說的游離透明質(zhì)酸和軛合物是以至少2的摩爾比存在的，所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的連接分子具有至少三個相連的賴氨酸。
3.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的連接分子具有至少四個相連的賴氨酸。
4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的連接分子具有至少五個相連的賴氨酸。
5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的連接分子具有至少六個相連的賴氨酸。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的連接分子是天然的聚賴氨酸。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其中所說的聚賴氨酸選自聚-L-賴氨酸、聚-D-賴氨酸、和聚-DL-賴氨酸。
8.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的透明質(zhì)酸是天然的透明質(zhì)酸。
9.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的透明質(zhì)酸是選自透明質(zhì)酸可藥用的鹽、透明質(zhì)酸酯、和硫酸化的透明質(zhì)酸的透明質(zhì)酸衍生物。
10.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所說的摩爾比選自至少2.0和至少4.0。
【文檔編號】A61K47/18GK103638040SQ201310303034
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2003年7月3日 優(yōu)先權(quán)日:2002年7月3日
【發(fā)明者】Y·斯維肯, R·帕薩, D·津格曼 申請人:派瑞克科學(xué)公司