Ssx2ip在預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了SSX2IP在預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用。具體地，本發(fā)明公開了SSX2IP抑制劑在制備抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或抑制腫瘤細(xì)胞遷移的藥物中的用途。SSX2IP抑制劑可作為藥物有效成分抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或抑制腫瘤細(xì)胞遷移，還可增加腫瘤細(xì)胞對化療藥物敏感性或降低腫瘤細(xì)胞對化療藥物耐藥性。此外，本發(fā)明的SSX2IP基因或蛋白及其激動劑可用于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖或遷移，用于制備腫瘤動物模型。
【專利說明】SSX21P在預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及腫瘤學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及SSX2IP抑制劑在預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞遷移以及化療耐藥性行方面的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及SSX2IP基因、蛋白或其激動劑在制備腫瘤模型中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，居全球(惡性腫瘤)發(fā)病率第五位，癌癥相關(guān)死因第三位，在中國其發(fā)病率僅次于肺癌，居第二位。
[0003]在肝癌的綜合治療中，手術(shù)切除和化療是治療的重要手段，但由于肝癌早期診斷困難，腫瘤轉(zhuǎn) 移速度快，且對化療藥物敏感度不高，導(dǎo)致各種治療效果不理想，轉(zhuǎn)移患者預(yù)后差。
[0004]此外在不同階段的肝癌患者中，個(gè)性化的治療方案尤其重要。但由于缺乏特異性肝癌轉(zhuǎn)移標(biāo)志物，治療的時(shí)間窗往往在肝癌轉(zhuǎn)移后才開啟，延誤了預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移的良好時(shí)機(jī)。
[0005]因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)能夠抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、降低化療耐藥性的治療藥物，以及能夠預(yù)測或診斷腫瘤轉(zhuǎn)移尤其是肝癌轉(zhuǎn)移的特異性標(biāo)志物，從而能夠預(yù)測肝癌轉(zhuǎn)移，進(jìn)而為更好地預(yù)防或治療腫瘤轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種能夠預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞遷移并能夠提高化療敏感性的SSX2IP抑制劑；本發(fā)明還提供了一種對腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤耐藥有預(yù)防或治療作用藥物的篩選方法。此外，本發(fā)明還提供了一種預(yù)測或診斷腫瘤是否轉(zhuǎn)移的試劑盒。
[0007]本發(fā)明的第一方面，提供了一種SSX2IP(滑膜肉瘤X斷裂點(diǎn)基因2相互作用蛋白，Synovial Sarcoma X brearkpoint2interacting Protein)抑制劑的用途，用于制備抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或抑制腫瘤細(xì)胞遷移的藥物。
[0008]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP蛋白來源于哺乳動物；較佳地，來源于人、小鼠或大鼠；更佳地，來源于人。
[0009]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤包括肝癌、胃癌、腸癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤。
[0010]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤為肝癌。
[0011]在另一優(yōu)選例中，所述的抑制劑包括:SSX2IP的抗體、SSX2IP核酸的反義RNA、siRNA、shRNA以及SSX2IP的活性抑制劑。
[0012]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物含有藥學(xué)上可接受的載體、SSX2IP抑制劑和任選的化療劑。
[0013]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物通過選自下組的用藥方式進(jìn)行給藥:口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、舌下含化、直腸灌注、鼻腔噴霧、口腔噴霧、皮膚局部或全身經(jīng)皮用藥。
[0014]在另一優(yōu)選例中，所述的藥物的制劑選自下組:片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑、噴霧劑。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP抑制劑以0.5_5mg/kg體重的劑量(每次或每天)施用于哺乳動物。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述的哺乳動物包括人、小鼠、大鼠，更佳地，為人。
[0017]在另一優(yōu)選例中，所述的化療劑包括酰胺(CTX)、異環(huán)磷酰胺(IFO)、絲裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、長春新堿(VCR)、長春花堿(VBL)、依托泊甙(VP16)、威猛(Vumon)、順鉬(CDDP)、氟尿嘧啶(5-FU)、卡鉬(CBP)和甲氨蝶呤(MTX)等。
[0018]本發(fā)明的第二方面，提供了一種SSX2IP抑制劑的用途，(a)用于制備促進(jìn)化療或放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的藥物組合物，或(b)用于制備促進(jìn)化療或放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的促進(jìn)劑，或(C)用于制備使得癌細(xì)胞對化療或放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡更敏感的增敏劑。
[0019]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP抑制劑用于癌癥治療的增敏劑或促進(jìn)細(xì)胞凋亡的促進(jìn)劑。
[0020]所述的SSX2IP蛋白包括融合蛋白和非融合蛋白。
[0021]本發(fā)明的第三方面，提供了一種體外非治療性抑制癌細(xì)胞遷移的方法，包括步驟:在SSX2IP抑制劑存在下，培養(yǎng)癌細(xì)胞，從而抑制癌細(xì)胞遷移。
[0022]在另一優(yōu)選例中，所述的方法包括向癌細(xì)胞的培養(yǎng)體系中添加SSX2IP抑制劑，從而抑制癌細(xì)胞遷移。
[0023]在另一優(yōu)選例中，所述的癌細(xì)胞包括肝癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、前列腺細(xì)胞、乳腺細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞。
[0024]在另一優(yōu)選例中，在所述方法中，所述的SSX2IP抑制劑的濃度為0.5_5mg/mL。
[0025]本發(fā)明的第四方面，提供了一種SSX2IP基因、SSX2IP蛋白或其激動劑的用途，用于制備促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的組合物(或促進(jìn)劑)，或用作促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的促進(jìn)劑。
[0026]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP基因或蛋白來源于哺乳動物；較佳地，來源于人、小鼠或大鼠；更佳地，來源于人。
[0027]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP基因或蛋白是重組人SSX2IP基因或蛋白或來自人血液或血清中的人SSX2IP基因或蛋白。
[0028]在另一優(yōu)選例中，所述的促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的藥物用于建立腫瘤模型。
[0029]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤為肝癌。
[0030]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP基因、SSX2IP蛋白或其激動劑的用途還包括:在SSX2IP蛋白或其激動劑存在下，培養(yǎng)癌細(xì)胞，從而促進(jìn)癌細(xì)胞生長或增殖。
[0031 ] 本發(fā)明的第五方面，提供了一種篩選用于抑制腫瘤細(xì)胞遷移或用于提高癌細(xì)胞藥物敏感性的候選化合物的方法，所述方法包括步驟:
[0032] (a)測試組中，在細(xì)胞的培養(yǎng)體系中添加測試化合物，并觀察所述測試組的細(xì)胞中SSX2IP的表達(dá)量和/或活性；在對照組中，在相同細(xì)胞的培養(yǎng)體系中不添加測試化合物，并觀察對照組的所述細(xì)胞中SSX2IP的表達(dá)量和/或活性；[0033]其中，如果測試組中細(xì)胞的SSX2IP的表達(dá)量和/或活性小于對照組，就表明該測試化合物是對SSX2IP的表達(dá)和/或活性有抑制作用的治療腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移或能夠提高化療藥物敏感性的化合物；和
[0034](b)對于步驟(a)中獲得的候選化合物，任選地測試所述候選化合物對癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移或遷移的抑制作用或所述候選化合物對癌細(xì)胞藥物敏感性的影響作用。
[0035]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤包括肝癌、胃癌、腸癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤。
[0036]在另一優(yōu)選例中，在步驟(b)中包括步驟:測試組中，癌細(xì)胞的培養(yǎng)體系中添加測試化合物，并觀察癌細(xì)胞移動的距離的數(shù)量和/或侵襲情況；在對照組中，在癌細(xì)胞的培養(yǎng)體系中不添加測試化合物，并觀察癌細(xì)胞移動的距離的數(shù)量和/或侵襲情況；其中，如果測試組中癌細(xì)胞的遷移距離或侵襲數(shù)量顯著小于對照組，就表明該測試化合物是對腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移有抑制作用的或能夠提高化療藥物敏感性的化合物。
[0037]本發(fā)明第六方面，提供了一種SSX2IP基因或SSX2IP蛋白的用途，用于制備檢測腫瘤轉(zhuǎn)移的試劑或試劑盒。
[0038]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP蛋白來源于哺乳動物；較佳地，來源于人、小鼠或大鼠；更佳地，來源于人。
[0039]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP蛋白來源于人，其全長氨基酸序列如SEQ IDN0.:1所示。
[0040]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP基因核苷酸序列如SEQ ID N0.:2所示。
[0041]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤包括:肝癌、胃癌、腸癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤。
[0042]在另一優(yōu)選例中，所述的試劑包括SSX2IP特異性引物、特異性抗體、探針和/或芯片。
[0043]在另一優(yōu)選例中，所述的檢測包括酶聯(lián)免疫反應(yīng)法(ELISA法)檢測或時(shí)間分辨免疫熒光法(TRFDWi)檢測。
[0044]在另一優(yōu)選例中，所述的SSX2IP蛋白或其特異性抗體偶聯(lián)有或帶有可檢測標(biāo)記。
[0045]在另一優(yōu)選例中，所述可檢測標(biāo)記選自下組:生色團(tuán)、化學(xué)發(fā)光基團(tuán)、熒光團(tuán)、同位素或酶。
[0046]在另一優(yōu)選例中，所述SSX2IP的特異性抗體是單克隆抗體或多克隆抗體。
[0047]在另一優(yōu)選例中，所述檢測是測定組織樣品、血液樣品、血清樣品或體液樣品。
[0048]在另一優(yōu)選例中，所述的組織樣品包括癌組織和癌旁組織。
[0049]本發(fā)明的第七方面，提供了一種用于檢測腫瘤轉(zhuǎn)移的診斷試劑盒，所述的試劑盒含有一容器，所述容器中含有檢測SSX2IP蛋白或mRNA的檢測試劑；以及標(biāo)簽或說明書，所述標(biāo)簽或說明書注明所述試劑盒用于檢測腫瘤轉(zhuǎn)移。
[0050]在另一優(yōu)選例中，所述的檢測腫瘤轉(zhuǎn)移指判斷腫瘤轉(zhuǎn)移是否發(fā)生，和/或判斷發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性(易感性)大小。
[0051 ] 在另一優(yōu)選例中，所述判斷包括預(yù)先判斷。 [0052]在另一優(yōu)選例中，所述的檢測SSX2IP蛋白或mRNA的檢測試劑包括:
[0053](a).抗SSX2IP蛋白的特異性抗體；和/或[0054](b).特異性擴(kuò)增SSX2IP的mRNA或cDNA的特異性引物。
[0055]在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)簽或說明書中注明以下內(nèi)容:
[0056]當(dāng)檢測對象的腫瘤組織SSX2IP表達(dá)量與癌旁組織的SSX2IP表達(dá)量之比≥2，則提示該檢測對象腫瘤轉(zhuǎn)移的幾率高于普通人群。
[0057]在另一優(yōu)選例中，所述的表達(dá)量是相對于對照基因(如β -肌動蛋白)的相對表達(dá)量。
[0058]在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還用于預(yù)測腫瘤患者生存時(shí)間。
[0059]在另一優(yōu)選例中，當(dāng)檢測對象是腫瘤患者時(shí)，如果檢測對象腫瘤組織中的SSX2IP表達(dá)量Yl顯著高于同類癌癥患者腫瘤組織中SSX2IP的表達(dá)量Υ2，則提示該檢測對象生存時(shí)間的低于同類癌癥患者的平均生存時(shí)間；
[0060]如果檢測對象腫瘤組織中的SSX2IP表達(dá)量Yl顯著低于同類癌癥患者腫瘤組織中SSX2IP的表達(dá)量Υ2，則提示該檢測對象生存時(shí)間的高于同類癌癥患者的平均生存時(shí)間。
[0061]在另一優(yōu)選例中，所述的顯著高于是指Υ1/Υ2≥2。
[0062]在另一優(yōu)選例中，所述的顯著低于是指Υ1/Υ2 ≤ 0.5。
[0063]本發(fā)明的第八方面，提供了一種SSX2IP基因或蛋白的用途，作為檢測腫瘤轉(zhuǎn)移的特異性標(biāo)志物用于制備檢測試劑；或用作檢測腫瘤轉(zhuǎn)移的特異性標(biāo)志物。
[0064]在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤包括肝癌。
[0065]本發(fā)明提供了一種預(yù)測或診斷腫瘤轉(zhuǎn)移的方法，包括步驟:
[0066](a).準(zhǔn)備受試者測試樣品；
[0067](b).檢測測試樣品中SSX2IP相對肌動蛋白的mRNA表達(dá)量并與參比值相比，當(dāng)其比值> 2則提示該檢測對象腫瘤轉(zhuǎn)移的幾率高于普通人群。
[0068]在另一優(yōu)選例中，所述測試樣品為組織樣品、血液樣品、血清樣品或體液樣品。
[0069]在另一優(yōu)選例中，所述參比值為非腫瘤樣品中SSX2IP的表達(dá)量。
[0070]在另一優(yōu)選例中，所述檢測步驟b包括檢測SSX2IP mRNA的量，或SSX2IPcDNA的量；和/或檢測SSX2IP蛋白的量。
[0071]在另一優(yōu)選例中，所述檢測步驟b包括通過RT-PCR或PCR方法進(jìn)行檢測。
[0072]在另一優(yōu)選例中，所述的檢測步驟b包括使用抗SSX2IP蛋白的抗體進(jìn)行檢測。
[0073]此外，本發(fā)明還包括一種抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的方法，包括步驟:給需要治療的對象(哺乳動物)施用安全有效量的SSX2IP蛋白或其激動劑。
[0074]應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0075]圖1顯示了 Kaplan-Meier分析SSX2IP在51例肝癌病人中表達(dá)與生存期的關(guān)系，其中，SSX2IP高表達(dá)病人組(31例)其生存期顯著低于SSX2IP低表達(dá)病人組(20)(P=0.004)。
[0076]圖2顯示了過表達(dá)SSX2IP與肝癌細(xì)胞的腹腔擴(kuò)散和肝轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系:其中，圖2A顯示了.B拍照記錄肝癌細(xì)胞在腹腔內(nèi)的擴(kuò)散情況。B.統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)SSX2IP的肝癌細(xì)胞其在裸鼠腹腔中擴(kuò)散并形成腫瘤的能力顯著高于轉(zhuǎn)染空載細(xì)胞組和未處理細(xì)胞組(6.2±0.84，2.6±0.89，2.4±1.14，**P < 0.001)。C.BEL-7402, BEL-7402Vector,BEL-7402SSX2IP三類細(xì)胞分別通過尾靜脈注射入裸鼠體內(nèi)，10周后，處死并解剖，拍照記錄裸鼠肝的情況。D.統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)SSX2IP的肝癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的比率顯著高于空載對照和空白對照組，轉(zhuǎn)移比率分別為7/10，2/10和1/10，P = 0.023.[0077]圖3顯示了 SSX2IP能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的劃痕愈合能力。其中，劃痕愈合實(shí)驗(yàn)反應(yīng)了肝癌細(xì)胞的移動能力。
[0078]圖3A 顯示了通過劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測 SMMC-7721, SMMC-772Ivector, SMMC-772Issx2ip三類細(xì)胞的移動能力，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)SSX2IP的肝癌細(xì)胞細(xì)胞SMMC-772Issx2ip,其移動能力顯著高于空載細(xì)胞組合空白對照細(xì)胞組，48小時(shí)后的平均間隙距離為:170.83±36.96 μ m,516.67±25.57m, 525.00±31.92 μ m,林P < 0.001。
[0079]圖3Β 顯示了通過劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測 BEL-7402, BEL-7402Vector, BEL_7402SSX2IP 三類細(xì)胞的移動能力，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)SSX2IP的肝癌細(xì)胞細(xì)胞BEL-7402SSX2IP，其移動能力顯著高于空載細(xì)胞組合空白對照細(xì)胞組，48小時(shí)后的平均間隙距離為:183.33 ± 49.07m，312.50±25.00m, 329.17±15.96 μ m,林P < 0.001。
[0080]圖4.SSX2IP能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力 [0081]圖4Α顯示了 SSX2IP對肝癌細(xì)胞SMMC-7721侵襲遷移能力的促進(jìn)結(jié)果:
[0082]圖4B顯示了統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明過表達(dá)SSX2IP肝癌細(xì)胞SMMC_7721SSX2IP，其侵襲和遷移的能力顯著增強(qiáng)。遷移實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)SSX2IP組對比對照組的數(shù)量統(tǒng)計(jì)為:123.33±9.45，59.67±4.73,51.33±6.03 ;侵襲實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)SSX2IP組對比對照組的數(shù)量統(tǒng)計(jì)為:92.00±7.00,43.67±4.16,38.00±3.61，**P < 0.001。
[0083]圖4C顯示了 SSX2IP對肝癌細(xì)胞BEL-7402侵襲遷移能力的促進(jìn)結(jié)果
[0084]圖4D顯示了統(tǒng)計(jì)結(jié)果，表明過表達(dá)SSX2IP肝癌細(xì)胞BEL-7402SSX2IP，其侵襲和遷移的能力顯著增強(qiáng)
[0085]遷移實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)SSX2IP組對比對照組的數(shù)量統(tǒng)計(jì)為:154.67 土 14.05，103.67 ±10.70，109.00 ±7.55 ;*P < 0.01。侵襲實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)SSX2IP組對比對照組的數(shù)量統(tǒng)計(jì)為:113.00±6.56,63.33±11.50,60.67±11.02，*P < 0.01。
[0086]圖5.SSX2IP能夠降低肝癌細(xì)胞對化療藥物的敏感度，增加耐藥性
[0087]圖 5A 顯示了 SMMC-7721, SMMC-772 IVector 和 SMMC-7721SSX2IP 對化療藥物 5_Fu的劑量反應(yīng)曲線和IC5tl值，結(jié)果顯示SMMC-7721SSX2IP對5-FU的IC5tl值顯著高于對照組(24.68± 1.17 μ Μ, 14.59±0.77Μ, 13.60±0.88 μ Μ, **Ρ〈0.001)。
[0088]圖 5Β 顯示了 BEL-7402, BEL_7402Vector 和 BEL-7402SSX2IP 對化療藥物 5_Fu的劑量反應(yīng)曲線和IC5tl值，結(jié)果顯示BEL-7402SSX2IP對5-FU的IC5tl值顯著高于對照組(28.52±0.65 μ Μ, 12.73± 1.81 μ Μ, 14.16± 1.20 μ Μ, **Ρ〈0.001)。
[0089]圖 5C 顯示了 BEL-7402, SMMC-772IVector 和 SMMC-7721SSX2IP 對化療藥物 CDDP的劑量反應(yīng)曲線和IC5tl值，結(jié)果顯示SMMC-7721SSX2IP對⑶DP的IC5tl值顯著高于對照組(11.38± 1.42 μ Μ, 5.72±0.75 μ Μ, 6.18±0.81 μ Μ, **Ρ〈0.001)。
[0090]圖 ? 顯示了 BEL-7402, BEL_7402Vector 和 BEL-7402SSX2IP 對化療藥物 CDDP的劑量反應(yīng)曲線和IC5tl值，結(jié)果顯示BEL-7402SSX2IP對CDDP的IC5tl值顯著高于對照組(9.86±1.24 μ Μ, 6.13±0.24 μ Μ, 5.90±0.47 μ Μ, **Ρ〈0.001)。
【具體實(shí)施方式】
[0091]本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)，SSX2IP抑制劑可以用作預(yù)防或治療腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞遷移，并能提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性；本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了 SSX2IP基因或蛋白可以用于制備提高腫瘤對化療藥物敏感性、篩選抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的藥物；此外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了 SSX2IP基因或蛋白及其激動劑可以用作促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞遷移，并增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性，可以用于動物耐藥、轉(zhuǎn)移模型的制備。
[0092]此外，本發(fā)明人通過研究還發(fā)現(xiàn)，SSX2IP的高表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移有很強(qiáng)的相關(guān)性，實(shí)驗(yàn)證明，SSX2IP可以作為預(yù)測或診斷腫瘤轉(zhuǎn)移的特異性標(biāo)志物，從而制備預(yù)測腫瘤是否可能或診斷腫瘤是否已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的檢測試劑盒。此外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了 SSX2IP可以用于預(yù)測腫瘤患者的生存時(shí)間。在此基礎(chǔ)上，完成了本發(fā)明。
[0093]SSX2IP蛋白和多核苷酸
[0094]在本發(fā)明中，“本發(fā)明蛋白”、“本發(fā)明多肽”、“SSX2IP蛋白”可互換使用，指滑膜肉瘤X斷裂點(diǎn)2相互作用蛋白(簡稱為SSX2IP)。應(yīng)理解，所述術(shù)語還包括SSX2IP的活性片段和衍生物。
[0095]在本發(fā)明中，“本發(fā)明基因”、“本發(fā)明多核苷酸”指編碼SSX2IP蛋白或其活性片段和衍生物的核苷酸序 列，包括正義和反義核酸。SSSX2IP定位于Chr0m0S0melp22.3，基因全長46kb,其中包含14個(gè)外顯子。
[0096]在本發(fā)明中，術(shù)語“SSX2IP蛋白”或“SSX2IP多肽”可互換使用，都指具有人蛋白SSX2IP氨基酸序列的蛋白或多肽。目前SSX2IP已被確定為急性髓性白血病的相關(guān)抗原，是一個(gè)潛在的白血病免疫治療的靶點(diǎn)。
[0097]可用于本發(fā)明的SSX2IP基因核苷酸序列的5種mRNA轉(zhuǎn)錄本的Genbank登錄號為NM001166293.1;NM001166294.1;NM001166295.1;NM001166417.1;NM014021.3。
[0098]一種優(yōu)選的SSX2IP基因核苷酸序列如SEQ ID N0.:1所示，Gene ID: 117178，其編碼的氨基酸序列如SEQ ID N0.:2所示，登錄號為NP001159889.1。
[0099]如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。
[0100]如本文所用，“分離的SSX2IP蛋白或多肽”是指SSX2IP蛋白基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化SSX2IP蛋白?；旧霞兊亩嚯脑诜沁€原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。在本發(fā)明中，SSX2IP蛋白包括融合蛋白和非融合蛋白。
[0101]本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
[0102]本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。
[0103]編碼SSX2IP的成熟多肽的多核苷酸包括:只編碼成熟多肽的編碼序列；成熟多肽的編碼序列和各種附加編碼序列；成熟多肽的編碼序列(和任選的附加編碼序列)以及非編碼序列。術(shù)語“編碼多肽的多核苷酸”可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。
[0104]本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體，其編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領(lǐng)域所知的，等位變異體是一個(gè)多核苷酸的替換形式，它可能是一個(gè)或多個(gè)核苷酸的取代、缺失或插入，但不會從實(shí)質(zhì)上改變其編碼多肽的功能。
[0105]本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交的核酸片段，包括正義和反義的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的長度至少含15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的擴(kuò)增技術(shù)(如PCR)以確定和/或分離編碼SSX2IP蛋白的多核苷酸。
[0106]本發(fā)明的人SSX2IP核苷酸全長序列或其片段通常可以用PCR擴(kuò)增法、重組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴(kuò)增法，可根據(jù)已公開的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開放閱讀框序列來設(shè)計(jì)引物，并用市售的cDNA庫或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫作為模板，擴(kuò)增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長時(shí)，常常需要進(jìn)行兩次或多次PCR擴(kuò)增，然后再將各次擴(kuò)增出的片段按正確次序拼接在一起。
[0107]一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細(xì)胞中分離得到有關(guān)序列。
[0108]此外，還可用人工合成的方法來合成有關(guān)序列，尤其是片段長度較短時(shí)。通常，通過先合成多個(gè)小片段，然后再進(jìn)行連接可獲得序列很長的片段。
[0109]應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA/RNA的方法被優(yōu)選用于獲得本發(fā)明的基因。用于PCR的引物可根據(jù)本文所公開的本發(fā)明的序列信息適當(dāng)?shù)剡x擇，并可用常規(guī)方法合成?？捎贸Ｒ?guī)方法如通過凝膠電泳分離和純化擴(kuò)增的DNA/RNA片段。
[0110]本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明的多核苷酸的載體，以及用本發(fā)明的載體或SSX2IP蛋白編碼序列經(jīng)基因工程產(chǎn)生的宿主細(xì)胞，以及經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明所述多肽的方法。
[0111]通過常規(guī)的重組DNA技術(shù)，可利用本發(fā)明的多核苷酸序列可用來表達(dá)或生產(chǎn)重組的SSX2IP蛋白。一般來說有以下步驟:
[0112](I).用本發(fā)明的編碼人SSX2IP蛋白的多核苷酸(或變異體)，或用含有該多核苷酸的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)合適的宿主細(xì)胞；
[0113](2).在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的宿主細(xì)胞；
[0114](3).從培養(yǎng)基或細(xì)胞中分離、純化蛋白質(zhì)。
[0115]本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建含人SSX2IP編碼DNA序列和合適的轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等。所述的DNA序列可有效連接到表達(dá)載體中的適當(dāng)啟動子上，以指導(dǎo)mRNA合成。表達(dá)載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止子。
[0116] 此外，表達(dá)載體優(yōu)選地包含一個(gè)或多個(gè)選擇性標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如真核細(xì)胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(GFP)，或用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。[0117]包含上述的適當(dāng)DNA序列以及適當(dāng)啟動子或者控制序列的載體，可以用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，以使其能夠表達(dá)蛋白質(zhì)。
[0118]宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞；或是低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞；或是高等真核細(xì)胞，如哺乳動物細(xì)胞。代表性例子有:大腸桿菌，鏈霉菌屬的細(xì)菌細(xì)胞；真菌細(xì)胞如酵母；植物細(xì)胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲細(xì)胞；CH0、COS、或293細(xì)胞的動物細(xì)胞等。
[0119]用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。當(dāng)宿主為原核生物如大腸桿菌時(shí)，能吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞可在指數(shù)生長期后收獲，用CaCl2法處理，所用的步驟在本領(lǐng)域眾所周知。另一種方法是使用MgCl2。如果需要，轉(zhuǎn)化也可用電穿孔的方法進(jìn)行。當(dāng)宿主是真核生物，可選用如下的DNA轉(zhuǎn)染方法:磷酸鈣共沉淀法，常規(guī)機(jī)械方法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。
[0120]獲得的轉(zhuǎn)化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng)，表達(dá)本發(fā)明的基因所編碼的多肽。根據(jù)所用的宿主細(xì)胞，培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基可選自各種常規(guī)培養(yǎng)基。在適于宿主細(xì)胞生長的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)宿主細(xì)胞生長到適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度后，用合適的方法(如溫度轉(zhuǎn)換或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)選擇的啟動子，將細(xì)胞再培養(yǎng)一段時(shí)間。 [0121]在上面的方法中的重組多肽可在細(xì)胞內(nèi)、或在細(xì)胞膜上表達(dá)、或分泌到細(xì)胞外。如果需要，可利用其物理的、化學(xué)的和其它特性通過各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于:常規(guī)的復(fù)性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術(shù)及這些方法的結(jié)
口 ο
[0122]抑制劑
[0123]利用本發(fā)明蛋白，通過各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與SSX2IP蛋白發(fā)生相互作用的物質(zhì)，尤其是抑制劑等。
[0124]本發(fā)明SSX2IP蛋白的抑制劑(包括抗體、反義核酸以及其他抑制劑)，當(dāng)在治療上進(jìn)行施用(給藥)時(shí)，可抑制SSX2IP蛋白的表達(dá)和/或活性，進(jìn)而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞的遷移。通常，可將這些物質(zhì)配制于無毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通常約為5-8，較佳地pH約為6-8，盡管pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于):瘤內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。
[0125]可用于本發(fā)明的抑制劑包括:SSX2IP的抗體、抑制性mRNA、SSX2IP核酸的反義RNA、siRNA、shRNA以及SSX2IP的活性抑制劑。其中，典型的SSX2IP抑制劑為抑制性miRNA、SiRNA0
[0126]典型地，將SSX2IP基因作為制備預(yù)防或治療腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的藥物的靶點(diǎn)的技術(shù)方案包括以下方案:
[0127]1.化學(xué)合成雙鏈核糖核酸分子，其序列特異性針對SSX2IP基因序列，利用脂質(zhì)體包裹遞送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)干擾SSX2IP基因的表達(dá)，觀察軟瓊脂克隆形成能力、細(xì)胞遷移能力等細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。可利用本領(lǐng)域常規(guī)的方法來設(shè)計(jì)和合成特異性針對SSX2IP的核酸序列(如siRNA)。
[0128]2.利用各種載體，包括DNA載體、慢病毒載體來干擾SSX2IP基因的表達(dá)，達(dá)到體內(nèi)干擾SSX2IP基因的效果，檢測它們對裸鼠瘤體腹腔擴(kuò)散或肝轉(zhuǎn)移的治療效果，從而實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤增殖的目的。
[0129]3.獲得能夠特異性抑制SSX2IP基因轉(zhuǎn)運(yùn)活性的多肽、單克隆抗體，達(dá)到抑制SSX2IP活性的目的，從而現(xiàn)實(shí)抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移或遷移的目的。
[0130]本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明SSX2IP抑制劑(如抗體、反義序列(如siRNA)、或抑制劑)以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但并不限于):鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的藥物組合物可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約I微克-10毫克/千克體重。
[0131]抗體
[0132]本發(fā)明還包括對人SSX2IP蛋白具有特異性的多克隆抗體和單克隆抗體，尤其是單克隆抗體。這里，“特異性”是指抗體能結(jié)合于人SSX2IP基因產(chǎn)物或片段。較佳地，指那些能與人SSX2IP基因產(chǎn)物或片段結(jié)合但不識別和結(jié)合于其它非相關(guān)抗原分子的抗體。本發(fā)明的抗體可以通過本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員已知的各種技術(shù)進(jìn)行制備。例如，將提純的人SSX2IP基因產(chǎn)物或它的抗原片段注射入動物體內(nèi)以產(chǎn)生多克隆抗體。同樣，表達(dá)人SSX2IP蛋白或它的抗原的細(xì)胞也可以用來對動物致免疫而產(chǎn)生抗體。
[0133]本發(fā)明不僅包括完整的單克隆或多克隆抗體，而且還包括具有免疫活性的抗體片段，如Fab’或(Fab ) 2片段；抗體重鏈；抗體輕鏈；遺傳工程改造的單鏈Fv分子；或嵌合抗體。
[0134]本發(fā)明的抗體包括可以抑制SSX2IP功能的抗體，也可以是不影響人SSX2IP功能的抗體。每一類抗體都可以通過對人SSX2IP基因產(chǎn)物的片段或功能域致免疫而產(chǎn)生，而人SSX2IP基因產(chǎn)物及其片段可以用重組方法產(chǎn)生或用多肽合成儀進(jìn)行合成。與非修飾形式的SSX2IP基因產(chǎn)物結(jié)合的抗體，可以利用在原核細(xì)胞(如E.coli)中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來免疫動物而得到。與翻譯后修飾形式如糖基化或磷酸化SSX2IP蛋白或多肽結(jié)合的抗體，可以利用在真核細(xì)胞如酵母或昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來免疫動物而得到。
[0135]可用于本發(fā)明的SSX2IP抗體可以是抗人SSX2IP蛋白抗體。本發(fā)明的抗人SSX2IP蛋白抗體可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)中，檢測活檢標(biāo)本中的人SSX2IP蛋白。
[0136]藥物組合物和給藥方式
[0137]本發(fā)明提供了含有活性成分(a)SSX2IP抑制劑；(b)藥學(xué)上可接受的載體；以及任選的(C)化療劑的藥物組合物。
[0138]在本發(fā)明的藥物組合物中，SSX2IP抑制劑SSX2IP抑制劑的含量沒有特別限制，通常為 0.01-95wt%,較佳地為 0.l-90wt%o
[0139]本發(fā)明的藥物組合物可以是單方制劑，也可以是復(fù)方制劑。
[0140]在復(fù)方制劑中，除了含有SSX2IP抑制劑之外，還可包含其他抗腫瘤化合物，例如化療劑。代表性的化療劑包括(但并不限于):烷化劑、抗代謝物、葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌呤類似物以及相關(guān)抑制劑、長春花堿類、epipodopyvllotoxins、抗生素、L 一天冬酞胺酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、干擾素、鉬配位復(fù)合物、大黃素取代的脲、甲基肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)抑制劑、腎上腺皮質(zhì)類固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素以及促性腺激素-釋放激素類似物。優(yōu)選的化療劑包括:5—氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氫葉酸、伊立替康、奧沙利鉬、卡培他濱、紫杉醇和多西紫衫醇。
[0141]本發(fā)明的藥物組合物的劑型和制備方法沒有特別限制，可用本領(lǐng)域常規(guī)通用的制法制成片劑、膠囊、顆粒劑、緩釋劑、注射劑等各種劑型。優(yōu)選的劑型是口服制劑(如片劑)和注射劑。
[0142]在本發(fā)明中，SSX2IP抑制劑或含SSX2IP抑制劑的藥物制劑可用于預(yù)防和治療腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移。
[0143]適用于本發(fā)明的腫瘤包括(但并不限于):黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺癌、肝癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、白細(xì)胞過多癥、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、鱗狀細(xì)胞癌、頭癌、頸癌、牙齦癌、舌癌、乳癌、前列腺癌、腎癌、骨癌、睪丸癌、卵巢癌、間皮瘤、肉瘤、宮頸癌、胃腸癌、淋巴瘤、腦瘤、結(jié)腸癌以及膀胱癌。
[0144]在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述的腫瘤為肝癌。
[0145]在本發(fā)明中，給藥方式?jīng)]有特別限制，可以通過口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)或皮下等途徑給藥。
[0146]本發(fā)明制劑可以每天服用或給藥一次或兩次、或多次，或者以緩釋方式給藥。優(yōu)選的方式是每天服藥一次，因?yàn)檫@樣便于病人堅(jiān)持，從而顯著提高病人服藥的順應(yīng)性。
[0147]服用時(shí)，極大多數(shù)病例一般每天應(yīng)用的總劑量為每人Img~200g，較佳地為IOmg ~100g0
[0148]激動劑
[0149]利用本發(fā)明蛋白，通過各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與SSX2IP蛋白發(fā)生相互作用的物質(zhì)，尤其是激動劑等。
[0150]本發(fā)明SSX2IP蛋白的激動劑，當(dāng)進(jìn)行施用(給藥)時(shí)，可促進(jìn)SSX2IP蛋白的表達(dá)和/或活性，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞(包括肝癌)的轉(zhuǎn)移或遷移。通常，可將這些激動劑配制于無毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通常約為5-8，較佳地pH約為6-8，盡管pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過體外或非體外的常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于):瘤內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。
[0151]本發(fā)明的SSX2IP基因、蛋白或其激動劑特別適用于體外腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)以及腫瘤動物模型的制備，尤其是肝癌細(xì)胞肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或腹腔轉(zhuǎn)移動物模型建模。
[0152]篩選方法
[0153]本發(fā)明還提供了基于SSX2IP進(jìn)行藥物篩選的方法。一種方法是先篩選影響(抑制)SSX2IP表達(dá)或活性的化合物，然后對篩選出的化合物進(jìn)一步測試其對癌細(xì)胞的抑制作用。
[0154]其中，代表性的癌細(xì)胞包括肝癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、前列腺細(xì)胞、乳腺細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞。
[0155] 本發(fā)明提供的篩選預(yù)防或治療腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞遷移或提高化療藥物敏感性的候選化合物的方法，基于該化合物對SSX2IP的表達(dá)量和/或活性的影響，一種典型的篩選方法包括步驟:[0156](a)測試組中，在細(xì)胞的培養(yǎng)體系中添加測試化合物，并觀察所述測試組的細(xì)胞中SSX2IP的表達(dá)量和/或活性；在對照組中，在相同細(xì)胞的培養(yǎng)體系中不添加測試化合物，并觀察對照組的所述細(xì)胞中SSX2IP的表達(dá)量和/或活性；
[0157]其中，如果測試組中細(xì)胞的SSX2IP的表達(dá)量和/或活性小于對照組，就表明該測試化合物是對SSX2IP的表達(dá)和/或活性有抑制作用的治療肝癌的候選化合物。和/或
[0158](b)對于步驟(a)中獲得的候選化合物，進(jìn)一步測試其對肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移或遷移的抑制作用。如，在測試組中，肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)體系中添加測試化合物，并觀察肝癌細(xì)胞移動的距離的數(shù)量和/或侵襲情況；在對照組中，在肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)體系中不添加測試化合物，并觀察肝癌細(xì)胞移動的距離的數(shù)量和/或侵襲情況；其中，如果測試組中肝癌細(xì)胞的遷移距離或侵襲數(shù)量顯著小于對照組，就表明該測試化合物是對肝癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞或肝癌細(xì)胞遷移有抑制作用的治療肝癌的候選化合物。
[0159]檢測方法和試劑盒
[0160]本發(fā)明涉及定量和定位檢測人SSX2IP蛋白水平或mRNA水平的診斷試驗(yàn)方法。這些試驗(yàn)是本領(lǐng)域所熟知的。試驗(yàn)中所檢測的人SSX2IP蛋白水平，可以用于診斷腫瘤的轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞的遷移。
[0161]一種檢測樣品中是否存在SSX2IP蛋白的方法是利用SSX2IP蛋白的特異性抗體進(jìn)行檢測，它包括:將樣品與SSX2IP蛋白特異性抗體接觸；觀察是否形成抗體復(fù)合物，形成了抗體復(fù)合物就表示樣品中存在SSX2IP蛋白。
[0162]SSX2IP蛋白或其 多核苷酸可用于SSX2IP蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列或DNA芯片上，用于分析組織中基因的差異表達(dá)分析和基因診斷。抗SSX2IP的抗體可以固定在蛋白質(zhì)芯片上，用于檢測樣品中的SSX2IP 蛋白。
[0163]本發(fā)明還提供了一種檢測肝癌的試劑盒，它含有特異性擴(kuò)增SSX2IP的引物對和/或SSX2IP特異性抗體以及標(biāo)簽或說明書。
[0164]其中，所述的標(biāo)簽或說明書注明以下內(nèi)容:當(dāng)檢測對象的SSX2IP相對-肌動蛋白的mRNA表達(dá)量與癌旁組織的SSX2IP相對-肌動蛋白的mRNA表達(dá)量之比>2，則提示該檢測對象腫瘤轉(zhuǎn)移的幾率高于普通人群。
[0165]一種典型的本發(fā)明的試劑盒可用于檢測人肝組織樣品或血液樣品。
[0166]本發(fā)明還包括一種抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的方法，包括步驟:給需要治療的對象(哺乳動物)施用安全有效量的SSX2IP抑制劑。
[0167]本發(fā)明的有益效果
[0168]1.本發(fā)明SSX2IP抑制劑可以有效地抑制腫瘤，特別是肝癌的轉(zhuǎn)移或肝癌細(xì)胞的遷移，可作為預(yù)防或治療腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的藥物。
[0169]2.本發(fā)明SSX2IP抑制劑可以顯著降低腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性，從而提高對化療藥物的敏感度，以提高化療藥物的效果。
[0170]3.本發(fā)明的SSX2IP抑制劑還可以用作藥物的篩選，從而篩選出對能夠有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的藥物，或?qū)熕幟舾械乃幬铩?br> [0171]4.本發(fā)明SSX2IP基因或蛋白及其激動劑可用于促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移或遷移，可用于離體癌細(xì)胞的培養(yǎng)或腫瘤動物模型的建模。[0172]5.本發(fā)明SSX2IP基因或蛋白可以用于作為診斷或預(yù)測腫瘤，尤其是肝癌轉(zhuǎn)移的特異性標(biāo)志物，即SSX2IP高表達(dá)者腫瘤轉(zhuǎn)移的幾率更大。
[0173]6.本發(fā)明SSX2IP基因或蛋白還可以用于預(yù)測腫瘤患者的生存時(shí)間，即SSX2IP表達(dá)量越高，腫瘤患者的生存時(shí)間越短。
[0174]實(shí)施例1
[0175]制備預(yù)測或診斷腫瘤是否轉(zhuǎn)移/預(yù)測患者生存期的試劑盒
[0176]制備一用于組織學(xué)檢測預(yù)測或診斷腫瘤是否轉(zhuǎn)移/預(yù)測患者生存期的試劑盒，所述試劑盒包括:
[0177](a)容器，以及位于容器內(nèi)的特異性針對SSX2IP的以下抗體:抗人SSX2IP的抗體(購自Abcam和Sigma公司);和
[0178](b)以及標(biāo)簽或說明書，所述標(biāo)簽或說明書注明所述試劑盒用于預(yù)測腫瘤是否轉(zhuǎn)移檢測或患者生存期。
[0179]實(shí)施例2SSX2IP蛋白表達(dá)與腫瘤癌栓形成和腫瘤包膜完整性的相關(guān)性
[0180]材料:53位肝癌病人樣本，均收集于復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院。獲得受試者的知情同意及醫(yī)院的倫理審查委員會的批準(zhǔn)。 [0181]方法:采用實(shí)施例1制備的試劑盒，分組情況如表1所示；觀察指標(biāo):腫瘤大小、癌栓形成及腫瘤包膜完整性；測定腫瘤瘤體內(nèi)SSX2IP的表達(dá)水平，并觀察其表達(dá)水平對于癌癥患者并發(fā)癥的發(fā)生有無意義。
[0182]結(jié)果:如表1所示:
[0183]表1
【權(quán)利要求】
1.一種滑膜肉瘤X斷裂點(diǎn)基因2相互作用蛋白即SSX2IP的抑制劑的用途，其特征在于，用于制備抑制腫瘤轉(zhuǎn)移或抑制腫瘤細(xì)胞遷移的藥物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的SSX2IP蛋白來源于哺乳動物；較佳地，來源于人、小鼠或大鼠。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的腫瘤包括肝癌、胃癌、腸癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抑制劑包括:SSX2IP的抗體、SSX2IP核酸的反義RNA、siRNA、shRNA以及SSX2IP的活性抑制劑。
5.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物含有藥學(xué)上可接受的載體、SSX2IP抑制劑和任選的化療劑。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述的化療劑包括酰胺(CTX)、異環(huán)磷酰胺(IFO)、絲裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、長春新堿(VCR)、長春花堿(VBL)、依托泊甙(VP16)、威猛(Vumon)、順鉬(CDDP)、氟尿嘧啶(5-FU)、卡鉬(CBP)和甲氨蝶呤(MTX)。
7.—種SSX2IP抑制劑的用途，其特征在于，(a)用于制備促進(jìn)化療或放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的藥物組合物，或(b)用于制備促進(jìn)化療或放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的促進(jìn)劑，或(C)用于制備使得癌細(xì)胞對 化療或放療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡更敏感的增敏劑。
8.—種體外非治療性抑制癌細(xì)胞遷移的方法，其特征在于，包括步驟:在SSX2IP抑制劑存在下，培養(yǎng)癌細(xì)胞，從而抑制癌細(xì)胞遷移。
9.一種SSX2IP基因、SSX2IP蛋白或其激動劑的用途，其特征在于，用于制備促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移的組合物。
10.一種篩選用于抑制腫瘤細(xì)胞遷移或用于提高癌細(xì)胞藥物敏感性的候選化合物的方法，其特征在于，所述方法包括步驟: (a)測試組中，在細(xì)胞的培養(yǎng)體系中添加測試化合物，并觀察所述測試組的細(xì)胞中SSX2IP的表達(dá)量和/或活性；在對照組中，在相同細(xì)胞的培養(yǎng)體系中不添加測試化合物，并觀察對照組的所述細(xì)胞中SSX2IP的表達(dá)量和/或活性； 其中，如果測試組中細(xì)胞的SSX2IP的表達(dá)量和/或活性小于對照組，就表明該測試化合物是對SSX2IP的表達(dá)和/或活性有抑制作用的治療腫瘤轉(zhuǎn)移或腫瘤細(xì)胞遷移或能夠提高化療藥物敏感性的化合物；和 (b)對于步驟(a)中獲得的候選化合物，任選地測試所述候選化合物對癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移或遷移的抑制作用或所述候選化合物對癌細(xì)胞藥物敏感性的影響作用。
【文檔編號】A61K39/395GK104001174SQ201310062585
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月27日
【發(fā)明者】霍克克, 李璞 申請人:霍克克, 李璞