專利名稱：一種從野生石龍芮里提取總黃酮的生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從大興安嶺野生石龍芮里提取總黃酮的方法，特別是涉及一種利用超聲波提取、超濾分離并與聚酰胺-大孔樹脂技術(shù)藕聯(lián)，純化總黃酮的新方法。
背景技術(shù)：
石龍苘學(xué)名Ranunculus sceleratus L.是毛茛科植物石龍苘的全草,一年生或二年生草本，高10-50cm。須根簇生。莖直立，上部多分枝，無毛或疏生柔毛。基生葉有長柄，長3-15cm;葉片輪廓腎狀圓形，長l-4cm，寬1. 5_5cm，莖下部葉與基生葉相同，上部葉較小，3全裂，裂片披針形或線形，無毛，基部擴(kuò)大成膜質(zhì)寬鞘，抱莖。聚傘花序有多數(shù)花；花梗長l-2cm,無毛；萼片5,橢圓形,長2-3. 5mm,外面有短柔毛；花瓣5,倒卵形,長1. 5_3mm,淡黃色，基部有短爪，蜜槽呈棱狀袋穴；花期4-6月，果期5-8月。國內(nèi)一般用水提取，正丁醇萃取，或乙醇熱回流提取生產(chǎn)總黃酮，存在著提取時間長、收率低，活性成分損失大等缺點(diǎn)。本發(fā)明的不同之處在于采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)的新方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明主要采用超聲波提取、超濾分離并與聚酰胺-大孔樹脂技術(shù)藕聯(lián)的新方法，純化總黃酮，總黃酮純度高；本發(fā)明方法簡單易操作，適合大生產(chǎn)，成本低，選用食品添加劑允許使用的乙醇做提取溶劑，無化學(xué)殘留。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)`明采用的技術(shù)方案是—種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其步驟如下(I)超聲提取石龍芮干燥根莖粉碎至40-60目，加入體積濃度70-75%乙醇，在一定料液比下超聲波提取，超聲頻率50-200KHZ，超聲時間40-60min ；(2)過濾回收乙醇溶劑，將經(jīng)步驟(I)處理的提取液走管道過濾機(jī)，得初提物；(3)超濾稀釋初提物，截留分子量10000-20000，過濾壓力O. 2-0. 3MPa，膜過濾提取液并保持一定的回收率(4)聚酰胺初步精制將所得溶液拌入干燥的聚酰胺樹脂，先以水洗去水溶性雜質(zhì)，再用20%、40%、60%、80%乙醇依次洗脫，收集洗脫液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔樹脂聯(lián)用純化
將提取液初步濃縮，加少量乙醇與1/4-1/6藥材用量的聚酰胺樹脂拌合，揮去溶齊U，將聚酰胺放置樹脂柱中，水洗脫至無色，取出鋪在填充于3倍至5倍于藥材用量的大孔樹脂上。濕法裝柱，樹脂柱的高徑比為3 1-5 1，流速為3-5BV/h ;(6)乙醇洗脫在常溫常壓下，以l_3BV/h流速，用一定體積濃度乙醇液洗脫，洗脫體積為5-7BV ；(7)重結(jié)晶取純化的總黃酮按一定比例加甲醇，加熱溶解，趁熱抽濾，放置過夜，析出結(jié)晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的總黃酮，純度在98%以上。
具體實(shí)施例方式實(shí)施案例1:一種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其步驟如下(I)超聲提取IOOkg石龍芮干燥根莖粉碎至40目，加入70%乙醇，超聲波提取，超聲頻率50KHZ，料液比1: 6，超聲時間40min;(2)過濾回收乙醇溶劑，將經(jīng)步驟(I)處理的提取液走管道過濾，得初提物；(3)超濾稀釋初提物，走截留分子量10000的超濾膜，過濾壓力O. 2MPa，過濾溫度控制在30°C，回收率控制在80% ；(4)聚酰胺初步精制將所得溶液與干燥的60目聚酰胺樹脂混合，先以水洗去水溶性雜質(zhì)，再用20%、40%,60%,80%乙醇依次洗脫，收集洗脫液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔樹脂聯(lián)用純化將提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇與1/4藥材用量的聚酰胺粉拌合，揮去溶劑，將聚酰胺放置樹脂柱中，水洗脫至無色，取出鋪在填充3倍于藥材用量的NKA-1I大孔樹脂上。濕法裝柱，樹脂柱的高徑比為3 1，流速為3BV/h;(6)乙醇洗脫在常溫常壓下，以lBV/h流速，用乙醇液洗脫，洗脫體積為5BV，乙醇濃度為70% ；(7)重結(jié)晶取純化的石龍芮總黃酮按1: 50的量加甲醇，加熱溶解，趁熱抽濾，放置過夜，析出結(jié)晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的總黃酮256kg，純度為98. 03%。實(shí)施案例2 :—種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其步驟如下(1)超聲提取50kg石龍芮干燥根莖粉碎至20目，加入75%乙醇，超聲波提取，超聲頻率100KHZ，料液比1: 8，超聲時間50min;(2)過濾回收乙醇溶劑，將經(jīng)步驟(I)處理的提取液走管道過濾，得初提物；(3)超濾稀釋初提物，走截留分子量15000的超濾膜，過濾壓力O. 2MPa，過濾溫度控制在40°C，回收率控制在90% ；(4)聚酰胺初步精制將所得溶液與干燥的80目聚酰胺樹脂混合，先以水洗去水溶性雜質(zhì)，再用20%、40%,60%,80%乙醇依次洗脫，收集洗脫液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔樹脂聯(lián)用純化將提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇與1/5藥材用量的聚酰胺粉拌合，揮去溶劑，將聚酰胺放置樹脂柱中，水洗脫至無色，取出鋪在填充于4倍于藥材用量的HPD100大孔樹脂上。濕法裝柱，樹脂柱的高徑比為4 1，流速為4BV/h;(6)乙醇洗脫在常溫常壓下，以3BV/h流速，用乙醇液洗脫，洗脫體積為6BV，乙醇濃度為80% (7)重結(jié)晶 取純化的石龍芮總黃酮按1: 100的量加甲醇，加熱溶解，趁熱抽濾，放置過夜，析出結(jié)晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的總黃酮1. 31kg，純度為98.1 %。實(shí)施案例3 :—種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其步驟如下(I)超聲提取200kg石龍芮干燥根莖粉碎至40目，加入75%乙醇，超聲波提取，超聲頻率80KHZ，料液比1: 10，超聲時間60min ;(2)過濾回收乙醇溶劑，將經(jīng)步驟(I)處理的提取液走管道過濾，得初提物；(3)超濾稀釋初提物，走截留分子量20000的超濾膜，過濾壓力O. 3MPa，過濾溫度控制在45 °C，回收率控制在95% ；(4)聚酰胺初步精制將所得溶液與干燥的80目聚酰胺樹脂混合，先以水洗去水溶性雜質(zhì)，再用20%、40%,60%,80%乙醇依次洗脫，收集洗脫液，得提取液；(5)聚酰胺-大孔樹脂聯(lián)用純化將提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇與1/6藥材用量的聚酰胺粉拌合，揮去溶劑，將聚酰胺放置樹脂柱中，水洗脫至無色，取出鋪在填充于5倍于藥材用量的AB-8大孔樹脂上。濕法裝柱，樹脂柱的高徑比為5 1，流速為5BV/h;(6)乙醇洗脫在常溫常壓下，以2BV/h流速，用乙醇液洗脫，洗脫體積為7BV，乙醇濃度為85% ；(7)重結(jié)晶取純化的石龍芮總黃酮按1: 100的量加甲醇，加熱溶解，趁熱抽濾，放置過夜，析出結(jié)晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的總黃酮5. 03kg，純度為98. 42%。
權(quán)利要求
1.一種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其步驟如下 (1)超聲提取 石龍芮干燥根莖粉碎至40-60目，加入體積濃度70-75%乙醇，超聲波提取，超聲頻率50-200KHZ，超聲時間 40-60min ； (2)過濾 回收乙醇溶劑，將經(jīng)步驟(I)處理的提取液走管道過濾機(jī)，得初提物； (3)超濾 稀釋初提物，截留分子量10000-20000，過濾壓力0. 2-0. 3MPa，膜過濾提取液； (4)聚酰胺初步精制 將所得溶液拌入干燥的聚酰胺樹脂，先以水洗去水溶性雜質(zhì)，再用20 %、40 %、60 %、80%乙醇依次洗脫，收集洗脫液，得提取液； (5)聚酰胺-大孔樹脂聯(lián)用純化 將提取液初步濃縮，加少量乙醇與1/4-1/6藥材用量的聚酰胺樹脂拌合，1/5揮去溶劑，，將聚酰胺放置樹脂柱中，水洗脫至無色，取出鋪在填充于3倍至5倍于藥材用量的大孔樹脂上。濕法裝柱，樹脂柱的高徑比為3 1-5 1，流速為3-5BV/h ; (6)乙醇洗脫 在常溫常壓下，以l-3BV/h流速，用一定體積濃度乙醇液洗脫，洗脫體積為5-7BV ； (7)重結(jié)晶 取純化的總黃酮按一定比例加甲醇，加熱溶解，趁熱抽濾，放置過夜，析出結(jié)晶，過濾，分離晶體；將剩余物用如上方法加熱溶解，重結(jié)晶，如此反復(fù)兩次，得到精制的總黃酮，純度在98 以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其特征是在所述的步驟(I)中，酶解過程中料液比為1: 6-10。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其特征是在所述的步驟(3)中，過濾溫度控制在30-45 V，回收率控制在80-95 %。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其特征是在所述的步驟(4)中，聚酰胺樹脂為60-80 目。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其特征是在所述的步驟(5)中，大孔樹脂型號為NKA-11、HPD100、AB-8 樹脂中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種采用超聲波提取法，超濾分離藕聯(lián)聚酰胺-大孔樹脂二級純化技術(shù)提純石龍芮總黃酮的新方法，其特征是在所述的步驟￠)中，洗脫乙醇體積濃度為 70-85%。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從大興安嶺野生石龍芮里提取總黃酮的方法，特別是涉及一種利用超聲波提取、超濾分離并與聚酰胺-大孔樹脂技術(shù)藕聯(lián)，純化總黃酮的新方法。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)提取方便快捷，提取純度高，適用于大生產(chǎn)。1、應(yīng)用超聲波提取技術(shù)，有效成分提取速度快，含量高。2、超濾分離是在常溫下進(jìn)行的，避免了因熱效應(yīng)引起的有效成分結(jié)構(gòu)變化及生理活性降低的問題。3、聚酰胺-大孔樹脂藕聯(lián)技術(shù)，進(jìn)一步提高了有效成分的純度，可使總黃酮有效成分活性更高。本發(fā)明先用乙醇做溶劑經(jīng)過超聲波預(yù)處理，低溫超濾分離，再經(jīng)聚酰胺-大孔樹脂二次純化，有效成分總黃酮純度提高到98.42％。
文檔編號A61K36/71GK103040965SQ20121059563
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者張亞紅, 姚德坤, 姚德利, 萬莉 申請人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司