廣金錢草總黃酮提取物的特征圖譜及其建立方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種從廣金錢草中提取總黃酮提 取物的方法和一種廣金錢草總黃酮提取物特征圖譜及其建立方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 廣金錢草是一種藥用植物，具有利濕退黃、利尿通淋的功效。廣金錢草中含有豐富 的黃酮類物質(zhì)。廣金錢草總黃酮提取物是一類具有相同母核結(jié)構(gòu)2-苯基色原酮的黃酮類 物質(zhì)。黃酮的功效是多方面的，它可以有效清除體內(nèi)的氧自由基、改善血液循環(huán)、降低膽固 醇，降低血糖、增進(jìn)傷口愈合和止痛。然而，廣金錢草黃酮的提取工藝和確定其中黃酮類物 質(zhì)組成的方法仍有待改進(jìn)。
[0003] 同時(shí)，廣金錢草分布廣泛，分布于福建、湖南、廣西和廣東等省區(qū)，因此，如何有效 確定廣金錢草的來源、并建立廣金錢草總黃酮提取物特征圖譜是一個(gè)尚待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的 在于提出一種從廣金錢草中提取總黃酮提取物的方法、一種確定廣金錢草中黃酮類物質(zhì)組 成的方法以及一種確定廣金錢草來源的方法。
[0005] 在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種從廣金錢草中提取總黃酮提取物的方 法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：將廣金錢草樣品與乙醇混合，并通過回流或超聲方 法進(jìn)行提取，以便獲得總黃酮提取物，其中，所述乙醇的濃度為25~95%，所述廣金錢草的 重量與所述乙醇的體積比為25mg :25~100ml，優(yōu)選25mg :50ml。通過上述提取方法，既可 以確保完全提取廣金錢草中的總黃酮，提取效率高，又可以使得后期液相色譜分析中峰的 分離度良好。
[0006] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述從廣金錢草中提取總黃酮提取物的方法可以進(jìn)一步包 括下列附加技術(shù)特征至少之一：
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述方法采用超聲方法進(jìn)行提取10~40分鐘，優(yōu)選20分 鐘。通過上述超聲提取方法，既節(jié)約了提取時(shí)間，又確保了完全提取廣金錢草中的總黃酮， 使得提取效率高，利于黃酮的藥用和液相色譜分析。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述乙醇的濃度為75%。發(fā)明人驚奇的發(fā)現(xiàn)，廣金錢草樣品 在75%乙醇里面提取效率最高，且液相色譜分析中峰的分離度良好。
[0009] 在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種建立廣金錢草總黃酮提取物特征圖譜的 方法，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：按照前面所述的方法，從廣金錢草中提取總黃酮 提取物；對所述總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析，并基于所得到的液相色譜分析結(jié)果建立 所述廣金錢草總黃酮提取物特征圖譜。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過上述提取方法，廣金錢草中的總黃 酮可以被高效提取。對上述總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析得色譜分析圖，從而可以建立 廣金錢草總黃酮提取物的特征圖譜。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述建立廣金錢草總黃酮提取 物特征圖譜的方法準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性高。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述建立廣金錢草總黃酮提取物特征圖譜的方法可以進(jìn)一 步包括下列附加技術(shù)特征至少之一：
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述液相色譜分析采用下列條件：采用甲醇-〇. 1%甲酸體 系進(jìn)行梯度洗脫，色譜柱為Waters BEH C18 (2. ImmX 100mm，1. 8微米），柱溫為25攝氏度， 流速為0. 2ml/min ;進(jìn)樣量：1微升，檢測波長為272nm，洗脫條件：
[0012]
[0013] 在上述色譜條件下，色譜峰可以達(dá)到很好的分離效果，從而建立廣金錢草總黃酮 提取物的特征圖譜。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述液相色譜分析條件下的建立廣金錢草總黃 酮提取物特征圖譜的方法具有高穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性的特點(diǎn)。在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提 出了一種確定廣金錢草中黃酮類物質(zhì)組成的方法，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：按照 上述方法，從廣金錢草中提取總黃酮提取物；對總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析，并基于所 得到的液相色譜分析結(jié)果確定所述廣金錢草中黃酮類物質(zhì)的組成。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過上述 提取方法，廣金錢草中的總黃酮可以被高效提取。對上述總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析 得色譜分析圖，從而可以準(zhǔn)確確定廣金錢草中黃酮類物質(zhì)的組成。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上 述確定廣金錢草中黃酮類物質(zhì)組成的方法準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性高。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述確定廣金錢草中黃酮類物質(zhì)組成的方法可以進(jìn)一步包 括下列附加技術(shù)特征至少之一：
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法中的液相色譜分析采用下列條件：采用甲醇-0. 1% 甲酸體系進(jìn)行梯度洗脫，色譜柱為Waters BEH C18 (2. ImmX IOOmm, 1.8微米），柱溫為25攝 氏度，流速為〇. 2ml/min，進(jìn)樣量：1微升，檢測波長為272nm，洗脫條件是：
[0016]
[0017] 在上述色譜條件下，色譜峰可以達(dá)到很好的分離效果，從而有效確定廣金錢草中 黃酮類物質(zhì)組成。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述液相色譜分析條件下的確定廣金錢草中黃酮 類物質(zhì)組成的方法具有高穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性的特點(diǎn)。
[0018] 在本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種確定廣金錢草來源的方法，根據(jù)本發(fā)明 的實(shí)施例，該方法包括：按照上述提取廣金錢草中總黃酮提取物的方法，從廣金錢草中提取 總黃酮提取物；以及對所述總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析，并基于所得到的液相色譜分 析結(jié)果確定所述廣金錢草的來源。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過上述提取方法，廣金錢草中的總黃酮 可以被高效提取。對上述總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析得色譜分析圖，從而可以準(zhǔn)確確 定廣金錢草的來源。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述確定廣金錢草來源的方法準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性 尚。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述確定廣金錢草來源的方法可以進(jìn)一步包括下列附加技 術(shù)特征至少之一：
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法中的液相色譜分析采用的檢測波長為272nm。在此檢 測波長條件下，色譜峰可以達(dá)到很好的分離效果，從而有效確定廣金錢草來源。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法中的液相色譜分析采用下列條件：采用甲醇-0. 1% 甲酸體系進(jìn)行梯度洗脫，色譜柱為Waters BEH C18 (2. ImmX IOOmrn, 1.8微米），柱溫為25攝 氏度，流速為〇. 2ml/min，進(jìn)樣量：1微升，洗脫條件是：
[0022]
[0023] 在上述色譜條件下，色譜峰可以達(dá)到很好的分離效果，從而有效確定廣金錢草來 源。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述液相色譜分析條件下的確定廣金錢草來源的方法具有高穩(wěn) 定性和準(zhǔn)確性的特點(diǎn)。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述基于所得到的液相色譜分析結(jié)果確定所述廣金錢草的 來源包括：(a)將所述液相色譜分析結(jié)果的色譜圖與預(yù)定的對照圖譜進(jìn)行比對；以及（b)判 斷所述色譜圖與所述對照圖譜的相似性，并且基于所述相似性確定所述廣金錢草的來源。 通過對比分析結(jié)果色譜圖和對照色譜圖的相似性，可以有效確定廣金錢草的來源。根據(jù)本 發(fā)明的實(shí)施例，上述確定廣金錢草來源的方法具有高穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性的特點(diǎn)。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在步驟（b)中，所述相似性是基于圖譜中下列至少之一位 置是否存在峰而確定的：15. Olmin、15. 71min、16. 60min、18. 04min、19. 77min、21. 38min、 22. 78min、23. 18min、23. 73min、27. 2min、29. 51min、31. 08min、31. 72min、32. 98min，其中， 所述位置的峰代表如下：15. Olmin代表vicenin-2,18. 04min代表木犀草素-6-C- a -L- P比 喃阿拉伯糖-8-〇β -D-吡喃葡萄糖苷，19. 77min代表vicenin-l，23. 18min代表木犀草 素-6-C- β -D-吡喃葡萄糖-8-C- β -吡喃木糖苷，23. 73min代表夏佛塔苷，27. 20min代表 染料木素-7-0-β -D-呋喃芹糖基-(I - 6)-O-β -D-吡喃葡萄糖苷，31. 08min代表新夏佛 塔苷，31. 72min代表異牡荊苷，32. 98min代表Vicenin-3。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述位置 的峰形和相對保留時(shí)間穩(wěn)定，通過對比待確定廣金錢草的色譜圖峰形和對照色譜圖峰形， 可以有效確定廣金錢草的來源。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在步驟（b)中，所述相似性是基于圖譜中下列位置是 否存在峰而確定的：15.01min、15.71min、18.04min、19.77min、22.78min、23.18min、 23.73min、27.2min、29.51min、31.08min、31.72min、32.98min，其中，所述位置的峰 代表如下：15. Olmin代表vicenin-2,18. 04min代表木犀草素-6-C-a -L-吡喃阿 拉伯糖-8-C- β -D-吡喃葡萄糖苷，19. 77min代表vicenin-1，23. 18min代表木犀草 素-6-C- β -D-吡喃葡萄糖-8-C- β -吡喃木糖苷，23. 73min代表夏佛塔苷，27. 20min代表 染料木素-7-0-β -D-呋喃芹糖基-(1 - 6)-0-β -D-吡喃葡萄糖苷，31. 08min代表新夏佛 塔苷，31. 72min代表異牡荊苷，32. 98min代表Vicenin-3。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述位置 的峰形和相對保留時(shí)間具有穩(wěn)定性，通過對比待確定廣金錢草的色譜圖峰形和對照色譜圖 峰形，可以有效確定廣金錢草的來源。
[0027] 本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，上述圖譜中位置峰的確定的方法和效果同樣適用于建 立廣金錢草總黃酮提取物特征圖譜的方法和確定廣金錢草中黃酮類物質(zhì)組成的方法。
[0028] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【附圖說明】
[0029] 圖1是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1的對照品紫外掃描圖；
[0030] 圖2是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1的對廣金錢草總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，不 同甲酸濃度作為色譜流動(dòng)相的色譜圖；
[0031] 圖3是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1的對廣金錢草總黃酮提取物進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，不 同柱溫下的色譜圖；
[0032] 圖4是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1的對廣金錢草總