專利名稱：一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑及誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到水產(chǎn)品養(yǎng)殖領(lǐng)域，具體指一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑及誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
鱉是我國(guó)傳統(tǒng)高檔滋補(bǔ)水產(chǎn)品，也是百姓喜愛的名貴水產(chǎn)品和水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要品種，在我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)中有舉足輕重的作用。在長(zhǎng)期的鱉養(yǎng)殖實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，雌、雄個(gè)體間存在著很大的生長(zhǎng)差異。雄性中華鱉的生長(zhǎng)明顯快于雌鱉，據(jù)試驗(yàn)，中華鱉養(yǎng)殖至平均體重300g的群體，雄鱉比雌鱉生長(zhǎng)快12. 7% 17. 0%，隨著養(yǎng)殖期的延長(zhǎng)，雌、雄鱉的生長(zhǎng)差異還會(huì)進(jìn)一步增大，雄性中華鱉肌肉中脂肪少，裙邊寬厚，內(nèi)臟小，具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，并且消費(fèi)者喜食雄鱉，雄鱉不但暢銷，而且同比單價(jià)雄性比雌性高25%。目前全國(guó)中華鱉年
產(chǎn)量約在22 25萬(wàn)噸，其中浙江省中華鱉養(yǎng)殖年產(chǎn)量達(dá)10 12萬(wàn)噸，約占全國(guó)總產(chǎn)量的一半，產(chǎn)值達(dá)50億元，是浙江省第一大水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)。因此，如果能人為控制中華鱉的雄鱉苗比例，將大大提高中華鱉養(yǎng)殖的產(chǎn)量、產(chǎn)值和效益。作為產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要技術(shù)，業(yè)內(nèi)也對(duì)中華鱉性別控制開展積極的技術(shù)探索。公告號(hào)為CN102487883A的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開了《一種中華鱉性別控制方法》，其是在23°C 35°C的孵化溫度下，向中華鱉卵的動(dòng)物極每天滴加20 30微克的甲基睪丸素，直至幼鱉出殼。此技術(shù)存在以下兩個(gè)缺陷①雖然甲基睪丸素能誘導(dǎo)中華鱉外部性征，但是由于雌性本體中存在的芳香化酶能將睪丸素轉(zhuǎn)變成雌激素，因此單獨(dú)的甲基睪丸素處理時(shí)很難達(dá)到徹底的性逆轉(zhuǎn)的效果，無(wú)法使全部個(gè)體雄性化。②此法需每天滴加藥物，操作繁瑣，且高劑量的甲基睪丸素極易導(dǎo)致胚胎發(fā)育以及日后性腺發(fā)育的不正常。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種性別控制效果好且不會(huì)影響中華鱉性腺發(fā)育的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供一種性別控制效果好且不會(huì)影響中華鱉性腺發(fā)育的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為該中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)齊U，其特征在于包括將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶于純度為92-98%的酒精中，得到芳香化酶抑制劑濃度為5(Γ 50μ g/μ1、輔助劑濃度為5(Γ 50μ g/μ I誘導(dǎo)劑；其中，所述輔助劑選自睪酮，甲睪酮或丙酸睪酮。為了盡量避免誘導(dǎo)劑的殘留，較好的，所述芳香化酶抑制劑的濃度為50μ g/μ 1，所述輔助劑的濃度為50 μ g/ μ I。該濃度的誘導(dǎo)劑其性別轉(zhuǎn)換率可達(dá)到95%或以上。使用上述中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑進(jìn)行中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法，其特征在于包括下述步驟①挑選受精鱉卵，在溫度為31°C ±3°C、相對(duì)濕度為75 85%的孵化條件下孵化至第15期，通過照蛋器確定胚胎的位置，然后在正對(duì)胚胎的卵殼上施加所述的誘導(dǎo)劑 5 10 μ I ；
②按相同的條件繼續(xù)孵化至第16期，采用同樣方法和同樣劑量在正對(duì)胚胎的卵殼上施加所述的誘導(dǎo)劑5 10μ I ；
③在相同的條件繼續(xù)孵化至稚鱉出殼。
上述施加方法可以為注射、噴灑或涂抹。
上述孵化過程可以使用現(xiàn)有技術(shù)中的任意一種孵化器，較好的，可以使用下述孵化器，在該孵化器中進(jìn)行完全裸孵，可獲得較好的孵化率，并可自動(dòng)控制，節(jié)省人力。該孵化器包括
孵化箱，具有箱體和箱門，
孵化板，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，有多塊，這些孵化板在箱體的高度方向上間隔設(shè)置；
收集盒，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，用于收集剛孵化出的稚鱉；
其特征在于該孵化器還包括
孵化箱，具有箱體和箱門，
孵化板，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，有多塊，這些孵化板在箱體的高度方向上間隔設(shè)置；
收集盒，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，用于收集剛孵化出的稚鱉；
其特征在于該孵化器還包括
溫度傳感器，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)的溫度；溫度傳感器的輸出端連接控制模塊；
濕度傳感器，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)的濕度；濕度傳感器的輸出立而連接控制|吳塊；
溫控裝置，連接控制模塊的輸出端，用于對(duì)箱體的內(nèi)環(huán)境進(jìn)行加熱升溫或制冷降溫，以提供鱉卵孵化所需要的溫度；
加濕管，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，連通超聲波加濕裝置的排汽管道，用于向所述箱體內(nèi)提供霧化顆粒水滴，以提供鱉卵孵化所需要的濕度；所述超聲波加濕裝置連接所述控制模塊的輸出端；
通風(fēng)裝置，包括設(shè)置在所述箱體上部和下部的殼壁上的上通氣孔和下通氣孔以及設(shè)置在所述箱體內(nèi)的風(fēng)扇，在所述風(fēng)扇的吹動(dòng)作用下，使所述箱體內(nèi)的空氣與所述箱體外的空氣形成循環(huán)流動(dòng)；
各所述孵化板上間隔設(shè)有多個(gè)用于限位待孵化的定位孔，并且各定位孔的周圍間隔設(shè)有多個(gè)透氣孔。
所述孵化板采用塑料或不銹鋼制備，所述定位孔為直徑為12 18mm的圓孔，所述透氣孔的直徑為5 8mm,并且相鄰的定位孔與透氣孔之間的間距為5 10mm。
各所述透氣孔與各所述定位孔交錯(cuò)排列。
相對(duì)于所述透氣孔，各所述定位孔位于正方形的中心位置，與該定位孔相鄰的透氣孔則位于該正方形的四個(gè)角的位置上；
同樣，相對(duì)于所述的定位孔，各所述透氣孔位于正方形的中心位置，而該透氣孔所相鄰的定位孔則位于該正方形的四個(gè)角的位置上。
所述加濕管為不銹鋼管或PVC塑料管，所述加濕管的管壁上間隔設(shè)有多個(gè)透氣微孔，并且各所述微孔的直徑為I 3mm。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用獨(dú)特的誘導(dǎo)劑對(duì)中華鱉在胚胎期進(jìn)行雄性性別的誘導(dǎo)和控制，通過性腺切片組織學(xué)染色也證實(shí)了本發(fā)明能夠徹底將其雄性化的效果，避免了現(xiàn)有技術(shù)中長(zhǎng)時(shí)間、高劑量地使用甲基睪丸素極易導(dǎo)致的稚鱉性腺發(fā)育的不正常，出現(xiàn)生殖器外翻等現(xiàn)象；本發(fā)明所提供的誘導(dǎo)方法選擇在胚胎發(fā)育中性別決定關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)僅噴灑2次誘導(dǎo)劑，即可使雄性誘導(dǎo)率在95%以上，同時(shí)保證了中華鱉性腺的正常發(fā)育以及低藥物殘留；操作簡(jiǎn)便，成本低，經(jīng)濟(jì)效益顯著，是目前中華鱉養(yǎng)殖中值得推廣的性別控制技術(shù)。而優(yōu)選方案中所使用的孵化器，采用超聲波加濕器提供鱉卵孵化所需要的濕度，超聲波加濕·器能夠產(chǎn)生粒徑為I 3微米的霧化狀超微粒子，水霧通過加濕管道均勻擴(kuò)散到箱體內(nèi)，極易使空氣吸收而濕潤(rùn)，并伴生豐富的負(fù)氧離子，能同時(shí)清新箱內(nèi)空氣，有利于蛋內(nèi)胚胎發(fā)育，能持續(xù)穩(wěn)定供濕與控濕，濕度精度可控制在土 1%，且不會(huì)形成水滴滴落在鱉卵上，既克服了傳統(tǒng)噴淋加濕或紗布加濕、水蒸氣加濕等保濕方法容易在鱉卵表面形成水珠導(dǎo)致鱉卵發(fā)霉、滋生細(xì)菌的缺點(diǎn)，又克服了加濕不均勻、濕度控制不穩(wěn)定、介質(zhì)流通不暢的缺點(diǎn)，孵化率高，稚鱉的質(zhì)量好；并且該孵化器單位體積孵化量大，每立方米可孵化1200(Γ15(ΚΚ)枚鱉卵；箱體內(nèi)環(huán)境可自動(dòng)控制，孵化期間無(wú)需人工管理，可全自動(dòng)孵化，節(jié)約了人力物力，且孵化清潔、操作安全、環(huán)保節(jié)能，省時(shí)省力；克服了傳統(tǒng)孵化方法利用介質(zhì)吸濕、需人工間隙式噴水加濕的技術(shù)缺陷，真正實(shí)現(xiàn)了中華鱉的裸孵，且無(wú)需任何介質(zhì)輔助的全自動(dòng)控制的孵化方法，孵化率高。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例中孵化器的立體結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本發(fā)明實(shí)施例中孵化板的立體結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本發(fā)明實(shí)施例中收集盒的立體結(jié)構(gòu)示意圖；圖4中的A是雌性出殼稚鱉的性腺切片組織學(xué)H&E染色照片；圖4中的B為雄性出殼稚鱉的性腺切片組織學(xué)H&E染色照片；圖4中的C為雌性出殼稚鱉的性腺切片Sox9免疫組織化學(xué)染色示意圖；圖4中的D為雄性出殼稚鱉的性腺切片Sox9免疫組織化學(xué)染色示意圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。如圖1至圖3所示，下述實(shí)施例中所使用的孵化器包括孵化箱I，為前開門的柜式結(jié)構(gòu)，由箱體11和箱門12組成。孵化板2,有多塊,相互平行地水平地設(shè)置在箱體11內(nèi)。箱體的側(cè)壁上設(shè)有擱板13，各孵化板2可拆卸地?cái)R置在對(duì)應(yīng)的擱板13上。各所述孵化板上均布有多個(gè)用于限位待孵化的定位孔21，并且各定位孔的周圍間隔設(shè)有多個(gè)透氣孔22。本實(shí)施例中的孵化板采用塑料或不銹鋼制備，透氣孔與各所述定位孔交錯(cuò)排列，定位孔21與透氣孔22的位置關(guān)系為以定位孔所在位置為正方形的中心位置時(shí)，其相鄰的透氣孔則位于該正方形的四個(gè)角的位置上；以透氣孔所在位置為正方形的中心位置時(shí)，其相鄰的定位孔則位于該正方形的四個(gè)角的位置上。各定位孔的直徑為15_，透氣孔的直徑為6_，相鄰定位孔與透氣孔之間的間距為8mm。
收集盒3，用于收集剛孵化出的稚鱉。根據(jù)孵化量的多少，可以在箱體的底面上設(shè)置一個(gè)收集盒，也可以在每塊孵化板或幾塊孵化板設(shè)置一個(gè)收集盒。本實(shí)施例中收集盒通過每塊孵化板或幾塊靠近箱門12的一側(cè)均可拆卸地設(shè)置有收集盒3。
溫度傳感器4，設(shè)置在箱體11內(nèi)，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)的溫度；溫度傳感器的輸出端連接控制模塊(圖中未示出)；
濕度傳感器5，設(shè)置在箱體11內(nèi)，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)的濕度；濕度傳感器的輸出端連接控制模塊；
加熱裝置6，設(shè)置在箱體的后壁內(nèi)，用于對(duì)箱體的內(nèi)環(huán)境進(jìn)行加熱，以提供鱉卵孵化所需要的溫度；加熱裝置6連接控制模塊的輸出端，根據(jù)控制模塊的指令工作。
加濕管7，設(shè)置在箱體11內(nèi)，連通超聲波加濕裝置8的排汽管道81，用于向箱體內(nèi)提供霧化水汽，以提供鱉卵孵化所需要的濕度。本實(shí)施例中加濕管7采用不銹鋼管或PVC 塑料管制備，管徑可在20 40mm中選擇，沿箱體的高度方向豎直設(shè)置，所述加濕管的管壁上間隔設(shè)有多個(gè)透氣微孔71，各所述微孔的直徑為2mm，保證相鄰孵化板之間的空隙中至少有廣2個(gè)透氣微孔。
超聲波加濕裝置8連接控制模塊的輸出端，由控制模塊控制其工作。本實(shí)施例中采用功率為30W、加濕量為300ml/h的市售超聲波加濕器。
通風(fēng)裝置，包括設(shè)置在所述箱體頂部的風(fēng)扇9和設(shè)置在箱體頂面和底面上的上、 下通氣孔(圖中未示出)，通氣孔還可以設(shè)置在箱體的后壁上。本實(shí)施例采用功率為20W的風(fēng)扇。通過風(fēng)扇的吹動(dòng)，使外界空氣從通氣孔內(nèi)進(jìn)入箱體內(nèi)，經(jīng)由隔板上的透氣孔循環(huán)至下通氣孔送出箱體，以實(shí)現(xiàn)空氣在箱體內(nèi)的循環(huán)以及空氣在箱體內(nèi)和箱體外的循環(huán)，從而將箱體內(nèi)的代謝氣體排出，將外界的新鮮空氣引入，以保證鱉卵孵化所需要的氧氣。
實(shí)施例1
1、誘導(dǎo)劑配制
將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶于酒精中，混合均勻得到不同濃度的誘導(dǎo)劑。各誘導(dǎo)劑的具體情況如表I所示。
表I
權(quán)利要求
1.一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑，其特征在于包括將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶于純度為92-98%的酒精中，得到芳香化酶抑制劑濃度為5(Γ 50μ g/μ1、輔助劑濃度為 50^150 μ g/μ I 誘導(dǎo)劑;所述輔助劑選自睪酮，甲睪酮或丙酸睪酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑，其特征在于所述芳香化酶抑制劑的濃度為50 μ g/μ 1，所述輔助劑的濃度為50 μ g/μ I。
3.使用上述中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑進(jìn)行中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法，其特征在于包括下述步驟①挑選受精鱉卵，在溫度為31°C ±3°C、相對(duì)濕度為75 85%的孵化條件下孵化至第15 期時(shí)，通過照蛋器確定胚胎的位置，然后在正對(duì)胚胎的卵殼上施加所述的誘導(dǎo)劑5 10μ I ；②按相同的條件繼續(xù)孵化至第16期時(shí)，采用同樣方法和同樣劑量在正對(duì)胚胎的卵殼上施加所述的誘導(dǎo)劑5 10μ1;③在相同的條件繼續(xù)孵化至稚鱉出殼。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑，其特征在于所述施加為注射、噴灑或涂抹。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法，其特征在于所述孵化是在孵化器中進(jìn)行的，所述的孵化器包括孵化箱，具有箱體和箱門，孵化板，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，有多塊，這些孵化板在箱體的高度方向上間隔設(shè)置；收集盒，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，用于收集剛孵化出的稚鱉；其特征在于該孵化器還包括溫度傳感器，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)的溫度；溫度傳感器的輸出端連接控制|吳塊；濕度傳感器，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)箱體內(nèi)的濕度；濕度傳感器的輸出端連接控制|吳塊；溫控裝置，連接控制模塊的輸出端，用于對(duì)箱體的內(nèi)環(huán)境進(jìn)行加熱升溫或制冷降溫，以提供鱉卵孵化所需要的溫度；加濕管，設(shè)置在所述箱體內(nèi)，連通超聲波加濕裝置的排汽管道，用于向所述箱體內(nèi)提供霧化顆粒水滴，以提供鱉卵孵化所需要的濕度；所述超聲波加濕裝置連接所述控制模塊的輸出端；通風(fēng)裝置，包括設(shè)置在所述箱體上部和下部的殼壁上的上通氣孔和下通氣孔以及設(shè)置在所述箱體內(nèi)的風(fēng)扇，在所述風(fēng)扇的吹動(dòng)作用下，使所述箱體內(nèi)的空氣與所述箱體外的空氣形成循環(huán)流動(dòng)；各所述孵化板上間隔設(shè)有多個(gè)用于限位待孵化鱉卵的定位孔，并且各定位孔的周圍間隔設(shè)有多個(gè)透氣孔。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法，其特征在于所述孵化板采用塑料或不銹鋼制備，所述定位孔為直徑為12 18mm的圓孔，所述透氣孔的直徑為5 8mm,并且相鄰的定位孔與透氣孔之間的間距為5 10mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法，其特征在于各所述透氣孔與各所述定位孔交錯(cuò)排列。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法，其特征在于相對(duì)于所述透氣孔，各所述定位孔位于正方形的中心位置，與該定位孔相鄰的透氣孔則位于該正方形的四個(gè)角的位置上；同樣，相對(duì)于所述的定位孔，各所述透氣孔位于正方形的中心位置，而該透氣孔所相鄰的定位孔則位于該正方形的四個(gè)角的位置上。
9.根據(jù)權(quán)利要求5至8任一權(quán)利要求所述的中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)方法，其特征在于所述加濕管為不銹鋼管或PVC塑料管，所述加濕管的管壁上間隔設(shè)有多個(gè)透氣微孔， 并且各所述微孔的直徑為I 3mm。
全文摘要
本發(fā)明涉及到一種中華鱉胚胎期雄性性別誘導(dǎo)劑及誘導(dǎo)方法，其特征在于包括將芳香化酶抑制劑和輔助劑溶于純度為92-98%的酒精中，得到芳香化酶抑制劑濃度為50~150μg/μl、輔助劑濃度為50~150μg/μl誘導(dǎo)劑；所述輔助劑選自睪酮，甲睪酮或丙酸睪酮。本發(fā)明所提供的誘導(dǎo)方法選擇在胚胎發(fā)育中性別決定關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)僅噴灑兩次誘導(dǎo)劑，即可使雄性誘導(dǎo)率在95%以上，同時(shí)保證了中華鱉性腺的正常發(fā)育以及低藥物殘留；操作簡(jiǎn)便，成本低，經(jīng)濟(jì)效益顯著，是目前中華鱉養(yǎng)殖中值得推廣的性別控制技術(shù)。
文檔編號(hào)A61P15/00GK102988986SQ20121043209
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月2日
發(fā)明者錢國(guó)英, 葛楚天, 王莉, 汪財(cái)生, 王偉, 李彩燕 申請(qǐng)人:浙江萬(wàn)里學(xué)院