專利名稱：用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體的是涉及麻醉藥物的一種用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體及制備方法。
背景技術(shù)：
表面麻醉是使用穿透力強的局麻藥施于皮膚黏膜表面，其透過皮膚黏膜而作用于其下的神經(jīng)末梢，使皮膚黏膜和其下的組織產(chǎn)生麻醉現(xiàn)象，但起效時間長，作用表淺而有限。直接可作為表面麻醉的局麻藥物有酯類的丁卡因和苯佐卡因，酰胺類的利多卡因等。 為了達到更好的效果，近年來復(fù)合表面麻醉劑得到了較大發(fā)展。其中有報道有EMLA膏含 2. 5%利多卡因，2. 5%丙胺卡因；TAC20含20%利多卡因，4%丁卡因；Oraqix含2. 5%利多卡因，2. 5%丙胺卡因等。這些表面麻醉劑都是酰胺類和酯類麻醉劑的復(fù)合，優(yōu)點是效果超過單一麻醉劑，但仍然只能限于軟組織淺表的麻醉，起效時間需40 60分鐘，而且由于含有酯類因此導(dǎo)致高鐵血紅蛋白血癥和過敏反應(yīng)的可能性升高。麻醉劑的擴散和滲透是濃度依賴性的，因此想要達到更深的深度，就要提高麻醉劑濃度，濃度提高會出現(xiàn)紅腫、發(fā)白、燒灼等黏膜表面的局部刺激，并且心腦血管系統(tǒng)毒性上升；如果提高藥物用量則導(dǎo)致起效時間延長。而且目前的表面麻醉劑穿透力不夠，尤其對于有角化黏膜，如上顎黏膜麻醉效果不好，對于完好的皮膚由于表皮的屏障作用而效果更差。鹽酸利多卡因為酰胺類局麻藥，是臨床麻醉與疼痛治療中最常用的局麻藥，具有物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、起效快、毒性小等優(yōu)點。脂質(zhì)體(liposome)是由磷脂或其他類脂化合物雙層膜構(gòu)成的中空小球，能包裹親水或親脂性藥物，結(jié)構(gòu)與細胞膜相似，具有良好的細胞融合性和經(jīng)皮滲透作用，使用經(jīng)脂質(zhì)體包裹藥物后，容易穿透角質(zhì)層進入皮膚或黏膜，而且脂質(zhì)體有限速膜屏障作用，還可減少局部刺激和由于藥物的全身吸收而導(dǎo)致的不良反應(yīng)。 因此可以考慮采用脂質(zhì)體作為鹽酸利多卡因的載體來提高局麻藥的滲透率，國內(nèi)外有應(yīng)用磷脂脂質(zhì)體做表面麻醉制劑的報道，但由磷脂和膽固醇為主料的傳統(tǒng)脂質(zhì)體作為一種皮膚黏膜直接給藥的新制劑，尚存在一些問題有待解決，如對藥物的包封率不高；成品穩(wěn)定性不好，易氧化，經(jīng)常出現(xiàn)滲漏的情況，官能團少，不易進行表面修飾等。

發(fā)明內(nèi)容
為解決以上問題，本發(fā)明提供一種既有傳統(tǒng)脂質(zhì)體優(yōu)點，而且穩(wěn)定性好，包封率高，滲透性更好，不易導(dǎo)致高鐵血紅蛋白血癥和過敏反應(yīng)的一種皮膚、黏膜表面麻醉用鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體，其主料是賴氨酸殼聚糖的十八烷基季銨鹽 (OQLCS)，該高分子脂質(zhì)體是OQLCS和膽固醇(Chol)依靠疏水締合作用在水中自發(fā)形成的一種分子有序組合體，為多層囊泡結(jié)構(gòu)，每層均為類脂雙分子膜，層間和脂質(zhì)體內(nèi)核為鹽酸利多卡因水相。對藥物的包封率達到60 85%;高分子脂質(zhì)體的粒徑在60 180nm，表面帶正電，電位在6 65mv。本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的制備方法，采用反相蒸發(fā)法制備如下鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體原料質(zhì)量分數(shù)配比為賴氨酸殼聚糖的十八烷基季銨鹽膽固醇鹽酸利多卡因=2 1 1 5 ；1)將0QLCS、膽固醇溶于二氯甲烷中形成油相；2)鹽酸利多卡因完全溶于去離子水中形成水相；3)將油相在150 200w功率范圍下進行超聲，加入水相，然后用探頭式超聲波發(fā)生器進行超聲分散，直至形成半透明乳液，形成水油均勻的分散乳液；4)將上述乳液在40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護，當有機溶劑完全揮發(fā)后，經(jīng)0. 2 0. 4μ m無菌濾膜濾過，得到鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體。所述的賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽(0QLCQ為連接Tat或不連接Tat?？缒る?也有翻譯為穿膜肽)系特指那些小于20個氨基酸、帶正電荷的短肽，可以穿過大多數(shù)細胞膜。它們可以將大分子運輸入幾乎所有的哺乳動物細胞，無需特殊的培養(yǎng)環(huán)境，而且它們的重組蛋白也表現(xiàn)出穿膜活性。其中研究較多的是1988年從艾滋病病毒(HIV-I)中發(fā)現(xiàn)的一種由86個氨基酸組成的多肽一跨膜肽TatCTransactivator)，或稱為轉(zhuǎn)錄活化因子Tat，它具有特別的跨膜傳遞功能，能輕而易舉的穿過細胞膜等生物膜屏障，還能攜帶多種物質(zhì)穿過細胞膜，將其與高分子脂質(zhì)體載體組裝連接，可有效地提高藥物滲透效果。跨膜肽(Tat)目前已經(jīng)商品化，可以從生化試劑公司定購。本專利應(yīng)用油溶性化學(xué)偶聯(lián)劑 SuIfO-LC-SPDFjf Tat(Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg)連接到高分子脂質(zhì)體的表面上，利用Tat的穿透、運輸作用來增加鹽酸利多卡因?qū)ζつw和黏膜生物屏障透過能力。所述的步驟3)中油相與水相的體積比優(yōu)選為2 1 2。本發(fā)明的用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體，可以直接將本產(chǎn)品涂敷于皮膚黏膜表面應(yīng)用，或制備成凝膠或膏劑應(yīng)用。本發(fā)明所述賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽(0QLCQ可以采用現(xiàn)有的商品，也可以采用已經(jīng)公開的技術(shù)制備，也可以采用如下制備過程1)將5 IOg賴氨酸殼聚糖溶解到100 200mL去離子水，緩慢的加入100ml，含
20% 二甲基十八烷基環(huán)氧丙基氯化銨的異丙醇混合溶液中。2)在800C的條件下將質(zhì)量分數(shù)為42 %的NaOH溶液緩慢滴加到體系中，攪拌M 48小時之后將樣品透析4 6天，最后真空凍干，即可得OQLCS的白色粉末。 接TAT-0QLCS反應(yīng)步驟如下1)稱取50 IOOmg的OQLCS溶于PBS (pH = 4)中，攪拌至全部溶解。2)稱取1 4mg的SPDP溶于1 ^iIDMSO中，并將該溶液加入到1)中，反應(yīng)2 4h后，透析4 6h。3)向透析后的溶液加入5 30mgTat多肽，攪拌12h后，透析4 6h，真空凍干后得到Tat-OQLCS粉末。
本發(fā)明所述二甲基十八烷基環(huán)氧丙基氯化銨可以是現(xiàn)有商品，或按照常津等提供的專利方法(申請專利號200710056993.4)進行制備。將十八烷基二甲基叔胺12g置四口瓶中，加入60ml溶劑，劇烈攪拌，升溫至55攝氏度，緩慢滴加環(huán)氧氯丙烷5. 5g，保溫回流數(shù)小時，減壓蒸餾除去未反應(yīng)的環(huán)氧氯丙烷及溶劑，得淺黃色膏狀物二甲基環(huán)氧丙基十八
烷基氯化銨。本發(fā)明制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體既具傳統(tǒng)脂質(zhì)體的優(yōu)點，應(yīng)用賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽(0QLCQ為原料代替磷脂，與膽固醇并結(jié)合酰胺類的局麻藥鹽酸利多卡因通過反相蒸發(fā)法合成高分子脂質(zhì)體，來提高透皮和透黏膜的效率；其又不含有酯類藥， 因而產(chǎn)生過敏反應(yīng)的可能性較低；而且對藥物包封率高，物理化學(xué)穩(wěn)性質(zhì)穩(wěn)定，分散性好， 儲存和應(yīng)用過程中不容易發(fā)生融合聚集；載體粒子表面帶正電，比傳統(tǒng)不帶電的磷脂脂質(zhì)體更易與生理下帶負電皮膚和黏膜結(jié)合而有利于藥物滲透，并且還可以通過表面修飾而連接一種有主動跨膜轉(zhuǎn)運功能的肽段一跨膜肽，來進一步提高透過生物膜的效率。經(jīng)體外小鼠透皮實驗證實該高分子脂質(zhì)體滲透量超過了同濃度鹽酸利多卡因注射液和傳統(tǒng)磷脂脂質(zhì)體。所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括藥物的釋放規(guī)律滿足表麻的迅速起效的要求；粒徑在60 180nm，如圖1粒度分析測試結(jié)果；粒徑均勻，如圖2透射電鏡照片所示；Zeta電位帶正電電位在6 65mV，如圖3Zeta電位分析測試結(jié)果所示，因為在生理條件下，皮膚和黏膜帶負電，因此帶正電荷比傳統(tǒng)不帶電的磷脂脂質(zhì)體更易與皮膚和黏膜結(jié)合而有利于藥物滲透；其不含有酯類藥物因此不會導(dǎo)致高鐵血紅蛋白血癥，產(chǎn)生過敏反應(yīng)的可能性較低；物理化學(xué)穩(wěn)性質(zhì)穩(wěn)定，且制備方便，儲存和應(yīng)用過程中不容易發(fā)生融合聚集，包封率62 85%;穩(wěn)定性好，可在4°C水溶液中保存至少2個月。而且整個制備過程簡單快捷，制備周期短，產(chǎn)率高。鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體藥物的釋放表面麻醉主要用皮膚、黏膜的有創(chuàng)操作和治療等方面，快速產(chǎn)生效果才符合臨床需要，不同于傳統(tǒng)脂質(zhì)體著重緩釋的功能，而是要求較快地滲透并釋放藥物起效。在36°C，pH = 6. 8的鹽酸緩沖液(PBS)為外液進行該高分子脂質(zhì)體的體外釋放實驗，表明鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體在5分鐘藥物釋放能夠達到 44%，在10分鐘達到62%，持續(xù)釋放2小時左右，符合臨床表面麻醉操作的需要。如圖4。鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體滲透效果驗證將鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體與含同濃度的鹽酸利多卡因注射液、磷脂脂質(zhì)體應(yīng)用小鼠去毛腹部皮膚進行了體外滲透實驗(每組η = 6)，采用高效液相色譜法檢測不同時間點透過液中鹽酸利多卡因的含量，結(jié)果顯示該鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的藥物滲透速率和滲透量都明顯超過了鹽酸利多卡因注射液和傳統(tǒng)磷脂脂質(zhì)體本身，如圖5。鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的表面麻醉效果驗證應(yīng)用兔角膜反射法實驗比較了該鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體與同濃度的鹽酸利多卡因注射液表面麻醉效果(每組η = 6) 表面麻醉的起效時間提前約2分鐘，高分子脂質(zhì)體組兔角膜反射消失持續(xù)時間約延長10分鐘。證明該表面麻醉劑有效，并能夠延長麻醉時間。


圖1 按實施例2制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體粒度分析測試結(jié)果；
圖2 按實施例2制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體透射電鏡照片；圖3 按實施例2制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體^ta電位分析測試結(jié)果圖4 按實施例2制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體在PBS (pH = 6. 8)緩沖液體外釋放實驗結(jié)果圖5 按實施例2和6制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體與鹽酸利多卡因注射液和傳統(tǒng)磷脂脂質(zhì)體在接受液為PBS (pH = 6. 8)小鼠體外透皮實驗結(jié)果。
具體實施例方式以下通過實施例對本發(fā)明作進一步的闡述，但本發(fā)明不限于此。實施例1 采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取16mg0QLCS、8mg膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取40mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入2ml的去離子水，完全溶解。(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以150W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.2μπι無菌濾膜濾過即得到產(chǎn)品。 制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體粒徑為66. 7nm,多分散性指數(shù)為0. 169，Zeta電位為 6. 22mv，包封率為 63. 2%。本實施例采用成品OQLCS商品為原料。實施例2 采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取48mg 0QLCS、2^ig膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取80mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入的去離子水，完全溶解。(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以175W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.2μπι無菌濾膜濾過即得產(chǎn)品。所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括粒徑為81. 2nm,多分散性指數(shù)為0. 184， Zeta電位為6. 51mV，包封率為70. 5%0本實施例OQLCS原料制備過程1)將5g賴氨酸殼聚糖溶解到IOOmL去離子水，緩慢的加入IOOml含20 %二甲基
十八烷基環(huán)氧丙基氯化銨的異丙醇混合溶液中。2)在800C的條件下將質(zhì)量分數(shù)為42 %的NaOH溶液緩慢滴加到體系中，攪拌M小時之后將樣品透析4天，最后真空凍干，即可得OQLCS的白色粉末，用于本實施例。實施例3 采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取160mg 0QLCS、80mg膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取80mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入的去離子水，完全溶解。
(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以200W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.4μπι無菌濾膜濾過即得到產(chǎn)品。所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括粒徑為159. 2nm,多分散性指數(shù)為 0. 257，Zeta 電位為 62. 78mv，包封率為 84. 7%0本實施例OQLCS原料制備過程1)將8g賴氨酸殼聚糖溶解到150mL去離子水，緩慢的加入IOOml含20%二甲基
十八烷基環(huán)氧丙基氯化銨的異丙醇混合溶液中。 2)在800C的條件下將質(zhì)量分數(shù)為42 %的NaOH溶液緩慢滴加到體系中，攪拌36小時之后將樣品透析5天，最后真空凍干，即可得OQLCS的白色粉末，用于本實施例。實施例4 采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取80mg0QLCS、40mg膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取40mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入的去離子水，完全溶解。(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以200W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.4μπι無菌濾膜濾過即得產(chǎn)品。 所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括粒徑為132nm，多分散性指數(shù)為0. 272， Zeta電位為45. 66mV，包封率為74. 1%0本實施例OQLCS原料制備過程1)將IOg賴氨酸殼聚糖溶解到200mL去離子水，緩慢的加入IOOml含20%二甲基
十八烷基環(huán)氧丙基氯化銨的異丙醇混合溶液中。2)在800C的條件下將質(zhì)量分數(shù)為42 %的NaOH溶液緩慢滴加到體系中，攪拌48小時之后將樣品透析6天，最后真空凍干，即可得OQLCS的白色粉末，用于本實施例。實施例5:采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取16mgTat-0QLCS、8mg膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取40mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入2ml的去離子水，完全溶解。(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以150W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.2μπι無菌濾膜濾過即得產(chǎn)品。所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括粒徑為69. Inm,多分散性指數(shù)為0. 289, Zeta電位為6. 84mV，包封率為62. 0%o本實施例采用成品OQLCS商品，TAT多肽商品(上海生工生物工程有限公司合成T yr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg)。
接TAT的OQLCS反應(yīng)步驟如下1)稱取50mg的OQLCS溶于PBS (pH = 4)中，攪拌至全部溶解。2)稱取ang的SPDP溶于ImlDMSO中，并將該溶液加入到1)中，反應(yīng)濁后，透析 4h。3)向透析后的溶液加入5mgTAT多肽，攪拌1 后，透析4h，真空凍干后得到 TAT-0QLCS粉末，用于本實施例。實施例6 采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取48mgTat-0QLCS、2^ig膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取80mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入的去離子水，完全溶解。(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以175W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.2μπι無菌濾膜濾過即得產(chǎn)品。所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括粒徑為52. 63nm,多分散性指數(shù)為0. 179， Zeta電位為51. 78mV，包封率為72. 4%0本實施例采用成品OQLCS商品，TAT多肽商品(上海生工生物工程有限公司合成T yr~G1y-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-G1n-Arg-Arg-Arg)。。接TAT的OQLCS反應(yīng)步驟如下1)稱取60mg的OQLCS溶于PBS (pH = 4)中，攪拌至全部溶解。2)稱取2mg的SPDP溶于2mlDMS0中，并將該溶液加入到1)中，反應(yīng)池后，透析 5h。3)向透析后的溶液加入15mgTAT多肽，攪拌12h后，透析5h，真空凍干后得到 TAT-0QLCS粉末，用于本實施例。實施例7 采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取160mgTat-0QLCS、80mg膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取80mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入的去離子水，完全溶解。(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以200W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.4μπι無菌濾膜濾過即得產(chǎn)品。所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括粒徑為121. lnm，多分散性指數(shù)為0. 217， Zeta電位為57. 15mV，包封率為85. 0%o本實施例采用成品OQLCS商品，TAT多肽商品(上海生工生物工程有限公司合成T yr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-GIn-Arg-Arg-Arg)。接TAT的OQLCS反應(yīng)步驟如下
1)稱取60mg的OQLCS溶于PBS (pH = 4)中，攪拌至全部溶解。2)稱取2mg的SPDP溶于2mlDMS0中，并將該溶液加入到1)中，反應(yīng)池后，透析 5h。3)向透析后的溶液加入15mgTAT多肽，攪拌12h后，透析5h，真空凍干后得到 TAT-0QLCS粉末，用于本實施例。實施例8:采用反相蒸發(fā)法制備鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的過程如下(1)精確稱取80mgTat-0QLCS、40mg膽固醇加入到茄形瓶中，溶于細1的二氯甲烷中。(2)精確稱取80mg鹽酸利多卡因加入茄形瓶中加入的去離子水，完全溶解。(3)向(1)中加入O)，然后用探頭式超聲波發(fā)生器以200W的功率對其進行超聲分散，直至形成半透明乳液。將上述乳液40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護。(4)當茄形瓶中的有機溶劑完全揮發(fā)后，后經(jīng)0.4μπι無菌濾膜濾過即得產(chǎn)品。所制備的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的性能包括粒徑為133. 4nm,多分散性指數(shù)為0. 269, Zeta電位為34. 36mV，包封率為77. 4%0本實施例采用成品OQLCS商品，TAT多肽商品(上海生工生物工程有限公司合成T yr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-GIn-Arg-Arg-Arg)。接TAT的OQLCS反應(yīng)步驟如下1)稱取IOOmg的OQLCS溶于PBS (pH = 4)中，攪拌至全部溶解。2)稱取^ig的SPDP溶于^IIDMSO中，并將該溶液加入到1)中，反應(yīng)4h后，透析 6h。3)向透析后的溶液加入30mgTAT多肽，攪拌12h后，透析6h，真空凍干后得到 TAT-0QLCS 粉末。實施例9:以上述實施例2和6的高分子脂質(zhì)體為例進行藥物體外釋放和驗證滲透皮膚、表面麻醉的效果和方法，其它實施例的實驗結(jié)果與此例趨勢一致，在此不一一列舉。1.藥物的體外釋放采取透析袋擴散法進行體外釋放動力學(xué)實驗。取Iml高分子脂質(zhì)體乳液裝入透析袋(Mw = 8000 10000)置于裝有50mL(pH = 6. 8) PBS緩沖溶液的離心管中，避光置于37°C恒溫振蕩器中，定時取出透析袋外的緩沖溶液anl，然后用紫外分光光度計在262nm處測定吸光度A，每次取樣后補充等量同溫度的釋放介質(zhì)。將測量的吸光度值代入鹽酸利多卡因在(pH = 6. 8)PBS緩沖溶液的標準曲線，再換算成釋放出的藥物百分比。釋放數(shù)值均值(n = 3)見表1。表面麻醉主要用皮膚、黏膜的有創(chuàng)操作和治療等方面，快速產(chǎn)生效果才符合臨床需要，不同于傳統(tǒng)脂質(zhì)體著重緩釋的功能，而是要求較快地滲透并釋放藥物起效。實驗結(jié)果表明鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體在5分鐘藥物釋放能夠達到44. 11 45. 77%，在10分鐘達到09 62. 79%，持續(xù)釋放2小時左右，符合臨床操作希望表面麻醉快速起效的需要。表1、不同時間點高分子脂質(zhì)體體外釋放結(jié)果(％ )
權(quán)利要求
1.用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體的制備方法，其特征是采用反相蒸發(fā)法制備過程如下鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體原料質(zhì)量分數(shù)配比為賴氨酸殼聚糖的十八烷基季銨鹽 膽固醇鹽酸利多卡因=2 1 1 5 ；1)將0QLCS、膽固醇溶于二氯甲烷中形成油相；2)鹽酸利多卡因完全溶于去離子水中形成水相；3)將油相在150 200w功率范圍下進行超聲，加入水相，然后用探頭式超聲波發(fā)生器進行超聲分散，直至形成半透明乳液，形成水油均勻的分散乳液；4)將上述乳液在40°C下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護，當有機溶劑完全揮發(fā)后，經(jīng)0. 2 0. 4 μ m無菌濾膜濾過，得到鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是所述的OQLCS為連接跨膜肽Tat；特指那些小于20個氨基酸、帶正電荷的短肽，可以穿過大多數(shù)細胞膜。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是所述Tat是從艾滋病病毒(HIV-I)中發(fā)現(xiàn)的一種由86個氨基酸組成的多肽
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是所述的步驟幻中油相與水相的體積比為 2 1 2。
5.權(quán)利要求1制備的用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體，其特征是脂質(zhì)體對藥物的包封率達到60 85% ；高分子脂質(zhì)體的粒徑在60 180nm，表面帶正電，電位在6 65mv。
6.如權(quán)利要求5所述的用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體，其特征是直接將本產(chǎn)品涂敷于皮膚黏膜表面應(yīng)用，或制備成凝膠或膏劑應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于表面麻醉的鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體及制備方法。將OQLCS、膽固醇溶于二氯甲烷中形成油相；鹽酸利多卡因完全溶于去離子水中形成水相；將油相在150～200W功率范圍下進行超聲，加入水相，然后用探頭式超聲波發(fā)生器進行超聲分散，直至形成半透明乳液，形成水油均勻的分散乳液；將乳液在40℃下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上以50r/min的旋轉(zhuǎn)速度進行旋蒸，同時向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中通入氮氣流加以保護，當有機溶劑完全揮發(fā)后，經(jīng)0.2～0.4μm無菌濾膜濾過，得到鹽酸利多卡因高分子脂質(zhì)體。脂質(zhì)體對藥物的包封率達到60～85％；高分子脂質(zhì)體的粒徑在60～180nm，表面帶正電，電位在6～65mv。可以直接將本產(chǎn)品涂敷于皮膚黏膜表面應(yīng)用，或進一步制備成凝膠或膏劑。
文檔編號A61P23/02GK102406609SQ201110396218
公開日2012年4月11日 申請日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者常津, 張連云, 李芹, 李長義, 王悅, 王漢杰, 蘇文雅 申請人:天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院