專利名稱：地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于防治腸源性內(nèi)毒性血癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中的一種地衣芽孢桿菌活菌的新用途，作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1979年Berg首次提出“細(xì)菌移位”的概念，將其定義為“腸道內(nèi)活的細(xì)菌通過腸粘膜侵入腸道以外的部位，如腸系膜淋巴結(jié)、肝、脾、血液以至全身的感染過程”。1990年Alexander將其內(nèi)容擴(kuò)展為“微生物移位”，即“腸道內(nèi)活的或死的細(xì)菌及其產(chǎn)物，包括內(nèi)毒素，通過解剖學(xué)完整的腸粘膜屏障侵入腸道以外部位的過程。1995年由山西醫(yī)科大學(xué)韓德五教授于國內(nèi)首次提出“腸源性內(nèi)毒素血癥學(xué)說”，認(rèn)為腸源性內(nèi)毒性血癥在肝病的發(fā)生發(fā)展中起著決定性的作用，該理論已逐步得到國內(nèi)國際的認(rèn)可。目前認(rèn)為各種致肝臟損傷的因素，如肝炎病毒、乙醇、藥物與毒物等，除通過各自的病因及發(fā)病機(jī)制造成“原發(fā)性肝損傷”外，在肝病發(fā)生發(fā)展中機(jī)體大多出現(xiàn)腸源性內(nèi)毒素血癥(造成人體血液中內(nèi)毒素水平大幅度提高)。循環(huán)血中出現(xiàn)可檢出的內(nèi)毒素，稱之為內(nèi)毒素血癥，其中不伴有革蘭氏陰性細(xì)菌(gram-negative bacteria，G-細(xì)菌)感染者，稱為腸源性內(nèi)毒素血癥。腸源性內(nèi)毒素血癥導(dǎo)致肝臟損傷的作用大體有(1)使患病機(jī)體的細(xì)胞免疫功能低下，對病毒性肝炎不利于病毒的殺滅與清除；(2)內(nèi)毒素可激活枯否細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子，炎性介質(zhì)等發(fā)揮其細(xì)胞毒作用直接損害肝細(xì)胞；C3)內(nèi)毒素使肝臟發(fā)生微循環(huán)障礙，使肝組織發(fā)生缺血缺氧而導(dǎo)致肝細(xì)胞變性和壞死。由此可見，腸源性內(nèi)毒素血癥可由于上述作用使肝臟發(fā)生“繼發(fā)性肝損傷”，其對肝病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸有著重要的作用和影響。腸源性內(nèi)毒素血癥重癥者往往引起過度的炎癥反應(yīng)，發(fā)生嚴(yán)重肝壞死，而導(dǎo)致重癥肝炎，甚至發(fā)生急性肝功能衰竭。因此在預(yù)防與治療治療原發(fā)性，繼發(fā)性肝損傷的同時應(yīng)注意腸源性內(nèi)毒素血癥的治療，而病毒性肝炎或者肝病患者往往都存在免疫功能較差及免疫耐受，因此病毒得不到清除，疾病久治不愈。目前臨床上對于腸源性內(nèi)毒素血癥多使用抗病毒藥物進(jìn)行治療，如干擾素，拉米夫定等，但是均未見明顯療效?？诜楣强伤峄c道，干擾細(xì)菌繁殖，在一定程度上降低血漿內(nèi)毒素水平，但無法阻斷殘留于體內(nèi)的內(nèi)毒素生物學(xué)效應(yīng)的，無法改善由腸源性內(nèi)毒素血癥介導(dǎo)的肝臟微循環(huán)障礙。因此探討腸源性內(nèi)毒素血癥新的治療方法與藥物制備具有很大的臨床價值。正常腸道屏障由腸道生物屏障、機(jī)械屏障、免疫防御以及腸肝軸這四種基本因素構(gòu)成，是機(jī)體防御腸道細(xì)菌及內(nèi)毒素等移位的關(guān)鍵機(jī)構(gòu)。正常腸道微生物通過細(xì)菌拮抗作用維持相互之間的穩(wěn)定平衡，如接觸抑制、抗微生物因子以及競爭連接部位與營養(yǎng)。當(dāng)正常腸屏障功能障礙時可發(fā)生細(xì)菌及內(nèi)毒素移位。嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、危重患者、多器官衰竭患者、威脅生命的菌血癥、腸道細(xì)菌感染患者，常出現(xiàn)細(xì)菌移位，但無明確的感染灶。細(xì)菌移居量與損傷輕重有關(guān)。循環(huán)內(nèi)毒素可正反饋的促進(jìn)腸道內(nèi)毒素移位。一旦腸屏障衰竭，肝清除腸源性細(xì)菌和內(nèi)毒素的能力就成為全身膿毒癥和遠(yuǎn)處器官損傷是否發(fā)生的決定因素。移位的細(xì)菌和內(nèi)毒素直接損害肝臟或加重已有的損傷，內(nèi)毒素得以最終進(jìn)入全身循環(huán)。體內(nèi)的內(nèi)毒素激活Kupffer細(xì)胞與其它吞噬細(xì)胞，釋放細(xì)胞因子及其它炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致遠(yuǎn)處器官損傷，對于多器官功能衰竭和腸源性敗血癥狀態(tài)的發(fā)生而言，腸道內(nèi)毒素移位比細(xì)菌移位更具有臨床意義，因此對于腸源性內(nèi)毒素血癥的治療如何恢復(fù)腸道的正常屏障就顯得尤為重要。微生態(tài)制劑是指在微生態(tài)學(xué)理論的指導(dǎo)下，調(diào)整生態(tài)失調(diào)、保持微生態(tài)平衡、提高宿主(人、動植物)健康水平或增進(jìn)健康狀態(tài)的生理活性制品及其代謝產(chǎn)物以及促進(jìn)生理菌群生長繁殖的生物制品。微生態(tài)制劑-地衣芽胞桿菌活菌能改善腸道環(huán)境，減少內(nèi)毒素的吸收，在肝炎后肝硬化的治療上具有潛在的臨床應(yīng)用價值。地衣芽胞桿菌活菌，其機(jī)制在于其一方面可造成低氧化還原電勢(Eh)和在局部環(huán)境消耗大量的氧氣，以促進(jìn)雙歧桿菌等原籍菌的生長，從而達(dá)到調(diào)整腸道菌群失調(diào)的目的；另一方面通過環(huán)境改變即調(diào)整腸道微生態(tài)環(huán)境而達(dá)到調(diào)整腸道微生態(tài)平衡的目的。在臨床上主要用于治療成人急性、慢性腹瀉及各種原因引起的腸道菌群失調(diào)癥，嬰幼兒腹瀉病，預(yù)防腸道傳染病等。已有臨床研究表明，肝硬化腹水伴自發(fā)性腹膜炎患者，口服地衣芽胞桿菌活菌膠囊，每次4粒，每日3次，10天為1療程，2療程后觀察兩組臨床癥狀、體征、腹水常規(guī)及培養(yǎng)和肝功能的變化情況，與39例單純應(yīng)用抗生素對照組比較，地衣芽胞桿菌活菌能夠恢復(fù)腸道正常菌群，改善肝功能，增強(qiáng)免疫，降低內(nèi)毒素血癥，具有肯定的治療作用。迄今為止，還未見地衣芽孢桿菌制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物的相關(guān)研究的報道。因此，研究地衣芽孢桿菌制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，地衣芽孢桿菌活菌降低硫代乙酰胺致大鼠急慢性肝損傷時引起的腸源性內(nèi)毒素血癥，改善其肝損傷的組織病理學(xué)變化，減輕慢性肝損傷時肝組織的脂質(zhì)過氧化損傷，部分降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及乳酸脫氫酶水平。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用；所述急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥可由各種致肝臟損傷因素引起，包括肝炎病毒、乙醇、藥物、毒物、肝硬化、肝癌及其他任何可引起肝臟損傷的因素；在治療權(quán)利要求2所述疾病的同時，具有修復(fù)肝損傷，改善肝功能的療效；當(dāng)阻塞性黃疸、胰腺炎、各種休克等疾病的發(fā)生且伴隨腸源性內(nèi)毒素血癥時，地衣芽胞桿菌活菌的制備對于上述幾種疾病伴有的腸源性內(nèi)毒素血癥也有積極的治療作用；所述地衣芽胞桿菌活菌成人的每日推薦使用劑量為0. 45-1. 35億活菌/kg。本發(fā)明的要點在于地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過動物實驗，探討地衣芽胞桿菌活菌的藥理學(xué)作用，為臨床提供一種新的藥用用途和使用方法。其原理是該藥物為肝病發(fā)生發(fā)展的“腸源性內(nèi)毒素血癥”基礎(chǔ)上研制，并且該藥物也具有減輕腸源性內(nèi)毒素水平，同時抵抗肝臟損傷，改善肝功能的作用；同時由于腸源性內(nèi)毒素血癥對于阻塞性黃疸、胰腺炎、各種休克等疾病的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后轉(zhuǎn)歸有著重要的影響，因此對于上述疾病的患者同時適用。該藥適用人群廣泛，適用于所有可致肝臟損傷的因素，如肝炎病毒、乙醇、藥物與毒物，等原因引起的內(nèi)毒素血癥的預(yù)防與治療，無受限肝病患者。本發(fā)明針對目前臨床上尚沒有肝臟疾病引起的腸源性內(nèi)毒素血癥的特效治療藥物，明確了地衣芽胞桿菌活菌可作為有效成分，以動物實驗療效為依據(jù)，提供了一種可治療內(nèi)毒性血癥及改善肝功能，抵抗肝損傷的新的使用用途。一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有地衣芽孢桿菌活菌降低硫代乙酰胺致大鼠急慢性肝損傷時引起的腸源性內(nèi)毒素血癥，改善其肝損傷的組織病理學(xué)變化，減輕慢性肝損傷時肝組織的脂質(zhì)過氧化損傷，部分降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及乳酸脫氫酶水平等優(yōu)點，將廣泛的應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域中。


下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。圖1為急性肝損傷預(yù)防正常對照組大鼠肝組織HE染色X 100。圖2為急性肝損傷預(yù)防TAA模型組大鼠肝組織HE染色X 100。圖3為急性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌低劑量組大鼠肝組織HE染色X 100。圖4為急性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌高劑量組大鼠肝組織HE染色X 100。圖5為急性肝損傷預(yù)防正常對照組大鼠肝組織HE染色X400。圖6為急性肝損傷預(yù)防TAA模型組大鼠肝組織HE染色X400。圖7為急性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌低劑量組大鼠肝組織HE染色X400。圖8為急性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌高劑量組大鼠肝組織HE染色X400。圖9為慢性肝損傷預(yù)防正常對照組大鼠肝組織HE染色X 100。圖10為慢性肝損傷預(yù)防TAA模型組大鼠肝組織HE染色X 100。圖11為慢性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌低劑量組大鼠肝組織HE染色X 100。圖12為慢性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌高劑量組大鼠肝組織HE染色X 100。圖13為慢性肝損傷預(yù)防正常對照組大鼠肝組織HE染色X400。圖14為慢性肝損傷預(yù)防TAA模型組大鼠肝組織HE染色X400。圖15為慢性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌低劑量組大鼠肝組織HE染色X400。圖16為慢性肝損傷預(yù)防地衣芽胞桿菌活菌高劑量組大鼠肝組織HE染色X400。圖17為慢性肝損傷治療用藥正常對照組大鼠肝組織HE染色X 100。圖18為慢性肝損傷治療用藥TAA模型組大鼠肝組織HE染色X 100。圖19為慢性肝損傷治療用藥地衣芽胞桿菌活菌低劑量組大鼠肝組織HE染色 X 100。圖20為慢性肝損傷治療用藥地衣芽胞桿菌活菌高劑量組大鼠肝組織HE染色 X 100。
圖21為慢性肝損傷治療用藥正常對照組大鼠肝組織HE染色X400。圖22為慢性肝損傷治療用藥TAA模型組大鼠肝組織HE染色X400。圖23為慢性肝損傷治療用藥地衣芽胞桿菌活菌低劑量組大鼠肝組織HE染色 X 400 ο圖M為慢性肝損傷治療用藥地衣芽胞桿菌活菌高劑量組大鼠肝組織HE染色 X 400 ο
具體實施例方式本發(fā)明藥物動物實驗方案如下。動物觀察對象是硫代乙酰胺(TAA)所致急性，慢性肝損傷大鼠所致的腸源性內(nèi)毒素血癥，檢測血漿內(nèi)毒素、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血清丙二醛(MDA)、血清乳酸脫氫酶(LDH)的變化并進(jìn)行肝臟病理學(xué)分析，以觀察地衣芽孢桿菌活菌對腸源性內(nèi)毒素血癥具有預(yù)防及治療作用。清潔級SD大鼠160只，雄性，體重240_290g，隨機(jī)分為3大組急性肝損傷預(yù)防用藥組40只、慢性肝損傷預(yù)防用藥組60只、慢性肝損傷治療用藥組60只。每一大組又隨機(jī)分為4組正常對照組、TAA模型組、地衣芽胞桿菌活菌低劑量組、地衣芽胞桿菌活菌高劑量組。具體實驗方案如下。1.急性肝損傷預(yù)防組清潔級SD大鼠40只，雄性，體重240_290g，隨機(jī)分為4組。①正常對照組自由飲食喂養(yǎng)9天。②TAA模型組自由飲食喂養(yǎng)7天，第8天開始皮下注射TAA，250mg/kg, 1次/日，連續(xù)2天。③地衣芽胞桿菌活菌低劑量組地衣芽孢桿菌活菌灌胃，5mg/kg, 1次/日，連續(xù)9天；第8天在灌胃的同時皮下注射TAA，TAA用法同TAA模型組，連續(xù)2天。④地衣芽胞桿菌活菌高劑量組地衣芽孢桿菌活菌灌胃，15mg/kg，1次/日，連續(xù)9天；第8天在灌胃的同時皮下注射TAA，TAA用法同TAA模型組，連續(xù)2天。急性肝損傷預(yù)防用藥組分組示意如下
權(quán)利要求
1.一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，其特征在于地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥可由各種致肝臟損傷因素引起，包括肝炎病毒、乙醇、藥物、毒物、肝硬化、肝癌及其他任何可引起肝臟損傷的因素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，其特征在于在治療權(quán)利要求2所述疾病的同時，具有修復(fù)肝損傷，改善肝功能的療效。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，其特征在于當(dāng)阻塞性黃疸、胰腺炎、各種休克等疾病的發(fā)生且伴隨腸源性內(nèi)毒素血癥時，地衣芽胞桿菌活菌的制備對于上述幾種疾病伴有的腸源性內(nèi)毒素血癥也有積極的治療作用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的一種地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述地衣芽胞桿菌活菌成人的每日推薦使用劑量為0. 45-1. 35億活菌/kg。
全文摘要
一種應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域中的地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥及治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于預(yù)防急慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用，地衣芽胞桿菌活菌作為制備用于治療慢性腸源性內(nèi)毒素血癥藥物中的應(yīng)用；所述腸源性內(nèi)毒素血癥是由致肝臟損傷的因素引起的；所述地衣芽孢桿菌活菌的用量為每日0.45-1.35億活菌/kg。該發(fā)明地衣芽孢桿菌活菌降低硫代乙酰胺致大鼠急慢性肝損傷時引起的腸源性內(nèi)毒素血癥，改善其肝損傷的組織病理學(xué)變化，減輕慢性肝損傷時肝組織的脂質(zhì)過氧化損傷，部分降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及乳酸脫氫酶水平。
文檔編號A61K35/74GK102552332SQ20111039609
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月2日
發(fā)明者劉立新, 蘇顯英, 陳錚, 顧佩菲, 馬大中 申請人:東北制藥(沈陽)科技發(fā)展有限公司, 東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司