專利名稱：一種治療肺癌的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體涉及一種治療肺癌的藥物組合物。
背景技術：
肺癌是全世界范圍內最常見的惡性腫瘤之一，病死率高，多數(shù)患者在明確診斷時即有轉移，5年生存率維持在15%左右。常規(guī)化療藥物治療肺癌毒性大，容易導致腫瘤復發(fā)，尋找低毒性、特異型殺傷肺癌細胞的藥物和方法具有重要意義。近年研究表明，抗瘧疾藥物青蒿素及其衍生物具有顯著的抗腫瘤作用，其藥理學作用研究受到廣泛關注。蒿甲醚為青蒿素的主要衍生物之一，抗瘧疾作用優(yōu)于青蒿素。近年來越來越多的實驗證明青蒿素類藥物有更廣泛的藥理作用，尤其重要的是它不僅可以選擇性抑制和/或殺滅多種腫瘤細胞，而且不良反應極少，甚至不產生耐藥性。青蒿素類藥物的抗腫瘤作用已經得到多方面的證實，其主要的作用機制有以下幾個方面1、鐵離子介導的細胞損傷惡性腫瘤細胞中Fe含量要比正常細胞大得多，青蒿素類藥物可以通過鐵離子介導形成內過氧化橋，并產生活性氧離子(ROS)和以碳為核心的自由基，后者使細胞發(fā)生巨大的分子損傷和細胞死亡；2、細胞周期阻滯青蒿琥酯可以使Kaposi’ s肉瘤細胞周期時間明顯縮短，二氫青蒿素可以使人乳腺癌MCF-7細胞阻滯在G0+G1期；3、誘導細胞凋亡青蒿琥酯可以誘導Kaposi’ s肉瘤細胞發(fā)生凋亡，并呈現(xiàn)出劑量依賴性，而并不能誘導正常細胞發(fā)生凋亡。青蒿素可以誘導人紅白血病K562細胞跨膜電位下降而發(fā)生凋亡；4、抗血管生成作用青蒿素類藥物可以通過抑制VEGF和KDR/flk-Ι的表達從而阻止腫瘤新生血管的形成；5、青蒿素類藥物可以調節(jié)腫瘤相關基因的表達，從而實現(xiàn)抗腫瘤的活性[；6、其它，如青蒿琥酯還具有對抗多藥耐藥的能力；青蒿素可以抑制星形細胞瘤 T67細胞中的核因子NF-κ B的合成。不僅如此，蒿甲醚可以引起嗜鉻細胞瘤(PC12)細胞的線粒體損傷，線粒體腫脹、嵴斷裂、減少、消失，并抑制線粒體呼吸鏈復合酶I和IV的活性， 從而導致細胞死亡。順鉬是治療肺癌中最常用的化療藥物之一，屬于細胞周期非特異性藥物，主要作用靶點是增殖細胞的DNA，有類似烷化劑雙功能基團的作用，可和細胞內的堿基結合，使 DNA分子鏈內和鏈間交叉鍵聯(lián)，從而使DNA失去功能。不能復制；高濃度時也抑制DNA和蛋白質的合成。順鉬除了與核DNA相互作用外，線粒體DNA(mtDNA)也是其重要的作用靶點。順鉬可引起肺腺癌A549細胞凋亡已被證實，并且試驗結果表明經順鉬作用后肺腺癌A549細胞中細胞色素氧化酶亞單位I (CoxI)、核糖體12SrRNA基因以及半胱氨酸轉運RNA(tRNA、 CyS)、天冬酰胺轉運RNA(tR-NAAsa)基因表達顯著上調，由此推測線粒體氧化磷酸化功能的增強是癌細胞對化療藥物的自然反應過程。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種治療肺癌的藥物組合物，所述藥物組合物的毒副作用少，療效好。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術方案一種治療肺癌的藥物組合物，包含蒿甲醚和順鉬。作為優(yōu)選，本發(fā)明所述藥物組合物還包含藥學上可接受的輔料。更優(yōu)選地，蒿甲醚與順鉬的重量比為1 0.01 1 0. 1，其中蒿甲醚與順鉬的重量比為1 0.02 1 0.05時，治療肺癌的效果最佳。本發(fā)明還提供包含根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物的各種臨床制劑。本領域技術人員可通過常規(guī)方法直接或間接加入藥學上可接受的輔料，制備臨床需要的各種劑型。經試驗研究發(fā)現(xiàn)蒿甲醚與順鉬聯(lián)用對體外培養(yǎng)的小鼠肺癌3LL細胞株有抑制作用。蒿甲醚與順鉬聯(lián)用或單用的效應均呈濃度、時間依賴關系，兩藥聯(lián)用的中效濃度明顯小于單用的中效濃度，兩藥高濃度合用時合用指數(shù)CI < 1(表示協(xié)同)；倒置顯微鏡下可觀察至IJ 3LL細胞典型的凋亡形態(tài)；流式細胞術顯示兩藥聯(lián)用時3LL細胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰，細胞周期被阻滯在G0/G1期，S期、G2/M期細胞數(shù)減少，兩藥聯(lián)用凋亡率高于單用順鉬或蒿甲醚， 且兩藥聯(lián)用的IC5tl值顯著低于單用順鉬或蒿甲醚，說明本發(fā)明所述藥物組合物不僅可減輕化療的毒副反應，減少用藥劑量，并能提高療效。動物實驗進一步證實，蒿甲醚與順鉬聯(lián)用表現(xiàn)出較好的抑瘤作用，均較單用順鉬或蒿甲醚強。


圖1為本發(fā)明所述藥物組合物的量效曲線；圖2為本發(fā)明所述藥物組合物與對照藥物給藥過程中模型小鼠體重變化曲線；圖3為本發(fā)明所述藥物組合物與對照藥物給藥過程中模型小鼠腫瘤體積變化曲線。
具體實施例方式本發(fā)明公開了一種治療肺癌的藥物組合物，本領域技術人員可以借鑒本文內容， 適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產品及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發(fā)明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術。下面結合實施例，進一步闡述本發(fā)明實施例1 測定蒿甲醚和順鉬單用與聯(lián)用對3LL細胞的抑制作用實驗材料DMEM/F12培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司；胎牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司；噻唑藍(MTT)購自美國AMRESC0公司。主要儀器二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Forma3164型)、酶標儀(美國Bio-Rad公司550 型)。細胞株及細胞培養(yǎng)小鼠肺癌細胞株3LL，用含10%胎牛血清、青霉素和鏈霉素 (各100u/ml)的DMEM/F12培養(yǎng)基，在37°C、5% C02孵箱中常規(guī)培養(yǎng)。
藥物蒿甲醚(Artemether，ART)由昆明制藥集團股份有限公司提供；順鉬(DDP) 購自山東省德州制藥廠實驗方法四甲基偶氮唑鹽法(MTT法)取對數(shù)生長期的3LL細胞，調整細胞懸液濃度為2 XlO5Ail，每孔100 μ 1接種于96 孔板，CO2培養(yǎng)箱中孵育24小時。設單用ART組、單用DDP組、兩藥聯(lián)用組、對照組(加生理鹽水)，實驗組各設 6 個濃度梯度(ART :500、250、125、62. 5,31. 25、15. 625 μ g/ml，DDP :20、 10、5、2. 5、1.25、0. 625yg/ml)，每個濃度設3個復孔，每孔加藥100μ 1，兩藥聯(lián)用按1 1 比例各加藥50 μ 1，對照組加生理鹽水。分別繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h、72、96h后，每孔加入5mg/ ml的MTT20 μ 1，培養(yǎng)4小時，棄上清液，每孔加入150 μ 1 DMSO,置37°C培養(yǎng)箱中15分鐘， 使結晶充分溶解，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定490nm處各孔的吸光值(OD)，并計算各組細胞抑制率(抑制率=1-實驗組OD值/對照組OD值)。兩藥聯(lián)用時間先后次系依賴關系設同時給藥組、先給ART24小時后再給DDP組、先給DDP24小時后再給ART組，共培養(yǎng)48小時，490nm測吸光值。中效原理判定兩藥聯(lián)用效應根據(jù)中效方程式fa/fu = (D/Dm)m，兩邊取對數(shù)得 lgfa/fu = mlgD-mlgDm。設 Y = lgfa/fu，X = lgD，a = _mlgDm，b = m，帶入上述方程式中得Y = bX+a。其中fa為細胞抑制率=1-實驗組平均OD值/對照組平均OD值；fu為細胞生存率=實驗組平均OD值/對照組平均OD值；D為藥物濃度；Dm為中效濃度即IC5(1。兩藥聯(lián)用時在各種效應時的合用指數(shù)CI = Dl/DXl+D2/DX2+a (D1D2/DX1DX2)(注D1、D2為合用時產生X效應時兩藥各自濃度，DX1、DX2為兩藥單獨使用時各自所需濃度)當α =0為兩種相互排斥性藥物，α = 1為兩種相互非排斥性藥物。CI < 1協(xié)同，CI = 1相加，CI > 1拮抗。實驗結果兩藥單用及聯(lián)用時不同濃度的效應兩藥單用及聯(lián)用時隨著藥物濃度增加對細胞抑制率也增加，見表1。表1、不同濃度的藥物單用及聯(lián)用對3LL細胞的抑制率(48h)
權利要求
1.一種治療肺癌的藥物組合物，包含蒿甲醚和順鉬。
2.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，還包含藥學上可接受的輔料。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，蒿甲醚與順鉬的重量比為 1 0. Ol 1 0. 1。
4.根據(jù)權利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，蒿甲醚與順鉬的重量比為 1 0. 02 1 0. 05。
5.包含根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物的臨床制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體公開了一種治療肺癌的藥物組合物，包含蒿甲醚和順鉑。細胞試驗顯示蒿甲醚與順鉑聯(lián)用可協(xié)同抑制小鼠肺癌3LL細胞株生長，兩藥單用和聯(lián)用的效應均呈濃度、時間依賴關系，兩藥高濃度合用時CI＜1；倒置顯微鏡下可觀察到3LL細胞典型的凋亡形態(tài)；流式細胞術顯示兩藥聯(lián)用時3LL細胞出現(xiàn)明顯凋亡峰，兩藥聯(lián)用凋亡率高于單用蒿甲醚或順鉑。動物實驗表明，蒿甲醚與順鉑聯(lián)用表現(xiàn)出較好的抑瘤作用，均較單用順鉑或蒿甲醚強。
文檔編號A61K31/357GK102247404SQ20101018257
公開日2011年11月23日 申請日期2010年5月19日 優(yōu)先權日2010年5月19日
發(fā)明者劉一丹, 劉國光, 楊兆祥, 楊旭娟, 陳云建 申請人:昆明制藥集團股份有限公司