專利名稱：芫根提取物用于制備減肥降血脂藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的芫根提取物是由以下方法制備的 方法A (1)將芫根原料用5～15倍體積的50～95％乙醇，于40～70℃水浴中，攪拌提取5～15h，過濾，將濾渣重復(fù)提取1～4次，合并濾液，減壓濃縮至無醇味浸膏； (2)取浸膏溶于40～70℃的熱水中，二者體積比為1∶1～2.5； (3)利用D101、AB-8、HPD100或者AS-3型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1～3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5～2ml/min的流速，用1～5倍柱體積的10～95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥，得到芫根提取物，得率為15～30重量％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為1.90～10.1重量％，1.85～3.2重量％，1.48～7.3重量％。
方法B (1)將芫根原料用5～15倍體積的50～95％乙醇，于40～70℃水浴中，以200～500w的超聲功率，超聲15～30min，反復(fù)提取2～5次； (2)將濾液40～70℃減壓濃縮成無醇味的浸膏； (3)將濃縮所得的浸膏加少量水溶解，二者體積比為1∶2.5； (4)利用D101、AB-8、HPD100或者AS-3型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1～3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5～2ml/min的流速，用1～5倍柱體積的10～95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥，得到芫根提取物，得率為20～30重量％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為1.95～14.8重量％，1.95～3.16重量％，4.48～10.1重量％。
方法C (1)將芫根原料用10～30倍體積的50～95％乙醇浸泡1～3h； (2)在常壓下，以微波功率500～900w，微波輻射20～60s，間歇輻射2～5次，進(jìn)行微波輔助浸??； (3)過濾收集濾液，將濾液濃縮成無醇味的浸膏； (4)將濃縮所得的浸膏加少量水溶解，二者體積比為1∶2.5； (5)利用D101、AB-8、HPD100或者AS-3型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1～3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5～2ml/min的流速，用1～5倍柱體積的10～95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物，得率為18～30重量％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為1.95～14.5重量％，2.05～4.08重量％，1.51～9.1重量％。
所述制備方法中的芫根原料均為芫根的塊根，經(jīng)切片后自然風(fēng)干，然后粉碎得到粉狀物，粉碎細(xì)度達(dá)到40～200目； 所述干燥方法為減壓真空干燥、冷凍干燥或噴霧干燥。
將芫根提取物制備成劑，該制劑是粉劑、片劑、膠囊、顆粒劑、緩釋片、緩釋膠囊、滴丸或液體制劑。制劑應(yīng)用于臨床治療肥胖癥、高血脂癥及制成含芫根提取物減肥降脂保健品。
本發(fā)明用Liebermann反應(yīng)檢測(cè)所提的芫根提取物中的皂苷，反應(yīng)中溶液呈黃→紅→藍(lán)→紫→綠色變化，可以確定其含有皂苷類化合物。提取物中皂苷含量的測(cè)定是利用苷元與香蘭素的硫酸試劑發(fā)生的顯色反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)，以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用紫外分光光度法測(cè)定芫根皂苷含量； 本發(fā)明用鹽酸-鎂粉反應(yīng)檢測(cè)所提的芫根提取物中的黃酮，泡沫處呈現(xiàn)紫紅色；取樣品的60％乙醇溶液滴在濾紙上后，與1％AlCl3乙醇溶液反應(yīng)在可見光下呈現(xiàn)灰黃色，在紫外光下呈現(xiàn)黃色熒光斑點(diǎn)；取樣品乙醇的60％溶液滴在濾紙上，用濃氨水熏過后，在紫外光下呈現(xiàn)黃褐色熒光斑點(diǎn)，說明提取物確實(shí)含有黃酮類化合物。芫根提取物中黃酮的定量測(cè)定是利用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用紫外分光光度法測(cè)定芫根提取物含量； 本發(fā)明用滴定法測(cè)定芫根提取物中有機(jī)酸的含量將所提樣品0.4g用無水乙醇定容到50ml。在配好溶液中加入2滴酚酞試劑，用0.0749mol/L的氫氧化鈉溶液滴定，每1ml氫氧化鈉溶液相當(dāng)于9.916mg水楊酸，總有機(jī)酸以水楊酸計(jì)。測(cè)得芫根提取物中有機(jī)酸的含量。
四、具體實(shí)施方法 實(shí)施例1 采用方法A，將芫根原料用15倍體積的50％乙醇，于70℃水浴中，攪拌提取15h，過濾，將濾渣重復(fù)提取1次，合并濾液，減壓濃縮至無醇味浸膏。取浸膏溶于70℃的熱水中(體積比1∶1.5)。利用HPD100型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5ml/min的流速，用5倍柱體積的20％、60％、95％乙醇分別進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為15.2％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為4.4％，2.5％，5.3％。
實(shí)施例2 采用方法A，將芫根原料用10倍體積的80％乙醇，于40℃水浴中，攪拌提取15h，過濾，將濾渣重復(fù)提取2次，合并濾液，減壓濃縮至無醇味浸膏。取浸膏溶于40℃的熱水中(體積比1∶2.5)。利用AB-8、HPD100型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用2倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以2ml/min的流速，用3倍柱體積的10％、40％、70％、95％乙醇分別進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為18.3％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為9.1％，2.2％，6.3％。
實(shí)施例3 采用方法A，將芫根原料用5倍體積的95％乙醇，于60℃水浴中，攪拌提取12h，過濾，將濾渣重復(fù)提取4次，合并濾液，減壓濃縮至無醇味浸膏。取浸膏溶于60℃的熱水中(體積比1∶2)。利用D101型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以1ml/min的流速，用5倍柱體積的20％、40％、60％、80％、95％乙醇分別進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為26.8％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為10.1％，3.2％，7.3％。
實(shí)施例4 采用方法B，將芫根原料用15倍體積的50％乙醇于70℃，以500w的超聲功率，超聲15min，反復(fù)提取2次。將濾液70℃減壓濃縮成無醇味的浸膏。將濃縮所得的浸膏加少量水溶解(體積比1∶2.5)。利用D101型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以2ml/min的流速，用3倍柱體積的20％、60％、95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為20.9％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為4.5％，3.06％，8.9％。
實(shí)施例5 采用方法B，將芫根原料用10倍體積的80％乙醇于40℃，以200w的超聲功率，超聲30min，反復(fù)提取3次。將濾液40℃減壓濃縮成無醇味的浸膏。將濃縮所得的浸膏加少量水溶解(體積比1∶2.5)。利用HPD100型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5ml/min的流速，用5倍柱體積的10％、40％、70％、95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為22.1％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為14.8％，2.16％，9.9％。
實(shí)施例6 采用方法B，將芫根原料用5倍體積的95％乙醇于60℃，以300w的超聲功率，超聲20min，反復(fù)提取5次。將濾液60℃減壓濃縮成無醇味的浸膏。將濃縮所得的浸膏加少量水溶解(體積比1∶2.5)。利用D101型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以1ml/min的流速，用5倍柱體積的20％、40％、60％、80％、95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為30％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為14.7％，1.95％，10.1％。
實(shí)施例7 將芫根原料用10倍體積的95％乙醇浸泡1h。在常壓下，以微波功率700w，微波輻射40s，間歇輻射5次，進(jìn)行微波輔助浸取。過濾收集濾液，將濾液濃縮成無醇味的浸膏。將濃縮所得的浸膏加少量水溶解(體積比1∶2.5)。利用D101型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5ml/min的流速，用5倍柱體積的20％、40％、60％、80％、95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為26.5％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為11.5％，3.08％，7.1％。
實(shí)施例8 將芫根原料用30倍體積的50％乙醇浸泡3h。在常壓下，以微波功率500w，微波輻射60s，間歇輻射2次，進(jìn)行微波輔助浸取。過濾收集濾液，將濾液濃縮成無醇味的浸膏。將濃縮所得的浸膏加少量水溶解(體積比1∶2.5)。利用AS-3型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用2倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以1ml/min的流速，用2倍柱體積的10％、40％、70％、95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為18.5％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為6.4％，4.08％，8.9％。
實(shí)施例9 將芫根原料用20倍體積的75％乙醇浸泡2h。在常壓下，以微波功率900w，微波輻射20s，間歇輻射5次，進(jìn)行微波輔助浸取。過濾收集濾液，將濾液濃縮成無醇味的浸膏。將濃縮所得的浸膏加少量水溶解(體積比1∶2.5)。利用D101型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5～2ml/min的流速，用4倍柱體積的10％、40％、70％、95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物。得率為18.1％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為11.5％，2.08％，9.1％。
實(shí)施例10 片劑取芫根提取物50g，加入50g可壓淀粉和40g羧甲基淀粉鈉，混合均勻，以70％的乙醇為潤(rùn)濕劑，制軟材，18目篩制粒，烘干，16目篩整粒，加入3g硬脂酸鎂為潤(rùn)滑劑，混合均勻，壓片、包衣，制成1000片包衣片。
實(shí)施例11 膠囊取芫根提取物50g，加入80g可壓淀粉和20g羧甲基纖維素鈉，混合均勻，以70％的乙醇為濕潤(rùn)劑，制軟材，24目篩制粒，烘干，20目篩整粒，加入3g硬脂酸鎂，混合均勻，裝膠囊，制成1000粒膠囊。
實(shí)施例12 顆粒劑取芫根提取物100g，加入450g蔗糖粉、100g羧甲基纖維素鈉、100g微晶纖維素和50g檸檬酸，混合均勻，以3％PVP為潤(rùn)濕劑制軟材，20目篩制粒，烘干，18目篩整粒，分裝，制成粒徑為830～880μm的1000袋顆粒劑。每袋重0.72～0.78g。
實(shí)施例13 粉針劑取芫根提取物12g，羥丙基-p-環(huán)糊精135g，加注射用水3L，攪成糊狀，再加70℃～85℃的注射用水3L，溶解時(shí)溫度控制在70℃～85℃，加甘露醇450g溶解，再用1mo L/L鹽酸溶液調(diào)p H值至5.6，加入針用炭后室溫?cái)嚢?，過濾脫炭，精濾.濾液按每只2ml進(jìn)行分裝，采用速凍法干燥，將制品取出，進(jìn)行封口，即得到性狀為白色疏松塊狀物或粉末，即得粉針劑。
實(shí)施例14 滴丸將150g聚乙二醇4000在水浴上加熱得熔融液，趁熱加入芫根提取物50g，攪拌均勻，65℃保溫1小時(shí)，用滴丸機(jī)滴制，滴速120滴/分鐘，滴制溫度65～75℃，在15℃左右的液體石蠟中冷卻，制得丸重約60mg，干燥，包衣，即得滴丸。
實(shí)施例15 口服液取蒸餾水適量，加入20g芫根提取物、180g蔗糖粉、20g檸檬酸，攪拌溶解，過濾，濾液補(bǔ)充蒸餾水至10000ml，加入香精適量，攪拌均勻，分裝，每支10ml，壓蓋，100℃消毒1小時(shí)，檢查合格，即得口服液。
實(shí)施例16 粉劑取芫根提取物30g，粉碎成粒徑為20μm粉狀物，加入500g蔗糖粉、100g羧甲基纖維素鈉、100g微晶纖維素混合均勻，分裝，制成1000袋粉劑。每袋重0.68～0.73g。添加量為食品或飼料的0.01～1％。
將上述制備實(shí)施例6所得的芫根提取物進(jìn)行如下效果實(shí)驗(yàn) 1、營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠檢測(cè)芫根提取物減肥降血脂活性實(shí)驗(yàn) SD大鼠60只(80±20g)隨機(jī)分為6組，除空白組喂食基礎(chǔ)飼料以外，每組均給予等量高脂飼料，每只每天20g。4周以后測(cè)得體重高于空白組15％，開始灌胃。實(shí)驗(yàn)組每天分別灌胃400mg/kg·d、800mg/kg·d、1600mg/kg·d芫根提取物?？瞻捉M、高脂組灌以等量蒸餾水，陽性對(duì)照組灌以鹽酸西布曲明2.5mg/kg·d。給藥3周之后檢測(cè)大鼠體重、身長(zhǎng)，計(jì)算lee’s指數(shù)，眼眶靜脈叢采血，用試劑盒測(cè)血清中總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-c、低密度脂蛋白LDL-c值。處死后解剖檢測(cè)大鼠睪丸脂肪濕重。結(jié)果見表1、表2、表3、表4。
表1.芫根提取物對(duì)大鼠體重、身長(zhǎng)和lee’s指數(shù)的影響
*表示與高脂組比較，0.01＜p＜0.05，**表示與高脂組比較p＜0.01 表2、芫根提取物對(duì)大鼠睪丸周圍脂肪濕重及其脂肪系數(shù)的影響

*表示與高脂組比較，0.01＜p＜0.05，**表示與高脂組比較p＜0.01 表3、大鼠血清總膽固醇TC、甘油三酯TG TC mmol/l TG mmol/l 空白組 1.881±0.095**0.557±0.043** 高脂組 3.645±0.335 0.988±0.174 陽性對(duì)照2.335±0.112**0.976±0.202 400mg/kg·d 3.557±0.346 0.701±0.033* 800mg/kg·d 3.625±0.459 0.903±0.431 1600mg/kg·d2.225±0.072**0.667±0.094* *表示與高脂組比較，0.01＜p＜0.05，**表示與高脂組比較p＜0.01 表4.大鼠血清高密度脂蛋白HDL-c、低密度脂蛋白LDL-c HDL-C mmol/l LDL-C mmol/l 空白組 0.662±0.112**2.262±0.152* 高脂組 0.456±0.123 3.109±0.656 陽性對(duì)照 0.678±0.012**2.156±0.134* 400mg/kg·d0.712±0.092**2.112±0.092* 800mg/kg·d0.683±0.025**2.301±0.108* 1600mg/kg·d 0.669±0.013**2.171±0.097* *表示與高脂組比較，0.01＜p＜0.05，**表示與高脂組比較p＜0.01 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的芫根提取物在高劑量顯示出顯著的減肥降血脂活性?？衫密靖崛∥镏苽渌幬锘蛘弑＝∈称酚糜陬A(yù)防或者治療肥胖癥及高血脂癥。
本發(fā)明的芫根提取物的制備方法和用途已經(jīng)通過具體的實(shí)例進(jìn)行了描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可借鑒本發(fā)明內(nèi)容，適當(dāng)改變?cè)稀⒐に嚄l件等環(huán)節(jié)來實(shí)現(xiàn)相應(yīng)的其它目的，其相關(guān)改變都沒有脫離本發(fā)明的內(nèi)容，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，都被視為包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.按照如下方法經(jīng)醇提取的芫根提取物用于制備減肥降血脂藥物的用途
(1)將芫根原料用5～15倍體積的50～95％乙醇，于40～70℃水浴中，攪拌提取5～15h，過濾，將濾渣重復(fù)提取1～4次，合并濾液，減壓濃縮至無醇味浸膏；
(2)取浸膏溶于40～70℃的熱水中，二者體積比為1∶1～2.5；
(3)利用D101、AB-8、HPD100或者AS-3型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1～3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5～2ml/min的流速，用1～5倍柱體積的10～95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥，得到芫根提取物，得率為15～30重量％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為1.90～10.1重量％，1.85～3.2重量％，1.48～7.3重量％。
2.按照如下方法經(jīng)醇提取的芫根提取物用于制備減肥降血脂藥物的用途
(1)將芫根原料用5～15倍體積的50～95％乙醇，于40～70℃水浴中，以200～500w的超聲功率，超聲15～30min，反復(fù)提取2～5次；
(2)將濾液40～70℃減壓濃縮成無醇味的浸膏；
(3)將濃縮所得的浸膏加少量水溶解，二者體積比為1∶2.5；
(4)利用D101、AB-8、HPD100或者AS-3型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1～3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5～2ml/min的流速，用1～5倍柱體積的10～95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥，得到芫根提取物，得率為20～30重量％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為1.95～14.8重量％，1.95～3.16重量％，4.48～10.1重量％。
3.按照如下方法經(jīng)醇提取的芫根提取物用于制備減肥降血脂藥物的用途
(1)將芫根原料用10～30倍體積的50～95％乙醇浸泡1～3h；
(2)在常壓下，以微波功率500～900w，微波輻射20～60s，間歇輻射2～5次，進(jìn)行微波輔助浸?。?br> (3)過濾收集濾液，將濾液濃縮成無醇味的浸膏；
(4)將濃縮所得的浸膏加少量水溶解，二者體積比為1∶2.5；
(5)利用D101、AB-8、HPD100或者AS-3型大孔吸附樹脂吸附浸膏水溶液，先用1～3倍柱體積的水洗去極性較大的雜質(zhì)，再以0.5～2ml/min的流速，用1～5倍柱體積的10～95％乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集、合并各段洗脫液，濃縮、干燥。得到芫根提取物，得率為18～30重量％，其中皂苷、黃酮、有機(jī)酸的含量分別為1.95～14.5重量％，2.05～4.08重量％，1.51～9.1重量％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的用途，其特征在于將所制得的芫根提取物用于制備降低血清中TC、TG和LDL-C含量并升高HDL-C含量的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及從芫根植株中提取得到的提取物制備減肥降血脂藥物的用途，尤其是減少體重，達(dá)到減肥的目的，同時(shí)還能降低曲青中TC、TG和LDL-C含量并升高HDL-C水平含量。
文檔編號(hào)A61P3/06GK101810663SQ20101017803
公開日2010年8月25日 申請(qǐng)日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月20日
發(fā)明者蔣思萍, 高平 申請(qǐng)人:西藏自治區(qū)高原生物研究所