專利名稱：锝-99m標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到锝_99m標記的放射性藥物化學(xué)和臨床核醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉 及到一種锝-99m標記的聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)配合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
ASGP 受體(Asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)是去唾液酸糖白蛋白 受體的簡寫，存在于哺乳動物肝細胞膜上，是介導(dǎo)肝臟清除血液中去唾液酸糖蛋白 (Asialoglycoprotein,ASGP)的專一位點。除了白蛋白之外幾乎所有血漿蛋白都為糖蛋白， 在被肝臟合成并釋放到血液時，其糖鏈末端為唾液酸。唾液酸與其它糖基形成較弱的連接， 在血液中并不穩(wěn)定，很易被清除。唾液酸部分被清除，標志著這個糖蛋白壽命的結(jié)束。大部 分血漿蛋白中半乳糖結(jié)構(gòu)都位于末端的第二位上，因此當(dāng)末端的糖被酶解后，以半乳糖結(jié) 尾的糖蛋白就可以作為ASGP受體的作用底物。去唾液酸糖蛋白一旦在細胞表面與ASGP受 體結(jié)合，所形成的配體-受體復(fù)合物迅速內(nèi)化，5分鐘左右進入前溶酶體囊泡后由于pH的作 用而解離，受體再循環(huán)到質(zhì)膜，大部分配體經(jīng)溶酶體酶的作用而被分解代謝，小部分配體則 繞過溶酶體的降解而排入膽汁，或穿過細胞膜返回細胞表面仍與受體相結(jié)合。這個過程可 以維持血漿糖蛋白的動態(tài)平衡。ASGP受體可以在一定程度上反映出有效肝細胞功能，在肝 炎、肝硬化或肝癌等肝損傷性疾病發(fā)生時，其數(shù)量和活性均受到損害。肝炎疾病在世界范圍 內(nèi)都是一種高發(fā)疾病，特別是肝硬化繼發(fā)肝癌患者眾多，嚴重影響人類健康與生活質(zhì)量，其 重要性現(xiàn)在已經(jīng)引起廣泛關(guān)注突現(xiàn)。1984年Vera等通過化學(xué)合成方法將半乳糖結(jié)構(gòu)與人 血清白蛋白偶聯(lián)得到新乳糖白蛋白(galactosyl-neoglycoalbumin，NGA)，并經(jīng)"mTc標記 后進行肝顯像研究。1986 年 Kubota 等研制 了一種 99mTc 標記 GSA(99mTc-diethylenetriamine pentaaceticacid-galactosyl-human serum albumin)，通過增力口雙功能連接齊[JDTPA(二乙 烯三胺五乙酸)結(jié)構(gòu)，簡化了標記條件，減少了非特異性結(jié)合。日本已經(jīng)利用ASGH 顯像劑 為核醫(yī)學(xué)肝臟SPECT顯像建立了三維肝臟模型，該顯像技術(shù)可以真實、數(shù)字化地反映肝臟 功能，這樣既可以對肝硬化患者術(shù)前肝功能進行正確的評估，幫助預(yù)測手術(shù)風(fēng)險、制定治療 方案，降低肝臟手術(shù)的圍手術(shù)期死亡率。聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)化合物(poly-N-p-vinylbenzyl-D-lactonami de)對ASGP受體具有良好的親和力，目前主要用為一種人工合成的肝組織工程支架材料。 1994年Goto等報道了用碘-125標記的聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)化合物，其對ASGP 受體具有很高的親和力，在肝臟中有較好的濃集。锝_99m是目前臨床使用最常見的放射性 核素，具有良好的核素性質(zhì)。目前锝_99m標記的ASGP受體顯像劑如99mTc_GSA等采用人血 清白蛋白作為分子骨架進行修飾、標記。但是人血清白蛋白容易變質(zhì)，不易保存。找到一種 穩(wěn)定性好、可用于锝_99m標記的人工聚合物開發(fā)用于肝ASGP受體顯像的SPECT顯像劑是 本技術(shù)領(lǐng)域需要解決的重要課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有化學(xué)穩(wěn)定性強、生物性能好、初始攝取值及化學(xué)純 度高、制備簡單及使用成本低，應(yīng)用在肝臟受體SPECT顯像領(lǐng)域的锝_99m標記的聚N-乙烯 基芐基-D-乳糖酰胺配合物。并且提供其制備方法。為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種锝_99m標記的聚N-乙烯基芐 基-D-乳糖酰胺配合物，其表達式為99mTc-PVLA，配體結(jié)構(gòu)通式為 以99mTc為中心核，配體為含有6-胼基吡啶-3-甲酰胺基團(HYOTC)和半乳糖基 團的聚合物——聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基芐基-6-胼基吡啶-3-甲酰 胺)(p(VLA-co-VNI))；式中m與n的比例為1 99 30 70，胼基選用苯甲醛(R = C6H5)、4_ 二甲氨基 苯甲醛(R = 4-NMe2-C6H4)、苯甲醛_2_磺酸鈉(R = 2-Na03S-C6H4)或4-羧基苯甲醛(R = 4-H02C-C6H4)通過成腙反應(yīng)進行保護。共配體選自N-三(羥甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、 N，N-(2-羥乙基)甘氨酸(Bicine)或N_(2_羥乙基)-亞乙基二氨三乙酸(HEDTA)中的 一種；當(dāng)使用N-三(羥甲基)甲基甘氨酸作為共配體時，可選用三(3-磺酰苯基)膦鈉鹽 (TPPTS)或三苯基膦單磺酸單鈉鹽(TPPMS)中的一種作為協(xié)同配體。本發(fā)明優(yōu)選的配體中，m與n的比例為4 96 15 85。锝-99m標記的聚N-乙烯基芐基_D_乳糖酰胺配合物的制備方法如下當(dāng)不使用協(xié)同配體時，以聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)-(N_乙烯基芐基-6-胼 基吡啶-3-甲酰胺)(p(VLA-co-VNI))為配體，在共配體、還原劑的存在下反應(yīng)制備得到放 射性锝_99m標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物，其制備步驟為a.將p (VLA-co-VNI)配體溶于緩沖液中；按照配體比共配體為1 5 1000的 重量比，加入共配體N-三(羥甲基)甲基甘氨酸(Tricine)、N，N-(2-羥乙基)甘氨酸 (Bicine)或N-(2-羥乙基)-亞乙基二氨三乙酸(HEDTA)中的一種；b.然后按還原劑比配體為1 1 800的重量比稱取還原劑并溶于鹽酸溶液中；加入到步驟a所得溶液中，混合均勻，控制其pH在5. 5 6. 5之間；c.將從醫(yī)用99Mo-99mTc發(fā)生器中淋洗獲得的高锝酸根99mTc04_淋洗液加入步驟b制 備的溶液中，密封后在沸水浴條件下反應(yīng)10 100分鐘；d.將步驟c所得標記化合物通過凝膠色譜柱進行純化。上述步驟a中優(yōu)選的p (VLA-co-VNI)配體的用量為0. lmg 4mg ；上述步驟a中p (VLA-co-VNI)配體中胼基可選用苯甲醛、4_ 二甲氨基苯甲醛、苯 甲醛-2-磺酸鈉或4-羧基苯甲醛等進行保護，以增加配體的穩(wěn)定性；胼基保護基團在步驟 c中加熱時解離，脫保護后的胼基與"mTc中心核配位。上述步驟a中所述共配體為N-三(羥甲基)甲基甘氨酸(TriCine)、N，N-(2-羥 乙基)甘氨酸(Bicine)或N-(2-羥乙基)-亞乙基二氨三乙酸(HEDTA)中的一種，其分子 結(jié)構(gòu)式為 共配體為锝_99m標記時參與配位的小分子配體，優(yōu)選的共配體用量為20mg lOOmg ；上述步驟a中所述的緩沖液為0. 05mol/L pH6. 0磷酸緩沖液，用量為0. lmL 5mL ；上述步驟b中所述的還原劑為將高價锝(99mTcVII04-)還原為低價锝的常規(guī)化學(xué)試 劑二水合氯化亞錫(SnCl2 2H20)，優(yōu)選的還原劑用量為0. 005mg 0. lmg ；上述步驟c中，配體中胼基的保護基團水解離去，使胼基裸露出來，從而進行標 記。上述步驟d中所述的凝膠色譜柱選用填料為葡聚糖凝膠G25(S印hadex G25)的凝 膠柱(HiTrap Desalting 凝膠柱)；上述制備方法中所述聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基芐基-6-胼基 吡啶-3-甲酰胺)(p (VLA-co-VNI))配體為自行合成，其優(yōu)選的配體用量為0. lmg-4mg。配 體比共配體為1 5 1000的重量比；還原劑比配體為1 1 800的重量比。上述制備方法中所述的共配體、緩沖液、還原劑等試劑均以從市場購得。當(dāng)使用協(xié)同配體時，以聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)-(N_乙烯基芐基-6-胼 基吡啶-3-甲酰胺)(p (VLA-co-VNI))為配體，在以tricine為共配體、協(xié)同配體、還原劑的 存在下反應(yīng)制備得到放射性锝_99m標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物，其制備 步驟為a.將p (VLA-co-VNI)配體溶于緩沖液中；按照配體比共配體為1 5 1000的 重量比，加入共配體N-三(羥甲基)甲基甘氨酸(Tricine)；
b.按照協(xié)同配體比共配體為1 2 10的重量比，加入?yún)f(xié)同配體；c.然后按還原劑比配體為1 1 800的重量比稱取還原劑并溶于鹽酸溶液中； 加入到步驟b所得溶液中，混合均勻，控制其pH在5. 5 6. 5之間；d.將從醫(yī)用99Mo-99mTc發(fā)生器中淋洗獲得的"mTc04_淋洗液加入步驟c制備的溶液 中，密封后在沸水浴條件下反應(yīng)10 100分鐘；e.將步驟d所得標記化合物通過凝膠色譜柱進行純化。上述步驟a中優(yōu)選的p (VLA-co-VNI)配體的用量為0. lmg 4mg ；上述步驟a中p(VLA-co-VNI)配體中胼基可選用苯甲醛、4_二甲氨基苯甲醛、苯甲 醛-2-磺酸鈉或4-羧基苯甲醛進行保護，以增加配體的穩(wěn)定性；胼基保護基團在步驟d中 加熱時解離，脫保護后的胼基與"mTc中心核配位。上述步驟a中所述共配體為N-三(羥甲基)甲基甘氨酸(Tricine)，優(yōu)選的共配 體用量為:20mg lOOmg ；上述步驟b中所述協(xié)同配體為三(3-磺酰苯基)膦鈉鹽(TPPTS)或三苯基膦單磺 酸單鈉鹽(TPPMS)中的一種，其分子結(jié)構(gòu)式為 協(xié)同配體為锝_99m標記時參與配位的小分子單齒配體，優(yōu)選的協(xié)同配體用量為 lmg 10mg ；上述步驟a中所述的緩沖液為0. 05mol/L pH6. 0磷酸緩沖液，用量為0. lmL 5mL ；上述步驟c中所述的還原劑為將高價锝(99mTcVII04-)還原為低價锝的常規(guī)化學(xué)試 劑二水合氯化亞錫(SnCl2 2H20)，優(yōu)選的原劑用量為0. 005mg-0. lmg ；上述步驟d中，配體中胼基的保護基團水解離去，使胼基裸露出來，從而進行標 記。上述步驟e中所述的凝膠色譜柱選用填料為葡聚糖凝膠G25(S印hadex G25)的凝 膠柱(HiTrap Desalting 凝膠柱)；上述制備方法中所述聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基芐基-6-胼基 吡啶-3-甲酰胺)(p(VLA-co-VNI))配體為自行合成，其優(yōu)選的配體用量為0. lmg 4mg。 配體比共配體為1 5 1000的重量比；協(xié)同配體比共配體為1 2 10的重量比；還原 劑比配體為1 1 800的重量比。上述制備方法中所述的共配體、協(xié)同配體、緩沖液、還原劑等試劑均以從市場購
本發(fā)明以放射性高锝酸鹽(99mTc04_)與聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)_ (N-乙 烯基芐基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺)(p(VLA-co-VNI))配體，輔以N-三(羥甲基)甲基甘 氨酸(TriCine)、N，N-(2-羥乙基)甘氨酸(Bicine)或N_(2_羥乙基)-亞乙基二氨三乙 酸(HEDTA)中的一種為共配體；當(dāng)使用N-三(羥甲基)甲基甘氨酸作為共配體時，可選用 三(3-磺酰苯基)膦鈉鹽(TPPTS)或三苯基膦單磺酸單鈉鹽(TPPMS)中的一種作為協(xié)同配 體；在還原劑SnCl2 2H20的存在下，反應(yīng)制備得到一種放射性锝_99m標記的聚N-乙烯基 芐基-D-乳糖酰胺配合物(99mTc-PVLA)，化學(xué)穩(wěn)定性及生物性能好、比活度高、肝臟攝取值 及靶與非靶比值高、制備簡單及使用成本低，可以用于制備新型的肝受體顯像劑。檢測表明所得锝-99m標記的聚N_乙烯基芐基_D_乳糖酰胺配合物通過薄層層 析及HPLC鑒定，其放射化學(xué)純度大于99 %，且在室溫下放置4小時后放化純度無變化，有較 好的穩(wěn)定性。以實施例1中使用tricine為共配體得到的配合物"mTc (PVLA) (tricine)2為例， 實驗表明，锝-99m標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物的基本的性能如下1. "mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠體內(nèi)生物分布取25只正常昆明小白鼠，于尾靜脈注射0. lmL "mTc (PVLA) (tricine) 2 (約 0. 185MBq，含1 ii g PVLA)。于注射后5、10、30、60和120min后斷頭處死。取出心、肝、肺、 腎、肌肉、骨、血等組織，稱量并在Y計數(shù)器中測其放射性計數(shù)。"mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠中的生物分布見表1。在正常小鼠中的生物分布結(jié)果顯示，99mTc(PVLA) (tricine)2在肝臟中有很高的初 始攝取，注射5min后，在肝臟中有(125. 33士 10.99) % ID/g的攝取值。在心、肺、腎、脾等 非靶器官的放射性濃集較低。特別是血液、腎臟中的放射性濃集明顯低于目前臨床使用 的99mTc-GSA，這對于肝臟部位的定量評價具有重要的意義?；谝陨仙锓植紝嶒灲Y(jié)果， "mTc(PVLA) (tricine)2表現(xiàn)了優(yōu)良的生物性能，有利于在未來的顯像中夠獲得更清晰的圖 像和更準確的數(shù)據(jù)。表1. "mTc (PVLA) (triCine)2在正常小鼠體內(nèi)生物分布數(shù)據(jù)(％ ID/g士sd，n = 5)
脾 2. "mTc (PVLA) (tricine) 2 在小鼠體內(nèi)抑制實驗取同批次5只正常昆明小白鼠，于尾靜脈預(yù)注射0. lmL抑制劑(NGA溶于生理鹽 水，按10mg/kg體重的劑量注射)，5min后，于尾靜脈注射0. lmL99mTc (PVLA) (tricine) 2(約 0. 185MBq，含1 ii g PVLA)。注射后5min后斷頭處死。取出心、肝、肺、腎、肌肉、骨、血等組 織，稱量并在锝分析儀內(nèi)測其放射性計數(shù)。"mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠體內(nèi)抑制實驗結(jié)果見表2。抑制實驗的結(jié)果表明，在通過預(yù)注射NGA，在5min時能夠明顯的抑制99mTc (PVLA) (tricine)2在小鼠肝臟中的攝取(P < 0.001)，大量未進入肝臟的"mTc (PVLA) (tricine)2 滯留在血液中，在心、肺、腎等各臟器攝取也明顯增加。抑制實驗的結(jié)果說明通過預(yù)注射NGA，可有效抑制99mTc(PVLA) (tricine) 2在肝中 的攝取。證明"mTc (PVLA) (tricine) 2對ASGP受體具有親和性。表2. "mTc (PVLA) (tricine) 2在正常小鼠體內(nèi)抑制實驗數(shù)據(jù)(注藥后 5min，% ID/g士 sd，n = 5) 上述各項實驗說明，本發(fā)明所述的锝_99m標記的聚N_乙烯基芐基_D_乳糖酰胺 配合物(99mTc-PVLA)，放射化學(xué)純度大于99%，有很高的化學(xué)穩(wěn)定性。具有優(yōu)良的生物性能， 在肝臟中有較高的初始攝取；與"mTc-GSA相比有較低的非靶臟器攝取，滿足用作肝細胞受 體顯像劑的條件，能減少不必要的放射性損傷，并且可減少對肝臟功能定量評價時的干擾， 可作為新型的肝細胞去唾液酸糖蛋白受體顯像劑，99mTc_PVLA作為新型配合物具有高化學(xué) 穩(wěn)定性和良好的生物分布性質(zhì)，可作為肝細胞受體SPECT顯像劑在臨床上推廣應(yīng)用。
具體實施例方式下面通過實施例詳述本發(fā)明，一種锝_99m標記的聚N_乙烯基芐基_D_乳糖酰胺 配合物1.對乙烯基苯甲氨的合成4-氯甲基苯乙烯15. 3g(0. lOmol)和鄰苯二甲酰亞胺鉀18. 5g(0. lOmol)溶于50mL DMF中，加熱至50°C反應(yīng)4h。旋蒸除去DMF，將殘余物溶于氯仿，先后用0. 2N的氫氧化鈉溶 液和水清洗，旋干有機相后，得到產(chǎn)物N-(4-乙烯基芐基)_鄰苯二甲酰亞胺。于甲醇中重 結(jié)晶。mp 107-108°C。18. 4g(0. 07mol)N-(4-乙烯基芐基)_鄰苯二甲酰亞胺溶于50mL乙醇中，加熱回 流，滴加入溶于10mL乙醇的80%的水合胼6. 6g(0. 105mol)。立即出現(xiàn)白色沉淀，機械攪拌 回流90min。過濾沉淀，母液旋干溶劑，將固體合并后，溶于K0H溶液(20gK0H，120mLH20)。 用乙醚萃取(140mLXl，70mLX4)合并乙醚相用2%的碳酸鉀溶液洗(40mLX 4)，用碳酸鉀 干燥后，除去溶劑，加壓蒸餾(72-73°C /3mmHg)。2. N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺(VLA)的制備稱取1. 27g乳糖酸，加入25mL甲醇，分散溶解后旋蒸除去溶劑。再加入25mL甲醇， 分散溶解后旋蒸除去溶劑。重復(fù)20次。得到乳糖酸內(nèi)酯。將乳糖內(nèi)酯1. 7g(5mmol)溶于17mL甲醇中回流，將對乙烯基苯甲氨0. 7g(5mmol)溶于3. 75mL甲醇中加入反應(yīng)瓶?；亓鞣磻?yīng)120min，冷卻至室溫，產(chǎn)生白色晶體。過濾后，固 體用少量的冷的甲醇洗，真空干燥。3. N-乙烯基芐基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺(VNI)的制備將6-胼基吡啶-3-甲酸(HYNIC) lg(6. 5mmol)溶于40mLDMF中，加入等物質(zhì)量的醛 類進行胼基保護，室溫攪拌3h。加入琥珀酰亞胺748mg(6. 5mmol)和DCC2. 76g(13. 4mmol)， 室溫反應(yīng)18h。過濾，濾液旋干，加入50mL乙酸乙酯，加熱回流lh，熱過濾，得到黃色粉末。所加入的醛類可通過成腙反應(yīng)對胼基進行保護，可選用苯甲醛、4-二甲氨基苯甲 醛、苯甲醛-2-磺酸鈉或4-羧基苯甲醛等。保護基團在標記過程中通過加熱水解離去，使 胼基裸露從而進行配位。將N-琥珀酰亞胺-6-胼基吡啶-3-甲酸和乙烯基苯甲氨按1.2 1投料，在DMF 中室溫反應(yīng)24h。旋蒸除去溶劑，分別用乙酸乙酯和甲醇洗滌后得到淺黃色粉末。4.聚(N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)-(N-乙烯基芐基_6_胼基吡啶_3_甲酰胺) (p (VLA-co-VNI))的制備VLA及VNI按95 5的比例溶于DMS0中，加入偶氮二異丁腈(AIBN)(按單體物 質(zhì)的量的0.5%)。低溫下抽真空并密封。60°C反應(yīng)16h。倒入冷的甲醇中，出現(xiàn)淺黃色沉 淀。將沉淀溶于水后，于5000MWcut的透析帶中透析48h，冷凍干燥。實施例1 以Tricine 作為共配體，"mTc (PVLA) (tricine) 2 的制備取p(VLA-co_VNI)0. 2mg 溶于 0. 5mL 磷酸緩沖液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 30mg 共配體tricine)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 2H20溶液10 u L，充分搖勻。最后 加入新鮮99mTc04_洗脫液0. 5mL(37MBq)，充分振蕩，密封后于沸水浴中反應(yīng)20min。即得到 "mTc(PVLA) (tricine)2。將HiTrap脫鹽凝膠柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 緩沖液)平衡，控制流速在1 lOmL/min之間。將0. 25mL標記好的"mTc (PVLA) (tricine) 2 用lmL注射器上樣，先用1.25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去雜質(zhì)、回收率> 95% 的"mTc (PVLA) (tricine) 2 溶液。通過層析及RP-HPLC鑒定，其保留時間為11. 9min，放射化學(xué)純度大于99%。HPLC 條件為高效液相色譜儀 SHIMADZU(SCL-lOAvp) ；Kromaisl C4 柱 250X4. 6mm, 5 u m 300A ；A相為水(含0.1%TFA)，B相為乙腈(含0.1%TFA)；淋洗梯度為0 5min B相， 5 30min 30% 70% B 相；流速 lmL/min。實施例2:以Bicine 作為共配體，"mTc (PVLA) (bicine)的制備取p (VLA-co-VNI) lmg 溶于 0. 5mL 磷酸緩沖液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 20mg 共配 體bicine)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 *2H20溶液5 y L，充分搖勻。最后加入新鮮 99mTc04-洗脫液0. 5mL(37MBq)，充分振蕩，密封后于沸水浴中反應(yīng)20min。即得到"mTc (PVLA) (bicine)。將HiTrap脫鹽凝膠柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 緩沖液)平衡，控制流速在1 10mL/min之間。將0. 25mL標記好的"mTc (PVLA) (bicine) 用lmL注射器上樣，先用1.25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去雜質(zhì)、回收率>95% 的"mTc(PVLA) (bicine)溶液。實施例3 以HEDTA 作為共配體，"mTc (PVLA) (HEDTA)的制備取p (VLA-co-VNI) 3mg 溶于 0. 5mL 磷酸緩沖液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 50mg 共配 體HEDTA)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 *2H20溶液20 y L，充分搖勻。最后加入新鮮 99mTc04-洗脫液0. 5mL(37MBq)，充分振蕩，密封后于沸水浴中反應(yīng)20min。即得到"mTc (PVLA) (HEDTA)。將HiTrap 脫鹽凝膠柱(S印hadex G25)用 25mL 淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5 的磷 酸緩沖液)平衡，控制流速在1 lOmL/min之間。將0. 25mL標記好的"mTc (PVLA) (HEDTA) 用lmL注射器上樣，先用1.25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去雜質(zhì)、回收率> 95% 的 99mTc(PVLA) (HEDTA)溶液。實施例4 以 Tricine 作為共配體，TPPMS 作為協(xié)同配體，"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)的制 備取p (VLA-co-VNI) 0. lmg 溶于 0. 5mL 磷酸緩沖液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 25mg 共 配體tricine, 5mg協(xié)同配體TPPMS)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 2H20溶液5 u L, 充分搖勻。最后加入新鮮99mTc04_洗脫液0.5mL(37MBq)，充分振蕩，密封后于沸水浴中反應(yīng) 20min。即得到"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)。將HiTrap脫鹽凝膠柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 緩沖液)平衡，控制流速在1 10mL/min之間。將0. 25mL標記好的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)用lmL注射器上樣，先用1. 25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去雜質(zhì)、回 收率> 95% 的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPMS)溶液。實施例5 以 Tricine 作為共配體，TPPTS 作為協(xié)同配體，99mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)的制 備取p (VLA-co-VNI) 0. 5mg 溶于 0. 5mL 磷酸緩沖液(0. 05mol/L pH6. 0，含有 30mg 共 配體tricine, 3mg協(xié)同配體TPPTS)中，待全部溶解后加入2mg/mL SnCl2 2H20溶液5 u L, 充分搖勻。最后加入新鮮99mTc04_洗脫液0.5mL(37MBq)，充分振蕩，密封后于沸水浴中反應(yīng) 20min。即得到"mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)。將HiTrap脫鹽凝膠柱(S印hadex G25)用25mL淋洗液(0. 05mol/L pH 7. 5的磷酸 緩沖液)平衡，控制流速在1 10mL/min之間。將0. 25mL標記好的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)用lmL注射器上樣，先用1. 25mL淋洗液淋洗后，收集lmL淋洗液，得到除去雜質(zhì)、回 收率> 95% 的"mTc (PVLA) (tricine) (TPPTS)溶液。
權(quán)利要求
一種锝-99m標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物，其表達式為99mTc-PVLA，配體結(jié)構(gòu)通式為以99mTc為中心核，配體為含有6-肼基吡啶-3-甲酰胺基團和半乳糖基團的聚合物——聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基芐基-6-肼基吡啶-3-甲酰胺；式中m與n的比例為1∶99～30∶70，肼基選用R＝C6H5的苯甲醛、R＝4-NMe2-C6H4的4-二甲氨基苯甲醛、R＝2-NaO3S-C6H4的苯甲醛-2-磺酸鈉或R＝4-HO2C-C6H4的4-羧基苯甲醛，通過成腙反應(yīng)進行保護；共配體選自N-三羥甲基甲基甘氨酸、N，N-2-羥乙基甘氨酸或N-2-羥乙基-亞乙基二氨三乙酸中的一種；當(dāng)使用N-三羥甲基甲基甘氨酸作為共配體時，可選用三3-磺酰苯基膦鈉鹽或三苯基膦單磺酸單鈉鹽中的一種作為協(xié)同配體。FSA00000128676300011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的99mTc標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺)配合物，其特征 在于所述的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基芐基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺配體 中，m η的范圍為4 96 15 85。
3.制備如權(quán)利要求1所述的99mTc標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物的制備 方法，包括以下步驟a.將聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基芐基-6-胼基吡啶-3-甲酰胺配體溶 于緩沖液中；按照配體比共配體為1 5 1000的重量比，加入共配體N-三羥甲基甲基甘 氨酸、N, N-(2-羥乙基)甘氨酸或N-2-羥乙基-亞乙基二氨三乙酸中的一種；b.按照協(xié)同配體比共配體為1 2 10的重量比，加入?yún)f(xié)同配體三3-磺酰苯基膦鈉 鹽或三苯基膦單磺酸單鈉鹽中的一種；c.然后按還原劑比配體為1 1 800的重量比稱取還原劑并溶于鹽酸溶液中；加入 到步驟b所得溶液中，混合均勻，控制其pH在5. 5 6. 5之間；d.將從醫(yī)用99Mo-99mTc發(fā)生器中淋洗獲得的高锝酸根99mTc04_淋洗液加入步驟c制備的 溶液中，密封后在沸水浴條件下反應(yīng)10 100分鐘；e.將步驟d所得標記化合物通過凝膠色譜柱進行純化。
4.如權(quán)利要求3所述99mTc標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物的制備方法， 其特征在于步驟c所述還原劑為SnCl2 · 2H20。
5.如權(quán)利要求3所述99mTc標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物的制備方法， 其特征在于步驟d所述反應(yīng)物反應(yīng)時間為20分鐘。
6.如權(quán)利要求3所述99mTc標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物的制備方法， 其特征在于所述還原劑配體共配體的重量比為1 20 2500。
7.如權(quán)利要求3所述99mTc標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物的制備方法，其 特征在于步驟a所述聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基芐基-6-胼基吡啶-3-甲 酰胺配體的用量為0. Img 4mg ；所述任一共配體的用量為20mg lOOmg。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種锝-99m標記的聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺配合物，以99mTc為中心核，配體為含有6-肼基吡啶-3-甲酰胺基團和半乳糖基團的聚合物--聚N-乙烯基芐基-D-乳糖酰胺-N-乙烯基芐基-6-肼基吡啶-3-甲酰胺；共配體選自N-三羥甲基甲基甘氨酸、N，N-2-羥乙基甘氨酸或N-2-羥乙基-亞乙基二氨三乙酸中的一種；并可選用三3-磺酰苯基膦鈉鹽或三苯基膦單磺酸單鈉鹽中的一種作為協(xié)同配體，經(jīng)混合、還原、反應(yīng)及純化等步驟制備而成。配合物化學(xué)穩(wěn)定性及生物性能好、比活度高、肝臟攝取值及靶與非靶比值高、制備簡單及使用成本低，可用于制備成為新型的肝受體顯像劑，應(yīng)用在放射性藥物化學(xué)和臨床核醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域中。
文檔編號A61K103/10GK101851313SQ20101017480
公開日2010年10月6日 申請日期2010年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月17日
發(fā)明者唐志剛, 張俊波, 張現(xiàn)忠, 楊文江, 王學(xué)斌, 陸潔 申請人:北京師范大學(xué);北京師宏藥物研制中心