專利名稱：一種免疫抑制藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于免疫抑制的1′-O-β-D-(3，4-二羥基苯乙基)-4′-O-咖啡?；?葡萄糖苷，該化合物又稱Calceolarioside A，屬于免疫抑制藥物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
目前用于免疫抑制治療的藥物有四大類。1、化學(xué)制劑。主要有烷化劑和抗代謝藥物兩大類，用于抗腫瘤。2、激素。用于抗炎和各型超敏反應(yīng)性疾病的治療。3、真菌代謝產(chǎn)物。主要有環(huán)孢菌素A和FK-506，此類藥物對(duì)T細(xì)胞，尤其是TH細(xì)胞有較好的選擇性抑制作用，而對(duì)其他的免疫細(xì)胞的抑制作用則相對(duì)較弱。4、中藥。例如雷公藤多甙，用于治療腎炎、紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。
Calceolarioside A是一種從植物中提取的化合物。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
Calceolarioside A的理化性質(zhì) 1、形態(tài)淡黃色粉末。
2、分子量及分子式478，C23H26O11。
3、溶解性易溶于甲醇、乙醇，能溶于水。
CalceolariosideA結(jié)構(gòu)不同于現(xiàn)有的其他免疫抑制藥物，分子量小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于合成。
對(duì)此有所報(bào)道的文獻(xiàn)有 1、Tanahashi T，Shimada A，Nagakura N，Inoue K，Kuwajima H，Takaishi K，et al.Isolation ofOleayunnanoside from Fraxinus insularis and Revision of Its Structure to Insularoside-6&prime；-O-β-D-glucoside，Chem Pharm Bull 1993；41(9)1649. 從木犀科植物Fraxinus insularis中提取了Calceolarioside A。
2、Hyoung Ja Kim，Yeon Gyu Yu，Hokoon Park，Yong Sup Lee，HIV gp41 Binding PhenolicComponents from Fraxinus sieboldiana var.angustata，Planta Med 2002；68(11)1034. 從木犀科植物Fraxinus sieboldiana提取了Calceolarioside A。
3、鄭曉珂，李軍，馮衛(wèi)生，畢躍峰，冀春茹，石膽草化學(xué)成分的研究，中國(guó)中藥雜志，2002，27(12)926-928。
從石膽草中分離得到Calceolarioside A。
化學(xué)制劑和真菌代謝產(chǎn)物具有較強(qiáng)的細(xì)胞亞性選擇性。激素的副作用較大，長(zhǎng)期使用會(huì)引起代謝紊亂，表現(xiàn)為向心性肥胖、滿月面容等，誘發(fā)或加重感染、消化性潰瘍、腎上腺皮質(zhì)萎縮或功能不全，還會(huì)出現(xiàn)反跳現(xiàn)象及停藥癥狀。雷公藤多甙等中藥用藥劑量比較大。而CalceolariosideA的藥理活性尚未為人們掌握，從而尚未確定其用途。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有免疫抑制治療藥物的缺點(diǎn)，獲得一種適用的細(xì)胞亞性多、低毒、小劑量的免疫抑制藥物。
本發(fā)明特征在于活性物質(zhì)為1′-O-β-D-(3，4-二羥基苯乙基)-4′-O-咖啡?；?葡萄糖苷，其用途是免疫抑制。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明其免疫抑制作用與環(huán)孢菌素A相似或稍強(qiáng)。有效治療量比雷公藤多甙少。沒(méi)有激素樣副作用。并且仍具有免疫抑制藥物普遍具有的抑制腫瘤細(xì)胞的作用。
體內(nèi)、體外藥學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，Calceolarioside A具有好的免疫抑制作用，其細(xì)胞免疫強(qiáng)度與現(xiàn)有臨床上廣泛使用的免疫抑制藥物環(huán)孢菌素A相當(dāng)，其體液免疫抑制作用明顯優(yōu)于環(huán)孢菌素A。以灌胃方式給藥，小鼠的半數(shù)致死量LD50為1500mg/kg，比治療劑量ID5012mg/kg高出100倍以上，說(shuō)明急性毒性很低。
CalceolariosideA組合物以口服方式，或者以經(jīng)皮給藥的方式用于治療。以口服方式治療時(shí)，需要將CalceolariosideA組合物制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、緩釋緩控微丸等劑型，按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備，例如使用活性成分Calceolarioside A與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的具體病癥的嚴(yán)重程度等確定CalceolariosideA的使用量，其日劑量是0.01～100mg/kg體重，優(yōu)選0.1～10mg/kg體重，1～3次/日，副作用小，基本沒(méi)有毒性。



圖1是Calceolarioside A的1H-NMR譜。圖2是Calceolarioside A的13C-NMR譜。圖3是Calceolarioside A的HMQC譜。圖4是Calceolarioside A的HMBC譜。

具體實(shí)施例方式 提取從水曲柳中提取。
波譜檢測(cè) 使用500M，在DMSO-d6中測(cè)定所提取物質(zhì)的1H-NMR，13C-NMR和HMBC核磁共振波譜數(shù)據(jù)見(jiàn)下表
由上述波譜鑒定結(jié)果可知，所提取的物質(zhì)為Calceolarioside A。
實(shí)驗(yàn) 1、TNF-α免疫分析 將THP-1細(xì)胞以5×105/ml的密度接種于24孔培養(yǎng)板中，分別加入不同濃度的藥物，培養(yǎng)1h后加LPS誘導(dǎo)于5％CO2、37℃培養(yǎng)4h，3000r/min離心收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，按照HumanTNF-α/TNFSF1A Immunoassay(R&D Systems)說(shuō)明書(shū)操作。同時(shí)利用考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法)測(cè)定細(xì)胞的蛋白含量，也就是不同藥物處理的細(xì)胞所含TNF-α(腫瘤壞死因子-α)的相對(duì)釋放量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表
通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較，可知Calceolarioside A的TNF-α釋放量低于洛伐他汀(Lovostatin)，并且略高于維生素E(VE)。Calceolarioside A的低、中、高三個(gè)濃度相差不大，均具有顯著抑制TNF-α釋放活性，與現(xiàn)有陽(yáng)性藥洛伐他汀相比活性稍強(qiáng)。說(shuō)明Calceolarioside A具有體液免疫作用。
2、T淋巴細(xì)胞增殖 健康昆明小鼠摘眼球除血，取脾臟，用注射器反復(fù)吹打脾臟，將淋巴細(xì)胞全部吹出，用培養(yǎng)液配成1×106/ml的細(xì)胞懸液，鋪96孔板。加入不同濃度的藥物，于5％CO2、37℃培養(yǎng)72h。MTT法測(cè)定并計(jì)算藥物對(duì)淋巴細(xì)胞的增殖活性。經(jīng)觀察與對(duì)照，可知增殖不明顯，Calceolarioside A并未促進(jìn)小鼠T淋巴細(xì)胞增殖。Calceolarioside A對(duì)T淋巴細(xì)胞無(wú)增殖活性。證明Calceolarioside A具有細(xì)胞免疫作用。
以1′-O-β-D-(3，4-二羥基苯乙基)-′-O-咖啡?；?葡萄糖苷(以下稱Calceolarioside A)為活性物質(zhì)制作的免疫抑制片劑的重量配比為 Calceolarioside A 3.97％， 淀粉 94.84％， 硬脂酸鎂 1.19％。
按上述重量配比稱取活性成分Calceolarioside A 1.0g，淀粉23.9g，硬脂酸鎂0.3g，將Calceolarioside A和淀粉混合，用水均勻濕潤(rùn)，將濕潤(rùn)后的混合物過(guò)16目篩并干燥，然后過(guò)14目篩，加入硬脂酸鎂，將混合物壓片，每片重25mg，活性成分Calceolarioside A含量為8mg。
權(quán)利要求
1.一種免疫抑制藥物，其特征在于，活性物質(zhì)為1′-O-β-D-(3，4-二羥基苯乙基)-4′-O-咖啡?；?葡萄糖苷(又稱Calceolarioside A)，其用途是免疫抑制。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫抑制藥物，其特征在于，所述的免疫抑制包括體液免疫抑制和細(xì)胞免疫抑制。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的免疫抑制藥物，其特征在于，采用所述活性物質(zhì)制作的免疫抑制片劑的重量配比為
Calceolarioside A 3.97％，
淀粉 94.84％，
硬脂酸鎂 1.19％；
所制作的片劑每片重25mg，活性物質(zhì)Calceolarioside A含量為8mg。
全文摘要
一種免疫抑制藥物，屬于免疫抑制藥物技術(shù)領(lǐng)域。現(xiàn)有化學(xué)制劑和真菌代謝產(chǎn)物具有較強(qiáng)的細(xì)胞亞性選擇性；激素的副作用較大；雷公藤多甙等中藥用藥劑量比較大。本發(fā)明特征在于活性物質(zhì)為1′-O-β-D-(3，4-二羥基苯乙基)-4′-O-咖啡?；?葡萄糖苷，其用途是免疫抑制。
文檔編號(hào)A61K31/7032GK101816665SQ201010126790
公開(kāi)日2010年9月1日 申請(qǐng)日期2010年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月18日
發(fā)明者王會(huì)堂, 陳玉娟, 王維 申請(qǐng)人:長(zhǎng)春理工大學(xué)