專利名稱：：黃連水提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物化學(xué)領(lǐng)域，更具體地，涉及黃連水提取物在制備治療牙周炎的藥物中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容在以往的研究中，有涉及黃連治牙周炎的文獻(xiàn)，但都是應(yīng)用的復(fù)方制劑。本研究①釆用黃連水提取物這一單一的有效成分治療牙周炎，這與以往采用復(fù)方制劑不同；②應(yīng)用黃連水提取物制備成牙周藥膜，臨床應(yīng)用更為方便，查閱文獻(xiàn)未見相同的報(bào)道。本發(fā)明涉及黃連水提取物在制備治療牙周炎的藥物中的應(yīng)用。1)黃連對(duì)牙周致病菌有明顯的抑制作用，可以用于牙周疾病的預(yù)防及治療。2)應(yīng)用黃連水提取物制備成牙周藥膜，對(duì)口腔組織沒有明顯的毒性刺激作用，可以應(yīng)用于臨床試驗(yàn)。3)機(jī)械治療后，應(yīng)用黃連藥膜輔助治療，可以顯著提高牙周炎的治療效果。4)黃連藥膜應(yīng)用于牙周炎的治療，可以顯著的減少齦溝液的量及其中有害細(xì)胞因子的含量，以上改變，可能是黃連藥膜對(duì)牙周病治療作用的機(jī)制之一。另一方面，本發(fā)明涉及黃連水提取物的制備方法，步驟如下取10g干的黃連才艮莖加入到100ml蒸餾水中，煮沸15分鐘。待煮沸的黃連溶液冷卻后，經(jīng)濾紙過濾到容器中，并經(jīng)O.22卿的濾網(wǎng)再次過濾至無菌試管中，以防可能的細(xì)菌污染，然后把它們放入-80°C中保存。當(dāng)黃連溶液完全凍結(jié)后，應(yīng)用EYEL4(TokyoRikakikaCoLtd)凍干機(jī)凍干，以獲得黃連溶液的粉末。另一方面，本發(fā)明涉及一種藥膜，其中活性成分為黃連。1)處方組成黃連粉末4g,甘油2ml，PVA(750)6g,CMC-Na2g。2)制備方法取PVA,用85。/。乙酉l浸泡24h,濾干后，再用蒸餾水浸泡24h,使其充分膨脹，在約9CTC水溫上加熱溶解，待全溶后加入蒸餾水浸泡的CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)攪勻，使成無色澄明粘稠性液體，過80目篩網(wǎng)，得濾液。將黃連粉末用蒸餾水溶解后，加入上述濾液中，邊加邊攪拌，再加入甘油，加蒸餾水至100ml,充分?jǐn)噭?。?CTC水浴保溫2030min,待氣泡完全消失后，經(jīng)消毒處理，并在涂有少量液體石蠟的玻璃板上鋪膜，膜厚約0.1mm,置平臺(tái)面上自然干燥。根據(jù)使用需要，裁成適當(dāng)大小(4mmx10mm)(每片約含黃連0.16mg)，裝入小塑料袋內(nèi)密封，Co^消毒、備用?？瞻姿幠げ患狱S連，其他過程相同。材泮+和方法第一部分口腔微生物對(duì)某些中草藥水提取物的藥物敏感性材灃牛和方法1.本研究應(yīng)用的中草藥及其水提取物的制備本研究應(yīng)用的中草藥有夏枯草(selfheal)、金銀花(honeysuckle)、厚樸(officialmagnolia)、菊花(chrysanthemummorifolium)、威靈仙(Chineseclematis)、黃連(Chinesegoldthread)、秦艽(large-leafedgentian)。分別取10g干的夏枯草穗，金銀花花，厚樸皮，菊花花，威靈仙根，黃連根莖，和秦艽根加入到100ml蒸餾水中，煮沸15分鐘。待煮沸的中草藥溶液冷卻后，經(jīng)濾紙過濾到容器中，并經(jīng)0.22iJm的濾網(wǎng)再次過濾至無菌試管中，以防可能的細(xì)菌污染，然后把它們放入-80。C中保存。當(dāng)中草藥溶液完全凍結(jié)后，應(yīng)用E丫EL4(TokyoRikakikaCoLtd)凍干機(jī)凍干，以獲得中草藥溶液的粉末。2.口腔微生物菌林和培養(yǎng)口腔鏈球菌培養(yǎng)應(yīng)用腦心浸液(BHI;DifcoLaboratories,Detroit,Mich.)肉湯培養(yǎng)基。首先，將一系列的中草藥提取物稀釋液，加入到培養(yǎng)基中，然后將過夜培養(yǎng)的變形鏈球菌Xc(S.mutansXc),萆毛鏈球菌(S.sobrinus),格登鏈球菌ATCC10558(S.gordoniiATCC10558),和唾液鏈球菌HT9R(S.salivariusHT9R)，分別接種到含有不同濃度中草藥提取物的培養(yǎng)基中，然后，在37。C下培養(yǎng)。伴放線桿菌的培養(yǎng)將伴放線放線桿菌NCTC9710,ATCC29523,IDH1705和IDH781菌抹，分別接種于含1%酵母提耳又物(DifcoLaboratories,Detroit,Mich.)的ToddHewett液體J咅養(yǎng)基(THB;DifcoLaboratories,Ditroit,Mich.)中，置37°C、5%co2溫箱培養(yǎng)。培養(yǎng)基中，中草藥稀釋液(mg/ml)的制備，與鏈球菌培養(yǎng)基相同。牙齦卟啉菌的培養(yǎng)將牙齦卟啉菌ATCC33277，381和W83菌林，分別4妄種于含0.5%酵母才是耳又物(DifcoLaboratories,Detroit,Mich.)、0.1%半胱氨酸、0.005%氯高4失血紅素及0.001%維生素k1的腦心浸液培養(yǎng)基(BHI;DifcoLaboratoriesDetroit,Mich.)中,置厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)(BectonDickinsonandCompanyCockeysville'MD)的GasPak罐中，于37t:、厭氧培養(yǎng)。培養(yǎng)基中，中草藥稀釋液(mg/ml)的制備與鏈球菌培養(yǎng)基相同。3.細(xì)菌生長(zhǎng)速度的測(cè)定各株細(xì)菌，在不同條件下的生長(zhǎng)速率，是通過測(cè)定特定時(shí)期培養(yǎng)基光密度變化來確定的。即口腔鏈球菌菌抹和伴放線桿菌菌抹的培養(yǎng)基光密度間隔2小時(shí)測(cè)定1次，共測(cè)定8次，而牙齦卟啉菌菌林每間隔8小時(shí)測(cè)定1次，共測(cè)定3次。在整個(gè)培養(yǎng)過程中，光密度值保持不變(細(xì)菌停止生長(zhǎng))的培養(yǎng)基中，中草藥提取物的最小濃度，被定為最小抑菌濃度(MIC);而光密度值增加較對(duì)照組(培養(yǎng)基中沒有中草藥提取物)顯著減小的培養(yǎng)基中，中草藥提取物的最小濃度，被定為初始抑菌濃度(IIC)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值用于比較、分析。結(jié)果1.夏枯草、金銀花、厚樸、菊花、威靈仙、秦艽的水浸液提取物對(duì)所試驗(yàn)的口腔微生物生長(zhǎng)無明顯抑制作用。2.而黃連的水浸液提取物，對(duì)所實(shí)驗(yàn)的口腔微生物的生長(zhǎng)率，有不同程度的抑制作用。結(jié)果見下表表1黃連水浸液提取物對(duì)牙周致病菌生長(zhǎng)的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2黃連水浸液提取物對(duì)口腔鏈球菌的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>1T^~~弁培養(yǎng)過程中，可觀察到微生物生長(zhǎng)明顯抑制，光密度值增加較對(duì)照組(培養(yǎng)基中沒有中草藥提取物)顯著減小的培養(yǎng)基中提取物濃度。$微生物停止生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中提取物濃度。第二部分黃連水提取物藥膜的制備及毒性實(shí)驗(yàn)材料和方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用健康II級(jí)Wistar大鼠9只，體重(250土20)g,由山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2.動(dòng)物分組將Wistar大鼠隨機(jī)分為3組，每組各3只大鼠①黃連藥膜組Wistar大鼠用氯胺酮100mg/kg腹腔注射麻醉，將黃連藥膜貼于大鼠的雙側(cè)頰黏膜；②空白藥膜組麻醉方法同上，將空白藥膜貼于大鼠的雙側(cè)頰黏膜；③空白對(duì)照組麻醉方法同上，但大鼠頰勦膜不做任何處理。3.取材及樣品制備藥膜貼附24h后，將所有大鼠活殺，取雙側(cè)頰部黏膜，置10%緩沖甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)切片，厚約67jjm，HE染色，光鏡下觀察。結(jié)果1.根據(jù)臨床使用需要，將黃連藥膜裁成適當(dāng)大小(4mmx10mm)(每片約含黃連0.16mg)，裝入小塑料袋內(nèi)密封，Co^消毒、備用?？瞻姿幠げ患狱S連，其他過程相同。2.貼敷黃連藥膜一天后，光鏡下觀察，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，Wistar大鼠頰黏膜無明顯病理變化。三組大鼠的頰黏膜角化層均無脫落，基底細(xì)胞排列整齊，形態(tài)正常，上皮下無明顯水肺。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，均未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(見圖1~3)。圖1空白對(duì)照組Wistar大鼠頰黏膜組織學(xué)形態(tài)(HE,x40)圖2空白藥膜組Wistar大鼠頰黏膜組織學(xué)形態(tài)(HE,x40)圖3黃連藥膜組Wistar大鼠頰翁膜組織學(xué)形態(tài)(HE，x40)第三部分黃連水提取物藥膜輔助治療慢性牙周炎的療效評(píng)價(jià)材料與方法1.病例選擇1.1納入標(biāo)準(zhǔn)(1)全身健康，無嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病如糖尿病、心血管疾病、癌癥等，婦女未妊娠或哺乳。(2)25歲以上的男女患者，有中度或重度慢性牙周炎，每個(gè)象限內(nèi)至少有1顆牙的探診深度(PD>5mm)，且探診出血(BOP)(+)。(3)患者在參加本實(shí)驗(yàn)前至少6月內(nèi)未做過牙周治療；2周內(nèi)未服用抗生素或非甾體類抗炎藥；無長(zhǎng)期服用引起牙齦增生或影響牙周組織恢復(fù)的藥物，如苯妥英鈉、硝苯吡啶等。(4)簽署知情同意書者。1.2病例組成30例成人慢性牙周炎患者，均選自山東省濟(jì)南市口腔醫(yī)院牙周科門診，其中男14例，女16例，年齡在25~628歲，平均42.6歲。2.研究方法2.1分組本研究采用同一患者口腔內(nèi)病情相同牙的自身對(duì)照設(shè)計(jì)，每個(gè)象限取1顆牙齒，共120顆，按計(jì)算機(jī)產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)表分為以下4組藥膜組，碘甘油組，藥膜對(duì)照組和空白對(duì)照組。2.2試驗(yàn)步驟(1)對(duì)入選患者的口腔軟組織和牙周狀況進(jìn)行檢查，攝全景片，按要求確定受試牙，每顆牙探診6個(gè)位點(diǎn)(MB、B、DB、DL、L、ML)，每顆牙探診最深的位點(diǎn)用作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(2)在基線前14天，完成全口齦上潔治并進(jìn)行口腔衛(wèi)生指導(dǎo)；評(píng)估所有患者的菌斑指數(shù)(Pl)、探診出血(BOP)、探診深度(PD)和附著喪失(AL)。探診時(shí)用的牙周探針尖端直徑為0.5mm,探診力約為25g,全部臨床檢查均由一位指定的臨床醫(yī)生作為檢查者完成。具體的纟企查指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)如下(3)基線時(shí)，由指定的檢查者再次檢查上述指標(biāo)，確定仍為牙周袋探診深度(PD>5mm),且探診后出血(BOP)(+)的牙位作為受試牙。(4)基線當(dāng)天，對(duì)所有受試牙進(jìn)行刮治(用超聲波潔牙機(jī)的齦下工作尖)。(5)給藥方法指定另一名醫(yī)生作為給藥者，按不同分組給予不同的藥物。①藥膜組取一片黃連藥膜，圍繞牙一周放入牙周袋內(nèi)。每周放1次，共方丈4次；②碘甘油組牙周袋內(nèi)放入橫甘油，每周1次，共放4次；③藥膜對(duì)照組取1片空白藥膜，按藥膜組相同的方法應(yīng)用；④空白對(duì)照組牙周袋內(nèi)不放任何藥物。治療結(jié)束后1周和4周患者復(fù)診，由同一名檢查者在不了解放藥的情況下檢查并記錄以上各項(xiàng)指標(biāo)，以及有無其他異常變化及不良反應(yīng)。3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SAS6.12軟件包對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料組間比較用方差分析(ANOVA),均數(shù)間兩兩比較應(yīng)用SNK;菌斑指數(shù)變化的比較應(yīng)用按等級(jí)分組資料的秩和檢驗(yàn)(Kruskal-wallisTest);探"^出血率的比專交用卡方4企—驗(yàn)(chi國(guó)square)。結(jié)果1.菌斑指數(shù)(Pl)的變化各組菌斑指數(shù)(Silness和L。e的記分標(biāo)準(zhǔn))在基線及治療后1周時(shí)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著性差異(P〉0.05)，治療后4周時(shí)藥膜組與藥膜對(duì)照組及空白對(duì)照組相比，有顯著性差異(P〈0.05);與-典甘油組相比，無顯著性差異(P〉0.05);各組內(nèi)不同時(shí)間比較，無顯著性差異(P〉0.05)(表1)。表1.4組受試牙之間Pl情況對(duì)比<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注$表示與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異，P〈0.05;#表示與藥膜對(duì)照組比較，有顯著性差異，P<0.052.探診深度(PD)在基線時(shí)，4組之間的PD相比無顯著性差異(P〉0.05)，具有可比性。2.1各組內(nèi)不同觀察時(shí)間的比較各組在治療后1周和治療后4周與基線比較，均有顯著性差異(P〈0.05)。治療后4周與治療后1周比較，藥膜組的PD呈繼續(xù)改善狀態(tài)，兩者之間有顯著性差異(P<0.05);石典甘油組雖有改善，但無顯著性差異(P〉0.05);而空白藥膜組和空白對(duì)照組則有反跳，但亦無顯著性差異(P〉0.05)。2.2各組間比較治療后1周時(shí)，藥膜組和石典甘油組與空白藥膜組和空白對(duì)照組比較，均有顯著性差異(P〈0.05);但藥膜組與碘甘油組之間以及空白藥膜組與空白對(duì)照組之間比較，均無顯著性差異(P〉0.05)。治療后4周時(shí)，藥膜組與其他3組比較，均有顯著性差異(P〈0.05),碟甘油組與2個(gè)空白組比較，亦有顯著性差異(P〈0.05)，但2個(gè)空白組比較，無顯著性差異(P〉0.05)。表2.4組受試牙之間PD(mm)情況對(duì)比(^土s)組另寸1T^治療后1周治療后4周藥膜組5.86±0.473.55±0.56&*#$~3.17±0.36&@*#$石與甘')由纟且5.88±0.494.05±0.39&'#3.85±0.44#空白藥膜組5.82±0.464.63±0.53&4.83±0.56&空白對(duì)照組5.76±0.464.85±0.52&4.94±0.43&注*表示與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異，P〈0.05;#表示與空白藥膜組比較，有顯著性差異，P〈0.05;$表示與碘甘油組比較，有顯著性差異，P〈0.05;&表示與基線比較，有顯著性差異，P〈0.05;@表示與治療后1周比較，有顯著性差異，P<0.053.附著喪失(AL)在基線時(shí)，4組之間的AL相比無顯著性差異(P〉0.05),具有可比性。3.1各組內(nèi)不同觀察時(shí)間的比較各組在治療后1周和治療后4周與基線比較，均有顯著性差異(P〈0.05)。治療后4周與治療后1周比較，藥膜組的AL呈繼續(xù)改善狀態(tài)，兩者之間有顯著性差異(P〈0.05);碘甘油組雖有改善，但無顯著性差異(P>0.05);而空白藥膜組和空白對(duì)照組則有反跳，但亦無顯著性差異(P>0.05)。3.2各組間比較治療后1周時(shí)，藥膜組和碘甘油組與空白藥膜組和空白對(duì)照組比較均有顯著性差異(P<0.05);但藥膜組與碘甘油組之間以及2個(gè)空白組之間比較，均無顯著性差異(P〉0.05)。治療后4周時(shí)，藥膜組與其他3組比較均有顯著性差異(P〈0.05)，碘甘油組與2個(gè)空白組比較亦有顯著性差異(P〈0.05),但是2個(gè)空白組比較無顯著性差異(P>0.05)。表3.4組受試牙之間AL(mm)情況對(duì)比(^±s)組別基線治療后1周治療后4周藥膜組碘甘油組空白藥膜組空白對(duì)照組4.55±0.594.45±0.624.40±0.614.46±0.612.32±0.61&*#$2.69±0.47&*#3.25±0.66&3.52±0.58&1.94±0.49&@*#$2.49±0.55&*#3.42±0.67&3.61±0.55&注*表示與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異，P〈0.05;#表示與空白藥膜組比較，有顯著性差異，P〈0.05;$表示與碘甘油組比較，有顯著性差異，P〈0.05;&表示與基線比較，有顯著性差異，P〈0.05;@表示與治療后1周比較，有顯著性差異，P<0.054.探診出血(BOP)在基線時(shí)，4組之間的BOP相比無顯著性差異(P〉0.05)，具有可比性。4.1各組內(nèi)不同觀察時(shí)間的比較各組在治療后1周和治療后4周與基線比較，均有顯著性差異(P〈0.05)。治療后4周與治療后1周比較，藥膜組和硪甘油組雖有改善，但無顯著性差異(P〉0.05);而空白藥膜組和空白對(duì)照組則有反跳，^旦亦無顯著性差異(P〉0.05)。4.2各組間比較治療后1周時(shí)，藥膜組BOP降低最為明顯，但與各組之間比較均無顯著性差異(P>0.05)。治療后4周時(shí)，藥膜組與其他3組比較，均有顯著性差異(P〈0.05)，其他3組之間比較均無顯著性差異(P〉0.05)。表4.4組受試牙之間BOP情況對(duì)比(％)組別基線治療后1周治療后4周藥膜組10023.33(7/30)&3.33(1/30)&*#$碘甘油組10036.67(11/30)&30(9/30)&空白藥膜組10046.67(14/30)&53.33(16/30)&空白對(duì)照組10050(15/30)&56.67(17/30)&注*表示與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異，P〈0.05;#表示與空白藥膜組比較，有顯著性差異，P〈0.05;$表示與碘甘油組比較，有顯著性差異，P〈0.05;&表示與基線比較，有顯著性差異，P〈0.05;@表示與治療后1周比較，有顯著性差異，P<0.05第四部分黃連水提取物藥膜輔助治療慢性牙周炎對(duì)齦溝液中炎癥因子的影響材料和方法1.病例選#^:同第三部分2.主要試劑和儀器2.1人IL-1(3ELISA試劑盒和人IL-6ELISA試劑盒(邦定泰克生物技術(shù))2.2酶標(biāo)儀Beckman3.GCF標(biāo)本的釆集和定量在基線齦下刮治和根面平整(SRP)及放藥前及治療后4周收集齦溝液(GCF)。收集時(shí)，去除測(cè)試牙面的菌斑。一奪WhatmanI號(hào)牙周試紙條(2mmx10mm)插入測(cè)試牙的近頰、遠(yuǎn)頰、近舌、遠(yuǎn)舌的裂隙，感到有輕微阻力時(shí)停止插入，放置30s后取出(若濾紙條上被血跡污染則棄用)，每顆測(cè)試牙的齦溝液量為4者相加之和。將每顆測(cè)試牙的4條濾紙條的濕潤(rùn)部分剪入一個(gè)Eppendorf管中，用錫紙密封后，迅速放入-2crc凍存、待檢。測(cè)量剩余部分的長(zhǎng)度，換算成浸潤(rùn)部分的長(zhǎng)度并記錄。收集完齦溝液后，再4企查和記錄所選牙的各項(xiàng)臨床指標(biāo)(探診深度、附著喪失、出血指數(shù))。用與GCF相似的人血清為樣本，用微量注射器取血清0.1、0.2、0.3......10juL,分別滴在制備好的濾紙條上，每個(gè)量點(diǎn)測(cè)兩條濾紙，測(cè)量濾紙條的浸潤(rùn)長(zhǎng)度，取其平均值繪制血清量與濾紙條浸潤(rùn)部分長(zhǎng)度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可換算檢測(cè)樣本中GCF的量。將上述樣本在常溫下解凍，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法，邦定泰克生物技術(shù)提供的人IL-6ELISA試劑盒檢測(cè)IL-6。反應(yīng)終止后用酶聯(lián)檢測(cè)儀測(cè)其OD值。結(jié)果判斷①每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本的OD值應(yīng)減去零孔的OD值。②手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。細(xì)胞因子的表示方式及計(jì)算方法齦溝液30s樣本中細(xì)胞因子含量(pg"洗提液中細(xì)胞因子檢出量x洗提液體積,稱為細(xì)胞因子總量。齦溝液中細(xì)胞因子濃度=細(xì)胞因子總量/齦溝液量。5.統(tǒng)計(jì)分析組內(nèi)治療前后結(jié)果比較應(yīng)用符號(hào)秩和檢驗(yàn)(signedranksumtest),組間比較應(yīng)用KruskalWallis檢驗(yàn)(KruskalWallistest)。結(jié)果1.齦溝液量在基線時(shí)，4組之間的齦溝液量相比無顯著性差異(P〉0.05),具有可比性。1.1各組內(nèi)治療前后的比較各組在治療后4周與基線比較，均有顯著性差異(P〈0.05)。1.2各組間比較治療后4周時(shí)，藥膜組與其他3組比較，均有顯著性差異(P〈0.05)，碘甘油組與2個(gè)空白組比較，亦有顯著性差異(P〈0.05),但2個(gè)空白組比較，無顯著性差異(P〉0.05),結(jié)果見表1。表1.4組受試牙之間齦溝液量對(duì)比。士s,ul)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注*表示與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異，P〈0.05;#表示與空白藥膜組比較，有顯著性差異，P<0.05;$表示與碘甘油組比較，有顯著性差異，P〈0.05;&表示與基線比較，有顯著性差異，P〈0.05;2.齦溝液IL-1(3濃度在基線時(shí)，4組之間的齦溝液1L-1(3濃度相比無顯著性差異(P〉0.05)，具有可比性。2.1各組內(nèi)治療前后的比較藥膜組和碘甘油組齦溝液IL-1(3的濃度，治療前后相比具有顯著性差異(P〈0.05),而空白藥膜組和空白對(duì)照組，治療前后相比均沒有顯著性差異(P>0.05)。2.2各組間比較治療后4周時(shí)，藥膜組與其他3組比較，均有顯著性差異(P〈0.05),碘甘油組與2個(gè)空白組比較，亦有顯著性差異(P〈0.05),但2個(gè)空白組比較，無顯著性差異(P>0.05),結(jié)果見表2。表2.4組受試牙之間齦溝液IL-1(3含量對(duì)比(^土s,pg/ml)組別基線治療后4周藥膜組192,37±23.5349.86±21.62*#$&碘甘油組191.11±29.6187.61±30.17*#&空白藥膜組183.84±26.96172.03±20.77空白對(duì)照組185.99±22.01174.68±16.31注*表示與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異，P<0.05;#表示與空白藥膜組比較，有顯著性差異，P〈0.05;$表示與碘甘油組比較，有顯著性差異，P〈0.05;&表示與基線比較，有顯著性差異，P〈0.05;3.齦溝液IL-6濃度在基線時(shí)，4組之間的齦溝液IL-6濃度相比無顯著性差異(P0.05),具有可比性。2.3.1各組內(nèi)治療前后的比較藥膜組和碘甘油組齦溝液IL-6濃度,治療前后相比具有顯著性差異(P<0.05);而空白藥膜組和空白對(duì)照組，治療前后相比均沒有顯著性差異(P〉0.05)。2.3.2各組間比較治療后4周時(shí)，藥膜組與其他3組比較，均有顯著性差異(P〈0.05),碘甘油組與2個(gè)空白組比較，亦有顯著性差異(P〈0.05),但2個(gè)空白組比較，無顯著性差異(P>0.05),結(jié)果見表3。表3.4組受試牙之間齦溝液IL-6含量對(duì)比(^土s，pg/ml)組別基線治療后4周藥膜組71.93±10.4421.08±12.9"#$&碘甘油組74.18±10.0035.26±15.4"#&空白藥膜組72.18±9.0366.67±8.43空白對(duì)照組73.30±10.0668.39±7.55注*表示與空白對(duì)照組比較，有顯著性差異，P〈0.05;#表示與空白藥膜組比較，有顯著性差異，P〈0.05;$表示與碘甘油組比較，有顯著性差異，P〈0.05;&表示與基線比較，有顯著性差異，P〈0.05;結(jié)論1.黃連對(duì)牙周致病菌有明顯的抑制作用，可以用于牙周疾病的預(yù)防及治療。2.應(yīng)用黃連水提取物制備成牙周藥膜，對(duì)口腔組織沒有明顯的毒性刺激作用，可以應(yīng)用于臨床試驗(yàn)。3.機(jī)械治療后，應(yīng)用黃連藥膜輔助治療，可以顯著提高牙周炎的治療效果。4.黃連藥膜應(yīng)用于牙周炎的治療，可以顯著的減少齦溝液的量及其中有害細(xì)胞因子的含量，以上改變，可能是黃連藥膜對(duì)牙周病治療作用的機(jī)制之一。1權(quán)利要求1、黃連水提取物在制備治療牙周炎的藥物中的應(yīng)用。2、權(quán)利要求1所述的黃連水提取物的制備方法，步驟如下取10g干的黃連根莖加入到100ml蒸餾水中，煮沸15分鐘。待煮沸的黃連溶液冷卻后，經(jīng)濾紙過濾到容器中，并經(jīng)O.221^m的濾網(wǎng)再次過濾至無菌試管中，然后把它們放入-80。C中保存，當(dāng)黃連溶液完全凍結(jié)后，應(yīng)用EYEL4(TokyoRikakikaCoLtd)凍干機(jī)凍干，以獲得黃連溶液的粉末。3、一種藥膜，其中活性成分為黃連的水提取物。4、根據(jù)權(quán)利要求3的藥膜的制備方法，1)處方組成黃連4分末4g,甘油2ml，PVA(750)6g,CMC-Na2g。2)制備方法取PVA，用85。/o乙醇浸泡24h,濾干后，再用蒸餾水浸泡24h,使其充分膨脹，在約90。C水溫上加熱溶解，待全溶后加入蒸餾水浸泡的CMC-Na(羧曱基纖維素鈉)攪勻，使成無色澄明粘稠性液體，過80目篩網(wǎng)，得濾液。將黃連粉末用蒸餾水溶解后，加入上述濾液中，邊加邊攪拌，再加入甘油，加蒸餾水至100ml,充分?jǐn)噭?。?(TC水浴保溫2030min，待氣泡完全消失后，經(jīng)消毒處理，并在涂有少量液體石蠟的玻璃板上鋪膜，膜厚約0.1mm,置平臺(tái)面上自然干燥。全文摘要本發(fā)明公開了黃連水提取物在制備治療牙周炎的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明首先制備黃連的水提取物，并制備成牙周藥膜，應(yīng)用于牙周炎的治療。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃連水提取物對(duì)牙周致病菌有明顯的抑制作用；制備成牙周藥膜，對(duì)口腔組織沒有明顯的毒性刺激作用；可以顯著提高牙周炎的治療效果；并顯著的減少齦溝液的量及其中有害細(xì)胞因子的含量。文檔編號(hào)A61K36/185GK101474266SQ20091001389公開日2009年7月8日申請(qǐng)日期2009年1月21日優(yōu)先權(quán)日2009年1月21日發(fā)明者吳益華,張世周申請(qǐng)人:山東省立醫(yī)院;吳益華