專利名稱：：海洋肽在制備促進剖宮產(chǎn)術后康復藥物、保健食品中的用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種海洋肽產(chǎn)品及其新用途，具體來說是從海洋魚類(魚皮、魚骨、魚肉中提取的海洋肽在制備促進剖宮產(chǎn)術后康復藥物、保健食品中的用途。屬醫(yī)藥、食品保健領域。
背景技術：
：剖宮產(chǎn)的根本目的是解決難產(chǎn)和某些高危妊娠，挽救圍生兒和孕產(chǎn)婦的生命。隨著剖宮產(chǎn)手術方法的改進、麻醉技術的進步、抗生素的發(fā)展，以及術后鎮(zhèn)痛技術的應用，剖宮產(chǎn)手術的安全性大有提高，產(chǎn)婦術后痛苦減少。因此在婦女分娩時較多使用。此外，初產(chǎn)婦對妊娠分娩沒有經(jīng)驗，擔心分娩過程中胎兒的安危、難產(chǎn)、懼怕產(chǎn)痛，擔心會陰切開等陰道手術操作、陰道分娩后可能出現(xiàn)的陰道松弛，因而對分娩感到緊張、抑郁和恐懼，導致對自然分娩缺乏信心，對分娩時的社會心理承受能力較差。高齡產(chǎn)婦、前置胎盤、瘢痕子宮、巨大兒、妊娠高血壓、妊娠期糖尿病等妊娠分娩高危因素發(fā)生率增加。社會上較為普遍的錯誤認識如剖宮產(chǎn)兒聰明、產(chǎn)婦痛苦少，家屬方便等等，甚至提出選擇吉日吉時分娩的要求，因此選擇剖宮產(chǎn)術終止妊娠者也越來越多。近年來，剖宮產(chǎn)率呈日益增高趨勢。歐美發(fā)達國家這種趨勢的高峰出現(xiàn)在20世紀70年代末及80年代初，達25%左右，雖于80年代后期開始努力降低剖宮產(chǎn)率，并在其后的10多年中穩(wěn)中有降，但在2000年以前，剖宮產(chǎn)率仍維持在20%左右，目前維持在5%20%，并未達到美國婦產(chǎn)科學會提出的剖宮產(chǎn)率目標值15%以內(nèi)。國內(nèi)于20世紀90年代初剖宮產(chǎn)率達20%左右，自90年代中期開始快速攀升，90年代末國內(nèi)大城市醫(yī)院的剖宮產(chǎn)率即已達到30%40%。目前雖無全國統(tǒng)計數(shù)據(jù)，但大多數(shù)城市醫(yī)院報道的剖宮產(chǎn)率約在40%60%，高者甚至達60%80%以上，大有取代陰道分娩而成為常規(guī)分娩方式之勢。剖宮產(chǎn)的應用越來越多。但剖宮產(chǎn)畢竟是一種手術，對母體是一種侵入性創(chuàng)傷，對產(chǎn)婦來講存在麻醉意外、術后出血、產(chǎn)后感染、肺栓塞等近期并發(fā)癥甚至死亡的危險，還有再孕后子宮下段剖宮產(chǎn)切口瘢痕處妊娠、子宮破裂等遠期并發(fā)癥等。其中，若傷口愈合不良，將給產(chǎn)婦帶來術中術后出血、術后切口感染、切口裂開、產(chǎn)婦患病(慢性盆腔痛、盆腔粘連易位癥、繼發(fā)不育、流產(chǎn))率高、剖宮產(chǎn)瘢痕妊娠(CSP)等危害。切口感染還可造成子宮下段切口炎出現(xiàn)術后晚期出血，嚴重者出現(xiàn)敗血癥危及產(chǎn)婦生命。而剖宮產(chǎn)瘢痕妊娠雖然發(fā)病率較低，一旦發(fā)生，產(chǎn)婦會有致命性大出血和子宮破裂的風險。因此，產(chǎn)后傷口良好愈合不僅有利于減少術后并發(fā)癥，促進剖宮產(chǎn)術后恢復，對提高產(chǎn)婦的生活質量尤為重要。而傷口的愈合是一個復雜的生物學過程，皮膚切口的愈合過程一般經(jīng)過4個時期(1)血管反應期血管收縮減少出血，血小板聚集形成血凝塊，凝血酶原激活物將凝血酶原轉變?yōu)槟?，后者使纖維蛋白原轉化為纖維蛋白，使傷口邊緣對合并形成抗感染屏障。(2)炎癥期嗜堿性粒細胞(肥大細胞)釋放包括組織胺和5-羥色胺在內(nèi)的炎性介質，引起血管擴張和細胞通透性的增加，使中性粒細胞、單核細胞和淋巴細胞向創(chuàng)面聚集。血運增加有利于毒素及壞死組織碎屑的清除。毛細血管通透性增加有利于滲出反應，以便營養(yǎng)和清洗組織壞死后感染的創(chuàng)面。單核吞噬細胞轉化為巨噬細胞，以吞噬細胞碎屑和細菌，在傷口愈合過程中至關重要。隨著血管舒張和血管滲透力的增加、白細胞的浸潤，出現(xiàn)白細胞和巨噬細胞的快速聚集。早期傷口的清潔是通過白細胞釋放的氧自由基和溶酶體來促進細菌和異體碎屑的移除。這個過程還有大量的生長因子和細胞質分裂，包括轉化生長因子(TGF-β)、血小板源性生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、白細胞介素-I(IL-I)、成纖維細胞生長因子(FGF)、前列腺素(PG)、腫瘤壞死因子(TNF)等。巨噬細胞是這些因子的重要來源，它所分泌的生長因子刺激成纖維細胞、上皮細胞和血管內(nèi)皮細胞移入傷口內(nèi)。它的缺乏會嚴重影響傷口愈合。此期一般37d,出現(xiàn)組織壞死或感染時，此期可延長并影響愈合，導致瘢痕形成。(3)增殖期這一過程包括基質產(chǎn)物、血管內(nèi)皮和上皮的生成，最終白細胞被巨噬細胞和成纖維細胞取代。在FGF、PDGF和TGF-β的作用下，巨噬細胞介導的細胞移動和增殖使傷口愈合基質形成，同時這些細胞還繼續(xù)調(diào)整來對抗微生物的作用。在這一階段，上皮細胞開始生長，角蛋白從上皮周圍移動穿過傷口表面?；ぞ徛永m(xù)，直至表皮層完全閉合。主要生長因子包括角蛋白細胞生長因子36-016丄6和？06。(4)塑形期該過程起始于傷口的成纖維細胞在基質中的成熟程度和集中數(shù)量的增加。纖維母細胞在生長因子的刺激下生長、分裂并產(chǎn)生膠原蛋白和氨基葡萄糖，構成細胞外框架。傷口塑形的控制可歸因于復雜的調(diào)節(jié)過程，細胞外基質和膠原的翻轉，膠原的增加而繼續(xù)進行，最后達到平衡，形成一個有力穩(wěn)定的瘢痕，這個過程可持續(xù)達2年。由上述可知，除了依賴各種細胞的活動以外，傷口的愈合過程需要各種生長因子和細胞因子的綜合調(diào)控，才能使傷口在一定時間內(nèi)得以愈合。其中發(fā)揮重要作用的因子有轉化生長因子-β(TGF-β)激活的血小板、巨噬細胞和淋巴細胞均可產(chǎn)生TGF-β,TGF-β對細胞分化、增生、炎癥過程具有刺激、抑制或雙相作用，對細胞外基質的合成、重塑具有獨特作用。TGF-β不僅通過促進成纖維細胞趨化，產(chǎn)生膠原纖維和細胞外基質，還可減少膠原酶的合成，增加金屬蛋白酶抑制劑的產(chǎn)生，從而減少傷口中的酶解作用，促進傷口愈合。血小板源性生長因子(PDGF)在傷口局部激活的血小板、單核細胞、巨噬細胞和成纖維細胞都可合成PDGF。PDGF不僅對成纖維細胞、單核細胞及中性粒細胞有趨化吸引作用，還可刺激成纖維細胞增殖、生成基質、表達整合素受體、遷移到傷口區(qū)，在損傷后期誘導成纖維細胞向肌成纖維細胞轉變[1°]。成纖維細胞生長因子(FGF):FGF是一個家族，目前已有19個成員，F(xiàn)GF各成員結構相關、功能相似，調(diào)節(jié)多種細胞的生長、分泌、遷移和凋亡。研究表明FGF通過旁分泌的方式發(fā)揮作用，對早期的生長因子IL-I產(chǎn)生必要刺激，而后者在內(nèi)皮的修復中起重要作用。其中的堿性FGF(bFGF，F(xiàn)GF2)有促血管生成作用，調(diào)節(jié)血管壁細胞的生長及其功能；有絲裂原活性和趨化作用，可促進成纖維細胞的生長、增殖，趨化炎性細胞和組織修復細胞向創(chuàng)面聚集。此外，F(xiàn)GF家族成員中FGF7X稱角化細胞生長因子(KGF)，對表皮細胞有獨特的刺激作用，原位雜交可見損傷皮膚的傷口邊緣表皮和真皮KGF高度表達，與表皮再生密切相關。如果某些生長因子缺乏、膠原蛋白的合成與降解平衡紊亂，將會影響愈合過程，弓丨起過度增生和瘢痕的形成；或者減慢甚至終止愈合過程。5%15%的傷口通常在手術后很快出現(xiàn)過度增生和瘢痕。產(chǎn)婦傷口的瘢痕組織寬大及切口瘢痕裂開可導致剖宮產(chǎn)瘢痕妊娠的發(fā)病風險增加。此外剖宮產(chǎn)手術時間、手術切口位置、切口類型、子宮切口縫合方式、術后傷口感染、愈合不良、全身情況(年齡、肥胖、營養(yǎng)不良、維生素、微量元素、全身性疾病以及藥物)等因素都將影響傷口愈合的過程。膠原蛋白具有獨特的纖維狀結構和良好的生物相容性、可降解性和低抗原性，已較多應用于制作美容化妝品、生物醫(yī)學材料、保健品等。膠原蛋白體外應用有改善表皮細胞微循環(huán)和促進皮肽組織新陳代謝的作用，從而加速組織再生與修復。動物實驗及臨床實驗均證明，膠原蛋白能促進表皮細胞生長，具有獨特的自動修復功能，可以引導上皮細胞遷入缺損區(qū)，并在細胞遷移時起到支持和潤滑作用。戴耕武等人用膠原蛋白貼膜治療輕、中度痤瘡，研究表明能改善皮膚血液循環(huán)，療效顯著。此外，膠原蛋白含有豐富的細胞代謝所需的氨基酸，可改善皮膚細胞的生存環(huán)境，促進皮膚組織的新陳代謝。膠原蛋白中蘊藏著多種生物活性肽，具有抑制血管緊張素轉化酶活性、抑制血小板凝結活性、抗氧化活性及抗腫瘤活性等。魚類皮膚和骨或肉中富含膠原蛋白，來源于魚類皮膚和骨或肉的海洋肽是以相對分子質量在1000以下的小分子肽為主要成分的粉末狀低聚肽產(chǎn)品，由26個氨基酸組成，富含羥脯氨酸等膠原合成原料。不僅具有很好的溶解性、低黏度、高濃度、水溶性、熱穩(wěn)定性等特點，而且在體內(nèi)吸收快、利用率高。膠原肽具有保濕性，因此有一定的美容效果，已經(jīng)廣泛應用于化妝品。美國CTFA化妝品原料手冊錄用的天然物質和日本《功能性化妝品原料》中選用的天然物質都有膠原蛋白及其水解產(chǎn)物膠原肽。體外實驗證實，魚膠原肽作為天然的美白化妝品原料，具有較強的酪氨酸酶活性抑制能力。除化妝品領域，膠原肽在降壓、降血脂、調(diào)節(jié)血糖、抗氧化、增強免疫力、抗風濕、健骨等方面的活性也逐漸成為人們研發(fā)的熱點。動物實驗表明，海洋低聚肽具有一定的降血脂、調(diào)節(jié)血糖、抗氧化、增強免疫力、增加骨密度的活性。國內(nèi)外已有部分研究論證了海洋肽對實驗動物具有抗損傷和抗氧化等功效。由此看來，國內(nèi)外對海洋肽的保健作用研究已取得了令人矚目的成就，許多海洋肽藥品和保健食品已相繼問世，經(jīng)濟效益十分顯著。但目前對于海洋肽在促進剖宮產(chǎn)術后傷口愈合和康復的研究還很少，如果通過開發(fā)藥物、保健食品及食品達到促進剖宮產(chǎn)術后康復的功能，改善剖宮產(chǎn)術后患者的生活質量之功效，既經(jīng)濟又實用，將對我國的衛(wèi)生保健行業(yè)帶來很大的前景。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種海洋肽產(chǎn)品及其在制備促進剖宮產(chǎn)術后康復藥物、保健食品中的用途。本發(fā)明提供的海洋肽是以海洋魚類的魚皮、魚肉或魚骨為主要原料，經(jīng)酶法水解生產(chǎn)的、能被三氯乙酸溶解、相對分子質量在1000以下的一組低分子量的寡肽混合物，包括海洋膠原肽(來源于魚皮)和海洋骨源肽(來源于魚骨)或海洋蛋白肽(來源于魚肉)，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點。其中所述的藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液。具體實施方案下面結合具體實施方案對本發(fā)明作進一步的說明，這些實例應被理解為僅是舉例說明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例海洋膠原肽促進大鼠剖宮產(chǎn)術后傷口愈合的作用研究一、材料與方法孕15天SD大鼠96只，由北京大學醫(yī)學部實驗動物中心提供，清潔級動物房飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度25°C，濕度60%RH。隨機分為4組，即對照組、海洋膠原肽低、中、高劑量組，每組24只。孕鼠適應性喂養(yǎng)3天后，在孕19天時，對照組給予生理鹽水灌胃，膠原肽組給予相應劑量(0.13g/kgbw,0.38g/kgbwU.15g/kgbw)的海洋膠原肽灌胃，1%苯巴比妥鈉腹腔注射麻醉，在下腹部沿腹中線剪開3cm縱切口，打開腹腔，在兩側子宮背對腸系膜側的中部各做2.Ocm的縱向切口，擠出大鼠幼崽和胎盤。用5-0可吸收性外科腸線連續(xù)縫合，深腹、筋膜、腹膜用4-0絲線縫合，皮肽用4-0絲線縫合。術后涂2%碘酊，注射青霉素0.1ml，放回盒子里，注意保暖，術后禁食1天，正常飲水。海洋膠原肽各劑量組術后繼續(xù)給予相應劑量的海洋膠原肽灌胃，每日一次，對照組給予等體積生理鹽水灌胃。手術后每日用放大鏡觀察傷口變化情況。各組于術后第3天觀察傷口及其周圍組織的創(chuàng)傷反應，第7、14、21天觀察傷口的愈合情況。術后創(chuàng)傷反應及傷口愈合情況統(tǒng)一按表1、表2中標準進行評分。表1.傷口及其周圍組織的創(chuàng)傷反應評分標準<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2.傷口愈合情況評分標準<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>在術后7天、14天、21天每組分別處死8只大鼠，分別測定傷口皮膚張力和子宮破裂壓力，并進行組織病理學觀察，評價皮膚和子宮切口愈合情況。傷口皮膚張力測定方法頸椎脫臼處死大鼠，取長1cm，寬0.5cm的傷口處皮膚組織，固定于儀器(Pclab-UE生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，北京微信斯達科技發(fā)展有限責任公司)兩端，拉開皮膚，直至拉斷，記錄張力最大值為傷口皮膚張力。子宮破裂壓力測定方法頸椎脫白處死大鼠，取出子宮，將儀器(Pclab-UE生物醫(yī)學信號采集處理系統(tǒng)，北京微信斯達科技發(fā)展有限責任公司)的導管插入子宮腔，并在合適的部位結扎固定。導管的近端與儀器連接，勻速向子宮腔內(nèi)注入生理鹽水，直至子宮爆裂或者液體滲出，所記錄的最高壓力為破裂壓力。二、結果肉眼觀察表現(xiàn)，術后第3天，對照組大鼠傷口多數(shù)有血痂附著，傷口及周圍組織明顯水腫，而海洋膠原肽組大鼠傷口的水腫程度明顯減輕，傷口創(chuàng)傷反應評分均高于對照組，其中高劑量組(1.15g/kgbw)得分明顯高于對照組(P<0.05)(表3)。術后第7、14、21天傷口愈合肉眼觀察結果顯示，海洋膠原肽各劑量組大鼠傷口愈合明顯情況好于對照組大鼠，其中高劑量組(1.15g/kgbw)在第7、14、21天的傷口愈合得分均明顯高于對照組(P<0.05)(表4)。而且，海洋膠原肽組大鼠比對照組大鼠傷口愈合時間平均提前1.7天。表3.各組傷口創(chuàng)傷反應情況比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*與對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)表4.各組傷口愈合情況比較^<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*與對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)傷口皮膚張力測定結果顯示海洋膠原肽各劑量組均可提高剖宮產(chǎn)大鼠傷口皮膚抗拉能力，其中海洋膠原肽高劑量組(1.15g/kgbw)術后第7、14、21天時傷口皮膚張力均明顯高于對照組(P<0.05)；中劑量組(0.38g/kgbw)術后第14、21天時大鼠傷口皮膚張力明顯高于對照組(P<0.05)(表5)。表5.海洋膠原肽對剖宮產(chǎn)大鼠術后傷口皮膚張力的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*與對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)子宮破裂壓力測定結果顯示海洋膠原肽各劑量組均可促進大鼠剖宮產(chǎn)術后子宮恢復情況，表現(xiàn)為子宮破裂壓力增高，其中高劑量組在術后7、14、21天時的子宮破裂壓力明顯高于對照組(P<0.05)，中劑量組大鼠術后14天子宮破裂壓力明顯高于對照組(P<0.05)(表6)。表6.海洋膠原肽對剖宮產(chǎn)大鼠術后子宮破裂壓力的影響Μ||劑量_子宮破裂壓力(mmHg)_力(g/kgbw)7天14天21—天一「00441"^iKtMti0371.46土111.55~413.31±177.04560.37±95.90低劑量組0.13452.19士305.35567.21±262.99676.99士184.44中劑量組0.38598.76士261.58677.10±205.47*675.51+346.34高劑量組_1.15689.73±275.98'718.08土185.14*836.79±210.60**與對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)病理組織學檢查結果顯示，術后第7天海洋膠原肽組大鼠傷口上皮厚度、新生毛細血管數(shù)量均明顯大于對照組，膠原纖維較對照組增多、增粗、融合，呈平行于皮膚表面排列，炎性細胞少于對照組。術后第14天組織切片觀察顯示，海洋膠原肽中劑量組和高劑量組新生表皮層細胞已經(jīng)覆蓋創(chuàng)面，新生纖維組織中毛細血管及成纖維細胞數(shù)量已見減少，膠原纖維含量高于對照組且排列整齊，對照組新生表皮層細胞間斷覆蓋創(chuàng)面。術后第21天，海洋膠原肽組傷口表皮完整，瘢痕組織面積收縮變小，膠原纖維排列較整齊，而對照組傷口組織中仍可見少量膠原纖維聚集成束，呈卷發(fā)狀，排列紊亂。其中1.15g/kgbw海洋膠原肽組效果最好。上述結果表明海洋膠原肽具有促進剖宮產(chǎn)術后皮膚傷口愈合，增加皮膚傷口抗拉強度，同時可促進剖宮產(chǎn)術后子宮傷口愈合，增加剖宮產(chǎn)術后子宮抗破裂壓力的作用。權利要求海洋肽在制備促進剖宮產(chǎn)術后康復藥物、保健食品中的用途。2.如權利要求1，其中所述的海洋肽是以海洋魚類的魚皮、魚肉或魚骨為主要原料，經(jīng)酶法水解生產(chǎn)的、能被三氯乙酸溶解、相對分子質量在1000以下的一組低分子量的寡肽混合物，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點。3.如權利要求1，其中所述的藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液。4.如權利要求1，其中所述的剖宮產(chǎn)術后康復是指剖宮產(chǎn)術后手術切口愈合和子宮切口愈合。全文摘要本發(fā)明涉及一種海洋肽產(chǎn)品及其在制備促進剖宮產(chǎn)術后康復藥物、保健食品或食品中的用途。海洋肽是以海洋魚類的魚皮、魚骨或魚肉為主要原料，經(jīng)酶法水解生產(chǎn)的、能被三氯乙酸溶解、相對分子質量在1000以下的一組低分子量的寡肽混合物，包括海洋膠原肽(來源于魚皮)、海洋骨源肽(來源于魚骨)和海洋蛋白肽(來源于魚肉)，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點。經(jīng)動物實驗證實，海洋肽具有促進剖宮產(chǎn)術后皮肽傷口愈合和促進子宮傷口愈合的作用。文檔編號A61P17/02GK101797373SQ200910008620公開日2010年8月11日申請日期2009年2月6日優(yōu)先權日2009年2月6日發(fā)明者李勇,王軍波申請人:黑龍江省索康營養(yǎng)科技有限公司;李勇