專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于保健藥品、功能性食品領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物及其制備方法。二十世紀(jì)30年代末至50年代初，Rose提出EAA的概念并證實(shí)以氨基酸混合物代替食物蛋白可以維持氮平衡(RoseWC.FedProc，1949，8:546552.Ko卯leJD等.JClinInvest,1975，55:881-891)，氨基酸制劑能為生物體所利用，并可顯著改善病人的營(yíng)養(yǎng)狀況。蛋白質(zhì)降解產(chǎn)生的某些肽也能被生物體所吸收，而且與游離氨基酸相比，這些肽的體內(nèi)吸收具有速度快、耗能低及吸收率高等優(yōu)勢(shì)(DanielH等.In:SoufrantWB，Hage—meisterH(Ed.)6lhInternationalSymposiumonDigestivePHysiologiinPigs[C].Du匪emtorfPubl.1994(1):1-7)。在機(jī)體內(nèi)肽的吸收機(jī)制同游離氨基酸的吸收機(jī)制相互獨(dú)立，互不干擾，這有助于減輕由于游離氨基酸間相互競(jìng)爭(zhēng)共同的吸收位點(diǎn)而產(chǎn)生的吸收抑制，并且有利于機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用。血液蛋白質(zhì)含有人體所需的8種必需氨基酸，其組成平衡，具有極高的生物效價(jià)，為優(yōu)質(zhì)蛋白源。目前，動(dòng)物血液大部分被以污水的形式排放或丟棄，不僅造成大量營(yíng)養(yǎng)資源的流失，而且還會(huì)嚴(yán)重地污染環(huán)境。在動(dòng)物血液中，血紅蛋白占其總蛋白質(zhì)含量的6070%。血紅蛋白生物活性肽具有很多極為重要的功能活性，如阿片樣活性(BrantlV等.EurJPharmacol.1986,125:309-10.PiotJM等.BiochemBiophysResCoramun1992，189:101-110.ZhaoQY等.BiochemBiophysActa.1996,1295:73-80.Zhao,Q等.Biopolymers，1997，43:75-98.NybergF等.JohnWiley&Sons,Inc.Biopoly，1997,43:147-156.LignotB等.BiotechnolApplBiochem1999，30:201-207)、ACE抑制活性(Hyun，C.-K等.ProcessBiochemistry,2000,36:65-71)、增強(qiáng)血管舒緩激肽活性(PiotJM等.FEBSLett1992,299:75-79)、剌激細(xì)菌生長(zhǎng)活性(Zhao，Q等，AnalyticaChimicaActa1997,352:201-220)、鎮(zhèn)痛活
背景技術(shù)：
：性(TakagiH等.Nature1979，5737:410-412.ZhaoQY等，JLiqChromRelTechnol1997,20:1717-1739)、抗菌活性(DaoudR等，P印tides2005，26:713-719.FroidevauxR等，F(xiàn)EBSLett2001，491:159-163.Li印keC等，JChromatogrB2003，791:345-356.ParishCA等，BioorgMedChem2001，9:377-382.)等。因此，如果能夠?qū)?dòng)物血紅蛋白加工成多肽和氨基酸產(chǎn)品，不僅可以充分利用廉價(jià)的動(dòng)物血液資源，而且有助于保護(hù)環(huán)境。經(jīng)檢索，未發(fā)現(xiàn)有關(guān)利用動(dòng)物血液制備血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供--種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物。本發(fā)明的另一目的是提供血上述紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為本發(fā)明一種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物，按照如下方法制備(1)按照28%的重量百分比取血紅蛋白千粉并溶于水中，得血紅蛋白溶液，然后在8590。C下保溫510min;(2)調(diào)節(jié)步驟(1)的血紅蛋白溶液的pH4.62.3，并按照胃蛋白酶與血紅蛋白干粉的質(zhì)量比為l:60100的比例向血紅蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在3241°C、pH為1.62.3條件下進(jìn)行水解78.5h，再在8590。C下保溫510min;接著在4。C、4200g條件下離心1015min，取上清液，得血紅蛋白水解產(chǎn)物；(3)對(duì)步驟(2)所得水解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物。上述血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物步驟(3)中所述的脫鹽可以采用離子交換樹(shù)脂進(jìn)行。上述血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物步驟(1)中所述的血紅蛋白干粉來(lái)自于豬血、牛血或鵝血等。所述的血紅蛋白干粉可于市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)，或者利用動(dòng)物血液經(jīng)離心噴霧千燥制得。上述血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物歩驟(2)中所述的胃蛋白酶可自市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)，如Amresco公司生產(chǎn)的胃蛋白酶。一種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液，按照如下方法制備按照重量百分比向上述血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%檸檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均勻，然后裝瓶密封；再在110°C12(TC下滅菌1015min，后冷卻至45。C，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液。上述加入甘氨酸、檸檬酸、蔗糖的目的是減弱水解產(chǎn)物的苦味，能夠起到較好的脫苦作用。血紅蛋白多肽氨基酸千粉，按照如下方法制備將上述所得的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物濃縮、冷凍千燥，得血紅蛋白多肽氨基酸干粉。含有上述血紅蛋白多肽氨基酸干粉的保健食品、保健藥品或化妝品。上述血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物的制備方法，包括如下步驟(1)按照28%的重量百分比取血紅蛋白干粉并溶于水中，得血紅蛋白溶液，然后在8590。C下保溫510min;(2)調(diào)節(jié)步驟(1)的血紅蛋白溶液的pH4.62.3，并按照蛋白酶與血紅蛋白千粉的質(zhì)量比為l:60100的比例向血紅蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在3241°C、pH為1.62.3條件下水解78.5h，再在8590。C下保溫510min;接著在4。C、4200g條件下離心1015min，取上清液，得血紅蛋白水解產(chǎn)物。(3)對(duì)步驟(2)所得水解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽；即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物。上述血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，方法如下按照重量百分比向血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%檸檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均勻，然后裝瓶密封；再在110°C120。C下滅菌1015min，后冷卻至45。C，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液。上述血紅蛋白多肽氨基酸干粉的制備方法，方法如下將上述所得的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物濃縮、冷凍干燥，即得血紅蛋白多肽氨基酸干粉。本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和有益效果(1)本發(fā)明是經(jīng)食品級(jí)蛋白酶在溫和條件下酶解獲得的，其安全性高，無(wú)副作用，無(wú)不良風(fēng)味；(2)本發(fā)明不僅能有效補(bǔ)充人體所需的必需氨基酸，而且具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血壓、降膽固醇等作用，為天然功能性生物制品；(3)本發(fā)明具有較好的口味；(4)本發(fā)明方法原料易得，方法簡(jiǎn)單、成本低，可降低生產(chǎn)成本30%以上；(5)本發(fā)明方法所用原料屬于廢物利用，減少了環(huán)境污染。圖1為本發(fā)明血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液所含多肽的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳圖譜，A:標(biāo)準(zhǔn)蛋白；B:樣品所含多肽具體實(shí)施例方式血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物的制備，按照如下步驟進(jìn)行(1)取2g血紅蛋白千粉(豬血經(jīng)離心噴霧千燥制得)，溶于100ml水中，得重量百分比為2%的血紅蛋白溶液，在9(TC下保溫10min;(2)然后用1NNaOH和1NHCL血紅蛋白溶液的pH至2.0，接著加入0.024g胃蛋白酶(購(gòu)于Amresco公司)，然后在37。C、pH值為2.0下進(jìn)行水解反應(yīng)7h，再在90。C下保溫10min，接著在4°C、4200g條件下離心10min，取上清液，得水解產(chǎn)物；(3)通過(guò)離子交換樹(shù)脂步驟(2)所得水解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物。水解產(chǎn)物灰分檢測(cè)在鉗堝中稱(chēng)取-一定量步驟(2)所得水解產(chǎn)物經(jīng)脫鹽、濃縮、冷凍干燥后的蛋白質(zhì)多肽干粉—在電爐屮炭化至無(wú)煙—在500°C馬福爐中灼燒到灰白色—冷卻至200。C—移入干燥皿冷卻到室溫—稱(chēng)重灼燒1小時(shí)—冷卻到恒重，測(cè)得其灰分為1.2%，說(shuō)明產(chǎn)品灰分很低。實(shí)施例2血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液的制備按照重量百分比向?qū)嵤├?所得的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物中加入0.7%甘氨酸、0.4%檸檬酸和4.5%蔗糖，混合均勻，然后定量將其裝瓶密封；再將其在12(TC下滅菌10min，后冷卻至45。C，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液。血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液的測(cè)定采用氨基酸自動(dòng)分析儀進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果本發(fā)明中多肽氨基酸在血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液中的含量為1825%，而且氨基酸種類(lèi)齊全(含18種氨基酸)，必需氨基酸含量占總氨基酸的43.8%(見(jiàn)表l)，說(shuō)明本發(fā)明營(yíng)養(yǎng)豐富，且營(yíng)養(yǎng)均衡。表1各種氨基酸在本發(fā)明多肽氨基酸的總氨基酸中的含量百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例3:血紅蛋白多肽氨基酸干粉的制備(1)取16g血紅蛋白干粉(豬血經(jīng)離心噴霧千燥制得)，溶于200ml水中，得重量百分比為8%的血紅蛋白溶液，在9(TC下保溫10min;(2)用1NNaOH或1NHCL調(diào)節(jié)血紅蛋白溶液的pH至2.2，接著加入0.256g胃蛋白酶(購(gòu)于Amresco公司)，然后在39"、pH值為2.2下水解8.5h，再在90。C下恒溫10min，后在4。C、4200g條件下冷凍離心15min，取上清液，得血紅蛋白水解產(chǎn)物；(3)接著通過(guò)離子交換樹(shù)脂對(duì)步驟(2)所得血紅蛋白水解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽，然后進(jìn)行濃縮、冷凍干燥，得血紅蛋白多肽氨基酸千粉。實(shí)施例4血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物的電泳檢測(cè)試驗(yàn)將實(shí)施例1步驟(2)獲得的水解產(chǎn)物進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(15%1\6%C)分析。采用Tris-glycin-Hcl系統(tǒng)進(jìn)行電泳。其分離膠濃度為15%，濃縮膠濃度為2.67%，樣品濃度為lmg/ml，上樣量10y1，采用考馬斯亮藍(lán)R250進(jìn)行染色，乙醇-冰醋酸進(jìn)行脫色。結(jié)果(如圖l)所示，血紅蛋白已被酶解為許多低于14.4KD以下的低分子量多肽片段，這些低分子量多肽有利于人體吸收，說(shuō)明本發(fā)明血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。權(quán)利要求1.一種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物，其特征在于按照如下方法制備(1)按照2～8％的重量百分比取血紅蛋白干粉并溶于水中，得血紅蛋白溶液，然后在85～90℃下保溫5～10min；(2)調(diào)節(jié)步驟(1)的血紅蛋白溶液的pH＝1.6～2.3，接著按照胃蛋白酶與血紅蛋白干粉的質(zhì)量比為160～100的比例向血紅蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在32～41℃、pH為1.6～2.3條件下進(jìn)行水解7～8.5h，再在85～90℃下保溫5～10min；接著在4℃、4200g條件下離心10～15min，取上清液，得血紅蛋白水解產(chǎn)物；(3)對(duì)步驟(2)所得水解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物。2、按照權(quán)利要求1所述的營(yíng)養(yǎng)物，其特征在于其步驟(1)中所述的血紅蛋白干粉來(lái)自于豬血、牛血或鵝血。3、按照權(quán)利要求1或2所述的營(yíng)養(yǎng)物，其特征在于其步驟(3)中所述的脫鹽采用離子交換樹(shù)脂進(jìn)行。4、一種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液，其特征在于按照如下方法制備按照重量百分比向權(quán)利要求1中所述的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%檸檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均勻，然后裝瓶密封；再在110。C120。C下滅菌1015min，后冷卻至45。C，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液。5、血紅蛋白多肽氨基酸干粉，其特征在于按照如下方法制備-將權(quán)利要求1所述的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物濃縮、冷凍干燥，即得血紅蛋白多肽氨基酸干粉。6、含有權(quán)利要求5所述的血紅蛋白多肽氨基酸干粉的食品、保健藥品或化妝品。7、權(quán)利要求1所述的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)按照28%的重量百分比取血紅蛋白干粉并溶于水中，得血紅蛋白溶液，然后在8590。C下保溫510min;(2)調(diào)節(jié)步驟(1)的血紅蛋白溶液的pH二1.62.3，接著按照胃蛋白酶與血紅蛋白干粉的質(zhì)量比為1:60100的比例向血紅蛋白溶液中加入胃蛋白酶，然后在3241°C、pH為1.62.3條件下水解78.5h，再在859(TC下保溫510min;接著在4。C、4200g條件下離心1015min，取上清液，得血紅蛋白水解產(chǎn)物。(3)對(duì)步驟(2)所得水解產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物。8、權(quán)利要求4所述的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液的制備方法，其特征在于所述的制備方法如下按照重量百分比向血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物中加入0.41.0%甘氨酸、0.20.6%檸檬酸和4.05.0%蔗糖，混合均勻，然后裝瓶密封；再在110°C120。C下滅菌1015min，后冷卻至45。C，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液。9、權(quán)利要求5所述的血紅蛋白多肽氨基酸千粉的制備方法，其特征在于所述的制備方法如下將權(quán)利要求1所述的血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物濃縮、冷凍干燥，即得血紅蛋白多肽氨基酸干粉。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物及其制備方法。本發(fā)明主要是將血紅蛋白干粉溶于水中，然后調(diào)節(jié)pH值為1.6～2.3，再加入胃蛋白酶，并在32～41℃、pH為1.6～2.3條件下水解7～8.5h；然后進(jìn)行離心，取上清液，脫鹽，即得血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)物。經(jīng)過(guò)添加調(diào)味劑，可制成血紅蛋白多肽氨基酸營(yíng)養(yǎng)液，或經(jīng)濃縮、冷凍干燥制備成血紅蛋白多肽氨基酸干粉。本發(fā)明安全性高，無(wú)副作用，無(wú)不良風(fēng)味；其次，本發(fā)明產(chǎn)品含有人體所需的必需氨基酸，并具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血壓、降膽固醇等作用；此外，本發(fā)明方法原料易得，方法簡(jiǎn)單、成本低；本發(fā)明還減少了環(huán)境污染。文檔編號(hào)A61K38/01GK101366943SQ200810222240公開(kāi)日2009年2月18日申請(qǐng)日期2008年9月12日優(yōu)先權(quán)日2008年9月12日發(fā)明者騫孫,沈慧星,羅永康申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)