專利名稱：：一種用于治療缺血性腦血管病的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥配制品，具體地說(shuō)是由動(dòng)植物藥材配制而成的、適用于缺血性腦血管病的藥物。
背景技術(shù)：
：腦血管病是嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)病和多發(fā)病，在全球已成為第一致殘和第三致死原因，而缺血性腦血管病的發(fā)病率約占腦血管病的75%[侯熙德.神經(jīng)病學(xué).人民衛(wèi)生出版社.北京.1996:197]，近年來(lái)還有上升趨勢(shì)。我國(guó)隨著人口老齡化的加速，腦卒中(其中約75%為腦梗塞)每年新發(fā)病例約150萬(wàn)，患病人數(shù)高達(dá)500600萬(wàn)，每年死亡者近100萬(wàn)，存活者中約1/4不同程度地喪失勞動(dòng)力，重度致殘者占40%以上，給家庭和社會(huì)造成了巨大的危害。因此腦缺血時(shí)神經(jīng)元損傷與保護(hù)的研究已成為當(dāng)前國(guó)際關(guān)注的熱點(diǎn)。由于腦缺血損傷的病理生理機(jī)制非常復(fù)雜，近年來(lái)，"腦缺血損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)"概念倍受重視。腦缺血再灌注損傷的主要病理生理機(jī)制包括自由基脂質(zhì)過(guò)氧化損傷、興奮性氨基酸(EAA)毒性、細(xì)胞內(nèi)Ca"超載、一氧化氮(N0)的神經(jīng)毒性作用這些損害機(jī)制相互作用、相互影響，惡性循環(huán)，進(jìn)一步加重了缺血性腦損傷。目前治療缺血性腦損傷的思路主要集中在阻斷興奮性氨基酸遞質(zhì)或受體、溶栓、清除自由基、阻斷鈣通道等。但是根據(jù)這些理論而采取的治療措施和研制的治療藥物目前卻沒(méi)有獲得理想的療效，有的甚至產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)。例如，美國(guó)FDA批準(zhǔn)的十多種抗腦卒中藥大多為溶栓藥和抗血栓藥，它最大的缺陷是只適用于卒中發(fā)生后36小時(shí)內(nèi)，如超過(guò)3小時(shí)，溶栓后可導(dǎo)致腦內(nèi)出血和腦水腫，反而會(huì)加重病情。一般情況下，患者發(fā)生腦卒中后在3小時(shí)內(nèi)不能到達(dá)醫(yī)院，所以能接受溶栓治療的幾率只有12%。除短暫性、血管痙攣性腦缺血之外，栓塞性腦缺血的唯一治療途經(jīng)就是溶栓，因此，在這個(gè)過(guò)程中必定伴隨著嚴(yán)重的再灌注繼發(fā)性損傷，主要通過(guò)"自由基_興奮性氨基酸-鈣"介導(dǎo)，而目前對(duì)于再灌注損傷主要通過(guò)神經(jīng)保護(hù)治療。神經(jīng)保護(hù)治療是針對(duì)腦血管病的病理機(jī)制，對(duì)腦損傷的生化和代謝紊亂通過(guò)藥物或其他等手段阻斷細(xì)胞壞死不同環(huán)節(jié)，增加正常和受損細(xì)胞存活能力，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。神經(jīng)保護(hù)治療藥物的出現(xiàn)意味著治療方法可以通過(guò)聯(lián)合溶栓而擴(kuò)大。目前神經(jīng)保護(hù)劑也用于腦缺血發(fā)作的急性期治療。由于傳統(tǒng)的溶栓治療"必須通過(guò)CT影像檢查排除出血性卒中、出血性梗塞、或硬膜下和硬膜外出血的病人"方可用藥。而神經(jīng)保護(hù)劑可給予任何懷疑急性卒中者進(jìn)行"急癥治療"，由此大大節(jié)省了進(jìn)行腦影像檢查和解釋檢查結(jié)果所需要的時(shí)間，為病人的有效治療及改善預(yù)后贏得了寶貴的時(shí)間。因此開(kāi)發(fā)具有神經(jīng)保護(hù)作用的新藥具有重要的意義。目前臨床上采用的血塞通膠囊(其主要成份為人參皂苷Rbl，人參皂苷Rgl，三七皂苷R1)是一種療效較好的治療治療缺血性腦血管病的藥物。不過(guò)，臨床上仍然需要有更多更好的藥物，以為醫(yī)師及患者提供更多的用藥選擇。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是要提供一種新的用于缺血性腦血管病的藥物，其可阻抑腦缺血損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)，改善腦血管病的缺血再灌注損傷，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明藥物是由包括以下重量份比的原料制成的豬膽粉2560份，山羊角1530份，黃芩2550份，梔子2560份，石菖蒲2530份，冰片或合成龍腦12份。本發(fā)明優(yōu)選的原料重量份比為豬膽粉2530份，山羊角1520份，黃芩2530份，梔子2530份，石菖蒲2530份，冰片或合成龍腦12份。本發(fā)明中所用原料可采用常規(guī)方法對(duì)其有效成分進(jìn)行提取或濃縮。本發(fā)明在此提供一種具體的制備方法(1)稱取豬膽粉，加入氫氧化鈉溶液皂化，放冷后調(diào)節(jié)pH值，析出沉淀濾過(guò)；沉淀用去離子水洗至中性，低溫干燥，得提取物粗品；粗品經(jīng)醋酸乙酯和適量的活性炭加熱回流，無(wú)水硫酸鈉脫水后濾過(guò)，析晶，干燥，得豬膽酸精品。(2)山羊角去角塞，刷洗晾干后打成粉末，用硫酸回流水解，放涼，用石灰乳調(diào)節(jié)pH直至4.04.5，攪拌使pH穩(wěn)定；濾過(guò)，收集濾液，沉淀用熱去離子水?dāng)囅?，濾過(guò)，至流出液近無(wú)色，合并濾、洗液，用微孔濾膜濾過(guò)；濾液通過(guò)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱洗脫除雜；收集的洗脫液濃縮，濾過(guò)，濾液經(jīng)活性炭脫色，濃縮干燥，得山羊角提取物。(3)取黃芩打碎，水煎煮兩次，合并煎煮液，過(guò)濾，濾液濃縮后用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.02.0，保溫靜置，濾過(guò)，沉淀加水混懸，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值，加入乙醇，攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液再用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值，析晶；經(jīng)活性炭脫色，干燥，即得黃芩提取物。(4)取梔子打碎，經(jīng)乙醇提取后濾過(guò)，濾液回收乙醇至盡，濃縮冷藏，冷藏液濾過(guò)，濾液用正丁醇提取，提取液經(jīng)減壓回收正丁醇至盡，再經(jīng)活性炭脫色，濃縮干燥，得梔子提取物。(5)石菖蒲粉碎成粗粉置揮發(fā)油提取器中，加去離子水回流提取，收集石菖蒲揮發(fā)油。(6)冰片或合成龍腦研成細(xì)粉。按照常規(guī)制劑要求，將上述提取物和冰片(或合成龍腦)與常規(guī)的藥用輔劑如賦形劑、崩解劑、黏合劑、潤(rùn)滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香劑、表面活性劑等混合，可將其制成顆粒劑、膠囊劑、片劑等口服制劑。也可采用常規(guī)制劑技術(shù)制備成注射液、輸液劑等制劑。本發(fā)明的原料也可以選用直接購(gòu)買(mǎi)的豬去氧膽酸、黃芩苷、梔子苷、石菖蒲揮發(fā)油，按照上述生藥配比進(jìn)行折算后，再與山羊角提取物以及冰片或合成龍腦混合后，作為有效成分與常規(guī)的藥用輔劑混合制備成各種制劑。本發(fā)明可用于制備治療缺血性腦血管病的各種藥物制劑。本發(fā)明用于治療缺血性腦血管病時(shí)，可經(jīng)口服或不經(jīng)口服給藥。給藥量也因劑型不同以及患者病情的輕重不同而有所不同。對(duì)成年人來(lái)說(shuō)，口服用藥量，每天以生藥計(jì)20200g比較適宜。肌注或靜脈注射用藥每天以生藥計(jì)220g比較適宜。本發(fā)明主要是針對(duì)缺血性腦血管病病理過(guò)程中的腦缺血損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)行設(shè)計(jì)4的。其所選用的6味中草藥相互作用，由此產(chǎn)生了良好的協(xié)同作用。本發(fā)明的有益效果表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面(1)本發(fā)明可有效增加血清SOD活性，降低MDA含量，明顯降低血清ET、TxB2濃度，增加6-KetoPGFla濃度，對(duì)腦多發(fā)梗塞性具有明顯的保護(hù)作用。(2)本發(fā)明可明顯減輕腦缺血再灌注損傷所致的神經(jīng)功能缺損，減小腦梗死范圍，降低腦指數(shù)和腦含水量，增加血清SOD活性，降低MDA含量，降低血清ET、TxB2濃度，增加6-KetoPGFla濃度。對(duì)腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用。(3)本發(fā)明具有抑制血小板聚集、抑制血栓形成、降低血液粘度的作用。以下實(shí)施例用于對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不以任何形式限制本發(fā)明。實(shí)施例1(1)稱取豬膽粉25kg，加入氫氧化鈉溶液皂化，放冷后調(diào)節(jié)pH值，析出沉淀濾過(guò)；沉淀用去離子水洗至中性，低溫干燥，得提取物粗品；粗品經(jīng)醋酸乙酯和適量的活性炭加熱回流，再用無(wú)水硫酸鈉脫水后濾過(guò)，析晶，干燥，得豬膽酸精品。(2)山羊角去角塞，稱取15kg;刷洗晾干后打成粉末，用硫酸回流水解，放涼，用石灰乳調(diào)節(jié)pH直至4.04.5，攪拌使pH穩(wěn)定；濾過(guò)，收集濾液，沉淀用3050°C的去離子水?dāng)囅?，濾過(guò)，至流出液近無(wú)色，合并濾、洗液；合并液經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)；濾液通過(guò)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱洗脫除雜；收集的洗脫液濃縮、濾過(guò)，濾液經(jīng)活性炭脫色，濃縮干燥，得山羊角提取物。(3)取黃芩25kg，打碎，水煎煮兩次，合并煎煮液，過(guò)濾；濾液濃縮后用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.02.0，保溫靜置24小時(shí)，濾過(guò)，沉淀加水混懸，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值，加入乙醇，攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液再用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH值，析晶；經(jīng)活性炭脫色，干燥，得黃芩提取物。(4)取梔子25kg，打碎，經(jīng)80X的乙醇提取后濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮，在24t:冷藏，冷藏液濾過(guò)，濾液用正丁醇提??；提取液減壓回收正丁醇至盡，濃縮、干燥，得梔子提取物。(5)取石菖蒲25kg，粉碎成粗粉置揮發(fā)油提取器中，加去離子水回流提取，收集石菖蒲揮發(fā)油，避光冷藏。(6)冰片研成細(xì)粉。將上述提取物及冰片加入糊精混均，制成每粒含(即相當(dāng)于)生藥4g的膠囊劑。實(shí)施例2稱取豬膽粉30kg，山羊角20kg，黃芩30kg，梔子30kg，石菖蒲30kg。按照常規(guī)方法制備提取物。將提取物與2kg合成龍腦混合后，加入適量的淀粉，糊精、硬酯酸鎂，混合制成濕粒，機(jī)器沖壓成片，制成每片含生藥2g的片劑。實(shí)施例3稱取豬膽粉60kg，山羊角30kg，黃吝50kg，梔子60kg，石菖蒲30kg。按照實(shí)施例1所述方法制備提取物。將提取物與2kg冰片混合后，加入蒸餾水、助溶劑溶解，過(guò)濾，灌裝。制成每100ml含生藥42g的口服液。實(shí)施例4稱取豬膽粉30kg，山羊角20kg，黃芩30kg，梔子30kg，石菖蒲30kg。按照實(shí)施例51所述方法制備提取物。提取物及2kg冰片混合按照常規(guī)方法進(jìn)行除熱源處理并加入蒸餾水，用氯化鈉調(diào)節(jié)等滲壓，過(guò)濾，灌裝。制成每10ml含生藥20g的注射液。實(shí)施例5-8是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)實(shí)施例。在以下實(shí)施例中的本發(fā)明藥物簡(jiǎn)稱試驗(yàn)藥。實(shí)施例5本發(fā)明對(duì)大鼠腦多發(fā)梗塞性模型的保護(hù)作用1儀器全自動(dòng)生化分析儀(TBA-120FR，日本)，液閃計(jì)數(shù)器(Wallac，發(fā)瑪西亞)。2試劑與藥物內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TxB2)、6-酮-前列腺素a(6-KetoPGFla)放免藥盒購(gòu)于北京福瑞生物工程公司，紅四氮唑購(gòu)于天津聯(lián)星生物技術(shù)公司。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒購(gòu)于南京建成生物試劑公司。3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，購(gòu)于北京維通利華公司，SPF級(jí)，雄性，體重240260g。合格證號(hào)SCX(京)2002-0003。4實(shí)驗(yàn)分組本發(fā)明藥物組(采用實(shí)施例1所制膠囊，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱試驗(yàn)藥組)，血塞通軟膠囊組(昆明制藥集團(tuán)生產(chǎn)，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱血塞通組)，模型組，假手術(shù)組和正常組。每組10只。5大鼠腦多發(fā)梗塞性模型的復(fù)制參照文獻(xiàn)方法復(fù)制腦多發(fā)梗塞性模型模型[1]，同種Wistar大鼠左心室內(nèi)采血，于37t:溫箱內(nèi)干燥，研碎后用200目篩孔過(guò)篩，應(yīng)用時(shí)取血栓栓子lmg加生理鹽水O.3ml，搖勻成混懸液。10%水合氯醛按3.5ml/kg體重腹腔麻醉，頸正中切開(kāi)皮膚，剝離胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌與胸骨乳突肌，暴露頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈與頸內(nèi)動(dòng)脈，暫時(shí)夾閉頸總動(dòng)脈，以及翼突腭動(dòng)脈，于頸外動(dòng)脈逆行插管注入栓子溶液0.3ml，推注同時(shí)開(kāi)放頸總動(dòng)脈，使栓子通過(guò)頸內(nèi)動(dòng)脈進(jìn)入顱內(nèi)至大腦各動(dòng)脈，造成多發(fā)性腦梗塞，開(kāi)放翼突腭動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，縫合皮膚。6藥物干預(yù)各組動(dòng)物于術(shù)后即刻經(jīng)舌下靜脈給藥，以后每24h給藥一次，連續(xù)1周，末次給藥后lh取血及腦組織。正常組及假手術(shù)組注射生理鹽水。7指標(biāo)檢測(cè)7.1血清生化指標(biāo)檢測(cè)于復(fù)制模型1周末次給藥后lh，各實(shí)驗(yàn)組大鼠球后靜脈叢取血，全自動(dòng)生化分析儀參照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量；液閃計(jì)數(shù)器參照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TxB》、6-酮-前列腺素F丄a(6-KetoPGFla)。7.2形態(tài)學(xué)檢查于復(fù)制模型1周末次給藥后lh，各實(shí)驗(yàn)組大鼠球后靜脈叢取血，隨后10%水合氯醛按3.5ml/kg體重腹腔麻醉，經(jīng)左心室灌注0.01M磷酸鹽緩沖液，pH值7.4，待灌注液清亮，灌注4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液10min，取腦，放入4X多聚甲醛磷酸鹽緩沖液外固定。石蠟包埋，切片，行HE染色，光鏡觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1試驗(yàn)藥對(duì)大鼠腦多發(fā)梗塞性模型形態(tài)學(xué)的影響HE染色結(jié)果表明，模型組皮層腦軟膜水腫及少部分充血，部分血管腔內(nèi)見(jiàn)有顆粒狀或絲絮狀物，皮層小血管腔亦見(jiàn)有上述改變，同時(shí)尚可見(jiàn)腦實(shí)質(zhì)水腫及多發(fā)軟化壞死灶。神經(jīng)元腫脹變性，部分細(xì)胞核呈空泡樣或顆粒樣變性，染色質(zhì)稀疏或丟失，有小膠質(zhì)細(xì)胞增生。丘腦、海馬部位觀察結(jié)果同上。試驗(yàn)藥組皮層軟腦膜及實(shí)質(zhì)血管腔內(nèi)栓子明顯減少或不見(jiàn)，有的管腔內(nèi)見(jiàn)有殘留的細(xì)顆粒或細(xì)絲狀遺骸，腦軟化及水腫不明顯，神經(jīng)元變性亦不明顯，膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)明顯增生。丘腦及海馬觀察結(jié)果基本同上。血塞通組上述三部位神經(jīng)元變性不明顯，膠質(zhì)細(xì)胞輕度增生，軟化灶明顯減少。2試驗(yàn)藥對(duì)大鼠腦多發(fā)梗塞性模型氧化損傷的影響(詳見(jiàn)表1)。表1試驗(yàn)藥對(duì)大鼠腦多發(fā)梗塞性模型血清S0D、MDA的影響實(shí)驗(yàn)分組SOD(U/ml)MDA(mnol/ml)正常組279.5±21.2**11.8±2.6**假手術(shù)組272.3±25.6**12.3±3.5**模型組214.5±27.917.9±3.2試驗(yàn)藥組292.4±31.5**13.5±2.8**血塞通組265.2±33.5**14.1±2.9*與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表1可見(jiàn)，試驗(yàn)藥組能夠明顯增加腦多發(fā)梗塞性大鼠血清S0D活性，降低MDA含量(P<0.05-0.01)。試驗(yàn)藥組與血塞通組沒(méi)有顯著差異。3試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響(詳見(jiàn)表2)表2試驗(yàn)藥對(duì)大鼠腦多發(fā)梗塞性模型ET、TXB2、6-KetoPGFla的影響實(shí)驗(yàn)分組ET(pg/ml)TxB2(pg/ml)6-KetoPGFla(pg/ml)正常組142.3±18.6*309.5±42.1**960.2±134.8#7實(shí)驗(yàn)分組ET(pg/ml)TxB2(pg/ml)6-KetoPGFla(pg/ml)假手術(shù)組150.5±10.4*314.8±43.1**948.7±144.8承*模型組161.8±9.3432.5±52.1590.3±142.7試驗(yàn)藥組135.6±11.5**349.2±43.7*798.9±156.8**血塞通組145.3±10.9**370.2±50.1*735.6±158.6與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表2可見(jiàn)，試驗(yàn)藥組能夠明顯降低血清ET、TxB2濃度，增加6-KetoPGFla濃度(P<0.05-0.01)。其增加6-KetoPGFla濃度的效果優(yōu)于血塞通組。上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明藥物能夠明顯改善大鼠腦多發(fā)梗塞性模型腦組織病理形態(tài)，增加血清SOD活性，降低MDA含量，明顯降低血清ET、TxB2濃度，增加6-KetoPGFla濃度。提示試驗(yàn)藥對(duì)大鼠腦多發(fā)梗塞性模型具有明顯的保護(hù)作用。實(shí)施例6本發(fā)明對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用1儀器全自動(dòng)生化分析儀(TBA-120FR，日本)，液閃計(jì)數(shù)器(Wallac，發(fā)瑪西亞)。2試劑與藥物內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TxB2)、6-酮-前列腺素a(6-KetoPGFla)放免藥盒購(gòu)于北京福瑞生物工程公司，紅四氮唑購(gòu)于天津聯(lián)星生物技術(shù)公司。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒購(gòu)于南京建成生物試劑公司。3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，購(gòu)于北京維通利華公司，SPF級(jí)，雄性，體重240_260g。合格證號(hào)SCX(京)2002-0003。4實(shí)驗(yàn)分組本發(fā)明藥物組(采用實(shí)施例1所制膠囊，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱試驗(yàn)藥組)，血塞通軟膠囊組(昆明制藥集團(tuán)生產(chǎn)，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱血塞通)，模型組，假手術(shù)組和正常組。每組20只。5大鼠腦缺血再灌注模型的復(fù)制參照文獻(xiàn)方法復(fù)制大腦缺血再灌注模型[1]，大鼠10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上，頸部正中切口，分出左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)及頸外動(dòng)脈(ECA)，電凝切斷ECA的上甲狀腺動(dòng)脈和枕動(dòng)脈分支，用6-0絲線結(jié)扎ECA遠(yuǎn)心端，然后用微血管夾夾閉ECA的起始處，再用6-0絲線穿過(guò)ECA松松地打半結(jié)，靠近遠(yuǎn)端結(jié)扎處剪斷ECA。取一根長(zhǎng)5-6cm的4-0的單絲尼龍線.，直徑0.23mrn，絲線外涂多聚賴氨酸，并在栓線插入端5mm處涂敷石蠟，涂蠟端直徑0.3mm。將絲線置入ECA，扎緊ECA上的絲線避免出血，去掉血管夾，將絲線由ECA導(dǎo)入頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，將絲線插進(jìn)顱腔，感到阻力時(shí)，從ICA起始處算起，一般插入長(zhǎng)度為1920mm。MCA起始處即被阻斷，結(jié)扎ECA殘端，縫合切口，引出尼龍線于皮膚切口外，以便拔出恢復(fù)血流時(shí)使用。1.5h后，重新打開(kāi)切口，拔出絲線，完成了血流再灌注，結(jié)扎ECA殘端，縫合切口。缺血模型動(dòng)物清醒后具備同側(cè)Homer氏征，提尾時(shí)左前肢屈曲內(nèi)收者方列為研究對(duì)象，排除有蛛網(wǎng)膜下腔出血者。6藥物干預(yù)各組動(dòng)物于術(shù)后即刻經(jīng)舌下靜脈給藥，以后每24h給藥一次，連續(xù)72h，末次給藥后lh取血及腦組織。正常組及假手術(shù)組注射生理鹽水7指標(biāo)檢測(cè)7.1神經(jīng)功能缺失征象的評(píng)定于復(fù)制模型后二次給藥后lh，進(jìn)行神經(jīng)功能缺失征象的評(píng)定采用臨床神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)觀察藥物對(duì)缺血大鼠神經(jīng)功能缺失征象的影響。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)無(wú)神經(jīng)功能缺損，肢體活動(dòng)正常；1級(jí)神經(jīng)功能輕度局灶性損傷，不能伸展左前肢；2級(jí)神經(jīng)功能中度局灶性損傷，向左側(cè)劃圈；3級(jí)神經(jīng)功能重度局灶性損傷，向左側(cè)傾倒；4級(jí)神經(jīng)功能極重度局灶性損傷，無(wú)自主行走及意識(shí)障礙。7.2腦梗死范圍于復(fù)制模型四次給藥后lh，各實(shí)驗(yàn)組部分大鼠(n=10)迅速斷頭取腦，切去額極后，稱重，間隔2mm連續(xù)作6個(gè)腦冠狀切片，立即置切塊于37°C1%TTC磷酸鹽緩沖液中避光恒溫孵育5-10min，可見(jiàn)正常組織染色呈紅色，壞死組織呈白色。小心分離白色區(qū)，稱重，為梗死區(qū)重量，計(jì)算梗死區(qū)占左腦及全腦的百分比。7.3腦指數(shù)及腦含水量于復(fù)制模型四次給藥后lh，各實(shí)驗(yàn)組部分大鼠(n=10)迅速斷頭取腦，切去額極后，稱重，然后放置烤箱(110°C)中烤干后再稱重。最后計(jì)算出腦指數(shù)和腦含水量。腦指數(shù)=腦濕重X100/體重，腦組織含水量二(腦濕重-腦干重)X100%。7.4血清生化指標(biāo)檢測(cè)于復(fù)制模型四次給藥后lh，各實(shí)驗(yàn)組大鼠球后靜脈叢取血，全自動(dòng)生化分析儀參照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量；液閃計(jì)數(shù)器參照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TxB2)、6-酮-前列腺素巳a(6-KetoPGFla)。8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，進(jìn)行方差分析，F(xiàn)檢驗(yàn)，組間比較，q檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺失征象的影響假手術(shù)組大鼠肢體活動(dòng)自如，無(wú)神經(jīng)功能缺失。單純?nèi)毖M缺血90min再灌24h組中，5只鼠行走時(shí)向左側(cè)劃圈；4只行走時(shí)向左側(cè)傾倒；l只出現(xiàn)意識(shí)障礙。試驗(yàn)藥組于相同時(shí)間點(diǎn)只有3只鼠不能伸展左前肢，其余大鼠無(wú)明顯神經(jīng)功能缺損。表明試驗(yàn)藥能明顯減輕腦缺血再灌注損傷所致的神經(jīng)功能缺損，具有腦保護(hù)作用。92試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦梗死范圍的影響(詳見(jiàn)表3)表3試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦梗死范圍的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表3可見(jiàn)，試驗(yàn)藥組能夠明顯減小實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦梗死范圍，與模型組相比，有顯著性差異(P<0.05)。試驗(yàn)藥組與血塞通組相比沒(méi)有顯著差異。3試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠指數(shù)及腦含水量的影響(詳見(jiàn)表4)表4試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表4可見(jiàn)，試驗(yàn)藥組能夠明顯降低實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦指數(shù)和腦含水量，與模型組相比，有顯著性差異(P<0.05)。4試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠氧化損傷的影響(詳見(jiàn)表5)表5試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠S0D、MDA的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表5可見(jiàn)，試驗(yàn)藥組能夠明顯增加實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠血清SOD活性，降低MDA含量，與模型組相比，有顯著性差異(P<0.05-0.01)。試驗(yàn)藥組與血塞通組相比沒(méi)有顯著差異。5試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響(詳見(jiàn)表6)表6試驗(yàn)藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠ET、TxB2、6_KetoPGFla的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表6可見(jiàn)，試驗(yàn)藥量組能夠明顯降低血清ET、TxB2濃度，增加6-KetoPGFla濃度(P<0.05-0.01)。試驗(yàn)藥組與血塞通組相比沒(méi)有顯著差異。上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明藥物能明顯減輕腦缺血再灌注損傷所致的神經(jīng)功能缺損，減小腦梗死范圍，降低腦指數(shù)和腦含水量，增加血清SOD活性，降低MDA含量，降低血清ET、TxB^農(nóng)度，增加6-KetoPGFla濃度。試驗(yàn)藥對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用。實(shí)施例7本發(fā)明對(duì)血液流變性、出凝血時(shí)間、血栓形成及血小板聚集的影響。l儀器血小板聚集儀(PAM-3型，上海醫(yī)科大學(xué)產(chǎn)品)；體外血栓形成儀(SDZ-A1型，江蘇無(wú)錫縣電子儀器廠產(chǎn)品)；血液粘度測(cè)定儀(R80C型)。2試劑與藥物鹽酸腎上腺素注射液(lmg/ml)，北京永康制藥廠，批號(hào)20040258;二磷酸腺苷(ADP)二鈉鹽，中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所；花生四烯酸(AA)，Sigma公司產(chǎn)品，膠原(100iig/mL)，KOKEN公司產(chǎn)品。3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，購(gòu)于北京維通利華公司，SPF級(jí)，雄性，體重240260g。合格證號(hào)SCX(京)2002-0003。昆明種小鼠，購(gòu)于北京維通利華公司，SPF級(jí)，雄性，體重2025g。合格證號(hào)SCX(京)2002-0003。4試驗(yàn)藥對(duì)大鼠血小板聚集的影響4.l動(dòng)物分組本發(fā)明藥物組(采用實(shí)施例1所制膠囊，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱試驗(yàn)藥組)，血塞通軟膠囊組(昆明制藥集團(tuán)生產(chǎn)，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱血塞通組)，模型組，假手術(shù)組和正常組。每組10只。4.2藥物干預(yù)各組動(dòng)物經(jīng)舌下靜脈給藥，連續(xù)1周，正常對(duì)照組注射生理鹽水，4.3血小板聚集率的測(cè)定末次給藥后lh，10%水合氯醛按3.5ml/kg體重腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3.8%枸櫞酸鈉溶液抗凝(血抗凝劑=9:1)，200g離心10min，制備富血小板血漿(PRP)，剩余部分1500g離心10min，制備貧血小板血漿(PPP)。用血小板聚集儀按照Born氏比濁法測(cè)定血小板聚集率，所用誘導(dǎo)劑終濃度ADP為4iimol/L，AA為40ymol/L，膠原為5mg/L。根據(jù)描記曲線，計(jì)算血小板最大聚集百分率。5試驗(yàn)藥對(duì)"血瘀"模型大鼠血液流變性及體外血栓形成的影響5.l動(dòng)物分組本發(fā)明藥物(采用實(shí)施例1所制膠囊，以下簡(jiǎn)稱試驗(yàn)藥)組(23.2mg/kg)，血塞通軟膠囊(昆明制藥集團(tuán)生產(chǎn)、23.2mg/kg)組，模型組，假手術(shù)組和正常組。每組10只。5.2藥物干預(yù)各組動(dòng)物經(jīng)舌下靜脈給藥，連續(xù)1周，正常對(duì)照組和血瘀模型組注射生理鹽水，5.3大鼠血瘀模型的復(fù)制及指標(biāo)測(cè)定除正常對(duì)照組外，其余各組均于取血前1天給大鼠皮下注射鹽酸腎上腺素0.8mg/12kg，共2次，間隔6h，期間進(jìn)行冰水游泳5min，第2次注射后禁食。次日給藥后lh，10%水合氯醛按3.5ml/kg體重腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，Chandler法測(cè)定體外血栓形成，血液粘度測(cè)定儀測(cè)定全血粘度及血漿比粘度。6試驗(yàn)藥對(duì)小鼠出血凝血時(shí)間的影響6.l動(dòng)物分組本發(fā)明藥物組(采用實(shí)施例1所制膠囊，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱試驗(yàn)藥組)，血塞通軟膠囊組(昆明制藥集團(tuán)生產(chǎn)，23.2mg/kg，以下簡(jiǎn)稱血塞通)，正常組。每組10只。6.2藥物干預(yù)各組動(dòng)物腹腔注射給藥，連續(xù)1周，正常對(duì)照組和血瘀模型組注射生理鹽水。6.3出血凝血時(shí)間檢測(cè)末次給藥后lh，將小鼠固定，露鼠尾于外，用手術(shù)刀切割1/2處左尾靜脈，待血流溢出開(kāi)始用秒表計(jì)時(shí)，每隔10s用濾紙吸去血滴，直至血流自然停止，觀察并記錄出血時(shí)間。以毛細(xì)玻璃管作眼眶內(nèi)眥穿剌，取血達(dá)5cm血柱，每隔5s折斷毛細(xì)玻璃管一小截，檢查有無(wú)血凝絲，記錄從毛細(xì)玻璃管采血至出現(xiàn)血凝絲時(shí)間。7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，進(jìn)行方差分析，F(xiàn)檢驗(yàn)，組間比較，q檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1試驗(yàn)藥對(duì)大鼠血小板聚集的影響(詳見(jiàn)表7)表7試驗(yàn)藥對(duì)大鼠血小板聚集的影響實(shí)驗(yàn)分組血小板最大聚集百分率ADPAA膠原正常組45.31±18.1237.32±20.5166.42±24.63試驗(yàn)藥組8.43±4.45**13.02±12.76*8.67±5.20**血塞通組24.30±21.18*12.58±10.72*27.85±22.48*與正常組比較，*:P<0.05**:P<0.01。由表7可見(jiàn)，試驗(yàn)藥連續(xù)給藥1周，明顯抑制由ADP、AA、膠原誘導(dǎo)的大鼠的血小板聚集，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)。試驗(yàn)藥組效果優(yōu)于血塞通組。2試驗(yàn)藥對(duì)"血瘀"模型大鼠血液流變性及體外血栓形成的影響(詳見(jiàn)表8)表8試驗(yàn)藥對(duì)"血瘀"模型大鼠全血粘度及血漿比粘度的影響13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表8可見(jiàn)，模型組大鼠在各切變率下的全血粘度和血漿粘度均顯著高于正常組，提示血瘀模型復(fù)制成功。與模型組比較，試驗(yàn)藥組全血粘度在切變率30s—^5s—1下明顯降低，在切變率200s—、100s—1下有降低趨勢(shì)。3試驗(yàn)藥對(duì)"血瘀"模型大鼠體外血栓形成的影響(詳見(jiàn)表9)表9試驗(yàn)藥對(duì)"血瘀"模型大鼠體外血栓的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與模型組相比，*:P<0.05**:P<0.01由表9可見(jiàn)，試驗(yàn)藥組能夠明顯減少"血瘀"模型大鼠體外血栓長(zhǎng)度、濕重和干重(P<0.05-0.01)，試驗(yàn)藥組效果優(yōu)于血塞通組。4試驗(yàn)藥對(duì)小鼠出血凝血時(shí)間的影響(詳見(jiàn)表10)表10試驗(yàn)藥對(duì)小鼠出血、凝血時(shí)間的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常組比較，*:P<0.05**:P<0.01由表10可見(jiàn)，試驗(yàn)藥組均可明顯延長(zhǎng)對(duì)小鼠出血、凝血時(shí)間(P<0.05-0.01)。上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明藥物具有抑制血小板聚集、抑制血栓形成、降低血液粘度的作用。試驗(yàn)藥組與血塞通組相比沒(méi)有顯著差異。本發(fā)明實(shí)施例2-4所制藥物，均具有實(shí)施例1所述的實(shí)驗(yàn)效果，故在此不再贅述。權(quán)利要求一種用于治療缺血性腦血管病的藥物，其特征在于它是由包含以下重量份比的原料制成的豬膽粉25～60份，山羊角15～30份，黃芩25～50份，梔子25～60份，石菖蒲25～30份，冰片或合成龍腦1～2份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療缺血性腦血管病的藥物，其特征在于所述的原料其重量份比為豬膽粉2530份，山羊角1520份，黃芩2530份，梔子2530份，石菖蒲2530份，冰片或合成龍腦12份。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種用于缺血性腦血管病的藥物，由包括以下重量份比的原料制成的豬膽粉25～60份，山羊角15～30份，黃芩25～50份，梔子25～60份，石菖蒲25～30份，冰片或合成龍腦1～2份。本發(fā)明藥物可有效阻抑腦缺血損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)，改善腦血管病的缺血再灌注損傷，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。文檔編號(hào)A61K31/045GK101744955SQ20081008009公開(kāi)日2010年6月23日申請(qǐng)日期2008年12月15日優(yōu)先權(quán)日2008年12月15日發(fā)明者劉彩霞,高國(guó)領(lǐng),黃懷鵬申請(qǐng)人:河北國(guó)金藥業(yè)有限責(zé)任公司