專利名稱：柴胡皂苷b₂的提取分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于中藥有效成分的提取分離方法，具體涉及關(guān)于中藥柴胡中有效 成分的提取分離方法。
背景技術(shù)：
柴胡皂苷b2是一種次生柴胡皂苷，是由原生柴胡皂苷d轉(zhuǎn)化而來，具體來說是由于柴胡皂苷d結(jié)構(gòu)中C-13， 28位之間的氧醚環(huán)不穩(wěn)定，易發(fā)生斷裂，生 成a"'u"s)一齊墩果二烯型的次生柴胡皂苷b2。文獻(xiàn)顯示d柴胡藥材經(jīng)過傳統(tǒng)的水煎煮后，柴胡皂苷d全部轉(zhuǎn)變?yōu)椴窈碥誦2 (Yukio Ogihara, Masaki Aburada， Sho-Saiko-To: Scientific Evaluation and Clinical Applications, 1 edition (My 24, 2003) ， CRC press, page 126); 2)含有柴胡的復(fù)方制劑中均能檢測到 大量的柴胡皂苷b2 (李軍、石任兵、劉斌等，四逆散不同配伍對柴胡皂苷a、 b2 及柴胡總皂苷煎出量的影響，北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007， 30 (2): 115-120)?？梢?，柴胡皂苷b2是含柴胡制劑中重要的柴胡皂苷類成分，是控制含柴胡制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)。因此，在實(shí)際工作中需要提取分離純度高的柴胡皂苷b2作為 對照品。特別是在含柴胡的藥物開發(fā)研究當(dāng)中，如何簡化柴胡皂苷b2的提取工 藝、提高分離純度，是制劑工藝研究過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。盡管已有文獻(xiàn)報(bào)道 柴胡中柴胡皂苷b2的提取制備方法(陳喜奎，張如意，張志亮等，黑柴胡中皂 苷類成分的研究，北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1992， 2 (3): 222-224)，但是，該方法 是利用中壓硅膠柱反復(fù)層析分離得到，要求有一定的設(shè)備。由于以往的提取工 藝路線復(fù)雜，對設(shè)備要求嚴(yán)格，不適合于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種提取分離中藥柴胡有效成分的工藝，即提取分離 中藥柴胡有效成分柴胡皂苷b2的新工藝。本發(fā)明的工藝方法包括如下步驟A:取柴胡或柴胡提取完揮發(fā)油后的藥渣，適當(dāng)粉碎，加入溶劑進(jìn)行提取， 提取液濃縮回收溶劑，得總提取物；B:總提取物加水適當(dāng)分散，上大孔樹脂吸附柱，先用堿水溶液洗脫除雜， 再用水洗脫至中性，接下來用10% 40%的乙醇/水溶液洗脫除雜，最后用40% 100%的乙醇/水溶液洗脫并收集該部分洗脫液，濃縮回收溶劑，得柴胡皂苷b2 粗品；C:取柴胡皂苷b2粗品，拌入2 10倍重量份硅膠，揮干溶劑，得拌樣硅膠; 另取20 80倍重量份硅膠活化2小時(shí)，濕法裝柱，將拌樣硅膠加入柱頂，以氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識，合并含有柴胡皂苷b2的流 份，回收溶劑得柴胡皂苷b2的精品；取柴胡皂苷b2的精品，于丙酮-水或氯仿-甲醇-水的混合溶劑中重結(jié)晶，過 濾，干燥，得柴胡皂苷b2純品。上述方法中步驟A中柴胡為傘形科柴胡屬任一植物的根，或市售柴胡飲片， 還包括經(jīng)過炮制的各種炮制品；柴胡提取完揮發(fā)油的藥渣為柴胡經(jīng)過水蒸氣蒸 餾或超臨界萃取后的藥渣；提取溶劑為水或任意一種醇類溶劑，或者這些溶劑 按一定比例組成的混和溶劑；提取方式為煎煮、加熱回流、超聲提取、微波提 取、高壓提取。上述方法中步驟A的方法為取柴胡藥材或柴胡提取完揮發(fā)油后的藥渣25 重量份，加入濃度為10 90%的乙醇150 300體積份，加熱回流提取0.5 2 小時(shí)，過濾，藥渣以同樣的方法先后提取2 5次，合并提取液，藥渣棄去；提 取液回收乙醇，得稠膏即總提取物2.5^3.5重量份。上述方法中步驟A的優(yōu)選方法為取柴胡藥材或柴胡提取完揮發(fā)油后的藥 渣25重量份，加入濃度為30%的乙醇250體積份，加熱回流提取1.5小時(shí)，過 濾，藥渣以同樣的方法先后提取3次，合并提取液，藥渣棄去；提取液回收乙 醇，得稠膏即總提取物3.3重量份。上述方法中步驟B中大孔吸附樹脂為非極性、弱極性或中等極性中的任意 一種；堿水溶液是由堿或鹽類成分的水溶液構(gòu)成，其濃度為1 5%。上述方法中步驟B的方法為取總提取物2.5 3.5重量份，加藥材量3 5 體積份的水稀釋，上非極性、弱極性或中等極性中的任意一種大孔吸附樹脂柱， 樹脂用量為藥材量的6 10倍體積份，徑高比為1:5 8，吸附流速2 4BV/h; 先用1 5%的NaOH、 KOH或NaC03洗脫7 15 BV，流速2 5 BV/h，再用水 洗脫至流出液為中性，接著用0 40%的乙醇洗脫4 8 BV，流速2 5BV/h; 最后用40 100%的乙醇洗脫5 10 BV，流速2 5 BV/h，收集該部分洗脫液， 回收溶劑，得柴胡皂苷b2粗品1.0 1.6重量份。上述方法屮步驟B的優(yōu)選方法為取總提取物3.3重量份，加藥材量4體積 份的水稀釋，上AB-8型人孔吸附樹脂柱，樹脂M為藥材量的8體積份，徑高比 為1:6，吸附流速2 BV/h;先用2%的NaOH洗脫9 BV，流速2 BV/h，再用水 洗脫至流出液為中性，接著用30呢的乙醇洗脫5BV，流速3BV/h;最后用80% 的乙醇洗脫8BV，流速3BV/h，收集該部分洗脫液，回收溶劑，得柴胡皂苷b2 粗品1.5重量份。上述方法中步驟C的方法為取柴胡皂苷b2粗品，拌入4 6倍重量份100 200目硅膠，揮干溶劑，得拌樣硅膠；另取100 200目硅膠30 60重量份，活 化2小時(shí)，濕法裝柱，徑高比為1:5 10，將拌樣硅膠加入柱頂，以10 5:0.01 5:0.01 0.5氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識，合并含有柴胡皂苷b2的流份，回收溶劑得柴胡皂苷b2的精品；取柴胡皂苷b2的精品，于10 0.01:0.01 10丙酮-水和10 1:0.01 9:0.01 0.9氯仿-甲醇-水的混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得柴胡皂苷b2純品。上述方法中步驟C的方法優(yōu)選為取柴胡皂苷b2粗品1.0 1.6重量份，拌 入3 5倍重量份100 200目硅膠，揮干溶劑，得拌樣硅膠；另取100 200目 硅膠40 50重量份，100 105。C活化2小時(shí)，濕法裝柱，徑高比為1:5 10， 將拌樣硅膠加入柱頂，以10 5:0.01 5:0.01 0.5氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識，合并含有柴胡皂苷b2的流份，回收溶劑得柴胡皂苷b2的精品0.08 0.16重量份；取柴胡皂苷b2的精品0.8 0.16重量份，于10 0.01:0.01 10丙酮-水或10 1:0.01 9:0.01 0.9氯仿-甲醇-水的混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得0.05 0.11重量份的柴胡皂苷1>2純品。上述方法中步驟C的進(jìn)一步優(yōu)選方法為取柴胡皂苷b2粗品1.5重量份， 拌入4倍重量份100 200目硅膠，揮干溶劑，得拌樣硅膠；另取100 200目 硅膠45重量份，100 105。C活化2小時(shí)，濕法裝柱，徑高比1:7，將拌樣硅膠 加入柱頂，以9:2:0.2氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識， 合并含有柴胡皂苷b2的流份，回收溶劑得柴胡皂苷b2的精品0.14重量份。取柴胡皂苷b2的精品0.14重量份，于6:4丙酮-水或5: 1:0.1氯仿-甲醇-水的 混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得0.11重量份的柴胡皂苷b2純品。采用本方法提取制備柴胡有效成分柴胡皂苷b2，提取工藝路線簡單，提取 分離純度提高，柴胡皂苷b2的收率提高，適合于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例l:柴胡皂苷b2的純度檢查用"效液相色譜法檢查純度。儀器Waters 600高效液相色譜儀。色浩柱 Hypersil-C18色譜柱，250mmx4.6mm， 5jxm(大連伊利特)。流動(dòng)相乙腈-水(30 50:70 50);流速1.0 丄.2mL/min;柱溫室溫;檢測波長254nm;進(jìn)樣m: lOpl;保留吋間(RT):柴胡皂苷h為20 30min;色譜圖紀(jì)錄時(shí)間50min。 面積歸一化法測純度，柴胡皂苷b2的純度為98.3%。實(shí)驗(yàn)例2:柴胡皂苷b2的結(jié)構(gòu)測定熔點(diǎn)用Yanaco型顯微熔點(diǎn)測定儀；紫外(UV)光譜用日本島津UV-260型 紫外可見分光光度計(jì)；紅夕卜(IR)光譜用Perkin-Elmer 983 G型儀器測定，KBr 壓片；核磁共振氫譜和碳譜^HNMR禾f] 13HNMR)用MERCURY-400核磁共振 儀測定；質(zhì)譜(MS)用JES-D300型質(zhì)譜儀測定上述精制方法所得的柴胡皂苷b2純品為白色顆粒狀結(jié)晶，熔點(diǎn)235 237。C。 UVXmax (nm): 244， 252， 262。 IR"max (KBr， cm-1) :3416 (OH) ，1640 (C=C)。 MS(m/z): 804(M+Na+H)，781(M+1)。 ^-NMR (6， C5D5N): 0.87， 0.91， 0.98， 0.99， 1.04， 1.67 (各3H， s， 6xCH3)(為結(jié)構(gòu)中6個(gè)角甲基信號)，6.71 (1H， d， J-10.4Hz， H-ll)， 5.72 (1H， d， /=10.4Hz， H-12), 5.38 (1H， d， /=7.8Hz， glcH-l)， 4.98 (1H， d， J=7.8Hz， fucH-l)， 1.43 (3H， d， >/=6.2Hz， fucCH3)。 13C-NMR (5， C5D5N):母核信號38.4 (C-l)， 26,1 (C-2)， 81.6 (C-3)， 43.8 (C-4)， 47.3 (C-5)， 18.9 (C-6)， 32.5 (C-7)， 41.2 (C-8)， 54.0 (C陽9)， 36.7 (C-IO)， 126.3 (C-ll)， 126.3 (C-12)， 136.2 (C陽13)， 42.0 (C隱14)， 32.6 (C-15)， 67.9(C-16)， 45.4(C-17)， 133.1 (C-18)， 39.1 (C-19)， 32.7(C-20)， 35.6(C-21)， 24.6(C-22)， 64.7(C-23)， 13.1 (C-24)， 18.4(C-25)， 17.4 (C-26)， 21.8 (C-27)， 64.7 (C-28)， 25.1 (C-29)， 32.3 (C-30);呋糖信號106.0 (C-l')， 71.8 (C陽2')， 85.5 (C-3')， 71.9 (C-4')， 71.1 (C-5')， 17.2 (C-6');葡萄糖信號106.7 (C-l")， 75.9 (C-2〃)， 78.7 (C-3〃)， 72.2 (C-4〃)， 78.5 (C-5〃)， 62.9 (C-6〃)。 以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，結(jié)構(gòu)如下'<formula>formula see original document page 7</formula>實(shí)驗(yàn)例3大孔吸附樹脂富渠柴胡皂苷b2粗品的實(shí)驗(yàn)取柴胡藥材2.5kg，加入濃度為30呢的乙醇25L，加熱回流提取1.5h，過濾， 藥渣以同樣的方法先后提収3次，顯后合并提取液，藥渣棄去，提取液回收乙 醇，得稠膏0.33kg。取上述稠膏0.33kg，加水10L稀釋，上AB-8大孔吸附樹脂，樹脂量20 L(水 中體積)，樹脂柱徑高比為1:6，吸附流速2BV/h，先用2免的NaOH洗脫9BV， 流速2BV/h，再用水洗脫至流出液為中性，接著用30免的乙醇洗脫5BV，流速 3BV/h;最后用80免的乙醇洗脫8BV，流速3BV/h，收集該部分洗脫液，回收 溶劑，得柴胡皂苷b2粗品0.15kg。實(shí)驗(yàn)例4柱層析方法與重結(jié)晶方法聯(lián)用制備柴胡皂苷b2純品的實(shí)驗(yàn)柴胡皂苷b2純品的制備采用柱層析和重結(jié)晶聯(lián)用的方法制備。柱層析時(shí)使用的吸附劑為硅膠G (青島海洋化工廠生產(chǎn)，4.5kg， 100 105。C活化2小時(shí))。 取上述柴胡皂苷粗品0.15kg，拌入到0.6kg 100 200目的硅膠中，揮干溶劑， 得拌樣硅膠，濕法上樣(色譜柱直徑高比1:7)。以9:2:0.2氯仿-甲醇-水的混合 溶劑洗脫，收集洗脫液，每份300mL，共收集80份，,每份減壓濃縮至小體積后，用薄層色譜檢查。薄層色譜條件反相硅膠預(yù)制板；展開劑40%甲醇/水溶液。 其中第31 40份中柴胡皂苷b2的含量較高，將其合并，減壓抽干得柴胡皂苷 b2的精品白色粉末0.014kg。取柴胡皂苷b2的精品0.014kg，用少量甲醇溶解，于5:l:0.1氯仿-甲醇-水的 混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得O.Ollkg的柴胡皂苷b2純品，為白色顆粒 狀結(jié)晶。實(shí)施例l:柴胡皂苷b2純品的制備取柴胡藥材2.5kg，加入濃度為30呢的乙醇20L;加熱回流提取2h，過濾，藥 渣以同樣的方法先后提取3次，最后合并提取液，藥渣棄去，提取液回收乙醇， 得稠膏0.31kg。取上述稠膏0.31kg，加水IOL稀釋，上AB-8大孔吸附樹脂，樹脂量20 L(水 屮體積)，樹脂柱徑高比為1:6，吸附流速2 BV/h，先用2%的NaOH洗脫IOBV， 流速2BV/h，再用水洗脫至流出液為中性，接著用25呢的乙醇洗脫8BV，流速 3BV/h;最后用90免的乙醇洗脫6BV，流速3BV/h，收集該部分洗脫液，回收 溶劑，得柴胡皂苷b2粗品0.14kg。柴胡皂苷b2純品的制備采用柱層析和重結(jié)晶聯(lián)用的方法制備。柱層析時(shí)使 用的吸附劑為硅膠G (青島海洋化工廠生產(chǎn)，4.5 kg， 100 105。C活化2小時(shí))。 取上述柴胡皂苷粗品0.14kg，拌入到0.55 kg 160 200目的硅膠中，揮干溶劑， 得拌樣硅膠，濕法上樣(色譜柱直徑高比1:6)。以7:2:0.2氯仿-甲醇-水的混合 溶劑洗脫，收集洗脫液，每份250mL，共收柒80份，每份減壓濃縮至小體積后，用薄層色譜檢查。薄層色譜條件反相硅膠預(yù)制板；展開劑50免「n醇/水溶液。其中第25 35份中柴別皂苷b2的含量較高，將其合并，減壓抽千得柴胡皂苷 b2的精品白色粉水0.013kg。取柴胡皂苷b2的精品0.013kg，用少量甲醇溶解，于6:4丙酮-水的混合溶劑 中重結(jié)晶，過濾，干燥，得0.009kg的柴胡皂苷b2純品，為白色顆粒狀結(jié)晶。實(shí)施例2:柴胡皂苷b2純品的制備取柴胡藥材2.5kg，加入濃度為20呢的乙醇30L，加熱回流提取2h，過濾，藥 渣以同樣的方法先后提取4次，最后合并提取液，藥渣棄去，提取液回收乙醇， 得稠膏0.35kg。取上述稠膏0.35kg，加水9L稀釋，上AB-8大孔吸附樹脂，樹脂量22.5 L(水中體積)，樹脂柱徑高比為1:7，吸附流速2BV/h，先用3免的NaOH洗脫9 BV，流速3BV/h，再用水洗脫至流出液為中性，接著用35免的乙醇洗脫5BV， 流速2BV/h;最后用70免的乙醇洗脫10BV，流速2BV/h，收集該部分洗脫液， 回收溶劑，得柴胡皂苷b2粗品0.11kg。柴胡皂苷b2純品的制備采用柱層析和重結(jié)晶聯(lián)用的方法制備。柱層析時(shí)使用的吸附劑為硅膠G (青島海洋化工廠生產(chǎn)，3.5kg， 100 105'C活化2小時(shí))。 取上述柴胡皂苷粗品O.llkg，拌入到0.44kg100 200目的硅膠中，揮干溶劑， 得拌樣硅膠，濕法上樣(色譜柱直徑高比1:5)。以6:1:0.1氯仿-甲醇-水的混合 溶劑洗脫，收集洗脫液，每份300mL，每份減壓濃縮至小體積后，用薄層色譜 檢查。薄層色譜條件反相硅膠預(yù)制板；展開劑50%甲醇/水溶液。其中第20 26份中柴胡皂苷b2的含量較高，將其合并，減壓抽干得柴胡皂苷b2的精品白色 粉末O.OlOkg。取柴胡皂苷b2的精品0.010kg，用少量甲醇溶解，于5:1:0.1氯仿-甲醇-水的 混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得0.006kg的柴胡皂苷b2純品，為白色顆粒 狀結(jié)晶。實(shí)施例3:柴胡皂苷b2純品的制備取提完揮發(fā)油后的柴胡藥渣2.5kg，加入濃度為50%的乙醇30L，加熱回流 提取1.5 11，過濾，藥渣以同樣的方法先后提取3次，最后合并提取液，藥渣棄去， 提取液回收乙醇，得稠膏0.26kg。取上述稠膏0.26kg，加水IIL稀釋，上AB-8大孔吸附樹脂，樹脂量19 L(水 中體積)，樹脂柱徑高比為1:8，吸附流速3 BV/h，先用3%的NaOH洗脫10 BV， 流速3BV/h，再用水洗脫至流出液為中性，接著用30呢的乙醇洗脫6BV，流速 3BV/h;最后用80W的乙醇洗脫9BV，流速3 BV/h，收集該部分洗脫液，回收溶劑，得柴胡皂苷b2禮l品0.10kg。柴胡皂苷b2純品的制^采用柱層析和重結(jié)品聯(lián)用的方法制備。柱/^析吋使 用的吸附劑為硅膠G (辨島海洋化工廠生產(chǎn)，3 kg， 100 105。C活化2小時(shí))。 取上述柴胡皂苷粗品aiUkg，拌入到0.50kg川0 2(X) H的硅膠屮，揮十溶劑， 得抨樣硅膠，濕法上樣(色譜柱直徑高比1:6)。以9:4:0.4氯仿-甲醇-水的混合 溶劑洗脫，收集洗脫液，每份300mL，每份減壓濃縮至小體積后，用薄層色譜 檢查。薄層色譜條件反相硅膠預(yù)制板；展開劑45%甲醇/水溶液。其中第30 40份中柴胡皂苷b2的含量較高，將其合并，減壓抽干得柴胡皂苷b2的精品白色 粉末0.009kg。取柴胡皂苷b2的精品0.009kg，用少量甲醇溶解，于7:5丙酮-水的混合溶劑 中重結(jié)晶，過濾，干燥，得0.006kg的柴胡皂苷b2純品，為白色顆粒狀結(jié)晶。實(shí)施例4:柴胡皂苷b2純品的制備取提完揮發(fā)油后的柴胡藥渣2.5kg，加入濃度為70%的乙醇25 L，加熱回流 提取lh，過濾，藥渣以同樣的方法先后提取4次，最后合并提取液，藥渣棄去， 提取液回收乙醇，得稠膏0.28kg。取上述稠膏0.28kg，加水IIL稀釋，上AB-8大孔吸附樹脂，樹脂量20 L(水 中體積)，樹脂柱徑高比為1:7，吸附流速3BV/h，先用2免的NaOH洗脫11 BV， 流速3BV/h，再用水洗脫至流出液為中性，接著用40呢的乙醇洗脫4BV，流速 3BV/h;最后用85呢的乙醇洗脫10BV，流速4BV/h，收集該部分洗脫液，回 收溶劑，得柴胡皂苷b2粗品0.12kg。柴胡皂苷b2純品的制備采用柱層析和重結(jié)晶聯(lián)用的方法制備。柱層析時(shí)使用的吸附劑為硅膠G (青島海洋化工廠生產(chǎn)，3.6kg， 100 105。C活化2小時(shí))。 取上述柴胡皂苷粗品0.12kg，拌入到0.48kg100 200目的硅膠中，揮干溶劑， 得拌樣硅膠，濕法上樣(色譜柱直徑高比1:7)。以9:3:0.3氯仿-甲醇-水的混合 溶劑洗脫，收集洗脫液，每份250mL，每份減壓濃縮至小體積后，用薄層色譜 檢查。薄層色譜條件反相硅膠預(yù)制板；展開劑55%甲醇/水溶液。其中第25 35份中柴胡皂苷b2的含量較高，將其合并，減壓抽干得柴胡皂苷b2的精品白色粉末O.OlOkg。取柴胡皂苷b2的精品0.010kg，用少量甲醇溶解，于5:2:0.2氯仿-甲醇-水的 混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得0.008kg的柴胡皂苷b2純品，為白色顆粒 狀結(jié)晶。
權(quán)利要求
1.一種柴胡皂苷b2的提取分離方法，其特征在于包括如下步驟A取柴胡或柴胡提取完揮發(fā)油后的藥渣，適當(dāng)粉碎，加入溶劑進(jìn)行提取，提取液濃縮回收溶劑，得總提取物；B總提取物加水分散，上大孔樹脂吸附柱，先用堿水溶液洗脫除雜，再用水洗脫至中性，接下來用10％～40％的乙醇/水溶液洗脫除雜，最后用40％～100％的乙醇/水溶液洗脫并收集該部分洗脫液，濃縮回收溶劑，得柴胡皂苷b2粗品；C取柴胡皂苷b2粗品，拌入2～10倍重量份硅膠，揮干溶劑，得拌樣硅膠；另取20～80倍重量份硅膠活化2小時(shí)，濕法裝柱，將拌樣硅膠加入柱頂，以氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識，合并含有柴胡皂苷b2的流份，回收溶劑得柴胡皂苷b2的精品；取柴胡皂苷b2的精品，于丙酮-水或氯仿-甲醇-水的混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得柴胡皂苷b2純品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l中所述的提取分離方法，其特征是所述步驟A中柴胡為傘 形科柴胡屬任一植物的根，或市售柴胡飲片，還包括經(jīng)過炮制的各種炮制品； 柴胡提取完揮發(fā)油后的藥渣為柴胡經(jīng)過水蒸氣蒸餾或超臨界萃取后的藥渣；提 取溶劑為水或任意一種醇類溶劑，或者這些溶劑按一定比例組成的混和溶劑； 提取方式為煎煮、加熱回流、超聲提取、微波提取、高壓提取中的任意一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l中所述的提取分離方法，其特征是所述步驟B中大孔吸附樹脂為非極性、弱極性或中等極性中的任意一種；堿水溶液是由堿或強(qiáng)堿弱酸鹽類成分的水溶液構(gòu)成，其濃度為1 5%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l中所述的提取分離方法，其特征是所述步驟C為取柴胡皂苷b2粗品，拌入4 6倍重量份100 200目硅膠，揮干溶劑，得 拌樣硅膠；另取100 200目硅膠30 60重量份，活化2小時(shí)，濕法裝柱，徑 高比為1:5 H)，將拌樣硅膠加入柱頂，以10 5:0.01 5:0.01 0.5氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識，合并含有柴胡皂苷1)2的流份，回 收溶劑得柴胡皂苷b2的精品；取柴胡皂苷b2的精品，于10 0.01:0.01 10丙酮-水或10 1:0.01 9:0.01 0.9氯仿-甲醇-水的混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，T燥，得柴胡皂苷b2純品。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l中所述的提取分離方法，其特征是該方法包括如下步驟 A:取柴胡藥材或柴胡提取完揮發(fā)油后的藥渣25重量份，加入濃度為10 90% 的乙醇150 300體積份，加熱回流提取0.5 2小時(shí)，過濾，藥渣以同樣的方法 先后提取2 5次，合并提取液，藥渣棄去；提取液回收乙醇，得稠膏即總提取 物2.5 3.5重量份；B:取總提取物2.5 3.5重量份，加藥材量3 5倍體積份的水稀釋，上非極性、弱極性或中等極性中的任意一種大孔吸附樹脂柱，樹脂用量為藥材量的6 10 倍體積份，徑高比為1:5 8，吸附流速2 4BV/h;先用1 5%的NaOH、 KOH 或NaC03洗脫7 15BV，流速2 5 BV/h，再用水洗脫至流出液為中性，接著 用0 40呢的乙醇洗脫4 8BV，流速2 5BV/h;最后用40 100%的乙醇洗脫 5 10BV，流速2 5BV/h，收集40 100%的乙醇洗脫部分，回收溶劑，得柴 胡皂苷b2粗品1.0 1.6重量份；C:取柴胡皂苷b2粗品1.0 1.6重量份，拌入3 5倍重量份100 200目硅膠， 揮干溶劑，得拌樣硅膠；另取100 200目硅膠40 50重量份，100 105。C活 化2小時(shí)，濕法裝柱，徑高比為1:5 10，將拌樣硅膠加入柱頂，以10 5:0.01 5:0.01 0.5氯仿-甲醇-水的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識，合并含有柴 胡皂苷b2的流份，回收溶劑得柴胡皂苷b2的精品0.08 0.16重量份；取柴胡皂苷1)2的精品0.08 0.16重量份，于10 0.01:0.01 10丙酮-水或 10 1:0.01 9:0.01 0.9氯仿-甲醇-水的混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得 0.05 0.11重量份的柴胡皂苷b2純品。
6.根據(jù)權(quán)利要求l中所述的提取分離方法，其特征是該方法包括如下步驟 A:取柴胡藥材或柴胡提取完揮發(fā)油后的藥渣25重量份，加入濃度為30%的乙 醇250體積份，加熱回流提取1.5小時(shí)，過濾，藥渣以同樣的方法先后提取3次， 合并提取液，藥渣棄去；提取液回收乙醇，得稠膏即總提取物3.3重量份； B:取總提取物3.3重量份，加藥材量4倍體積份的水稀釋，上AB-8型大孔吸 附樹脂柱，樹脂用量為藥材量的8倍體積份，徑高比為1:6，吸附流速2BV/h; 先用2%的NaOH洗脫9 BV，流速2BV/h，再用水洗脫至流出液為中性，接著 用30%的乙醇洗脫5 BV，流速3BV/h;最后用80%的乙醇洗脫8 BV，流速3 BV/h，收集該部分洗脫液，回收溶劑，得柴胡皂苷b2粗品1.5重量份；C:取柴胡皂苷b2粗品1.5重量份，拌入4倍重量份100 200目硅膠，揮下溶 劑，得拌樣硅膠；另取100 200目硅膠45重量份，100 105。C活化2小時(shí)， 濕法裝柱，徑高比1:7，將拌樣硅膠加入柱頂，以9:2:0.2氯仿-甲醇-水的混合溶 劑洗脫，收集洗脫液，薄層檢識，合并含冇柴胡總苷h的流份，回收溶劑得柴胡皂苷b2的精品0.14重量份；取柴胡皂苷b2的精品0.14重量份，于6:4丙酮-水或5:1:0.1氯仿-甲醇-水的 混合溶劑中重結(jié)晶，過濾，干燥，得0.11重量份的柴胡皂苷b2純品。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥有效成分的提取分離方法，具體涉及關(guān)于中藥柴胡中有效成分柴胡皂苷b₂的提取分離方法，本發(fā)明將柴胡提取得到的總提取物，經(jīng)過大孔樹脂純化得到柴胡皂苷b₂粗品，柴胡皂苷b₂粗品用柱層析或重結(jié)晶或以上兩種方法聯(lián)用制備得到柴胡皂苷b₂的純品，該方法能有效分離得到柴胡皂苷b₂單體，適合工業(yè)生產(chǎn)，為更好地對柴胡有效成分的質(zhì)量進(jìn)行控制提供了基礎(chǔ)。
文檔編號A61K36/185GK101255182SQ20081004950
公開日2008年9月3日 申請日期2008年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月8日
發(fā)明者華 姜, 軍 李 申請人:河南科技大學(xué)