專利名稱：真菌來源的多糖作為藥物組合物或食品補(bǔ)充劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及真菌來源的多糖作為用于人類和動(dòng)物健康的藥物組合物或食品補(bǔ)充劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
已知微觀真菌和食用真菌具有有益于健康的特性，例如降血糖、降低血液膽固醇、抗氧化或免疫促進(jìn)的特性。真菌含有具有與胃腸道和身體總體健康有關(guān)的重要特性的可消化性化合物，被定義為多糖類飲食纖維。通過降低血液胰島素濃度、增加小腸內(nèi)食物的黏度并減慢碳水化合物吸收，其具有對(duì)葡萄糖循環(huán)(glucosecirculation)發(fā)揮作用的特性。因此，真菌具有調(diào)節(jié)糖代謝的能力。它們還在動(dòng)脈血壓的調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。如Fukushima et al.，(2000)對(duì)蘑菇(Agaricus bisporus)的纖維的研究(Fukushima M，Nakano M，Morii Y，Ohashi T，F(xiàn)ujiwara Y & Sonoyama K(2000)J.Nutr.1302151)表明，含有大量纖維的真菌對(duì)于降低血液中的總膽固醇和HDL-膽固醇的濃度具有有益的作用。因此，其在對(duì)高血壓和心血管疾病，更廣泛地，對(duì)肥胖和代謝綜合征的預(yù)防中發(fā)揮著間接作用。
極少有食品能發(fā)揮免疫促進(jìn)特性。大多數(shù)食品導(dǎo)致免疫抑制而非免疫促進(jìn)。真菌例如花菇(Lentinus edodes)、舞菇(灰樹花，Grifolafrondosa)、靈芝(靈芝菌，Ganoderma Lucidum)或巴西菇(姬松茸，Agaricus blazei murill)為“免疫促進(jìn)性”食物。免疫促進(jìn)功能主要是由于其細(xì)胞壁內(nèi)存在β-葡聚糖類多糖(Lull C，Wichers HJ &Savelkoul HFJ(2005)Antiinflammatory and immunomodulatingproperties of fungal metabolites.Mediators Inflammation 263)。
某些植物纖維被推薦用于預(yù)防、抑制或治療肥胖和肥胖相關(guān)疾病，如源自菊苣菊粉的寡果糖、或昆布多糖(一種源自藻類的β-葡聚糖)。寡果糖通過在結(jié)腸內(nèi)發(fā)酵從而釋放能夠抑制血漿生長素(plasmatique en ghreline，一種通常刺激食欲的激素)含量的化合物而發(fā)揮作用。間接地，通過增加飽腹感和減少食物攝入，可觀察到對(duì)膽固醇水平和動(dòng)脈粥樣硬化的效應(yīng)，這是與代謝綜合征以及與心血管疾病相關(guān)的多種效應(yīng)之一。
并且已知?dú)ぞ厶?一種由來自有殼水生動(dòng)物外殼的殼質(zhì)中獲得的多糖，并被認(rèn)為是一種纖維)可發(fā)揮降低血脂和降低血液膽固醇的作用。這些效應(yīng)是由于胃內(nèi)的食物脂肪酸或膽汁酸(帶負(fù)電)與殼聚糖(帶正電)之間的相互作用。然而，殼聚糖的缺點(diǎn)在于其來源于有殼水生動(dòng)物，其可能引起過敏。
含殼質(zhì)-葡聚糖共聚物(chitin-glucan copolymer)的組合物的非食物相關(guān)的用途已經(jīng)為人所知，特別是作為愈合皮膚的活性劑。對(duì)源自黑曲霉(Aspergillus niger)的Mycoton和Mycoran組合物用于皮膚和瘢痕的特性進(jìn)行了描述。然而，并未發(fā)現(xiàn)任何口服應(yīng)用，特別是在食品或制藥領(lǐng)域中。
大多數(shù)針對(duì)真菌來源的纖維的有益效果所開展的研究，是在新鮮真菌或粉狀真菌或可溶于水性介質(zhì)的β-葡聚糖(通常從植物中提取)上進(jìn)行的。然而，這些產(chǎn)品并非最適用于上述指征。


發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的 本發(fā)明的主要目的是提供一組真菌來源的天然物質(zhì)，其能夠提供食品補(bǔ)充劑或藥物組合物，特別是作為平衡飲食和良好衛(wèi)生規(guī)范的補(bǔ)充而用于改善人類和動(dòng)物健康，尤其是用于預(yù)防和/或?qū)怪T如代謝綜合征、肥胖、糖尿病和心血管疾病或相關(guān)疾病的病狀。
本發(fā)明的目的還在于提供一組物質(zhì)，其表現(xiàn)出無懈可擊的食品安全，且同時(shí)能夠以與作為食品補(bǔ)充劑的應(yīng)用相一致的費(fèi)用，大體積供應(yīng)。
本發(fā)明的目的還在于提供一組非動(dòng)物來源且純度優(yōu)良的天然物質(zhì)，已經(jīng)對(duì)其進(jìn)行了良好的表征并且具有良好的追溯性。
本發(fā)明的目的還在于提供一種穩(wěn)定且易于配制的多糖類食品補(bǔ)充劑。
本發(fā)明的目的在于提出一種藥物活性劑或食品補(bǔ)充劑，其能夠使與代謝綜合征、肥胖、糖尿病和/或心血管疾病病狀相關(guān)的參數(shù)，例如甘油三酯含量、LDL-膽固醇與HDL-膽固醇之間的平衡、脂質(zhì)沉積物覆蓋的主動(dòng)脈弓表面積、血漿抗氧化能力等恢復(fù)到正常水平。
發(fā)明描述 本發(fā)明描述了經(jīng)有益純化的真菌來源的、并且優(yōu)選黑曲霉的提取物的效用。純化提取物的水解產(chǎn)物，即殼質(zhì)(chitine，幾丁質(zhì))和低分子量的β-葡聚糖的共聚物，也是本發(fā)明的一部分。正是這兩種聚合物(殼質(zhì)和β-葡聚糖)之間的結(jié)合以及來自真菌源的共聚物的三維結(jié)構(gòu)，使其成為有益于健康的化合物。特別是黑曲霉(其為用于食品和制藥工業(yè)的檸檬酸生產(chǎn)中的副產(chǎn)品)的可利用性和特性，使其成為其衍生物在人類和動(dòng)物健康中進(jìn)行應(yīng)用的供選擇的原材料。
各種來源的多糖類纖維及其寡聚物，如寡果糖、昆布多糖或殼聚糖等的有益作用已經(jīng)為人所知。本發(fā)明者已經(jīng)在國際申請(qǐng)WO03/068824中描述了用于生產(chǎn)來自真菌的、更特別地來自黑曲霉類真菌的非動(dòng)物來源的殼聚糖的過程。
現(xiàn)在，本發(fā)明者已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，上述來自真菌源、特別是來自真菌黑曲霉的殼質(zhì)-葡聚糖復(fù)合物及其水解產(chǎn)物出乎預(yù)料地兼有幾種已知的纖維特性，并且發(fā)現(xiàn)殼聚糖并非用于例如克服血脂障礙而最合適的化合物。實(shí)際上，殼質(zhì)-葡聚糖復(fù)合物及其水解產(chǎn)物發(fā)揮降低血液膽固醇和降血糖的作用，其增加血漿的抗氧化能力，從而促進(jìn)粥樣斑的減少，其可增加飽腹感并刺激免疫系統(tǒng)。
關(guān)于殼聚糖，存在這樣的情況(先驗(yàn)的)，葡聚糖通過脂肪酸或膽汁酸與殼聚糖銨基之間的靜電相互作用，依靠其在胃處結(jié)合脂質(zhì)的能力發(fā)揮減肥作用，依靠其在腸內(nèi)結(jié)合脂質(zhì)的能力發(fā)揮降低血液膽固醇的作用。不過，本發(fā)明的殼質(zhì)-葡聚糖物質(zhì)及其水解產(chǎn)物，首先基本上不帶靜電荷，其次不能在體外吸收脂肪酸。然而，其具有顯著減少甘油三酯含量、總膽固醇含量和LDL-膽固醇的作用(相當(dāng)于殼聚糖的作用)，同時(shí)促進(jìn)HDL-膽固醇的增加(增加方式與殼聚糖相當(dāng))。
關(guān)于殼聚糖，除了這些常見的作用，還有一些使其成為有益物質(zhì)的效果未曾描述殼質(zhì)-葡聚糖及其水解產(chǎn)物能夠在水中吸收通常約10倍于其自身的質(zhì)量，這使得其成為具有優(yōu)良纖維特性(尤其是能夠改善轉(zhuǎn)運(yùn))的物質(zhì)。由于殼質(zhì)部分與β-葡聚糖部分之間的協(xié)同，其能夠顯著刺激血漿的抗氧化活性并能夠發(fā)揮免疫促進(jìn)活性。
由于不能夠在胃水平吸收脂質(zhì)，因而殼質(zhì)-葡聚糖及其水解產(chǎn)物不會(huì)引起脂類營養(yǎng)素(維生素)失調(diào)的風(fēng)險(xiǎn)，而有時(shí)懷疑殼聚糖具有此風(fēng)險(xiǎn)。最后，殼質(zhì)-葡聚糖及其水解產(chǎn)物可按照一種易于實(shí)施的過程獲得并純化，該過程開始于優(yōu)質(zhì)真菌，其為可大量獲得并可更新的副產(chǎn)品，并且其為非動(dòng)物來源。
本發(fā)明人通過“真菌來源的多糖”表示從真菌細(xì)胞壁純化獲得的提取物，其主要由殼質(zhì)和β-葡聚糖的多糖(以共聚物形式)及其水解產(chǎn)物組成。純化的提取物優(yōu)選包含以質(zhì)量計(jì)超過提取物總質(zhì)量的70％、優(yōu)選超過80％、優(yōu)選超過85％、更加優(yōu)選超過95％的殼質(zhì)-葡聚糖含量。
本發(fā)明人通過“殼質(zhì)-葡聚糖”表示從真菌細(xì)胞壁提取的純化共聚物，其由α構(gòu)象的通過(1，6)-型鍵(

)彼此連接的N-乙酰-D-葡糖胺單元和可選地較小比例的D-葡糖胺單元的鏈(殼質(zhì)鏈)以及β構(gòu)象的通過(1，3)-型、(1，3)(1，6)-型或(1，3)(1，4)-型鍵，并且優(yōu)選(1，3)-型鍵彼此連接的D-葡萄糖單元鏈(β-葡聚糖鏈，本文中也稱為“葡聚糖”)組成。
通常認(rèn)為，真菌細(xì)胞壁多糖根據(jù)其在堿介質(zhì)中的溶解性可分為兩組，且細(xì)胞壁骨架是不可溶的。人們還已經(jīng)知道不溶性成分由殼質(zhì)和β-葡聚糖(根據(jù)物種不同，比例有所不同)組成，β-葡聚糖單元通過不同的結(jié)構(gòu)的鍵而連接，殼質(zhì)與β-葡聚糖之間的鍵是穩(wěn)定的，如由例如Siestma & Wessels關(guān)于釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)(接合菌(Zygomycete))、粗糙鏈孢霉(Neurospora crassa)(子囊菌(Ascomycete))、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)(子囊菌(Ascomycete))和灰蓋鬼傘(Coprinus cinereus)(擔(dān)子菌(Basidiomycete))所表明的(Siestma JH & Wessels JG.(1981)Solubility of(1，3)-beta-D-(1，6)-beta-D-glucan in fungal wallsimportance of presumed linkage between glucan and chitin.(1981)J.Gen.Microbiol.125209)。已知黑曲霉不溶性成分的殼質(zhì)與β-葡聚糖鏈彼此之間共價(jià)連接，如例如由Stagg CM和Feather MS(Biochim.Biophys.(1973)Acta 32064)所論及的。例如，F(xiàn)ontaine等關(guān)于煙曲霉(Fontaine T，Simenel C，Dubreucq G，Adam O，Delepierre M，Lemoine J，Vorgias CE，Diaquin M & Latgé JP.(2000)Molecularorganization of the alkali-insoluble fraction of Aspergillus fumigatuscell wall，J.Bio.Chem.27527594)、和Kollar等關(guān)于酵母菌釀酒酵母(Kollar R，Petrakovas E，Ashwell G，Robbins P & Cabib E.(1995)Architecture of the yeast cell wall，the linkage between chitin andbeta(1，3)glucan，J.Biol.Chem.2701170)已經(jīng)描述了用于確定殼質(zhì)與β-葡聚糖之間的共價(jià)鍵性質(zhì)的方法。
有益地，殼質(zhì)-葡聚糖共聚物包含低于10％的水溶性化合物。優(yōu)選地，殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的純度高于80％，優(yōu)選高于85％。有益地，殼質(zhì)-葡聚糖共聚物包含的重金屬低于40mg/kg，優(yōu)選低于20mg/kg，如利用歐洲藥典(European Pharmacopeia)2.4.8F專題論文中描述的方法所確定的。有益地，殼質(zhì)-葡聚糖共聚物包含低于2ppm的砷，如通過AES-ICP確定的。有益地，殼質(zhì)-葡聚糖共聚物具有適于食用的微生物學(xué)性質(zhì)，優(yōu)選包含低于10,000cfu/g，更加優(yōu)選低于1,000cfu/g的微生物總數(shù)(包括酵母和霉菌數(shù))。
殼質(zhì)與β-葡聚糖之間的比值在95:5和5:95之間，優(yōu)選在70:30和20:80之間，更加優(yōu)選在70:30和25:75之間，更加優(yōu)選在60:40和25:75(m/m)之間。另一優(yōu)選的殼質(zhì)與β-葡聚糖的比值介于50:50和10:90之間，優(yōu)選在45:55和20:80之間。這種類型的共聚物可通過之前描述過的殼質(zhì)-葡聚糖共聚物水解而得到。殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的殼質(zhì)部分優(yōu)選包含至少85％的N-乙酰-D-葡糖胺單元和至多15％的D-葡糖胺單元，優(yōu)選包含至少90％的N-乙酰-D-葡糖胺單元和至多10％的D-葡糖胺單元。共聚物通常呈白色至輕微褐色的粉末形式。無論溫度和pH如何，其在水性和有機(jī)溶劑中基本上不可溶。其在水性介質(zhì)中能夠溶脹。它是吸濕性的，在水中通?？晌占s7倍于其自身的質(zhì)量，這相當(dāng)于植物不溶纖維如半纖維素或果膠的溶脹度。
有益地，根據(jù)本發(fā)明的殼質(zhì)-葡聚糖共聚物可通過以KITOZYME S.A.名義分別于2003年2月12日和2005年7月4日提交的國際申請(qǐng)WO 03/068824和法國專利申請(qǐng)所描述的工藝而獲得，兩個(gè)申請(qǐng)均結(jié)合于此供參考。該工藝特別是在申請(qǐng)F(tuán)R0507066中加以描述，如所提交申請(qǐng)的第18頁第14行等等。在該工藝中，優(yōu)選將黑曲霉用作真菌來源。
有益地，該方法包括下列步驟 1)可選地，將生物菌體(生物量，biomasse)懸浮于酸性溶液中并除去酸溶性產(chǎn)物， 2)將酸不溶性成分懸浮于堿性溶液中并除去堿溶性產(chǎn)物， 3)通過進(jìn)一步用水處理，純化堿不溶性產(chǎn)物， 4)干燥不溶于水的產(chǎn)物， 5)可選地，通過用有機(jī)溶劑處理而純化干燥產(chǎn)物， 6)可選的，干燥不溶于有機(jī)溶劑的產(chǎn)物。
根據(jù)初始生物菌體組成和最終殼質(zhì)-葡聚糖共聚物產(chǎn)物所需純度的不同，第一個(gè)步驟即將生物菌體懸浮于酸性溶液中是可選性的。優(yōu)選酸性溶液為鹽酸或硫酸的水溶液，優(yōu)選鹽酸的水溶液。根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施例，所述酸性溶液的濃度介于0.1與5N之間，優(yōu)選約0.5N。
有利地，該第一個(gè)提取步驟可除去酸溶性化合物包括無機(jī)化合物。
第二個(gè)步驟有利地利用諸如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨水溶液這樣的水溶液，并且優(yōu)選氫氧化鈉或氫氧化鉀的水溶液。優(yōu)選地，所述堿性溶液的濃度介于0.1與5N之間，優(yōu)選約1N。
第三個(gè)步驟即純化堿不溶性產(chǎn)物優(yōu)選通過使所述產(chǎn)物與水接觸并通過例如過濾分離水不溶性產(chǎn)物而實(shí)施。
每一個(gè)步驟均優(yōu)選在5-120℃之間的溫度下實(shí)施，并且更加優(yōu)選在低于60℃的溫度下實(shí)施。生物菌體優(yōu)選占1-15％(干重，w/v)，并且更加優(yōu)選占3-12％。這些步驟優(yōu)選持續(xù)4-48小時(shí)，并且更加優(yōu)選少于30小時(shí)。每一個(gè)步驟均可重復(fù)多次。
本發(fā)明人通過“殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物”表示由特別是從真菌細(xì)胞壁提取的殼質(zhì)-葡聚糖共聚物受控水解得到的共聚物，并且其由共價(jià)連接的殼質(zhì)鏈和β-葡聚糖鏈組成，其中殼質(zhì)與β-葡聚糖的比例優(yōu)選在50:50和10:90(m/m)之間，優(yōu)選60:40和15:85(m/m)之間。由于部分水解，水解產(chǎn)物的分子量低于殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的分子量。殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物的殼質(zhì)部分優(yōu)選由至少85％的N-乙酰-D-葡糖胺單元和至多15％的D-葡糖胺單元組成，優(yōu)選由至少90％的N-乙酰-D-葡糖胺單元和至多10％的D-葡糖胺單元組成。



圖1示出了用于記錄殼質(zhì)-葡聚糖F1和水解的殼質(zhì)-葡聚糖F4的固相碳13核磁共振(13C-NMR)譜的條件。
圖2示出了殼質(zhì)-葡聚糖F1(第28批)的13C-NMR譜。
圖3示出了水解的殼質(zhì)-葡聚糖F4(第2批)的13C-NMR譜。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明者意外地發(fā)現(xiàn)殼質(zhì)-葡聚糖共聚物及其水解產(chǎn)物(屬于一組結(jié)構(gòu)類似于殼聚糖結(jié)構(gòu)的多糖)，盡管其基本不帶電荷，卻具有與殼聚糖相當(dāng)?shù)慕档脱耗懝檀嫉奶匦?。該化合物易于從真菌來源，例如黑曲霉的菌絲體獲得，其構(gòu)成真菌細(xì)胞壁外骨架的不溶性部分。殼質(zhì)-葡聚糖共聚物及其水解產(chǎn)物還具有其它有益于健康的作用，如在本發(fā)明中所描述的。
本發(fā)明特別涉及從真菌來源提取的多糖及其水解衍生物作為用于改善人類和動(dòng)物健康的藥物活性劑或食品補(bǔ)充劑。經(jīng)?？诜景l(fā)明的多糖使得特別能夠預(yù)防、治療或?qū)褂绕涫茄系K、高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，并刺激生物體的抗氧化活性，刺激免疫系統(tǒng)，發(fā)揮有利于糖尿病情況中的降血糖作用，且增強(qiáng)飽腹感以將代謝綜合征減至最少。本發(fā)明的多糖可按照能實(shí)現(xiàn)優(yōu)良的純度、良好的重復(fù)性的有益過程，從真菌來源中以大生產(chǎn)量獲得。本發(fā)明的多糖基本上由D-葡糖胺單元、和/或N-乙酰-D-葡糖胺單元和D-葡糖胺單元、尤其是殼質(zhì)(N-乙酰-D-葡糖胺)和β-葡聚糖(D-葡萄糖)共聚物組成。本發(fā)明還包括這些聚合物或共聚物的任何修飾，例如通過將化學(xué)官能團(tuán)連接到聚合物上以改善其特性。
因此，根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及至少一種真菌來源的多糖(主要包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物)用于制造口服組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及至少一種不溶于水性或有機(jī)介質(zhì)中的真菌來源的多糖用于制造口服組合物的應(yīng)用，所述多糖主要包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物。
本發(fā)明還涉及至少一種包括含β-葡聚糖鍵(

)的聚合物的真菌來源的多糖用于制造口服組合物的應(yīng)用，所述β-葡聚糖鍵基本上由1，3-位的β-葡聚糖鍵組成。
本發(fā)明還涉及至少一種基本上包含上文所定義的多糖的真菌來源的提取物用于制造口服組合物的應(yīng)用。有益地，按質(zhì)量計(jì)算，多糖包含的殼質(zhì)-葡聚糖多糖占真菌來源的提取物總質(zhì)量的70％以上，優(yōu)選大于85％。
真菌提取物可從多類真菌包括接合菌、擔(dān)子菌、子囊菌(黑曲霉是其中的一部分)以及半知菌的菌絲體細(xì)胞壁，和/或它們的混合物中獲得。選擇所述真菌來源使得能夠提取上文和下文所定義的多糖。雖然存在著某些包含葡聚糖的真菌來源，但特別地，這些單元是水溶性的或者包括很少或不包括殼質(zhì)結(jié)構(gòu)鏈，因此也不可能獲得本發(fā)明的多糖。真菌來源可以為天然的或經(jīng)遺傳修飾的(GMO)。
本發(fā)明涵蓋所有能獲得本發(fā)明所定義的殼質(zhì)-葡聚糖聚合物的真菌類型。
有益地，采用上述定義的多糖的水解產(chǎn)物。
有益地，殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物中殼質(zhì)與β-葡聚糖的比值在60:40與15:85(m/m)之間。
有益地，殼質(zhì)-葡聚糖共聚物中殼質(zhì)部分的至少85％是N-乙酰-D-葡糖胺單元，而該部分的至多15％是D-葡糖胺單元。
因此，本發(fā)明能夠?yàn)槿祟惢騽?dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物提供一種口服組合物，用于獲得一種選自由以下組成的組中的效應(yīng)抗氧化、降低血液膽固醇或降血脂效應(yīng)、對(duì)免疫系統(tǒng)的刺激效應(yīng)、降血糖效應(yīng)(特別是糖尿病)、飽腹效應(yīng)、改善食物轉(zhuǎn)運(yùn)的效應(yīng)、以及旨在預(yù)防和/或治療和/或?qū)惯x自由血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖、肥胖相關(guān)疾病、心血管疾病、代謝綜合征、糖尿病和高尿酸血癥組成的組的病癥的效應(yīng)。
本發(fā)明還涉及一種藥物或食品補(bǔ)充劑組合物，其包括至少一種如上文定義真菌來源的多糖或提取物作為活性成分。
本發(fā)明還涉及一種治療、預(yù)防或?qū)共“Y(特別是上文提到的病癥)的方法，包括使需要多糖的個(gè)體口服有效量的包括至少一種如上文或下文描述中所定義的多糖的組合物。
本發(fā)明還涉及用于減少人或動(dòng)物優(yōu)選哺乳動(dòng)物的重量或防止或?qū)怪亓吭黾拥姆椒ā＿@個(gè)方法特別涉及保養(yǎng)美學(xué)。
本發(fā)明還涉及用于優(yōu)化食物轉(zhuǎn)運(yùn)(transit)的方法。
因此，本發(fā)明涉及本發(fā)明產(chǎn)品制造尤其用于上述其中一個(gè)方法或者用于施加上文或下文所述其中一個(gè)效應(yīng)的組合物的應(yīng)用。
通過常規(guī)方法，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地確定將采用的本發(fā)明產(chǎn)品的有效量。有益地，按重量計(jì)算，所采用的根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品的有效量占將給與的組合物總重量的0.001％至100％。如果產(chǎn)品以膠囊、顆?；蚱瑒┑男问浇o與，則其可以純品(pure)應(yīng)用或以任何其它濃度、與其它活性成分或者賦形劑一起應(yīng)用。如果將其摻入食品中，則產(chǎn)品濃度低于15％，優(yōu)選低于10％。
本發(fā)明的產(chǎn)品通常以顆粒、片劑或膠囊的形式配制，或者以其他形式摻入食品或飲品中。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員在閱讀涉及多種實(shí)施例的解釋性說明書之后，將更加明了本發(fā)明的其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)，然而說明書中的實(shí)施例僅僅為了進(jìn)行示例而不能以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例是本發(fā)明不可或缺的一部分，并且基于作為整體的說明書，任何相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)表現(xiàn)為新穎性的特征，包括實(shí)施例，在其功能和其一般性方面都是本發(fā)明不可或缺的一部分。
因此，每一個(gè)實(shí)施例均具有一般范圍。
此外，在實(shí)施例中，除非另有指明，所有的百分比均按重量給出，并且除非另有指明，所有的溫度均以攝氏度表示，且除非另有指明，壓力均為大氣壓。
實(shí)施例 用于獲得下文所得殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的過程在專利申請(qǐng)WO03/068824和FR05.07066中有所描述。
實(shí)施例1-從黑曲霉的菌絲體中提取和純化的殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的實(shí)施例(提取物F1) 為了制備F1殼質(zhì)-葡聚糖共聚物，將質(zhì)量50kg(干重)的濕黑曲霉菌絲體懸浮于濃度為1％的鹽酸溶液中，然后過濾。隨后將固體物質(zhì)懸浮于0.25％的氫氧化鈉溶液中，然后過濾。將固體物質(zhì)用水洗4次，隨后干燥。接下來懸浮于乙醇中，然后過濾并干燥。得到大約20kg殼質(zhì)-葡聚糖(F1)。
在表1中給出6批F1殼質(zhì)-葡聚糖的分子特征及組成。
根據(jù)下文簡要描述的方法，通過在圖1中所示條件下記錄的固相碳13核磁共振(MNR)譜來計(jì)算殼質(zhì)/葡聚糖的質(zhì)量比。F1殼質(zhì)-葡聚糖復(fù)合物(第28批)的譜在圖2中示出。β-葡聚糖的比例根據(jù)以下四個(gè)共振帶的面積來確定104ppm(殼質(zhì)和β-葡聚糖的碳1)、23ppm(殼質(zhì)的CH3碳)、55ppm(殼質(zhì)的碳2)和61ppm(殼質(zhì)和β-葡聚糖的碳6)，以純殼質(zhì)作為參照。例如，可根據(jù)式1進(jìn)行計(jì)算，其中I′是碳信號(hào)面積，并且其中[]CG表示所分析的殼質(zhì)-葡聚糖的比值，而[]C則是參照殼質(zhì)的比值。C1是殼質(zhì)和β-葡聚糖的碳1，C2則是殼質(zhì)的C2。

6批殼質(zhì)-葡聚糖的殼質(zhì)/葡聚糖的質(zhì)量比平均為39:61±2(m/m)。
D-葡糖胺(NGlc)單元的比例，以殼質(zhì)部分的mol％表示，可根據(jù)NMR譜估算，如Heux等所描述的(Heux L，Brugnerotto J，Desbrières J，Versali MF & Rinaudo M.(2000)Solid state NMR fordetermination of the degree of acetylation of chitin and chitosan.Biomacromolecules 1746)。D-葡糖胺單元的比例則在鹽酸過量的懸浮液中利用氫氧化鈉進(jìn)行電位滴定而測(cè)定。
在表2中給出殼質(zhì)-葡聚糖的微生物學(xué)性質(zhì)以及搜索病原體的結(jié)果。
表1-各批殼質(zhì)-葡聚糖共聚物(F1)的分子特征和組成 *殼質(zhì)-葡聚糖比值4次計(jì)算結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差；**LQ離子耦合等離子體分析法的敏感性限值(5.3ppm)。
表2-F1殼質(zhì)-葡聚糖(第26批)的微生物學(xué)性質(zhì) 因此，從上表中能夠了解，根據(jù)本發(fā)明的共聚物具有較高的純度。
實(shí)施例2-殼質(zhì)-葡聚糖共聚物水解產(chǎn)物(F4)的實(shí)例 在該實(shí)施例中，F(xiàn)4殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物通過將F1殼質(zhì)-葡聚糖共聚物在濃度大于30％的氫氧化鈉溶液中于100℃或更高的溫度下堿性水解至少2小時(shí)而獲得。將該物質(zhì)用水洗數(shù)次、懸浮于乙醇中，然后過濾并干燥?？蓮?0kg F1殼質(zhì)-葡聚糖中得到大約5kg水解產(chǎn)物。
在表3中給出幾批F4殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物的分子特征和組成。殼質(zhì)-葡聚糖比值根據(jù)固相碳13核磁共振譜進(jìn)行計(jì)算。該比值根據(jù)所采用的水解方法而變化。分析條件與用于F1的分析條件相同。
表3-各批殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物(F4)的分子特征和組成(灰分、蛋白)
*殼質(zhì)-葡聚糖比值4次計(jì)算結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差。
根據(jù)本發(fā)明的共聚物明顯具有較高的純度。
實(shí)施例3-口服水解的殼質(zhì)-葡聚糖后，抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化、降低血液膽固醇和降血脂效應(yīng)的證實(shí) 所采用的動(dòng)物模型是給與引起動(dòng)脈粥樣化飲食的倉鼠。對(duì)倉鼠喂食富含膽固醇而缺乏抗氧化劑(維生素C、維生素E和硒)的食物，其將引起與人類粥樣斑中所出現(xiàn)的損傷類似的血脂障礙和動(dòng)脈損傷(Nistor A，Bulla A，F(xiàn)ilip DA & Radu A(1987)The hyperlipidemichamster as a model of experimental atherosclerosis.Atherosclerosis68159)。因?yàn)閭}鼠的脂質(zhì)代謝，其易于操作而且誘導(dǎo)損傷(或病變)所需時(shí)間較短(8-12周)，所以倉鼠是一種特別有用的研究動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型。因?yàn)槠鋵?duì)旨在降低膽固醇和粥樣斑的操作反應(yīng)良好，因此被選擇用來研究殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物的效應(yīng)(Kowala，MC，Nunnari，JJ，Durham，SK & Nicolosi，RJ(1991)Doxazosin andcholestyramine similarly decrease fatty streak formation in the aorticarch of hyperlipidemic hamsters.Atherosclerosis 913549)。
在該實(shí)施例中，將兩種化合物(其特征總結(jié)于表4中)投于倉鼠的每日食物中。
●42.85mg/kg/天F4水解的殼質(zhì)-葡聚糖(即，對(duì)于重70kg的人，相當(dāng)于3g/天) ●42.85mg/kg/天F7真菌來源的殼聚糖(即，對(duì)于重70kg的人，相當(dāng)于3g/天) 對(duì)照組每天通過管飼法接受水，以實(shí)現(xiàn)與其它組相同的實(shí)驗(yàn)條件并防止由于管飼壓力所導(dǎo)致的任何可能的差異。
一旦接收，即將28只重約80克的敘利亞金倉鼠置于塑料籠內(nèi)，并分為3批，每批8只，房間溫度23℃，濕度70％，光周期12小時(shí)(12N/12D)。每天測(cè)定食物消耗量和它們的體重。各組所接受的飲食(及其成分)在表5中詳細(xì)給出。
表4-F4和F7化合物的特征 表5-倉鼠飼料的組成
1無機(jī)鹽混合料包括(mg/kg飼料)CaHPO4，17200；KCl，4000；NaCl，4000；MgO，420；MgSO4，2000；Fe2O3，120；FeSO4·7H2O，200；微量元素，400(MnSO4·H2O，98；CuSO4·5H2O，20；ZnSO4·7H2O，80；CoSO4·7H2O，0.16；KI，0.32；淀粉，足量(qs)40g(每kg飼料)。該混合料不含Na2SeO3。
2維生素混合料包括(mg/kg飼料)視黃醇，12；膽鈣化甾醇，0.125；硫胺素，40；核黃素，30；泛酸，140；吡多辛，20；肌醇，300；氰鈷胺素，0.1；甲萘醌，80；煙酸，200；膽堿，2720；葉酸，10；對(duì)氨苯甲酸，100；生物素，0.6；淀粉，足量(qs)20g(每kg飼料).該混合料不含α-生育酚和抗壞血酸。
組織取樣.實(shí)驗(yàn)12周后，倉鼠禁食16小時(shí)，隨后施以腹膜內(nèi)麻醉。
血漿取樣.首先通過心內(nèi)穿刺取血樣，然后3500×g離心10分鐘?；厥昭獫{、等分并隨后儲(chǔ)存于-80℃。隨后測(cè)定這些血漿中的總膽固醇、HDL-膽固醇水平、LDL-膽固醇水平、甘油三酯、尿酸和尿素。
器官取樣.用含1mM氯化鈣和0.27％葡萄糖的磷酸鹽緩沖液(1mM，pH7.2)灌注后，取出肝臟。該操作的目的是為了除去可能含SOD和GSHPx活性的殘留血液。隨后將所述肝臟干燥、稱重并隨即儲(chǔ)存于-80℃。將在該器官上測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶活性。
用含2.5mM氯化鈣、2.5％低聚甲醛和1.5％戊二醛的0.1M二甲胂酸鈉緩沖液(pH7.4)固定血管系統(tǒng)后，取出主動(dòng)脈。隨后在雙目透鏡下取出主動(dòng)脈弓，縱向打開，固定(epingler)在一塊軟木上，然后浸入固定液中并儲(chǔ)存于4℃。將主動(dòng)脈壁的脂質(zhì)染色后，可觀察到由飲食引起的動(dòng)脈粥樣損傷。
結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以下部分將示出的值對(duì)應(yīng)于從各組(8個(gè)動(dòng)物/組)獲得的平均值±SEM(平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差)。平均值之間的顯著性通過StatView4.5軟件(ABACCUS Concept，Inc)利用Fischer檢驗(yàn)進(jìn)行變量ANOVA分析而確立。如果值具有相同的上標(biāo)字母，則表示這些值未達(dá)到P<0.05的顯著性差異。
結(jié)果 a-脂質(zhì)表面積測(cè)定.組織學(xué)染色后，按照Nunnari et al.，(NunnariJJ，Zand T，Joris I & Majno G.(1989)Quantification of oil Red Ostaining of the aorta in hypercholesterolemic rats.Exp.Mol.Pathol.51:1)描述的方法，利用裝配有照相裝置的光學(xué)顯微鏡測(cè)定脂質(zhì)沉積物的表面積。
表6-覆蓋有主動(dòng)脈脂質(zhì)沉積物的主動(dòng)脈表面積的百分比 可以注意到根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品比殼聚糖更加有效。
b-血漿測(cè)定 對(duì)血漿進(jìn)行多項(xiàng)測(cè)定 ●生物學(xué)參數(shù)測(cè)定(總膽固醇、甘油三酯、HDL、LDL、尿酸、尿素)， ●關(guān)于抗氧化能力的測(cè)定(TAS). 血漿膽固醇總量的測(cè)定.利用試劑盒No.1489232 Roche/Hitachi，Roche Diagnostics進(jìn)行分析。該分析基于Allain等(Allain CC，PoonLS，Chan CS，Richmond W & Fu PC.(1974)Enzymatic determinationof total serum cholesterol，Clin.Chem.20470)所描述的技術(shù)。
血漿甘油三酯的測(cè)定.利用試劑盒No.1488872Roche/Hitachi，Roche Diagnostics，按照Wahlefeld & Bergmeyer(Wahlefeld AW &B ergmeyer HU(1974)inMethods of enzymatic analysisS econdEdition，New York Academic Press p.1831)開發(fā)的方法進(jìn)行分析。
血漿HDL的測(cè)定.利用試劑盒No.1930672 Roche/Hitachi，Roche Diagnostics進(jìn)行分析。按照Marz & Gross(

W & Gross W.(1986)Evaluation of a phosphotungstic acid/MgCl2precipitation andquantitative lipoprotein electrophoresis assay.Clin.Chim.Acta.15833)描述的技術(shù)分離HDL。
血漿LDL的測(cè)定.利用總膽固醇含量與HDL-膽固醇含量之間的差值計(jì)算血漿LDL-膽固醇含量。
表7-生化參數(shù)總結(jié) 可以注意到本發(fā)明的產(chǎn)品具有等同于殼聚糖的效應(yīng)。
尿素的測(cè)定.利用試劑盒No.1489364 Roche/Hitachi，RocheDiagnostics進(jìn)行分析。該尿素定量分析基于Talke和Schubert(TalkeH & Schubert GE.(1965)Enzymatische Harnstoffbest timmung im blutund serum im optischen test nach Warburg.Klin.Wochenschr.43174)描述的UV動(dòng)力學(xué)方法。
尿酸的測(cè)定.利用試劑盒COBAS INTEGRA 400/700/800 UricAcid ver.2(UA2)Roche/Hitachi，Roche Diagnostics進(jìn)行分析。該分析是按照Town等(Town MH et al.，(1985)J.Clin.Chem.Clin.Biochem.23591)的改良方法進(jìn)行的酶比色測(cè)定(enzymaticcolorimetric assay)。
表8-血漿酶活性 可以注意到本發(fā)明的產(chǎn)品的血漿酶活性優(yōu)于或等同于殼聚糖。
血漿抗氧化能力的測(cè)定(TAS).該參數(shù)利用Randox No.NX2332試劑盒(Laboratoire Randox)而測(cè)定，該試劑盒的方法基于Miller等(Miller NJ，Rice-Evans C，Davies MJ，Gopinathan V & MilnerA.(1993)A novel method for measuring antioxidant capacity and itsapplication to monitoring the antioxidant status in premature neonates，Clinical Science.84407)的技術(shù)。
表9-血漿抗氧化活性 可以注意到本發(fā)明的產(chǎn)品具有完全出乎意料的血漿抗氧化活性，且其不能與抑制血漿抗氧化活性的殼聚糖相比較。
c-測(cè)定肝臟酶活性 肝臟細(xì)胞溶質(zhì)成分的制備.對(duì)細(xì)胞溶質(zhì)成分進(jìn)行肝臟酶活性測(cè)定；特別地，因?yàn)槊柑幱诩?xì)胞溶質(zhì)中，因此有必要實(shí)施兩步超速離心第一次離心是將肝組織勻漿以5％濃度于0.15M NaCl中，在4℃下以8000×g離心20分鐘，從而回收上清液。上清液隨后則在4℃下以105 000xg離心1小時(shí)。將細(xì)胞溶質(zhì)儲(chǔ)存于-80℃，以備分析。蛋白分析則按照Smith等(Smith PK et al.，(1985)Measurement ofprotein using bicinchoninic acid.Anal.Biochem.15076)利用二辛可寧酸法進(jìn)行。
谷胱甘肽過氧化物酶活性(Se-GSHPx).該酶活性的測(cè)定基于樣品利用水性過氧化氫催化谷胱甘肽氧化的能力，按照Wendel的方法(Wendel A.(1981)Glutathione peroxydase.Methods inenzymology，77327)而進(jìn)行。
表10-肝Se-GSHPx的比活性 可以注意到本發(fā)明的產(chǎn)品具有的肝酶活性等同于殼聚糖的肝酶活性。
超氧化物歧化酶活性(SOD).SOD的活性利用SOD525試劑盒(Tebu-Bio)按照Paoletti與Mocali的方法(Paoletti F & Mocali A.(1990)Determination of superoxide dismutase activity by purelychemical system based on NADCPJH oxidation，Methods Enzymology.186209)而測(cè)定。
表11肝SOD的比活性 可以注意到本發(fā)明的產(chǎn)品所具有的超氧化物歧化酶活性與殼聚糖相當(dāng)。
為了對(duì)這些結(jié)果進(jìn)行概述，表12和13將各種參數(shù)中的變化量(variation)(表示為相對(duì)于對(duì)照組的百分比(％))綜合在一起。
表12-主動(dòng)脈脂質(zhì)沉積物表面積和肝臟酶活性的變化量(表示為相對(duì)于對(duì)照組的百分比(％)) 表13-各種生化參數(shù)的變化量(表示為相對(duì)于對(duì)照組的百分比(％)) 總膽固醇、甘油三酯、HDL-膽固醇和LDL-膽固醇是能夠表明水解的殼質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖降低血液膽固醇效應(yīng)的生化參數(shù)。實(shí)際上，與對(duì)照組相比，總膽固醇和LDL-膽固醇的下降(顯著性下降，下降系數(shù)為10)能夠證實(shí)水解的殼質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖對(duì)發(fā)生粥樣斑的預(yù)防作用以及因此對(duì)心血管疾病的預(yù)防作用。
HDL-膽固醇的增加比較引人注意。這反映了一個(gè)事實(shí)，即膽固醇從周圍器官向肝臟的流動(dòng)增加，從而減少了器官和動(dòng)脈內(nèi)富含膽固醇的顆粒沉積和氧化的風(fēng)險(xiǎn)?；贔4和F7的治療能夠逆轉(zhuǎn)相比于對(duì)照的HDL/LDL水平。
覆蓋有脂質(zhì)沉積物和泡沫細(xì)胞的主動(dòng)脈弓的表面積百分比是動(dòng)脈粥樣損傷發(fā)生的直接指標(biāo)。與對(duì)照相比，兩種處理均能非常顯著地降低該百分比，其中有效水平近乎相似，均在97％左右。然而，根據(jù)喂以動(dòng)脈粥樣硬化飼料的相同倉鼠模型中所研究的分子，被認(rèn)為在降低脂質(zhì)沉積物方面非常有效的化合物例如酒多酚(winepolyphenol)表現(xiàn)為覆蓋有脂質(zhì)沉積物的主動(dòng)脈弓表面積下降70％-90％(Auger R et al.，J.Agric.Food Chem.(2005)539823；AugerR et al.，(2005)J.Agric.Food Chem.532015；Auger R et al.，(2004)J.Agric.Food Chem.525297)。
僅F4增加了血漿抗氧化能力，比對(duì)照組增加33.1％。至于抗氧化系統(tǒng)中涉及的肝臟酶活性，觀察到，相比于對(duì)照組，通過用F4和F7處理，硒依賴性谷胱甘肽過氧化物酶活性有所增加，而SOD活性則大大下降。
還可以注意到，用F4和F7處理的兩組中，血漿中尿酸和尿素極大下降(60％-70％)。所觀察到的下降反映了腎對(duì)尿酸和尿素較大的清除，其降低了高尿酸血癥的風(fēng)險(xiǎn)，而已知高尿酸血癥是促進(jìn)粥樣斑形成的參數(shù)。
所采用動(dòng)物模型的脂質(zhì)譜及相關(guān)參數(shù)的很大改善，使得能夠推斷經(jīng)常性攝入水解的殼質(zhì)-葡聚糖對(duì)于預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化甚至肥胖均有益，效果可與攝入殼聚糖相比擬，甚至更好。
實(shí)施例4 口服殼質(zhì)-葡聚糖對(duì)大鼠胃腸道、血糖譜和脂質(zhì)譜的影響 流程 所采用的模型是正常大鼠，給與其富含果糖(21％)的標(biāo)準(zhǔn)飼料和飲品，其通過肝的快速果糖代謝而促進(jìn)肝脂肪變性，引起高甘油三酯血癥和高胰島素血癥以及骨骼肌和肝內(nèi)胰島素作用的下降。
將殼質(zhì)-葡聚糖(表14)以10％的比率投于大鼠的日常飲食中，該比率是能夠在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生急性效應(yīng)的劑量。研究了其短期和長期效應(yīng)。對(duì)照組接受富含果糖的標(biāo)準(zhǔn)飼料(表15)。將10只重約100-125g的雄性Wistar大鼠分入兩組(對(duì)照/處理)置于籠內(nèi)，房間溫度23℃、濕度70％，光周期12小時(shí)(12N/12D)。
每周測(cè)定一次飼料消耗量和體重變化。處理2周后，估算24小時(shí)的糞便量及其中的水含量。適應(yīng)期(1周，在該過程中動(dòng)物接受不富含果糖的標(biāo)準(zhǔn)飼料)后，對(duì)存在殼質(zhì)-葡聚糖下的胃排空和血糖反應(yīng)進(jìn)行評(píng)估。大鼠斷食18小時(shí)。處理組通過管飼法接受葡萄糖-對(duì)乙酰氨基酚-殼質(zhì)-葡聚糖(10％)溶液，而對(duì)照組則接受葡萄糖-對(duì)乙酰氨基酚溶液。在2小時(shí)期間取血樣(血葡萄糖水平、血胰島素水平、對(duì)乙酰氨基酚)。同樣，處理3周后，對(duì)不存在殼質(zhì)-葡聚糖下的胃排空和血糖反應(yīng)進(jìn)行評(píng)估。在該情形中，大鼠斷食18小時(shí)，并通過管飼法給與葡萄糖-對(duì)乙酰氨基酚溶液2天。在2小時(shí)期間取血樣(血葡萄糖水平、血胰島素水平、對(duì)乙酰氨基酚)。在處理第3周的過程中，大鼠斷食18小時(shí)。隨后評(píng)估口盲腸傳輸(或運(yùn)轉(zhuǎn))時(shí)間。將用卡紅溶液著色的飼料給與大鼠。測(cè)定第一次出現(xiàn)有色糞便的時(shí)間。
處理4周后，麻醉大鼠并實(shí)施剖腹術(shù)。將來自門靜脈和腔靜脈的血液離心，以回收血清和/或血漿。利用血清和/或血漿分析血脂(總膽固醇、HDL-膽固醇、LDL-膽固醇)和血糖(葡萄糖、胰島素)譜。取出各種器官、稱重并儲(chǔ)存以評(píng)估盲腸發(fā)酵(盲腸增殖、盲腸pH、短鏈羧酸含量)、肝臟和糞便的脂質(zhì)含量以及脂肪量(睪丸脂肪組織和內(nèi)臟脂肪組織的重量)。
結(jié)果 結(jié)果表明經(jīng)常性攝入殼質(zhì)-葡聚糖促進(jìn)大鼠模型中平衡的腸內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)以及血脂和血糖譜的平衡穩(wěn)態(tài)。觀察到“纖維效應(yīng)”對(duì)與代謝性疾病例如高膽固醇血癥、糖尿病或者甚至代謝綜合征和肥胖等直接相關(guān)的參數(shù)(或因素)具有預(yù)防效應(yīng)。實(shí)際上，纖維降低食物的熱量密度(千卡數(shù)/100g)，顯著減慢胃排空和食物消化，并且顯著減少胰島素分泌。這些效應(yīng)共同引起熱量消耗的自發(fā)下降和饑餓感的自發(fā)下降。
殼質(zhì)-葡聚糖誘導(dǎo)盲腸水平的發(fā)酵。該發(fā)酵過程伴隨短鏈脂肪酸生成，相比于對(duì)照組，接受殼質(zhì)-葡聚糖的組通過影響上皮細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，其短鏈脂肪酸生成顯著較高。因此這促進(jìn)萎縮風(fēng)險(xiǎn)的下降、促進(jìn)受損腸上皮的恢復(fù)、和/或促進(jìn)對(duì)細(xì)胞過度增殖的抑制。
表14-殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的分子特征和組成 表15-大鼠飼料組成(標(biāo)準(zhǔn)AO4飼料，UAR，法國) 表16-相比于對(duì)照組，已攝入殼質(zhì)-葡聚糖的大鼠組的生化和生理參數(shù)變化


顯著低于對(duì)照組的值(p<0.05)；

顯著高于對(duì)照組的值(p<0.05)；

未顯著改變(p<0.05) 實(shí)施例5 殼質(zhì)-葡聚糖的吸水能力 為了模擬殼質(zhì)-葡聚糖在胃腸道中的行為，使粉狀殼質(zhì)-葡聚糖在與水、NaCl和不同pH下的水溶液接觸。攪拌接觸12小時(shí)后，通過離心分離殼質(zhì)-葡聚糖，并測(cè)定濕重。
表17-殼質(zhì)-葡聚糖在不同介質(zhì)中的溶脹度(每100g干殼質(zhì)-葡聚糖吸收的水(g)) 結(jié)果 從本實(shí)施例可以看出，殼質(zhì)-葡聚糖能夠吸收大約6倍于其本身質(zhì)量的水或水性介質(zhì)，其與已知的商業(yè)化不溶性膳食纖維(例如半纖維素和果膠)具有相同數(shù)量級(jí)的溶脹度(吸收4-8倍于其自身質(zhì)量的水)。
實(shí)施例6 證實(shí)倉鼠口服殼質(zhì)-葡聚糖后抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化、降低血液膽固醇和降低血脂的效應(yīng) 流程 所采用的模型與實(shí)施例3中示出的相同。在本實(shí)施例中，在倉鼠每日飲食中給與兩種化合物，將這兩種化合物的特征總結(jié)于表18中 ●CG2組42.85mg/kg/天的殼質(zhì)-葡聚糖(即，對(duì)于重70kg的人，相當(dāng)于2g/天) ●CG1.5組21.43mg/kg/天的殼質(zhì)-葡聚糖(即，對(duì)于重70kg的人，相當(dāng)于1.5g/天) ●Cs2組28.57mg/kg/天的殼聚糖(即，對(duì)于重70kg的人，相當(dāng)于2g/天) 對(duì)照組每天通過管飼法接受水，以實(shí)現(xiàn)相同的實(shí)驗(yàn)條件。
表18-殼質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖化合物的特征 一旦接收，則將48只重約100g的敘利亞金倉鼠置于實(shí)施例3的相同實(shí)驗(yàn)條件下。每天測(cè)定飼料消耗量及其體重。各組飼以實(shí)施例3中示出的相同飼料(表5)。
結(jié)果 取樣、統(tǒng)計(jì)分析和分析方法與實(shí)施例3中所示出的相同。所有結(jié)果均示于表19中。
表19-與對(duì)照組相比，已攝入殼質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖的倉鼠組的生化參數(shù)的變化


顯著低于對(duì)照組的值(p<0.05)；

顯著高于對(duì)照組的值(p<0.05) 從本實(shí)施例可以看出，殼質(zhì)-葡聚糖使飼以動(dòng)脈粥樣硬化飲食的大鼠的生化參數(shù)發(fā)生與實(shí)施例3中所研究的產(chǎn)物相同的變化。以所研究的兩個(gè)劑量，殼質(zhì)-葡聚糖大大改善脂質(zhì)譜和相關(guān)參數(shù)。因此，殼質(zhì)-葡聚糖的經(jīng)常性攝入在動(dòng)脈粥樣硬化甚至相關(guān)病狀的預(yù)防中是有益的。
權(quán)利要求
1.至少一種主要包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的真菌來源的多糖用于制造給予人類或動(dòng)物、優(yōu)選哺乳動(dòng)物的口服組合物、用于獲得選自由以下效應(yīng)組成的組中的效應(yīng)的應(yīng)用，該組包括抗氧化、降低血膽固醇或降低血脂的效應(yīng)、對(duì)免疫系統(tǒng)的刺激效應(yīng)、尤其是在糖尿病情況下的降血糖效應(yīng)、飽腹效應(yīng)、改善食物轉(zhuǎn)運(yùn)的效應(yīng)以及預(yù)防和/或治療和/或?qū)惯x自由血脂障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖、肥胖相關(guān)疾病、心血管疾病、代謝綜合征、糖尿病和高尿酸血癥組成的組中的病癥的效應(yīng)。
2.至少一種在水性或有機(jī)介質(zhì)中不可溶的真菌來源的多糖用于制造口服組合物的應(yīng)用，所述多糖主要包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物。
3.至少一種包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的真菌來源的多糖用于制造口服組合物的應(yīng)用，所述殼質(zhì)-葡聚糖共聚物中殼質(zhì)與β-葡聚糖的比值在70:30和20:80之間。
4.至少一種主要包含如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所定義的多糖的真菌來源的提取物用于制造口服組合物的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述多糖的殼質(zhì)-葡聚糖多糖按質(zhì)量計(jì)占所述真菌來源的提取物總質(zhì)量的70％以上，優(yōu)選85％以上。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于使用黑曲霉作為真菌來源。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于利用前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所定義的多糖的水解產(chǎn)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述殼質(zhì)-葡聚糖水解產(chǎn)物所具有的殼質(zhì)與β-葡聚糖的比值在60:40和15:85(m/m)之間。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的殼質(zhì)部分的至少85％是N-乙酰-D-葡糖胺單元，并且至多15％是D-葡糖胺單元。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述組合物旨在用于實(shí)現(xiàn)降低血液膽固醇或降低血脂的效應(yīng)。
11.口服食品補(bǔ)充劑組合物，其包括至少一種真菌來源的多糖或提取物作為活性成分，其中所述多糖或提取物主要包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物或其水解產(chǎn)物，所述殼質(zhì)-葡聚糖共聚物或其水解產(chǎn)物包括的殼質(zhì)與β-葡聚糖的比值在50:50和10:90之間。
12.口服的藥物組合物，其包括至少一種真菌來源的多糖或提取物作為活性成分，其中所述多糖或提取物主要包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物或其水解產(chǎn)物，所述殼質(zhì)-葡聚糖共聚物或其水解產(chǎn)物包括的殼質(zhì)與β-葡聚糖的比值在50:50和10:90之間。
全文摘要
本發(fā)明涉及至少一種主要包括殼質(zhì)-葡聚糖共聚物的真菌來源的多糖用于制造口服組合物的應(yīng)用。特別地，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防、治療或?qū)褂绕涫茄系K、高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，并刺激生物體的抗氧化活性，刺激免疫系統(tǒng)，在糖尿病中發(fā)揮有利的降血糖作用，并增加飽腹感以將代謝綜合征降至最低的藥物組合物或食品補(bǔ)充劑組合物。
文檔編號(hào)A61K38/00GK101472602SQ200780022322
公開日2009年7月1日 申請(qǐng)日期2007年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月21日
發(fā)明者皮埃爾-路易斯·泰塞德爾, 奧雷莉·博爾內(nèi), 山德里內(nèi)·戈蒂埃, 讓-米歇爾·布呂耶爾, 讓-馬克斯·魯阿內(nèi) 申請(qǐng)人:基多塞米股份公司