專利名稱：：喜樹(shù)堿-細(xì)胞滲透肽綴合物和含有其的藥物組合物的制作方法喜樹(shù)堿-細(xì)胞滲透肽綴合物和含有其的藥物組合物本發(fā)明涉及一種在治療藥劑向靶細(xì)胞或者組織的改進(jìn)輸送中使用的新化合物，包含其的組合物及其用途。所述化合物更特別地是肽部分和喜樹(shù)堿的綴合物，其衍生物或者類似物，它們提供許多益處，包括水溶性、藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布的提高，治療指數(shù)的增加，和患者體內(nèi)代謝變異性的限制以及生物活性成分向靶細(xì)胞或者組織輸送的改進(jìn)。
背景技術(shù)：
：喜樹(shù)堿(CPT)是六十年代發(fā)現(xiàn)的從喜樹(shù)(Ow7^o^ecaacw/w'朋to)提取的生物堿(Wall等，J.Amer.Chem.Soc.88:3888-3890(1966))。這種不溶于水的分子顯示非常強(qiáng)的抗腫瘤活性，但由于很強(qiáng)的膀胱毒性和嚴(yán)重的腹瀉限制了它在臨床上的應(yīng)用(Gottlieb等，CancerChemother.Rep.54:461-470(1970),Moertel等，CancerChemother.Rep.56:95-101(1972))。結(jié)構(gòu)-活性研究已經(jīng)鑒定出兩種水溶性的抗腫瘤衍生物，它們目前在市場(chǎng)上銷售依立替康(irinotecan，CPT-ll，Campto,Camptosar)禾口托泊替康(topotecan，Hycamtin,水溶性的喜樹(shù)堿衍生物)。這兩種分子是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的特異性抑制劑，所述DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I誘導(dǎo)DNA的單鏈斷裂從而阻斷DNA復(fù)制(Hsiang等，J.Biol.Chem.260:14873-14878(1985),Kawato等，CancerRes.51:4187-4191(1991),Satoh等，Biol.Pharm.Bull.17:662-664(1994))。依立替康是SN38的水溶性前體藥物(7-乙基-10-羥基-喜樹(shù)堿)，而SN38是肝酶切割依立替康后釋放的活性代謝產(chǎn)物。SN38是一種有效的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，作為抗增殖劑時(shí)其活性至少是依立替康的2000倍。但是，SN38是高度不溶于水的，需要輸送系統(tǒng)以使其充足的給藥和生物利用率。和許多喜樹(shù)堿衍生物一樣，SN38包含對(duì)于抗腫瘤功效非常重要的內(nèi)酯環(huán)。該內(nèi)酯環(huán)在生理或者堿性PH下是不穩(wěn)定的，導(dǎo)致活性藥物轉(zhuǎn)化為無(wú)活性的羧酸形式(Chabot，Clin.Pharmacokinetics,33:245-259(1997))。依立替康被廣泛用于結(jié)腸癌的治療。但是，它受到幾個(gè)限制。給藥后，依立替康必須轉(zhuǎn)化為有活性的SN38。在人類中依立替康經(jīng)肝酶轉(zhuǎn)化為活性藥物SN38是非常少的(Rohtenberg等，J.Clin.Oncology11:2194-2204(1993),Senter等，BioconjugateChem.12:1074-1080(2001))。只有2-8°/。的依立替康給藥劑量被肝和腫瘤羧酸酯酶(CES)切割為親脂性的代謝產(chǎn)物SN38(Senter等，BioconjugateChem.12:1074-1080(2001)，Xu等，Clin.CancerRes.8:2605-2611(2002))。對(duì)這種分解代謝動(dòng)力學(xué)的分析證明了歸因于遺傳和環(huán)境因素的重要患者體內(nèi)異質(zhì)性，這可以影響酶的活性直至10倍(Chamsson等,DrugMetab.Dispos.30:731-733(2002))。這導(dǎo)致依立替康代謝在個(gè)體體內(nèi)高水平的變異性，影響依立替康的耐受性和功效并顯著的將患者治療復(fù)雜化(Ohe等，J.Natl.CancerInst.84:972-974(1992)，Gupta等，CancerRes.54:3723-3725(1994)，Slatter等，DrugMetab.Dispos.28:423-433(2000)，Kraut等，ASCOabstractNo:2501,2004)。SN38在肝臟中被尿苷二磷酸葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1A1(UGT1A1)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化(解毒)為SN38-葡糖苷酸(SN38-G)，一種無(wú)活性的葡糖醛酸-綴合物。葡萄苷酸化使分子具有親水性，允許其通過(guò)膽汁的胃腸道排泄。一旦進(jìn)入腸內(nèi)，SN38-G被腸內(nèi)細(xì)菌群落(beta-葡糖醛酸酶)重新轉(zhuǎn)化為SN38。依立替康本身主要被排泄入膽汁(>26°/。)，并且能夠被腸內(nèi)的CES轉(zhuǎn)化為SN38(M.Horikawa,PharmaceuticalRes.,19:1345-1353(2002))。SN38在腸內(nèi)的這種局部積聚造成依立替康治療后觀察到的高水平的遲發(fā)腸內(nèi)毒性(腹瀉)，這是依立替康主要的一個(gè)劑量限制毒性(Xie等，Clin.Pharmacol.Ther;72:265-275(2002)，Alimonti等，CancerTreatmentRev.30:55-562(2004))。遲發(fā)腹瀉是嚴(yán)重的(例如危急生命)，有時(shí)與發(fā)燒一起出現(xiàn)。依立替康另一個(gè)顯著的毒性是白細(xì)胞減少(例如中性白細(xì)胞減少)。血液學(xué)紊亂可能導(dǎo)致嚴(yán)重的發(fā)育不良，有時(shí)并發(fā)全身感染。治療后觀察到的這些嚴(yán)重的副作用造成對(duì)患者的輔助醫(yī)院護(hù)理(更長(zhǎng)的住院；抗腹瀉治療；預(yù)防性抗生素療法)(Kehrer等，Clin.CancerRes.7:1136-1141(2001))。已經(jīng)在臨床試驗(yàn)中證明依立替康的劑量提高/強(qiáng)化獲得改進(jìn)的治療應(yīng)答。這種劑量作用已經(jīng)在患有轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌的患者中得到證明(Ychou等，CancerChemother.Pharmacol.50:383-391(2002),VanCutsem等，Br.J.Cancer.92:1055-1062(2005))。但是，如上所述的嚴(yán)重副作用限制了可以給予個(gè)體的劑量，這減弱了依立替康的潛在功效。人類癌癥與喜樹(shù)堿衍生物的反復(fù)接觸可導(dǎo)致抗藥性的產(chǎn)生(Nakagawa等，CancerLettersinpress(2005))。這種特性不僅引起喜樹(shù)堿衍生物治療后功效的降低，而且造成其他常用抗癌劑治療后的功效降低。因此如上所述，對(duì)發(fā)展一種能夠克服喜樹(shù)堿衍生物(例如SN38)局限性的合適輸送系統(tǒng)存在很大的興趣。己經(jīng)提出不同的策略輸送喜樹(shù)堿衍生物，例如SN38的脂質(zhì)體制劑(在NEOPHARM提交的公開(kāi)號(hào)為WO2004/035032的PCT專利申請(qǐng)中描述)，SN38的納米顆粒制劑(在IMARX提交的公開(kāi)號(hào)為WO03/103596的PCT專利申請(qǐng)中描述)，聚谷氨酸-喜樹(shù)堿綴合物(在CELLTHERAPEUTICS提交的公開(kāi)號(hào)為WO01〃0275的PCT專利申請(qǐng)中描述)或者喜樹(shù)堿的聚合衍生物例如PEG-喜樹(shù)堿綴合物(在ENZON提交的公開(kāi)號(hào)為WO03/097356和DEBIO提交的公開(kāi)號(hào)為WO03/031467的PCT專利申請(qǐng)中描述)或者20-O-[甘氨酰-氨基?；?甘氨酰]-喜樹(shù)堿的聚合綴合物(在PHARMACIA&UPJOHN提交的公開(kāi)號(hào)為WO99/17804的PCT專利申請(qǐng)中描述)。CYCLACEL提交的公開(kāi)號(hào)為WO00/01417的PCT專利申請(qǐng)還描述了肽藥物輸送系統(tǒng)，其目的在于促進(jìn)不同藥物的輸送，例如10-羥基喜樹(shù)堿。該專利申請(qǐng)描述了使用衍生自果蠅觸足同源蛋白("raso;/n7aa"&ww;e^ahomoprotein)(優(yōu)選稱為穿膜肽(penetratin)的細(xì)胞滲透肽(cellpenetratingpeptide,CPP))的同源異形框肽綴合多種細(xì)胞毒藥物，從而增強(qiáng)它們的輸送和/或治療作用。但是，該專利申請(qǐng)沒(méi)有顯示利用所述綴合物進(jìn)行的任何體外或者體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。因此申請(qǐng)人利用該專利申請(qǐng)WO00/01417的實(shí)施例29描述的綴合物在體外進(jìn)行了人血清穩(wěn)定性研究。這些研究顯示該綴合物的半衰期(穩(wěn)定性)小于三分鐘，這看起來(lái)對(duì)于體內(nèi)治療有效量的喜樹(shù)堿衍生物的胞內(nèi)輸送是不充分的。DIATOS提交的公開(kāi)號(hào)為WO01/64738的PCT專利申請(qǐng)涉及一些與氨基聚糖反應(yīng)的氨基酸序列，并從外部基質(zhì)將大量活性物質(zhì)(即核酸、蛋白、藥物、抗原或者抗體)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)部，更特別地是細(xì)胞核。這類序列來(lái)自人類蛋白，因此當(dāng)給予需要治療的人時(shí)是非免疫原性的細(xì)胞滲透肽(CPP)。因此需要活性化合物(例如SN38)的增強(qiáng)的輸送效率、安全性和功效。在本發(fā)明研究范圍內(nèi)，申請(qǐng)人合成了不同的CPP-喜樹(shù)堿衍生物綴合物。然后在體外和體內(nèi)鑒定這些綴合物的穩(wěn)定性、功效和毒性。尤其是本發(fā)明的目的是提供一種化合物，所述化合物減輕或者減少喜樹(shù)堿衍生物例如依立替康的上述缺點(diǎn)和不希望的副作用。尤其是本發(fā)明旨在提供一種化合物，所述化合物能夠改進(jìn)采用藥學(xué)上可接受形式的生物活性物質(zhì)的可溶性，具有足夠的穩(wěn)定性以允許有效的胞內(nèi)輸送，減少毒性或者不希望的副作用，增強(qiáng)所需治療功效作用的發(fā)生，提供藥物給藥的替代途徑，減少患者體內(nèi)的變異性，和/或調(diào)節(jié)藥物的組織分布和代謝。發(fā)明概述根據(jù)第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種包括與載體部分連接的藥物部分的綴合物，其中所述載體部分包括一種肽或者其類似物，所述肽或者其類似物促進(jìn)有效負(fù)載(例如藥物部分)滲透入細(xì)胞或者組織并且具有以下能力增加藥物的可溶性，調(diào)節(jié)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)、代謝和組織分布性質(zhì)，和/或降低抗藥性的發(fā)生，和所述藥物部分是任意的喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物。本文中所述肽或者其類似物還被稱為細(xì)胞滲透肽(CPP)。本發(fā)明還涉及包括這種綴合物的藥物組合物及其治療用途，尤其是用于各種類型疾病包括癌癥的治療。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示給狗輸注DPV1047-MIC-SN38(10、20、50mg/kg，黑色柱)、DPV1047-BCH-SN38(5、10(n=2)、20mg/kg，灰色柱)和依立替康(30mg/kg,白色柱)后SN38的血液AUC。圖2顯示輸注DPV1047-MIC-SN38(50mg/kg)和DPV1047-BCH-SN38(10mg/kg)后DPV1047-MIC-SN38、DPV1047-BCH-SN38和SN38的血液AUC。▲:DPV1047-MIC-SN38;T:來(lái)自DPV1047-MIC-SN38的SN38;翻DPV1047-BCH-SN38;:來(lái)自DPV1047-BCH-SN38的SN38。在輸注到達(dá)定量的極限(7.8ng/mLeqSN38)結(jié)束時(shí)測(cè)量AUC;DPV1047-MIC-SN38和DPV1047-BCH-SN38在它們各自的劑量AUC=AUC0-4.42h。發(fā)明詳述根據(jù)一個(gè)特定的實(shí)施方案，本發(fā)明提供一種綴合物，所述綴合物包括至少一種喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物，更優(yōu)選包括化合物SN38，所述SN38與載體部分連接，優(yōu)選通過(guò)連接子基團(tuán)連接。載體部分包括一種肽或者其類似物，所述肽或者其類似物促進(jìn)有效負(fù)載(例如藥物部分)滲透入細(xì)胞或者組織并且具有以下能力增加藥物部分的可溶性，調(diào)節(jié)藥物部分的藥代動(dòng)力學(xué)、代謝和組織分布性質(zhì)，減少患者體內(nèi)的變異性，和/或降低抗藥性的發(fā)生。本發(fā)明的綴合物包括它們的鹽、光學(xué)和幾何異構(gòu)體或者其混合物。所述綴合物的鹽尤其是堿或者酸加成鹽，優(yōu)選適合藥物用途。在藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸中，非限制性的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。在藥學(xué)上可接受的有機(jī)酸中，非限制性的實(shí)例包括乙酸，三氟乙酸，乳酸，丙酮酸，丙二酸，琥珀酸，戊二酸，反丁烯二酸，酒石酸，馬來(lái)酸，檸檬酸，苯甲酸，抗壞血酸，甲磺酸，乙磺酸，2-羥基乙磺酸和樟腦酸。在藥學(xué)上可接受的堿中，非限制性的實(shí)例包括氫氧化鈉，氫氧化鉀，三乙胺和叔丁基胺。優(yōu)選地，本發(fā)明的綴合物采用鹽酸鹽形式。有利地，載體部分與藥物(即喜樹(shù)堿衍生物)的綴合導(dǎo)致所述藥物的藥代動(dòng)力學(xué)性能相對(duì)于非綴合藥物的改變。有利地，所述載體部分包括帶正電荷的部分(即堿性氨基酸)，其在綴合物的水溶液中誘導(dǎo)低pH(例如pH值<6.5)。這種酸性pH有助于藥物組合物中喜樹(shù)堿衍生物的內(nèi)酯基團(tuán)的穩(wěn)定(內(nèi)酯形式〉95%),因此可使注射到活體動(dòng)物或者人類個(gè)體后內(nèi)酯和羧酸形式的血漿平衡有利于內(nèi)酯形式(>大約55%的內(nèi)酯形式)(Kaneda等，Biol.Pharm.Bull.20:992-996(1997))。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是通過(guò)藥物與載體部分的綴合，還改變(即調(diào)節(jié))所述藥物的組織分布進(jìn)而改變其體內(nèi)代謝。與活化依立替康的肝羧酸酯酶相比，代謝的改變包括利用血漿以及組織酯酶切割本發(fā)明的綴合物?？偟膩?lái)說(shuō)，本發(fā)明改變的組織分布(即肝攝取降低)和輸送系統(tǒng)避免了肝活化本發(fā)明綴合物的需要，導(dǎo)致個(gè)體內(nèi)治療變異性的降低和腸毒性的下降(與依立替康相比)，此外輸送超過(guò)60°/。的活性代謝產(chǎn)物(即治療活性形式的藥物)例如SN38。有利地，本發(fā)明的綴合物顯示足夠的穩(wěn)定性以允許輸送治療有效量的循環(huán)性和細(xì)胞性喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物。優(yōu)選地，本發(fā)明的綴合物包括通過(guò)連接子基團(tuán)與載體部分連接的至少一個(gè)喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物，其中所述載體部分是細(xì)胞滲透肽，并且其中在體外37'C的人血漿中綴合物的半衰期(即具有50%摩爾比的由本發(fā)明綴合物釋放的游離喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物的時(shí)間)等于或者超過(guò)5分鐘。術(shù)語(yǔ)"綴合"或者"綴合的"是指共價(jià)、離子或者疏水性相互作用，從而分子的各部分被結(jié)合在一起并保持非常接近。術(shù)語(yǔ)"反應(yīng)的"具有對(duì)于化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)常見(jiàn)的含義。術(shù)語(yǔ)"連接子"或者"交聯(lián)劑"在本文中可以互換使用，是指將兩個(gè)部分偶聯(lián)/連接在一起的鏈，其包括一或多個(gè)原子。術(shù)語(yǔ)"體外"具有本領(lǐng)域公知的含義，例如細(xì)胞培養(yǎng)物，涉及純化的試劑或者提取物，例如細(xì)胞提取物。術(shù)語(yǔ)"體內(nèi)"也具有本領(lǐng)域公知的含義，例如涉及生物體內(nèi)的活細(xì)胞和/或生物體內(nèi)的任意細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)"藥代動(dòng)力學(xué)"表示藥物被機(jī)體吸收、分布、代謝和清除的過(guò)程。通常將藥物及其代謝物的血液、血漿或者血清濃度的演變作為時(shí)間函數(shù)來(lái)鑒定藥代動(dòng)力學(xué)性能。觀察時(shí)間可以包括大約5分鐘至大約24小時(shí)或者更長(zhǎng)的時(shí)間。術(shù)語(yǔ)"血槳藥代動(dòng)力學(xué)"是指藥物及其代謝物的血液、血漿或者血清濃度隨時(shí)間的演變。術(shù)語(yǔ)"組織分布"被定義為在指定時(shí)間內(nèi)不同組織與藥物或者其代謝產(chǎn)物的相對(duì)或者絕對(duì)接觸，所述組織即肝，肺，胃，腸，胰腺，腦，膀胱，卵巢，睪丸，前列腺，子宮，皮膚，肌肉，脾，淋巴結(jié)，腫瘤或者任意其他相關(guān)器官。根據(jù)組織中藥物或者代謝產(chǎn)物濃度的演變作為時(shí)間函數(shù)確定組織分布。術(shù)語(yǔ)"肽，，是指氨基酸的聚合物，其中書寫習(xí)慣是N或者氨基端在左邊，C或者羧基端在右邊。20個(gè)最常見(jiàn)的天然L-氨基酸可以選擇用3個(gè)字母或者1個(gè)字母表示。本文使用的肽被認(rèn)為包括"肽類似物"，含有對(duì)L-氨基酸側(cè)鏈或者a-氨基酸骨架的一或多個(gè)修飾的結(jié)構(gòu)修飾。骨架修飾肽類似物的實(shí)例是N-甲基甘氨酸"擬肽"(Zuckermann等，J.Amer.Chem.Soc.114:10646-47(1992))。術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞滲透肽"(CPP)被定義為能夠穿過(guò)生物膜或者生理屏障的載體肽。細(xì)胞滲透肽還被稱為細(xì)胞可滲透肽，蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(PTD)或者膜易位序列(MTS)。CPP具有以下能力在體外和/或體內(nèi)易位哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜并進(jìn)入細(xì)胞和/或細(xì)胞核，以及指導(dǎo)感興趣的綴合的化合物例如藥物或者標(biāo)記到需要的細(xì)胞終點(diǎn)。因此，CPP能夠指導(dǎo)或者促進(jìn)感興趣的化合物滲透穿過(guò)磷脂、線粒體膜、內(nèi)體膜或者核膜。CPP還能夠指導(dǎo)感興趣的化合物從細(xì)胞外部穿過(guò)質(zhì)膜，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)或者胞漿或者到達(dá)細(xì)胞內(nèi)的預(yù)定位置，例如核，線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，溶酶體或者過(guò)氧化物酶體?；蛘呋蛘叽送?，CPP能夠指導(dǎo)感興趣的化合物穿過(guò)血腦屏障或者h(yuǎn)ematoretinal屏障、跨粘膜屏障、皮膚、胃腸屏障和/或肺部屏障。己經(jīng)發(fā)18現(xiàn)數(shù)種蛋白和它們的肽衍生物具有細(xì)胞內(nèi)化作用性質(zhì)，包括但不限于1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)蛋白Tat(Ruben等J.Virol.63，1-8(1989))，皰疹病毒被膜蛋白VP22(Elliott和O'Hare,Cell88,223-233(1997》，穿膜肽(Derossi等，J.Biol.Chem.271，18188-18193(1996))，protegrin1(PG-l)抗微生物肽SynB(Kokryakov等，F(xiàn)EBSLett.327，231-236(1993))和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Jans，F(xiàn)asebJ.8,841-847(1994))。這些載體肽之間幾乎沒(méi)有序列同源性，但均是高度陽(yáng)離子的，并且富含精氨酸或者賴氨酸。實(shí)際上，已經(jīng)示出合成的多聚精氨酸肽被高效的內(nèi)化(Futaki等，J.Mol.Recognit.16,260-264(2003);Suzuki等，J.Biol.Chem.(2001))。因此，在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的綴合物提供選自下列物質(zhì)的CPP:1型人免疫缺陷病毒(HIV-l)蛋白Tat,皰疹病毒被膜蛋白VP22，穿膜肽，protegrin1(PG-1)抗微生物肽SynB，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，合成的多聚精氨酸肽，或者具有細(xì)胞內(nèi)化作用性質(zhì)的其肽衍生物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特定方面，CPP包括具有下式(I)的氨基酸序列C(Xl)p[(X)o(B)n(X)sBX(X)rXB]m(X2)qC(I)g巾XI和X2獨(dú)立地是1到20個(gè)氨基酸的氨基酸序列；p和q獨(dú)立地是0和5之間的整數(shù)，優(yōu)選是O或者l;B獨(dú)立地是堿性氨基酸，X獨(dú)立地是非堿性氨基酸；C獨(dú)立地是不存在的或者是包括與綴合物的其余部分連接的硫醚鍵的任意部分，優(yōu)選所述部分是半胱氨酸或者半胱胺；m是l或者2;n是1、2或者3;o是0或者1;r是0或者l;s是0、1、2或者3。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，CPP來(lái)源于人類蛋白，因此避免了給予人類時(shí)的免疫原性。根據(jù)所述的特定實(shí)施方案，CPP是包括如上限定的式(I)所示氨基酸序列的肽。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的CPP還能夠溶解高親脂性的分子和/或與未綴合到本發(fā)明CPP的所述分子相比，改變它們的藥代動(dòng)力學(xué)和組織19分布。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的載體部分包括在體外和/或體內(nèi)能夠與細(xì)胞表面的糖胺聚糖類反應(yīng)的CPP。這類CPP在DIATOS提交的PCT專利申請(qǐng)WO01/64738和WO05/016960以及DeCoupade等(BiochemJ.390:407-18(2005))中有描述。這些肽是源自人肝素結(jié)合蛋白和/或抗DNA抗體的氨基酸序列，所述人肝素結(jié)合蛋白和/或抗DNA抗體選自脂蛋白例如人載脂蛋白B或者E(Cardin等，Biochem.Biosphys.Res.Com.154:741(1988))，agrine(Campanelli等，Development122:1663-1672(1996))，胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白(Fowlkes等，Endocrinol.138:2280-2285(1997))，人血小板衍生生長(zhǎng)因子(Maher等，MolCell.Biol.9:2251-2253(1989))，人胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)(Inoue等，F(xiàn)EBS269:89-92(1990))，人肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子(HB-EGF)(Arkonac等，J.Biol.Chem.273:4400-4405(1998))，酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)(Fromm等，Arch.Biochem.Bioph.343:92(1997))，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)(Yayon等，Cell64:841-848(1991))，人腸粘蛋白2序列(Xu等，GlyconjugJ.13:81-90(1996))，人y干擾素(Lortat-Jacob&Grimaud，F(xiàn)EBS280:152-154(1991))，人白介素12的亞基p40(Hasan等，J.Immunol.162:1064-1070(1999))，源自基質(zhì)細(xì)胞的因子1-a(Amara等，J.Biol.Chem.272:200-204(1999))，人中性粒細(xì)胞衍生"肝素結(jié)合蛋白"(CAP37/天青殺素)(Pohl等，F(xiàn)EBS272:200-204(1990))，免疫球蛋白分子例如抗DNA單克隆鼠抗體F4.1的CDR2禾n/或CDR3區(qū)(Avrameas等，Proc.Natl.Acad.Sci.95:5601(1998))，人抗DNA單克隆抗體RTT79的高變CDR3區(qū)(Stevenson等，J.Autoimmunity6:809(1993))，人抗DNA單克隆抗體NE-l的高變區(qū)CDR2和/或CDR3(Hirabayashi等，Scand.J.Immunol.37:533(1993))，人抗DNA單克隆抗體RT72的高變區(qū)CDR3(Kalsi等，Lupus4:375(1995))。CPP與糖胺聚糖類(GAGs)反應(yīng)/結(jié)合的能力可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的直接或者間接糖胺聚糖結(jié)合分析確定，例如PCT專利申請(qǐng)WOOO/45831中描述的用于肽糖胺聚糖結(jié)合的親和共同電泳(ACE)分析。本領(lǐng)域還有數(shù)種其他公知的方法用于分析GAG-肽相互作用，例如PCT專利申請(qǐng)WO01/64738或者Weisgraber和Rail(J.Biol.Chem.，262(33):11097畫103)描述的方法(利用載脂蛋白B-100的特定實(shí)例)；或者通過(guò)改良的ELISA試驗(yàn):96孔板用特定GAG(硫酸軟骨素A、B禾nC，肝素，硫酸肝素，透明質(zhì)酸，硫酸角蛋白，多配體聚糖)包被，然后添加與標(biāo)記綴合的肽指定時(shí)間；充分洗滌后，利用與所述標(biāo)記物相關(guān)的特異性分析確定肽結(jié)合。CPP可以是任意長(zhǎng)度。例如CPP的長(zhǎng)度是小于或等于500，250，150，100，50，25，10，6或者4個(gè)氨基酸。例如CPP的長(zhǎng)度是大于或等于4，6，10，25，50，100，150，250或者500個(gè)氨基酸。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以輕易的確定CPP的合適長(zhǎng)度及設(shè)計(jì)。對(duì)于CPP的一般參考文獻(xiàn)可以引用CELLPENETRATINGPEPTIDES:PROCESSESANDAPPLICATIONS,UloLangel編輯(2002);或者AdvancedDrugDeliveryReviews57:489-660(2005)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，CPP的長(zhǎng)度是5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24或者25個(gè)氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，CPP包括長(zhǎng)度小于50個(gè)、優(yōu)選小于25個(gè)氨基酸的式(I)所示的氨基酸序列。通常，式(I)所示的氨基酸序列多于8個(gè)氨基酸，優(yōu)選多于10個(gè)。根據(jù)特定的實(shí)施方案，載體部分是包括式(I)所示氨基酸序列的肽，其中C不存在或者位于氨基酸序列的任意位置，或者更優(yōu)選在所述氨基酸序列的C或者N端位置?？梢栽谑?I)所示氨基酸序列的任意位置添加包括硫醇基的部分，以便將肽通過(guò)硫醚鍵綴合到喜樹(shù)堿、其衍生物或者類似物。更優(yōu)選地，所述包括硫醇基的部分位于所述氨基酸序列的C或者N端位置(即所述部分只存在于C和N端位置中的一個(gè)，而不存在于式(I)的另一C或者N位置)。具體來(lái)說(shuō)，所述部分是半胱氨酸或者半胱胺。優(yōu)選地，XI和X2獨(dú)立地是從2到15個(gè)氨基酸的氨基序列，更優(yōu)選從2到10個(gè)氨基酸。它們可以包括堿性或者非堿性氨基酸。更特別地，XI和X2不含半胱氨酸氨基酸。術(shù)語(yǔ)"堿性氨基酸"表示在PH7帶正電荷的任意氨基酸，尤其是具有胍基、amidinyl或者氨基部分的任意氨基酸。術(shù)語(yǔ)"胍基"和"胍"可以互換使用，均表示具有式-HN-C(NH2)NH(非質(zhì)子化形式)的部分。舉例來(lái)說(shuō)，精氨酸含有胍基，并且還被稱為2-氨基-5-胍基戊酸或者a-氨基-6-胍基戊酸。術(shù)語(yǔ)"amidinyl'鄰"脒基"可以互換使用，均表示具有式-C(-NH)(NH2)的部分。優(yōu)選高堿性氨基酸是組氨酸(H)，精氨酸(R)和/或賴氨酸(K)，更優(yōu)選是K和R。術(shù)語(yǔ)"非堿性氨基酸"表示在等于或者低于pH7時(shí)不帶正電荷的任意氨基酸殘基。因此它包括任意非極性的氨基酸(即疏水性氨基酸)、在pH7極性不帶電氨基酸和帶負(fù)電荷的氨基酸。本文使用的非極性氨基酸是A,I，L,M，F(xiàn)，P，W和V。極性不帶電荷的氨基酸是N，C，Q，G，S，T和Y。帶負(fù)電荷的氨基酸是D和E。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，式(I)的BX(X)rXB部分包括的非堿性氨基酸選自谷氨酸(E)，甘氨酸(G)，谷氨酰胺(Q)，絲氨酸(S)，蘇氨酸(T)，亮氨酸(L)，纈氨酸(V)，脯氨酸(P)和瓜氨酸。本發(fā)明優(yōu)選的氨基酸序列如下列所述-o是1,和/或-p禾口域q是l，禾口/或-XI是3到12個(gè)氨基酸的序列，和域-X2是2到10個(gè)氨基酸的序列，和/或-r是0和/或-m是1。因此，優(yōu)選的源自人肝素結(jié)合蛋白并且能夠特異滲入細(xì)胞的CPP選自-DPV3(SEQIDNO:1):與肝素反應(yīng)的CPP和源自人胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)序列C端部分的肽的二聚體(Inoue等，F(xiàn)EBS269:89-92(1990))。-DPV6(SEQIDNO:2):與肝素反應(yīng)并源自人血小板衍生生長(zhǎng)因子A.鏈的C端部分的氨基酸序列的CPP(Maher等,Mol.Cell.Biol.9:2251-2253(1989))。-DPV7(SEQIDNO:3)和DPV7b(SEQIDNO:4):與肝素反應(yīng)并源自人肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子樣生長(zhǎng)因子(HB-EGF)序列的C端部分的CPP(Arkonac等，J.Biol.Chem.273:4400-4405(1998))。-DPVIO(SEQIDNO:5):與肝素反應(yīng)并對(duì)應(yīng)于人腸粘蛋白2序列的C端部分的CPP(Xu等，GlyconjugJ.13:81-90(1996))。-DPV3/10(SEQIDNO:6):與肝素反應(yīng)并源自人胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)序列的C端部分(參見(jiàn)上文)和人腸粘蛋白2序列的C端部分(參見(jiàn)上文)的CPP。-DPV10/6(SEQIDNO:7):與肝素反應(yīng)并源自人腸粘蛋白2序列的C端部分(參見(jiàn)上文)和血小板衍生生長(zhǎng)因子A鏈的C端部分(參見(jiàn)上文)的CPP。-DPV1047(SEQIDNO:8)和DPV1048(SEQIDNO:9):與肝素反應(yīng)，源自人脂蛋白B的氨基酸序列(3358-3372)(Cardin等，Biochem.Biosphys.Res.Com.154:741(1988))和對(duì)應(yīng)于人抗DNA單克隆抗體NE-1的高變區(qū)CDR3的肽序列(Hirabayashi等，Scand.J.Immunol.37:533(1993))的CPP。畫DPV15(SEQIDNO:IO)和DPV15b(SEQIDNO:11):與肝素反應(yīng)并含有"肝素結(jié)合蛋白"CAP37序列的一部分的CPP。根據(jù)本發(fā)明，所述細(xì)胞滲透肽更特別地選自下表la所示的一種肽。表la<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>如前所述，表la所示的每種肽有利地在氨基酸序列的C或者N位置具有半胱氨酸。本發(fā)明的細(xì)胞滲透肽可以是但不限于如上所述的那些或者其類似物。"類似物"是與其至少大約50%、優(yōu)選至少大約70%、更優(yōu)選至少大約80%-85%、優(yōu)選至少大約90%和最優(yōu)選至少大約95°/。-99%相同。例如，肽可以在1，2，3，4或更多個(gè)殘基上具有取代?？梢允褂肅PP的單體形式(例如上述)或者多聚體形式(二聚體，三聚體等等)。必要時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用數(shù)種公知的化學(xué)策略將CPP轉(zhuǎn)變成具有增加的體內(nèi)穩(wěn)定性和/或生物活性的藥物候選物，例如-N-和C-端修飾以預(yù)防外肽酶降解C端酰胺化或者N端乙酰化，-通過(guò)形成二硫鍵的環(huán)化，-酰胺氮的烷化以預(yù)防內(nèi)肽酶降解，-引入非天然氨基酸以修飾內(nèi)肽酶的識(shí)別位點(diǎn)(2-甲基丙氨酸，(X-二烴基化的甘氨酸，寡聚氨基甲酸酯，低聚尿素(oligourea)，胍基或者脒基骨架...)，-在CPP氨基酸序列中摻入非遺傳編碼的氨基酸(甘氨酸或者苯丙氨酸的甲基化，鹵化或者氯化)，-將一些或者甚至全部L-氨基酸替換為它們相應(yīng)的D-氨基酸或者p-氨基酸類似物。這類肽可以被合成為"反向(inverso)"或者"逆反(retro-inverso)"形式，即用D-氨基酸取代所述序列的L-氨基酸，或者通過(guò)逆轉(zhuǎn)氨基酸的序列并用D-氨基酸取代L-氨基酸。在結(jié)構(gòu)上，逆轉(zhuǎn)肽比簡(jiǎn)單的D-類似物更近似于初始肽?；旧螪-肽對(duì)肽酶更具抗性，因此與它們的L-肽對(duì)應(yīng)物相比，D-肽在血清和組織中更加穩(wěn)定。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，含有L-氨基酸的CPP用單個(gè)D-氨基酸加帽以抑制外肽酶破壞，-CPP來(lái)源的寡聚氨基甲酸酯的合成；寡聚氨基甲酸酯骨架由通過(guò)相對(duì)剛性的氨基甲酸酯鍵連接的手性乙烯骨架組成(Cho等，Science261:1303-1305(1993))。本發(fā)明的綴合物還包括喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物。本文使用的"喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物"是指任意的生物活性化合物，所述化合物具有在體外和/或尤其在體內(nèi)結(jié)合DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的性質(zhì)，并且含有下式(II)所代表的喜樹(shù)堿骨架仰其中t是0、1或者2，Z是-COO-基團(tuán)(-COO-的方向是按照式(II)書寫的方式從下到上)或者取代的或者未取代的二價(jià)烷基。更特別地，喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物含有式(n)所示的喜樹(shù)堿骨架，其中式(n)中的任意一個(gè)烴基都可以被取代，優(yōu)選l、2、3或者4個(gè)烴基被取代。式(II)的取代基可以在很大范圍內(nèi)變化，這種范圍使喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物具有在體外和/或尤其在體內(nèi)結(jié)合DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的性質(zhì)。取代基獨(dú)立地是相同或者不同的，并且優(yōu)選是烷基，芳基，卣素，-OR',=0,=NR'，=N-OR'，-NR'R",-SR'，-SiR'R"R"'，-OC(O)R',-C(O)R'，-C02R'-CONR'R"，-OC(O)NR'R"，-NR"C(O)R',-NR'-C(O)NR"R"',-NR"C(0)2R'，-NR-C(NR,R")=NR'",-S(O)R'，畫S(0)2R',-S(0)2NR'R",-NRS02R'，-CN和-N02，-R',-N3，-CH(Ph)2，氟(d-C4)烷氧基，氟(C,-C4)垸基或者兩個(gè)相鄰的基團(tuán)可以與攜帶他們的碳原子一起形成式0(CH2)uO-所示的基團(tuán)，其中u代表整數(shù)1或者2;并且其中R'，R"，R'"和R""優(yōu)選獨(dú)立選自氫，(C廣Cs)烷基，(d-C8)雜烷基，芳基和雜芳基，(未取代的芳基)-(CpC4)垸基和(未取代的芳基)氧基-(C1-C4)烷基。例如，當(dāng)本發(fā)明的喜樹(shù)堿類似物包括多于一個(gè)R基團(tuán)時(shí)，每個(gè)R基團(tuán)被獨(dú)立地選擇，如同當(dāng)存在R',R",R"'和R""這些基團(tuán)中的多個(gè)時(shí)一樣獨(dú)立選擇。所述取代基也可以被取代。例如，任意基團(tuán)可以用以下的基團(tuán)取代至少一個(gè)烷基，芳基，鹵素，-OR'，=0，=NR'，=N-OR'，-NR'R",-SR':-SiR'R"R"'，-OC(O)R'，-C(O)R'，-C02R'，-CONR'R"，-OC(O)NR'R"，-NR"C(O)R'，-NR'-C(O)NR"R'"，-NR"C(0)2R'，-NR-C(NR'R")=NR'"，-S(O)R',-S(0)2R'，-S(0)2NR'R"，-NRS02R'，-CN和-N02,-R',-N3，-CH(Ph)2，氟(C,-C4)烷氧基，氟(CrCO烷基。尤其是取代基選自以下基團(tuán)烷基，優(yōu)選低級(jí)垸基；-OR'，其中R'是H;-OC(O)R'，其中R'是烷基，包括雜烷基和更優(yōu)選雜環(huán)烷基，例如哌啶或者哌嗪基；被-NR'R"或者雜烷基和更優(yōu)選雜環(huán)烷基例如哌啶或者哌嗪基取代的垸基；兩個(gè)相鄰的基團(tuán)可以與攜帶他們的碳原子一起形成式-0(CH2)uO-所示的基團(tuán)，其中u代表整數(shù)l或者2，優(yōu)選是2。除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"垸基"單獨(dú)或者作為另一個(gè)取代基的一部分表示直鏈或者支鏈、或者環(huán)烴基，任選被至少一個(gè)雜原子包括O、N、Si和S(如下所定義)間斷，或者其組合，其可以是完全飽和的、單或者多不飽和的，并且可以包括二價(jià)和多價(jià)基團(tuán)，具有指定的碳原子數(shù)(即C,-Cw表示1到10個(gè)碳)。飽和烴基的實(shí)例包括但不限于基團(tuán)例如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，t-丁基，異丁基，仲丁基，環(huán)己基，(環(huán)己基)甲基，環(huán)丙基甲基，例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基等等的同系物和異構(gòu)體。非飽和的烷基是具有一或多個(gè)雙鍵(例如鏈烯基)或者三鍵(例如炔基)的基團(tuán)。非飽和烷基的實(shí)例包括但不限于乙烯基，2-丙烯基，巴豆基，2-異戊烯基，2-(丁二烯基)，2，4-戊二烯基，3(1,4-戊二烯基)，乙炔基，1-和3-丙炔基，3-丁炔基以及高級(jí)同系物和異構(gòu)體。除非另作說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"烷基"還意味著包括下面更詳細(xì)限定的那些垸基衍生物，例如"雜烷基"。限于烴基的烷基被稱為"同烷基(homoalkyl)"。術(shù)語(yǔ)"垸基"單獨(dú)或者作為另一取代基的一部分包括源自烷的一價(jià)或者二價(jià)基。在二價(jià)基中，可以引用但不限于-CH2-，-CH2CH2-，-CH2CH2CH2-，-CH2CH2CH2CH2-。通常，烷基具有1到24個(gè)碳原子，本發(fā)明優(yōu)選這些基團(tuán)具有10個(gè)或者更少的碳原子。"低級(jí)烷基"是更短的鏈烷基，通常具有8個(gè)或者更少的碳原子。除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"雜垸基"單獨(dú)使用或者與另一術(shù)語(yǔ)聯(lián)用時(shí)表示穩(wěn)定的直鏈或者支鏈、或者環(huán)烴基，或者其組合，其由指定數(shù)目的碳原子和至少一個(gè)選自O(shè)、N、Si和S的雜原子組成，其中氮、碳和硫原子任選被氧化和氮雜原子任選被季銨化。雜原子O、N和S和Si可以位于雜垸基的任意內(nèi)部位置或者位于烷基與分子其余部分連接的位置。實(shí)例包括但不限于-CH2-OCH3,-CH2-CH2-NH-CH3，-CH2-CH2-N(CH3)-CH3,-CH2-S-CH2-CH3,-S(0)-CH3，-CHrCH2-S(0)2-CH3，-CH=CH-OCH3，-Si(CH3)3,-CH2-CH=N-OCH3和CH=CH-N(CH3)-CH3。硅基是指位于雜垸基的任意內(nèi)部位置或者位于烷基與分子其余部分連接的位置的Si。直至兩個(gè)雜原子可以是連續(xù)的，例如-CH2-NH-OCH3禾口-CH2-OS-(CH3)3。類似地，術(shù)語(yǔ)"雜烷基"單獨(dú)使用或者作為另一取代基的一部分包括源自雜烷基的二價(jià)基，以下舉例說(shuō)明但不限于-CHrCH2-S-CH2-CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。術(shù)語(yǔ)"雜烷基"可以包括聚(乙二醇)和其衍生物。此外，對(duì)于二價(jià)烷基和雜垸基，沒(méi)有按照基團(tuán)化學(xué)式書寫的方向指明連接基團(tuán)的方向。例如，式-C(0)2R'-代表-C(0)2R'-和-R'C(0)2-。術(shù)語(yǔ)"低級(jí)"與術(shù)語(yǔ)"雜烷基"聯(lián)用表示具有1到8個(gè)碳原子的部分。術(shù)語(yǔ)"烷氧基"、"烷基氨基"和"烷基硫"(或者硫代烷氧基)均采用它們的常規(guī)含義，是指那些分別通過(guò)氧原子、氨基或者硫原子與分子其余部分連接的垸基。通常，"酰基取代基"也選自上述基團(tuán)。本文使用的術(shù)語(yǔ)"酰基取代基"是指與羰基碳連接并且填充羰基碳的原子價(jià)的基團(tuán)，所述羰基碳與本發(fā)明的化合物直接或者間接連接。除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"環(huán)垸基"和"雜環(huán)垸基"單獨(dú)或者與其他術(shù)語(yǔ)聯(lián)用時(shí)分別表示取代或者未取代"烷基"(更優(yōu)選d-d。環(huán)烷基)和取代或者未取代"雜烷基"(更優(yōu)選C-d。雜環(huán)烷基)的環(huán)狀形式。此外，對(duì)于雜環(huán)烷基，雜原子可以占據(jù)雜環(huán)與分子其余部分連接的位置。環(huán)垸基的實(shí)例包括但不限于環(huán)戊基，環(huán)己基，l-環(huán)己烯基，3-環(huán)己烯基，環(huán)庚基等等。雜環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于1-(1,2，5，6-四氫吡啶基)，l-哌啶基，2-哌啶基，3-哌啶基，4-嗎啉基，3-嗎啉基，四氫呋喃-2-基，四氫呋喃-3-基，四氫噻吩-2-基，四氫噻吩-3-基，l-哌嗪基，2-哌嗪基等等。環(huán)狀結(jié)構(gòu)的雜原子和碳原子任選被氧化。除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"鹵"或者"鹵素"單獨(dú)或者作為另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或者碘原子。此外，術(shù)語(yǔ)例如"鹵垸基"表示包括單鹵烷基和多鹵烷基。例如，術(shù)語(yǔ)"斷C1-C4)垸基"表示包括但不局限于三氟甲基，2，2，2-三氟乙基，4-氯丁基，3-溴丙基等等。除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"芳基"表示取代或者未取代的多不飽和、芳香族烴取代基，其可以是被融合在一起或者共價(jià)連接的單環(huán)或者多環(huán)(優(yōu)選從1到3個(gè)環(huán))。術(shù)語(yǔ)"雜芳基"是指包含1到4個(gè)雜原子的芳基(或者環(huán))，所述雜原子選自N、O和S，其中氮、碳和硫原子任選被氧化，氮原子任選被季銨化。雜芳基可以通過(guò)雜原子與分子的其余部分連接。芳基和雜芳基的非限制性實(shí)例包括苯基，l-萘基，2-萘基，4-聯(lián)苯基，l-吡咯基，2-吡咯基，3-吡咯基，3-吡唑基，2-咪唑基，4-咪唑基，吡嗪基，2-噁唑基，4-噁唑基，2-苯基-4-噁唑基，5-噁唑基，3-異噁唑基，4-異噁唑基，5-異噁唑基，2-噻唑基，4-噻唑基，5-噻唑基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-噻吩基，3-噻吩基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，5-苯并噻唑基，嘌呤基(purinyl)，2-苯并咪唑基，5-吲哚基，l-異喹啉基，5-異喹啉基，2-喹喔啉基，5-喹喔啉基，3-喹啉基和6-喹啉基。上述各種芳基和雜芳基環(huán)狀系統(tǒng)的取代基選自如下所述可接受的取代基。"芳基"和"雜芳基"還包括環(huán)狀系統(tǒng)，其中一或多個(gè)非芳香環(huán)系統(tǒng)與芳基或者雜芳基系統(tǒng)融合或者結(jié)合。為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，當(dāng)與其他術(shù)語(yǔ)(例如芳氧基，芳硫氧基(arylthioxy)，芳垸基)聯(lián)用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"芳基"包括如上文限定的芳基和雜芳基環(huán)。因此，術(shù)語(yǔ)"芳烷基"包括芳基與烷基連接的那些基團(tuán)(例如苯甲基，苯乙基，吡啶基甲基等等)，所述垸基包括其中碳原子(例如亞甲基)已經(jīng)被例如氧原子取代的那些垸基(例如苯氧基甲基，2_吡啶基氧基甲基，3-(1-萘基氧基)丙基等等)。在喜樹(shù)堿、其類似物和衍生物中，可以更優(yōu)選引用下列專利/專利申請(qǐng)中描述的化合物WO99/09996，WO99/65493，WO00/53607,EP1101765,EP137,145,EP074,256，US4，604，463,EP56，692,EP88,642，EP296,612，EP321,122，EP325,247，EP540,099,EP737,686,WO90/03169,WO96/37496，WO96/38146，WO96/38449,WO97/00876,US7,104,894，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容在此引入作為參考。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，喜樹(shù)堿骨架如式(II)所示，其中t是0，Z是如上文限定的coo基團(tuán)，其可以用下式(m)表示Q(m)根據(jù)更優(yōu)選的實(shí)施方案，喜樹(shù)堿骨架用下式(IV)表示:更特別地，喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物含有式(ni)、更優(yōu)選式(iv)所示的喜樹(shù)堿骨架，其中任意烴基都可以如上文限定被取代。尤其是喜樹(shù)堿、其類似物和衍生物選自依立替康，托泊替康，GI-147211C，SN38，7-羥甲基喜樹(shù)堿，9-氨基喜樹(shù)堿(9-AC)，7-氨基甲基喜樹(shù)堿，10-羥基喜樹(shù)堿和(20S)-喜樹(shù)堿(稱為喜樹(shù)堿)。所述化合物的結(jié)構(gòu)如下所示GI畫147211C依立替康(20S)-喜樹(shù)堿,OH7-羥甲基喜樹(shù)堿HOHO、托泊替康\HO9-氨基喜樹(shù)堿藥物部分可以與載體部分直接或者間接連接。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，其中所述藥物部分與所述載體間接連接，鍵可以是例如下面所述的中間鍵合基團(tuán)，所有這類連接基團(tuán)和如下所述的其他基團(tuán)在以下均稱為連接子部分，或者來(lái)源于下面限定的交聯(lián)試劑。根據(jù)本發(fā)明，每個(gè)載體部分與至少一個(gè)藥物部分連接，更優(yōu)選與一個(gè)藥物部分連接。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，將載體部分制備為例如有利于與超過(guò)一個(gè)的藥物部分連接，各藥物部分可以是相同的也可以是不同的。例如，載體部分可以包括自身促進(jìn)連接超過(guò)一個(gè)藥物部分的組分，例如天然氨基酸如半胱氨酸的衍生物，或者插入具有多個(gè)活性位點(diǎn)的多價(jià)合成氨基酸或者連接子。采用這種方式，單個(gè)載體部分可以載有2到10個(gè)或者更優(yōu)選4到5個(gè)藥物部分。還在這種實(shí)施方案中，各藥物部分可以通過(guò)相同或者不同的連接子基團(tuán)與載體部分直接或者間接連接。當(dāng)連接超過(guò)一種不同類型的藥物部分時(shí)，就可以協(xié)調(diào)各個(gè)藥物的比例和劑量以有利于特異藥物組合的給藥?？梢酝ㄟ^(guò)所述藥物部分的任意合適官能團(tuán)例如羥基、羧基或者氨基進(jìn)行直接連接。優(yōu)選的間接連接將通過(guò)連接部分進(jìn)行。連接部分還提供分子內(nèi)柔性或者調(diào)節(jié)綴合的結(jié)構(gòu)域之間的分子內(nèi)距離，從而有助于維持生物學(xué)活性。合適的連接部分包括雙功能和多功能有機(jī)基團(tuán)，其獨(dú)立地選自取代或者未取代的烷基，取代或者未取代的雜烷基，取代或者未取代的芳基，取代或者未取代的雜芳基、醛類、酸類、酯類、酐類、巰基或者羧基，例如下面限定的馬來(lái)酰亞胺基衍生物，馬來(lái)酰亞胺基環(huán)己垸衍生物，馬來(lái)酰亞胺基安息香酸衍生物，馬來(lái)酰亞胺基己酸衍生物和琥珀酰亞胺基衍生物或者可以源自溴化氰或者氯化氰，琥珀酰亞胺酯或者磺酸鹵化物和類似物或者其組合。上述術(shù)語(yǔ)(例如"烷基"，"雜垸基"，"芳基"和"雜芳基")包括指定基團(tuán)的取代和未取代的兩種形式。下面提供各種類型基團(tuán)優(yōu)選的取代基。烷基和雜烷基(包括那些經(jīng)常被稱為亞垸基、烯基、雜亞烷基、雜烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)垸基、環(huán)烯基和雜環(huán)烯基)的取代基一般分別被稱為"垸基取代基"和"雜垸基取代基"，它們可以是但不限于選自以下基團(tuán)的一或多種不同基團(tuán)-OR',=0，=NR'，=N-OR'，-NR'R"，-SR',-鹵素，-SiR'R"R"',-OC(O)R'，-C(O)R'，-C02R'，-CONR'R",畫OC(O)NR'R",-NR"C(O)R',-NR'-C(O)NR"R"',-NR"C(0)2R'，-NR-C(NR'R")=NR"'，-NR-C(NR'R")=NR"'，-S(O)R'，-S(0)2R'，-S(0)2NR'R"，-NRS02R'，NRR'S02R",-CN和-N02，其數(shù)量從0到(2m'+l)，其中m'是這類基團(tuán)上碳原子的總數(shù)。R',R",R'"和R""均優(yōu)選獨(dú)立地是指氫，取代或者未取代的雜烷基，取代未取代的芳基，例如用l-3個(gè)鹵素取代的芳基，取代或者未取代的垸基，垸氧基或者硫代烷氧基，或者芳烷基。例如當(dāng)本發(fā)明的化合物包括多于一個(gè)R基團(tuán)時(shí)，每個(gè)R基團(tuán)被獨(dú)立地選擇，就如當(dāng)存在R'，R"，R'"和R""這些基團(tuán)中的多個(gè)時(shí)一樣獨(dú)立地選擇。當(dāng)R'和R"與相同的氮原子連接時(shí)，它們可以和氮原子結(jié)合形成5-、6-或者7-元環(huán)。例如，NR'R"表示包括但不局限于l-吡咯烷基和4-嗎啉基。根據(jù)上文關(guān)于取代基的討論，本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解術(shù)語(yǔ)"垸基"意在包括包含與氫基以外的基團(tuán)結(jié)合的碳原子的基團(tuán)，例如鹵烷基(例如-CF3和-CH2CF3)和?；?例如-C(0)CH3，-C(0)CF3，C(0)CH2OCH3等等)。與對(duì)于烷基描述的取代基類似，芳基取代基和雜芳基取代基一般分別被稱為"芳基取代基"和"雜芳基取代基"，它們是不同的并選自例如鹵素，-OR'，=0，=NR'，=N-OR'，-NR'R",-SR',-鹵素，-SiR'R"R'",-OC(O)R'，-C(O)R'，-C02R'，-CONR'R",畫OC(O)NR'R"，-NR"C(O)R',-NR'畫C(O)NR"R"',-NR"C(0)2R'，-NR-C(NR'R")=NR"'，畫S(O)R'，-S(0)2R'，-S(0)2NR'R",-NRS。2R':-CN和-N02，-R'，-N3，-CH(Ph)2，氟(aC4)烷氧基和氟(Q-C4)烷基，其數(shù)量從O到芳香環(huán)體系中開(kāi)放化合價(jià)的總數(shù);其中R'，R",R'"和R""優(yōu)選獨(dú)立選自氫，(CVQ)垸基和雜烷基，未取代的芳基和雜芳基，(未取代的芳基)-(d-C4)垸基和(未取代的芳基)氧基-(CrQ)烷基。例如當(dāng)本發(fā)明的連接部分包括多于一個(gè)R基團(tuán)時(shí)，每個(gè)R基團(tuán)獨(dú)立選擇，就如當(dāng)存在R'，R",R'"和R""這些基團(tuán)中的多個(gè)時(shí)一樣獨(dú)立選擇。芳基或者雜芳基環(huán)上相鄰原子的兩個(gè)芳基取代基任選用式-T-C(O)-(CRR')v-U-所示的取代基取代，其中T和U獨(dú)立是NR-，-O-,-CRR'-或者單鍵，v是從0到3的整數(shù)。或者，芳基或者雜芳基環(huán)上相鄰原子的兩個(gè)取代基任選用式-A-(CH2)x-B-所示的取代基取代，其中A和B獨(dú)立是-CRR'-，-O陽(yáng),-NR-,-S-,-S(O)-,誦S(O)2-,-S(O)2NR'-或者單鍵，x是從1到4的整數(shù)。這樣形成的新環(huán)的單鍵之一任選用雙鍵取代?；蛘撸蓟蛘唠s芳基環(huán)上相鄰原子的兩個(gè)取代基任選用式-(CRR')b-X-(CR"R'")d-所示的取代基取代，其中b和d獨(dú)立是從0到3的整數(shù)，X是-O-,-NR'-，-S-，-S(O)-,-S(0)2-或者-S(0)2NR'-。取代基R，R',R"和R"'優(yōu)選獨(dú)立選自氫或者取代或者未取代的(CrC6)垸基。本文使用的術(shù)語(yǔ)"雜原子"包括氧(0)，氮(N)，硫(S)和硅(Si)。就像之前使用的，符號(hào)"R"是代表取代基團(tuán)的常見(jiàn)縮寫，選自取代或者未取代的垸基，取代或者未取代的雜烷基，取代或者未取代的芳基，取代或者未取代的雜芳基，和取代或者未取代的雜環(huán)基團(tuán)。一方面用于在連接子和藥物之間以及另一方面用于在連接子和載體部分之間形成共價(jià)鍵的連接子部分上的官能團(tuán)(即活性基團(tuán))可以是相同的(即同官能團(tuán))或者優(yōu)選不同類型的官能團(tuán)(即雜官能團(tuán))，更特別包括氨基，肼基，羥基，硫醇，馬來(lái)酰亞胺基，羰基和羧基。根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述官能團(tuán)選自羧基(-COOH)和馬來(lái)酰亞胺基。所述連接子部分可以包括1到4個(gè)氨基酸殘基的短序列，^f述短序列任選包括硫醇，通過(guò)其連接子部分與載體部分連接。在特定的實(shí)施方案中，可以通過(guò)交聯(lián)劑實(shí)現(xiàn)載體部分與藥物部分的偶聯(lián)。存在數(shù)種可供使用的分子間交聯(lián)劑，參見(jiàn)例如MeansandFeeney，CHEMICALMODIFICATIONOFPROTEINS,Holden-Day,1974,pp.39-43。這些試劑是例如N-琥珀酰亞胺基3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)或者N，N'-(l,3-苯撐)雙馬來(lái)酰亞胺(這兩種試劑對(duì)巰基高度特異，并且形成不可逆的連接)；N,N'-亞乙基-雙-(碘乙酰胺)或者其他這類具有6到11個(gè)碳亞甲基橋的試劑(其對(duì)巰基相對(duì)特異)；和1,5-二氟-2,4-二硝基苯(其與氨基和酪氨酸基團(tuán)形成不可逆的連接)?？捎糜谠撃康牡钠渌宦?lián)試劑包括p,p'-二氟-N，N'-二硝基二苯砜(其與氨基和苯酚基形成不可逆的交叉連接)；己二亞胺酸二甲酯(dimethyladipimidate)(其對(duì)氨基特異)；苯酚-1，4-二磺酰氯(其主要與氨基反應(yīng))；六亞甲基二異氰酸酯或者二異硫氰酸酯，或者偶氮苯基-p-二異氰酸酯(其主要與氨基反應(yīng))；戊二醛(其與數(shù)種不同的側(cè)鏈反應(yīng))和disdiazobenzidine(其主要與酪氨酸和組氨酸反應(yīng))；N-3-馬來(lái)酰亞胺基丙酸；N-6-馬來(lái)酰亞胺基己酸；N-11-馬來(lái)酰亞胺基H^—酸，4-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己垸-l-羧基-6-酰氨基己酸；4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基乙基)甲酰氨基乙基(Peg)4甲酰氨基甲基]環(huán)己烷羧酸。如前所述，交聯(lián)劑可以是同雙功能的，即具有進(jìn)行相同反應(yīng)的兩個(gè)官能團(tuán)。同雙功能交聯(lián)劑的實(shí)例是雙馬來(lái)酰亞胺基己烷(bismaleimidohexane，"BMH")。BMH含有兩個(gè)馬來(lái)酰亞胺官能團(tuán)，所述官能團(tuán)在溫和條件下(pH6.5-7.7)特異與含巰基化合物反應(yīng)。所述兩個(gè)馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)通過(guò)烴鏈連接。因此，BMH可用于含半胱氨酸殘基的多肽的不可逆交聯(lián)。交聯(lián)劑也可以是異雙功能的。異雙功能交聯(lián)劑具有兩個(gè)不同的官能團(tuán)，例如胺活性基團(tuán)和硫醇活性基團(tuán)，它們將分別交聯(lián)具有游離胺和硫醇的兩個(gè)部分。優(yōu)選的異雙功能交聯(lián)劑是4-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己垸-l-羧酸琥珀酰亞胺酯("SMCC")，琥珀酰亞胺基-4-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)-環(huán)己垸-1-羧基(6-酰氨基己酸酯)("LC-SMCC")，N-馬來(lái)酰亞胺基苯甲?；?N-羥基琥珀酰亞胺酯("MBS")和4-(p-馬來(lái)酰亞胺基苯基)丁酸琥珀酰亞胺酯("SMPB")，一種MBS的伸展鏈類似物。這些交聯(lián)劑的琥珀酰亞胺基團(tuán)與伯胺反應(yīng)形成酰胺鍵，硫醇-反應(yīng)性馬來(lái)酰亞胺與硫醇基(例如半胱氨酸的)形成共價(jià)硫醚鍵。交聯(lián)劑通常在水中具有低溶解度。親水性部分例如磺酸基可以添加到交聯(lián)劑以提高其水溶性。硫代-MBS和硫代-SMCC是進(jìn)行水溶性改性的交聯(lián)劑的實(shí)例。許多交聯(lián)劑產(chǎn)生一種在細(xì)胞條件下基本上不可切割的綴合物。但是，一些交聯(lián)劑含共價(jià)鍵，例如二硫化物，其在細(xì)胞條件下是可切割的。例如，Traut's試劑，二硫代雙(琥珀酰亞胺基丙酸酯)("DSP")和N-琥珀酰亞胺基3-(2-吡啶二硫)丙酸酯("SPDP")是公知的可切割交聯(lián)劑。直接的二硫鍵也是有用的。許多交聯(lián)劑，包括上文討論的那些，是可商購(gòu)。從商品供應(yīng)商那里可以輕易獲得關(guān)于它們使用的詳細(xì)說(shuō)明書。關(guān)于蛋白交聯(lián)和綴合制劑的一般參考文獻(xiàn)是Wong,CHEMISTRYOFPROTEINCONJUGATIONANDCROSS-LINKING,CRCPress(1991)。根據(jù)綴合時(shí)在生物體液(例如人血漿)中的穩(wěn)定性可以區(qū)分本發(fā)明使用的連接子。術(shù)語(yǔ)"穩(wěn)定性"被定義為從本發(fā)明綴合物釋放的喜樹(shù)堿衍生物的半衰期，這取決于選擇的連接子。有利地，本發(fā)明的綴合物是穩(wěn)定的，尤其是它表現(xiàn)出l，2，3，4，5，6，7，8，9或者10小時(shí)的半衰期。不穩(wěn)定的綴合物將釋放更短半衰期的藥物部分，例如<5分鐘。高度穩(wěn)定的綴合物具有超過(guò)11小時(shí)的血槳半衰期。優(yōu)選地，綴合物在體外人血漿中是穩(wěn)定的，37。C的半衰期為大約1到6.5小時(shí)。按照實(shí)施例II的描述測(cè)定綴合物的半衰期。優(yōu)選的本發(fā)明的異雙功能交聯(lián)劑包括游離-COOH基團(tuán)和游離馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)。這類交聯(lián)劑可以引用下列化合物N-3-馬來(lái)酰亞胺基丙酸PIERCE出售(Ref:22296)更特別地，本發(fā)明的綴合物衍生自下列交聯(lián)劑:C10II13,N-6-馬來(lái)酰亞胺基己酸Sigma出售(Ref:M8卯4)C15H23N04廳.Wt.:281.35N-ll-馬來(lái)酰亞胺基十一酸PIERCE出售(Ref:22211)C1SH26N205Mol.Wt.:350.414-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧基-6-酰氨基已酸C26H41N3O10函,Wt,:555,624-[(N-馬來(lái)酰亞胺基乙萄甲酰氨基乙基(Peg)4甲酰氨基甲基]環(huán)己烷羧酸o04-[(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧基-6-酰氨基己垸甲酰氨基甲蜀環(huán)己垸羧酸oC20H28M2O5Mo3LWt.:376.454-[((N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己垸甲酰氨萄甲基]環(huán)己垸羧酸本文中，本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及新化合物、其鹽和/或異構(gòu)體，尤其是適合作為交聯(lián)劑的化合物，如下式0O所示其中B是取代或者未取代的環(huán)烷基，Rl和R2獨(dú)立地是不存在的(即共價(jià)鍵)或者是取代或者未取代的二價(jià)烷基、雜烷基、芳基或者雜芳基。這類交聯(lián)劑是非常有用的，因?yàn)槿绱双@得的綴合物在體外在人血漿中有利地穩(wěn)定，37。C的半衰期超過(guò)5分鐘。式(V)引用的基團(tuán)如上文所限定。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，所述化合物如式(V)所示，其中Rl是取代或者未取代的二價(jià)烷基、雜垸基、芳基或者雜芳基，R2是不存在的或者是取代或者未取代的二價(jià)烷基、雜烷基、芳基或者雜芳基。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，所述化合物如式(V)所示，其中至少一個(gè)Rl禾nR2被選自下列基團(tuán)的至少一個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷-O-，-NR'-,-SR'-,-SiR'R"-，-OC(O)陽(yáng)，-C(O)-，-C02-，-CONR'國(guó)，-做'CO-，-OC(O)NR'-,-NR"OC(0)-和-NR"C(0)2-，其中R'和R"獨(dú)立地如上文所限定，尤其是R'和R"選自如上文限定的氫，(C,-Cs)烷基，(CVCs)雜烷基，芳基和雜芳基。當(dāng)R1和/或R2被至少一個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷時(shí)，所述間斷可以位于R1和/或R2基團(tuán)的任意內(nèi)部位置或者位于Rl和/或R2與式(V)所示化合物的其余部分連接的位置。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式(V)所示的化合物，其中-6是環(huán)(^3《8)烷基，優(yōu)選未取代的環(huán)垸基，包括環(huán)戊基或者環(huán)己基，禾口/或-Rl是雜烷基，尤其是包括聚(乙二醇)(即PEG)和其衍生物，例如PEG-3、PEG-4、PEG-5或者PEG-6，和/或-R1是直鏈(C1-C8)烷基鏈，尤其是-CH2-或者-CH2CH2-，禾口/或-Rl是(d-Cs)烷基鏈，任選被選自下列基團(tuán)的至少一個(gè)、優(yōu)選一或兩個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷畫OC(O)-，-C02-，隱CONR'-，-NR'CO畫，-OC(O)NR'-和-NR"C(0)2-，優(yōu)選-CONR'-或者-NR"OC(O)-，其中R'和R"彼此獨(dú)立優(yōu)選選自氫和(C,-C8)烷基，和任選所述(Q-Cs)烷基鏈包括如上文限定的至少一個(gè)環(huán)垸基鏈，和/或-R2不存在，和/或-R2是雜垸基，尤其是包括聚(乙二醇)(即PEG)和其衍生物，例如PEG-3、PEG-4、PEG-5或者PEG-6，和/或-R2是直鏈(C1-C8)烷基鏈，尤其是-CH2-或者-CH2CH2-，和/或-R2是(C1-C8)垸基鏈，任選被選自下列基團(tuán)的至少一個(gè)、優(yōu)選一或兩個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷-OC(O)-，-COr,-CONR'-,-NR'CO-,-OC(O)NR'-和-NR"C(O)r，優(yōu)選-CONR'-或者-NR"OC(O)-，其中R'和R"彼此獨(dú)立優(yōu)選選自氫和(C1-C8)垸基，和任選所述(C1-C8)垸基鏈包括如上文限定的至少一個(gè)環(huán)烷基鏈。特別地，式(V)所示的化合物可以用上文鑒定的化合物說(shuō)明，艮P:4-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲萄環(huán)己烷-l-羧基-6-酰氨基已酸，4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基乙基)甲酰氨基乙基(Peg)4甲酰氨基甲基]環(huán)己垸羧酸，4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧基-6-酰氨基己垸甲酰氨基甲基]環(huán)己烷羧酸，或者4-[((N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己垸甲酰氨基)甲基]環(huán)己烷羧酸。式(V)所示的化合物可以用本領(lǐng)域公知的的不同方法制備。特別地，式(V)所示的化合物可以用實(shí)施例中描述的方法制備。根據(jù)本發(fā)明的特定方面，所述綴合物包括如上述與載體部分連接的藥物部分，其中所述藥物部分與所述載體部分通過(guò)連接子共價(jià)連接，所述連接子得自上述式(V)所示的化合物(交聯(lián)劑)。根據(jù)這個(gè)特定實(shí)施方案，本發(fā)明的綴合物更特別的如下式(VI)所示其中X是如上文限定的載體部分(CPP)，尤其如式(I)所示，其與化合物的其余部分通過(guò)硫醚鍵連接，及B、Rl、R2是如上文限定的基團(tuán)，和Y是如上文限定的藥物部分，尤其是SN38部分，在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，所述綴合物如式(VI)所示，其中Y通過(guò)下列鍵與綴合物的其余部分連接硫醚、腙、酰胺、酯、醚、氨基甲酸酯或者硫代氨基甲酸酯鍵，更特別是通過(guò)醚鍵(-O-)、二硫鍵或者硫醚鍵。本文描述的綴合物，包括式(VI)所示的那些，是新的化學(xué)實(shí)體。在本發(fā)明的一個(gè)特定方面，本發(fā)明的綴合物包括其中載體部分如式(I)所示(包括上文確定的任意優(yōu)選實(shí)施方案)以及任選其中連接子基團(tuán)來(lái)源于包括游離-COOH基團(tuán)和游離馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)的交聯(lián)劑、尤其是來(lái)源于N-6-馬來(lái)酰亞胺基己酸和4-[((N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷甲酰氨基)甲基]環(huán)己烷羧酸的那些綴合物。本文公開(kāi)的特定化學(xué)實(shí)體包括但不限于其中X如上文限定，尤其是DPV3，DPV3.10,DPV6,DPV7,DPV7b,DPV15,DPV15b，DPV1047，DPV1048，DPV10或者DPV10/6,和甚至更優(yōu)選是DPV3:DPV15,DPV15b或者DPV1047。本發(fā)明還涉及制備相同化學(xué)實(shí)體的方法。本發(fā)明的綴合物可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任意方法制備。例如，載體部分(或者肽)可以利用常規(guī)的溶液-或者固相肽合成法制備。然后這種肽就可以與藥物部分、藥物部分的適當(dāng)反應(yīng)性衍生物或者交聯(lián)劑直接反應(yīng)。藥物部分或者其衍生物可以通過(guò)例如以下的鍵形成與載體部分連接硫醚、腙、酰胺、酯、醚、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯或者二硫鍵形成?；蛘?，通過(guò)交聯(lián)劑尤其是式(V)所示的交聯(lián)劑與載體部分的合適官能團(tuán)尤其是硫醇基團(tuán)的反應(yīng)引入如上所述的尤其是用于制備式(VI)所示綴合物的連接子基團(tuán)，然后在連接子基團(tuán)和藥物部分之間形成共價(jià)鍵。式(v)所示綴合物的特定實(shí)施方案中，所述藥物具有合適的官能團(tuán)與連接子形成共價(jià)鍵。所述合適的官能團(tuán)更優(yōu)選是羥基以便在連接子基團(tuán)和藥物部分之間形成酯鍵。尤其是通過(guò)載體部分的合適官能團(tuán)與例如二價(jià)或者三價(jià)化學(xué)基團(tuán)的逐次延伸可以獲得多價(jià)藥物-輸送綴合物。根據(jù)另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，在與載體部分反應(yīng)前，交聯(lián)劑先與藥物部分偶聯(lián)。39利用這些方法，技術(shù)人員能夠利用各種連接子部分制備各種各樣的藥物-載體綴合物。如下面舉例說(shuō)明的，可以選擇藥物部分上的合適基團(tuán)以連接載體部分，以及如果需要，連接子連接藥物或者載體部分，或者二者均在它們偶聯(lián)前進(jìn)行?；蛘撸部梢詫?duì)藥物進(jìn)行修飾以允許綴合。本發(fā)明的綴合物可以與生理上可接受的支持物、載體或者賦形劑一起配制為藥物，所述藥物通過(guò)各種方法用于獸醫(yī)，例如用于哺乳動(dòng)物并且尤其是人類。本發(fā)明涉及本發(fā)明的綴合物用于下述治療的用途。因此，本發(fā)明的范圍擴(kuò)展到本發(fā)明的化合物用于制備治療或者預(yù)防上文所述疾病的藥劑(或者藥物)的用途。因此，本發(fā)明的綴合物可以被摻入組合物，優(yōu)選適于給藥的藥物組合物。這種組合物通常包括至少一種本發(fā)明的綴合物或者綴合物的混合物，并且任選包括藥學(xué)上可接受的載體。本文使用的"藥學(xué)上可接受的載體"旨在包括與藥物給藥相容的任意和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等等。這類介質(zhì)和藥劑用于藥學(xué)活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域公知的。除非任意常規(guī)介質(zhì)或者試劑與本發(fā)明的活性綴合物不相容，那么均可以預(yù)期其在組合物中的使用。所述組合物中還可以摻入輔助活性化合物。本發(fā)明的組合物優(yōu)選藥物組合物被配制為與其預(yù)定的給藥途徑相容。給藥途徑的實(shí)例包括靜脈內(nèi)推注或者輸注，真皮內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、口服(例如吸入)、透皮(例如局部)、顱內(nèi)、椎管內(nèi)和透粘膜給藥。用于這些給藥途徑的溶液或者懸浮液可以包括下列組分無(wú)菌稀釋劑例如注射用水，鹽溶液，非揮發(fā)油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或者其他合成溶劑；抗菌劑例如苯甲醇或者對(duì)羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或者亞硫酸氫鈉；螯合劑例如依地酸；緩沖液比如乙酸鹽，檸檬酸或者磷酸鹽和用于張力調(diào)整的物質(zhì)例如氯化鈉或者葡萄糖。利用酸或者堿例如鹽酸或者氫氧化鈉可以調(diào)節(jié)pH。腸胃外制劑可以裝入安瓿、一次性注射器或者由玻璃或者塑料制成的多劑量小瓶。適于注射用途的藥物組合物包括無(wú)菌水溶液(水溶性時(shí))或者分散劑和用于無(wú)菌注射溶液或者分散劑的臨時(shí)制備的無(wú)菌粉末。對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，合適的載體包括生理鹽水，抑菌水，CremophorELTM(BASF,Parsippany,NJ)或者磷酸鹽緩沖液(PBS)。在所有情況下，所述組合物必須是無(wú)菌的并且應(yīng)該流動(dòng)到能夠給藥的程度。它在制備和儲(chǔ)存條件下應(yīng)該是穩(wěn)定的并且必須保持抗微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用。所述載體可以是溶劑或者分散介質(zhì)，含例如水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等等)和其合適的混合物。例如，通過(guò)使用包衣例如卵磷脂，就分散劑來(lái)說(shuō)通過(guò)維持要求的粒度以及通過(guò)使用表面活性劑可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。微生物作用的預(yù)防可以通過(guò)不同的抗細(xì)菌劑和抗真菌劑實(shí)現(xiàn)，例如對(duì)羥苯甲酸類，氯丁醇，苯酚，抗壞血酸，硫柳汞等等。很多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑，例如糖，多元醇例如甘露醇，山梨糖醇，氯化鈉。通過(guò)在組合物中包括延緩吸收的物質(zhì)例如單硬脂酸鋁和明膠可以實(shí)現(xiàn)注射組合物的延長(zhǎng)吸收。通過(guò)將所需量的本發(fā)明綴合物以及上文列舉的一種成分或者成分組合摻入合適的溶劑可以制備無(wú)菌注射溶液，然后根據(jù)需要過(guò)濾滅菌。通常，通過(guò)將本發(fā)明的活性綴合物摻入無(wú)菌載體來(lái)制備分散液，所述載體含有堿性分散介質(zhì)和來(lái)自那些上文列舉的所需其他成分。就用于制備無(wú)菌注射溶液的無(wú)菌粉末來(lái)說(shuō)，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干，這產(chǎn)生一種活性成分以及任意其他所需成分的粉末，所述其他所需成分來(lái)自其先前無(wú)菌過(guò)濾的溶液?？诜M合物通常包括惰性稀釋劑或者可食載體。它們可以被裝入膠囊或者壓成片劑。為了口服治療給藥目的，本發(fā)明的活性綴合物可以與賦形劑混合，并且以片劑、錠劑或者膠囊的形式使用。還可以使用液體載體將口服組合物制備為漱口劑，其中所述液體載體中的本發(fā)明綴合物被口服使用，swished，咳出或者吞服。藥學(xué)上相容的結(jié)合劑和/或佐劑材料可以被包括作為所述組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等等可能含任意下列成分或者相似性質(zhì)的化合物結(jié)合劑例如微晶纖維素，西黃蓍膠或者明膠；賦形劑例如淀粉或者乳糖，崩解劑例如藻酸，Primogd，或者玉米淀粉;潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂或者Sterotes;助流劑例如膠體二氧化硅；甜味劑例如蔗糖或者糖精；或者調(diào)味劑例如薄荷，水楊酸甲酯，或者柑桔調(diào)味料。對(duì)于通過(guò)吸入給藥，本發(fā)明的綴合物以氣溶膠噴霧的形式從壓力容器或者分配器或者噴霧器輸送，所述分配器含有合適的噴射劑例如氣體例如二氧化碳。全身性給藥還可以通過(guò)透粘膜或者透皮方法。對(duì)于透粘膜或者透皮給藥，在制劑中使用對(duì)將滲透的屏障合適的滲透劑。這類滲透劑通常是本領(lǐng)域已知的，并且包括例如對(duì)于透粘膜給藥來(lái)說(shuō)是去污劑、膽鹽和褐霉酸衍生物。通過(guò)利用鼻腔噴霧或者栓劑可以實(shí)現(xiàn)透粘膜給藥。對(duì)于透皮給藥，本發(fā)明的活性綴合物被配制入本領(lǐng)域公知的軟膏、油膏、凝膠或者乳劑。本發(fā)明的綴合物還可以被制備成栓劑形式(例如利用常規(guī)栓劑基質(zhì)例如可可脂和其他甘油酯類)或者用于直腸輸送的保留灌腸劑形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的活性綴合物與載體一起配制，所述載體保護(hù)本發(fā)明的綴合物被機(jī)體快速清除，所述載體例如是控釋制劑，包括埋植劑和微囊或者大包囊化的輸送系統(tǒng)?？梢允褂每缮锝到?、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，膠原，聚正酯類，聚乙二醇和聚乳酸，或者其組合。制備這類制劑的方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。所述材料還可以例如從AlzaCorporation購(gòu)買，也可以被用作藥學(xué)上可接受的載體。這些可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員己知的方法制備，例如如美國(guó)專利4,522,811中所述。特別有利的是配制劑量單位形式的口服或者腸胃外組合物以便給藥和劑量統(tǒng)一。本文使用的劑量單位形式是指適合作為待治療受試者的單一劑量的物理分離單位；每個(gè)單位含有預(yù)定量的本發(fā)明活性綴合物以及所需的藥物載體，所述預(yù)定量的本發(fā)明活性綴合物預(yù)期產(chǎn)生所需的治療效果。本發(fā)明劑量單位形式的規(guī)格由以下因素確定并直接取決于它們本發(fā)明活性綴合物的獨(dú)特性質(zhì)和待實(shí)現(xiàn)的特定治療效果，以及本發(fā)明活性綴合物這類化合物用于個(gè)體治療領(lǐng)域中的固有局限性。本發(fā)明這類綴合物的毒性和治療功效可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)或者實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中的標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)藥步驟確定，例如測(cè)定MTD(最大耐受劑量)，TGI(定義為100-T/C(%)的腫瘤生長(zhǎng)抑制率0^1%》和T/C(治療動(dòng)物的平均腫瘤體積相對(duì)于對(duì)照組的平均腫瘤體積的比例)。治療功效和毒性之間的劑量比例是治療指數(shù)，其可以表示為ED50/LD50的比值。顯示更高治療指數(shù)的本發(fā)明綴合物是優(yōu)選的。盡管可以使用顯示毒性副作用的本發(fā)明綴合物，但應(yīng)該考慮設(shè)計(jì)一個(gè)輸送系統(tǒng)將本發(fā)明的這類綴合物靶向患病組織部位以便將對(duì)非腫瘤細(xì)胞的潛在損害最小化，從而減少副作用。在配制給人使用的劑量范圍時(shí)可以使用從動(dòng)物研究獲得的數(shù)據(jù)。本發(fā)明這類綴合物的劑量?jī)?yōu)選處于包括有效劑量水平的范圍內(nèi)，并且其毒性是可接受或者不存在。該范圍內(nèi)的劑量可能是不同的，這取決于使用的劑型和給藥途徑。對(duì)于本發(fā)明方法使用的任何本發(fā)明綴合物，最初都可以從動(dòng)物模型的分析估算治療有效劑量。這類信息可用于更精確地確定人類的有效劑量。含有本發(fā)明綴合物的組合物的治療有效量(即有效劑量)可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員輕易確定。例如，治療有效量是抑制至少20%的異種移植的人類癌癥的腫瘤生長(zhǎng)的量。在某些實(shí)施方案中，更高的抑制百分比例如45、50、75、85、90%或者更高的百分比是優(yōu)選的。示范性的劑量包括毫克或者微克量的本發(fā)明化合物每千克受試者體重(例如大約1微克每公斤到大約1克每公斤，大約1微克每公斤到大約50微克每公斤，或者大約50微克每公斤到大約5毫克每公斤)。組合物可以每周給藥至少一次，但是也可以每天一次或者每2、3、4、5或者6天一次，持續(xù)大約1至10周，例如2至8周或者大約3至7周，或者持續(xù)大約4、5或者6周。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解某些因素可能影響有效治療受試者所要求的劑量和時(shí)間，包括但不限于疾病或者紊亂的嚴(yán)重性，先前的治療，受試者的一般健康狀態(tài)和/或年齡，以及其他疾病。此外，利用治療有效量的組合物對(duì)受試者的治療可以包括單一治療或者一系列治療。還應(yīng)理解，考慮到被調(diào)節(jié)的表達(dá)或者活性，組合物的合適劑量依賴于組合物的效力。當(dāng)將一或多種本發(fā)明的這些化合物給予動(dòng)物(例如人)時(shí)，醫(yī)生、獸醫(yī)或者研究人員例如可以首先給出相對(duì)低的劑量，隨后提高劑量直到獲得適當(dāng)?shù)膽?yīng)答。此外，應(yīng)當(dāng)理解對(duì)于任何特定受試者的特定劑量水平將依賴于各種因素，包括使用的本發(fā)明特定化合物的活性，受試者的年齡、體重、一般健康狀態(tài)、性別和飲食，給藥時(shí)間，給藥途徑，排泄速率，任何藥物組合，以及表達(dá)或者活性被調(diào)節(jié)的程度。藥物組合物可以與給藥說(shuō)明書一起裝入容器、包裝或者分配器中。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，可以治療有效量將本發(fā)明的化合物與其他治療方案或者藥物(例如多重藥物方案)同時(shí)或者依次給予。特別地，其他治療方案或者藥物是抗癌治療或者藥物，例如5-氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸、奧沙利鉑(oxaliplatine)、卡培他濱(capecitabine)、長(zhǎng)春花新堿、塞來(lái)昔布(celebrex)、替莫唑胺(temozolomide)、微量元素(例如硒)、沙利度胺(thalidomide)、西妥昔單抗(cetuximab)、吉西他濱(gemcitabine)、多西紫杉醇(docetaxel)、3-AP(Triapine⑧)、卡鉬(carboplatine)、硼替佐米(bortezomib)、貝《戈單抗(bevacizumab)、索拉非尼(sorafenib)、順柏(cisplatin)、吉非替尼(gefitinib)、flavopiridol、elvorin、卡鉬、氨柔比星(amrubicin)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、培美曲塞(pemetrexed)、埃羅替尼(erlotinib)、絲裂霉素C、AMG706、帕尼妥單抗(panitumab)、紫杉醇、雷替曲塞(raltitrexed)、伊馬替尼(imatinib)、阿昔單抗(abciximab)、英夫利昔單抗(infliximab)、帕利珠單抗(paliviz醒b)、利妥昔單抗(rituximab)、吉姆單抗奧佐米星(gemtuzumabozogamicin)、阿侖珠單抗(alemtuzumab)或替伊莫單抗(ibritumomabtiuxetan)。當(dāng)進(jìn)行同時(shí)給藥時(shí)，活性藥物可以在相同的或者不同的組合物中給予。這種聯(lián)合治療(cotreatment)的目的在于增強(qiáng)療效和/或減少毒性。在另一個(gè)特定實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及放療與本發(fā)明化合物的聯(lián)用，其同時(shí)或者依次施用。根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及有效量的至少一種如上所述的本發(fā)明化合物在制備用于治療疾病、尤其是癌癥的藥物組合物中的用途。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的可以使用的化合物包括如上文限定的任何亞組和如上文鑒定的任何特定化合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是治療癌癥的方法，包括給予需要這類治療的患者有效量的至少一種如上所述的化合物。因?yàn)楸景l(fā)明的綴合物包含藥物部分，所以本發(fā)明的綴合物適用于治療各種情況下的各種疾病。在這方面，"治療"包括治療性和預(yù)防性治療。因此，可以在疾病非常早期的階段或者在其顯著進(jìn)展包括轉(zhuǎn)移后使用所述綴合物。術(shù)語(yǔ)"治療"尤其表示患者負(fù)荷的降低，例如細(xì)胞增殖率的降低，患病增殖細(xì)胞的破壞，腫瘤質(zhì)量或者腫瘤大小的降低，腫瘤轉(zhuǎn)移的減少，腫瘤進(jìn)展的延緩，以及完全的腫瘤抑制，存活率的提高或者任何其他適當(dāng)?shù)呐R床終點(diǎn)。本發(fā)明的綴合物尤其適合于治療癌癥，例如實(shí)體瘤或者淋巴瘤。特定實(shí)例包括結(jié)腸癌，肺癌(即小細(xì)胞、非小細(xì)胞、支氣管癌)，胰腺癌，卵巢癌，乳腺癌，前列腺癌，肝癌，頭、胃和頸癌，膀胱癌，非何杰金氏淋巴瘤，黑素瘤，白血病，成神經(jīng)細(xì)胞瘤和惡性膠質(zhì)瘤。所述綴合物可以采用不同途徑給藥，通常通過(guò)注射，例如全身注射。優(yōu)選的給藥途徑是靜脈內(nèi)通過(guò)推注或者輸注，持續(xù)15分鐘至1或者2天。但是，也可以使用其他給藥途經(jīng)，例如肌內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、瘤內(nèi)等等。此外，如果需要，可以進(jìn)行重復(fù)注射。本發(fā)明的另一個(gè)目的是減少癌細(xì)胞增殖的方法，通過(guò)給予患有癌癥的受試者有效量的本發(fā)明綴合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是治療轉(zhuǎn)移癌的方法，通過(guò)給予需要這類治療的受試者有效量的本發(fā)明綴合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是如上文限定的綴合物在制備用于治療轉(zhuǎn)移性癌或者減少癌細(xì)胞增殖的藥物組合物中的用途。本發(fā)明的其他方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的實(shí)施例中公開(kāi)，其應(yīng)被認(rèn)為是說(shuō)明性的，不是用于限制本申請(qǐng)的范圍。實(shí)施例I.材料和方法I.la細(xì)胞滲透肽(CPP)DPV3:ArgLysLysArgArgArgGluSerArgLysLysArgArgArgGluSer(SEQIDNO.l)DPV1047:ValLysArgGlyLeuLysLeuArgHisValArgProArgValThrArgMetAspVal(SEQIDNO.8)DPV15:LeuArgArgGluArgGinSerArgLeuArgArgGluArgGinSerArg(SEQIDNO.10)DPV15b:GlyAlaTyrAspLeuArgArgArgGluArgGinSerArgLeuArgArgArgGluArgGinSerArg(SEQIDNO.11)DPV7:GlyLysArgLysLysLysGlyLysLeuGlyLysLysArgAspPro(SEQIDNO.3)Tat48—60:GlyArgLysLysArgArgGinArgArgArgProProGin(SEQIDNO.44)穿膜肽ArgGinlieLyslieTrpPheGinAsnArgArgMetLysTrpLysLys(SEQIDNO.29)DPV51(D):D-LysD-ArgGlyD-LeuD-LysD-LeuD-ArgD-His(SEQIDNO.51)DPV1047(D):ValLysArgGlyLeuLysLeuArgHisValArgProArgValThrArgMetAspVal(SEQIDNO.8，采用D構(gòu)像)為了讓CPP和連接子-SN38部分綴合(參見(jiàn)實(shí)施例1.4):-DPV3、DPV15、0￥7和丁3148.6()在氨基酸序列的(末端位置還包含一個(gè)半胱氨酸(Cys)。-DPV1047、DPV15b、穿膜肽和DPV51在氨基酸序列的N末端位置還包含一個(gè)半胱氨酸(Cys)。45通過(guò)Neosystem，F(xiàn)rance合成所述氨基酸序列。I.lb非細(xì)胞滲透肽PolyE(16):GluGluGluGluGluGluGIuGIuGluGluGluGluGluGluGluGlu(SEQIDNO.52)為了讓PolyE間和連接子-SN38部分綴合(參見(jiàn)實(shí)施例1.4)，PolyE(叫還在氨基酸序列的N末端位置包含一個(gè)半胱氨酸(Cys)。通過(guò)Neosystem,France合成所述氨基酸序列。L2連接部分(連接子)連接子#1:N-3-馬來(lái)酰亞胺基丙酸(PIERCE，F(xiàn)rance,產(chǎn)品Ref:22296)C7H7N04Mol.Wt.:1鎖3連接子#2(也稱為"MIC"):N-6-馬來(lái)酰亞胺基己酸(SIGMA,France,產(chǎn)品Ref:M8904)'o連接子#3:N-ll-馬來(lái)酰亞胺基十一酸(PIERCE，F(xiàn)rance,產(chǎn)品Ref:22211)連接子#4:4-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-l-羧基-6-酰氨基已酸C18H26N205廳.聰.350.41連接子#5(也稱為"BCH")4-[((N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己垸甲酰氨基)甲基]環(huán)己烷羧酸C20H28N2O5MoLVt:376.45連接子#6:4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基乙基)甲酰氨基乙基(Peg)4甲酰氨基甲基]環(huán)己烷羧，C26H41N3O10Mol.Wt.:555.62連接子#7:4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧基-6-酰氨基己烷甲酰氨基甲基]環(huán)己加<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>1.3連接子4至7的合成1.3.1連接子#4的合成將于DMF(100mL)的琥珀酰亞胺基4-[N-馬來(lái)酰亞胺基甲基]環(huán)己烷-l-羧酸酯(PIERCERef:22360)(25mmol)溶液攪拌5分鐘，然后在室溫下將其添加到于H20(50mL)的6-氨基己酸(50mmol)(SIGMARef:A2504)溶液。室溫下攪拌所述混合物4h。添加二氯甲烷(100mL)，先用水(3xl50mL)然后用5。/。水性檸檬酸(3xl50mL)洗滌有機(jī)層以除去過(guò)量的6-氨基己酸。真空干燥所述有機(jī)層，并將所獲白色粉末保存在-2(TC。1.3.2連接子存5("BCH")的合成將于DMF(100mL)的琥珀酰亞胺基4-[>^馬來(lái)酰亞胺基甲基]環(huán)己烷-1-羧酸酯(P正RCERef:22360)(25mmol)溶液攪拌5分鐘，然后在室溫下將其添加到于H2O(50mL)的反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸(50mmol)(SIGMARef:08455)溶液。室溫下攪拌所述混合物4h。添加二氯甲垸(IOOmL)，先用水(3xl50mL)然后用5"/。水性檸檬酸(3xl50mL)洗滌有機(jī)層以除去過(guò)量的反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸。真空干燥所述有機(jī)層，并將所獲白色粉末保存在畫20。C。1.3.3連接子#6的合成將于DMF(100mL)的Mal-dPeg4-NHS(QuantaBioDesignRef:10214)(25mmol)溶液攪拌5分鐘，然后在室溫下將其添加到于H2O(50mL)的反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸(50mmol)(SIGMARef:08455)溶液。室溫下攪拌所述混合物4h。添加二氯甲烷(100mL)，先用水(3xl50mL)然后用5。/。水性檸檬酸(3xl50mL)洗滌有機(jī)層以除去過(guò)量的反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸。真空千燥所述有機(jī)層，并將所獲白色粉末保存在-2(TC。1.3.4連接子#7的合成將于DMF(100mL)的琥珀酰亞胺基4-[>^-馬來(lái)酰亞胺基甲基]環(huán)己烷-1-羧基-[6-氨基己酸])(PIERCERef:22362)(25mmol)溶液攪拌5分鐘，然后在室溫下將其添加到于H2O(50mL)的反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸(50mmo1)(SIGMARef:08455)溶液。室溫下攪拌所述混合物4h。添加二氯甲垸(IOOmL)，先用水(3xl50mL)然后用5。/。水性檸檬酸(3x150mL)洗滌有機(jī)層以除去過(guò)量的反式-4-(氨基甲基)環(huán)己烷羧酸。真空干燥所述有機(jī)層，并將所獲白色粉末保存在-20"C。1.4喜樹(shù)堿和其衍生物喜樹(shù)堿C20H16N2O4Mol.Wt.:348.351.5制備CPP-連接子-SN38綴合物的方法按照下文描述的方法制備CPP-連接子-SN38綴合物。利用上文所述的不同連接子，采用相同的方法將不同的CPP綴合到SN38。M-0-遂凝f-SA^S游激吝SN38和連接子在于N-甲基-2-吡咯烷酮的0-(lH-6氯苯并三唑-l-基)-l,l，3,3-四甲基脲介導(dǎo)下進(jìn)行縮合。在利用二氯甲萃取并通過(guò)水洗滌除去N-甲基-2—吡咯垸酮后，中間產(chǎn)物連接子-SN38被分離并且通過(guò)從二氯甲烷/甲基叔丁基醚沉淀而純化。合成途徑的實(shí)例在0"C將于N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(50mL)的連接子(15.29mmol，例如MIC是3.23g)和0-(lH-6氯苯并三唑-l-基)-l，l，3，3-四甲基脲(HCTU)(6.1g，14.74mmol)和二異丙基乙胺(DIPEA)(5.4mL，30.9mmol)溶液攪拌15分鐘。向該反應(yīng)混合物添加黃色固體粉末形式的SN38(5g，12.75mmol)。在0"C攪拌所述混合物2小時(shí)。所述溶液加入二氯甲烷(130mL)中，依次用NaCl1M(3x130mL)然后是5n/。水性檸檬酸(3x130mL)萃取。在(TC將有機(jī)層緩慢(至少超過(guò)30分鐘)添加到甲基叔丁基醚(MTBE)(600mL)。然后過(guò)濾形成的黃色沉淀并真空(200mBar)干燥過(guò)夜。C尸尸與M-(9-遂接f-57V3(g游潔凝連接子-SN38部分與CPP綴合產(chǎn)生于DMF(二甲基甲酰胺)的CPP-連接子-SN38綴合物的混合物。用水萃取所述產(chǎn)物，并凍干產(chǎn)生黃色固體。合成途徑的實(shí)例SN38Mol.Wt.:392.40MICC,0H13NO4Mol.Wt.:211.21MIC-S鵬Mol.Wt.:585.60w"、MtC-SN38C32H31N308Mol.Wt.:585,60CPP-MIOSN38在室溫下將于二甲基甲酰胺(DMF)(200mL)的CPP-SH(5.69mmol)(例如在N末端位置含有一個(gè)半胱氨酸的DPV1047(21.49g))的溶液攪拌5分鐘。然后，添加黃色固體粉末形式的10-O-連接子-SN38(5g，8.54mmo1)。室溫下攪拌所述混合物3h。加水(200ml)，并用二氯甲垸(5xl50mL)萃取水層以去除過(guò)量的10-O-連接子-SN38。將水層在-8(TC保存4h，然后凍干。CPP-連接子-SN38綴合物保存于-20。C。通過(guò)HPLC測(cè)定CPP-連接子-SN38的凈含量。與SN38標(biāo)準(zhǔn)曲線(364nm)比較可以計(jì)算凈含量。/0力-遂接子-澄基^W滅游劍吝10-羥基喜樹(shù)堿和"連接子"在于N-甲基-2-吡咯烷酮的0-(lH-6-氯苯并三唑_1_基)_1,1,3,3-四甲基脲介導(dǎo)下進(jìn)行縮合。在利用二氯甲垸萃取并通過(guò)水洗滌除去N-甲基-2-吡咯垸酮后，中間產(chǎn)物10-0-連接子-羥基喜樹(shù)堿被分離并且通過(guò)從二氯甲烷/甲基叔丁基醚沉淀而純化。合成途徑的實(shí)例在(TC將于N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(50mL)的連接子(16.47mmo1，例如BCH是6.20g)和0-(lH-6-氯苯并三唑-l-基)-l,l，3，3-四甲基脲(HCTU)(6.53g，15.78mmol)和二異丙基乙胺(DIPEA)(5.74mL，32.94mmol)溶液攪拌15分鐘。向該反應(yīng)混合物添加黃色固體粉末形式的10-羥基喜樹(shù)堿(5g，13.72mmol)。在O'C攪拌所述混合物2小時(shí)。所述溶液加入二氯甲烷(130mL)，依次用NaCl1M(3x130mL)然后是5。/。水性檸檬酸(3x130mL)萃取。在Ot:將有機(jī)層緩慢(至少超過(guò)30分鐘)添加到甲基叔丁基醚(MTBE)(600mL)。然后過(guò)濾形成的黃色沉淀并真空(200mBar)干燥過(guò)夜。qy與,O-連接子-經(jīng)某喜賴滅游腐凝io-羥基喜樹(shù)堿C20H16N2O5Mol.Wt.:364.35BCHC20H28N2O5Mol.Wt.:376.4510-O-BCH-羥基喜樹(shù)堿—C40Yl42N'4O9'Mol.Wt,:722.78lO-O-連接子-羥基喜樹(shù)堿與CPP綴合產(chǎn)生于二甲基甲酰胺的CPP-lO-O-連接子-羥基喜樹(shù)堿綴合物的混合物。用水萃取所述產(chǎn)物，并凍干產(chǎn)生黃色固體。合成途徑的實(shí)例lO-O-BCH-羥基喜樹(shù)堿Mol.Wt.:722.78CPP-10-O-BCH-羥基喜樹(shù)堿在室溫下將于二甲基甲酰胺(200mL)的CPP-SH(4.61mmol)(例如在N末端位置含有一個(gè)半胱氨酸的DPV1047(17.42g))的溶液攪拌5分鐘。然后，添加黃色固體粉末形式的lO-O-連接子-羥基喜樹(shù)堿(5.0,6.92mmol)。室溫下攪拌所述混合物3h。加水(200ml)，并用二氯甲烷(5xl50mL)萃取水層以去除過(guò)量的10-0-連接子-羥基喜樹(shù)堿。將水層在-8(TC保存4h，然后凍干。CPP-10-O-連接子-羥基喜樹(shù)堿綴合物保存于-2(TC。通過(guò)HPLC測(cè)定CPP-10-O-連接子-羥基喜樹(shù)堿的凈含量。與10-羥基喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)曲線(364nm)比較可以計(jì)算凈含量。蘇6>-遂接，-就碰劍備合成途徑的實(shí)例葉°ftDCC，DMAPDCM沉淀DCM/MTBE喜樹(shù)堿C20Hl6N2O4Mol.Wt.:348.35連接子#1Mol.Wt:168.1520-0-連接子#1-喜樹(shù)堿C28H22N207Mol.Wt.:498.48在(TC將于1mL二氯甲烷的連接子弁l(16.47pmol,2.78mg)和二環(huán)己基碳二亞胺(6.8mg，33pmol)溶液攪拌12小時(shí)。在+(TC，通過(guò)過(guò)濾去除形成的沉淀(DCU，N,N'-二環(huán)己基脲)，并將濾液添加到喜樹(shù)堿(3.4mg，9.7pmol)和DMAP(2mg，16.47(imol)。在0"攪拌所述混合物4小時(shí)，然后依次用NaC1M(3xlmL)然后是5%水性檸檬酸(3><1mL)萃取。在0匸將有機(jī)層緩慢添加至甲基叔丁基醚(10ml)。然后過(guò)濾形成的黃色沉淀(20-O-連接子弁l-喜樹(shù)堿)并真空(200mBar)干燥過(guò)夜。C戶尸與M-0-遂接^^-^W滅游錄凝合成途徑的實(shí)例20-0-連接子#1-喜樹(shù)堿C2SH22N207Mol.Wt.:49S.48CPP-20-O-連接子^-喜樹(shù)堿在室溫下攪拌于二甲基甲酰胺(lmL)的CPP-SH(4.61pmol)(例如在N末端位置含有一個(gè)半胱氨酸的DPV1047(16.6mg))溶液5分鐘。然后，添加黃色固體粉末形式的20-0-連接子#1-喜樹(shù)堿(3.4mg，7pmol)。室溫下攪拌所述混合物3h。加水(lml)，并用二氯甲烷(5xlmL)萃取水層以去除過(guò)量的20-O-連接子-喜樹(shù)堿。將水層在-8(TC保存2h，然后凍干。CPP-20-O-連接子一喜樹(shù)堿綴合物保存于-2(TC。通過(guò)HPLC測(cè)定CPP-20-O-連接子-喜樹(shù)堿的凈含量。與喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)曲線(364nm)比較可以計(jì)算凈含量。蘇O-激，-喜#滅游縦合成途徑的實(shí)例EDC,DMAJ'DCM沉淀DCM/MTBE喜禾對(duì)堿C20H16N2O4Mol.Wt.:348.35連接子—BCHM()l.Wt,:376.4520-O-BCH-喜樹(shù)堿C40H42N4O8幽.Wt.:706.78向于二氯甲烷(IOmL)的喜樹(shù)堿(10mg，28.7[miol)溶液添加DMAP(10.5mg，86.2pmol)和連接子弁5(BCH,21.6mg，57.7jamol)。攪拌所述溶液5分鐘，然后添加于二氯甲烷(50.5mL)的EDC(11.1mg,57.7pmol)和三乙胺(12^L,86.2pmol)溶液。室溫下攪拌所述混合物18小時(shí)。所述溶液依次用NaCl1M(3x10mL)然后是5。/。水性檸檬酸(3x10mL)萃取。蒸發(fā)有機(jī)層直至獲得的體積為1mL，在0。C將溶液緩慢(至少超過(guò)5分鐘)添加到甲基叔丁基醚(20mL)。然后過(guò)濾形成的黃色沉淀并真空(200mBar)干燥過(guò)夜。CP尸與則-體子#5-喜細(xì)翻凝合成途徑的實(shí)例:20-O-BCH-喜樹(shù)堿C40HN4O8CPP-20-O-BCH-喜樹(shù)堿則.Wt.:706.78室溫下將于二甲基甲酰胺(lmL)的CPP-SH(4.61pmol)(例如在N末端位置含有一個(gè)半胱氨酸的DPV1047(16.6mg))的溶液攪拌5分鐘。然后，添加黃色固體粉末形式的20-0-連接子-喜樹(shù)堿(5mg，7pmol)。室溫下攪拌所述混合物3h。加水(lmL)，并用二氯甲烷(5xlmL)萃取水層以去除過(guò)量的20-O-BCH-喜樹(shù)堿。將水層在-80。C保存2h，然后凍干。CPP-20-O-BCH-喜樹(shù)堿綴合物保存于-20。C。通過(guò)HPLC測(cè)定CPP-20-O-連接子-喜樹(shù)堿的凈含量。與喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)曲線(364nm)比較可以計(jì)算凈含量。II穩(wěn)定性研究為了檢驗(yàn)連接子對(duì)綴合物穩(wěn)定性的影響，合成具有相同CPP但具有不同連接子的不同綴合物。CPP-連接子弁1-SN38CPP-連接子弁2-SN38<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>CPP-連接子tf3-SN38.oCPP-連接子tf4-SN38CPP-連接子弁5-SN385—')廣HLCPP-連接子tf6-SN38<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>CPP-連接子tf7-SN38在不同種屬的枸櫞酸鈉血漿(10%(v/v)檸檬酸鈉緩沖液，0.106M)中檢驗(yàn)綴合物的穩(wěn)定性(參見(jiàn)下表1)。37。C在血漿中保溫2.55ioM的綴合物。利用如下所述的HPLC熒光法(參見(jiàn)色譜設(shè)備和條件)分析樣品，然后用TFA/乙腈萃取，并測(cè)量綴合物釋放的游離喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物(例如SN38)的量。色譜設(shè)備和條件:每種樣品取150pL置于1.5mL微量離心管中。每管添加450于H20的5%(v/v)TFA，渦旋振蕩所述混合物5秒。然后將樣品在+4"C以16000g離心3分鐘。將100(^L上清置于1.5mL微量離心管。然后立即添加甲醇(IOOpiL),并渦旋振蕩5秒。然后將樣品在室溫下以16000g離心3分鐘?；厥?50上清用于HPLC分析。利用4.6x100mm(3pm粒度)LunaC18(2)柱(Phenomenexref.00D-4251-E0,LePecq,France)通過(guò)高效液相層析(HPLC;Agilent1100系列，配備熒光檢測(cè)器)分離綴合物、代謝產(chǎn)物和喜樹(shù)堿衍生物(即SN38)。流動(dòng)相(A)的水性組分是于水的0.in/。(v/v)TFA。有機(jī)調(diào)節(jié)劑(B)是含0.1。/。(v/v)TFA的乙腈。對(duì)于綴合物和其代謝產(chǎn)物，使用梯度洗脫，B的比例在2分鐘內(nèi)從15"M)線性增加到37。/。，6分鐘內(nèi)從37%到47%，然后在2分鐘內(nèi)到達(dá)90%，流速恒定為1.2mL/分鐘。然后B的比例回到初始條件3.0分鐘。表l:DPV1047-連接子-SN38在37'C血漿中的半衰期(分鐘)<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>綴合物的半衰期對(duì)應(yīng)于本發(fā)明綴合物釋放50%(按摩爾量計(jì)算)的游離喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物需要的時(shí)間。在人血漿中，綴合物DPV1047-連接子W-SN38的半衰期(小于5分鐘)比綴合物DPV1047-連接子弁2-SN38(6-7分鐘)的半衰期更短，其依次比綴合物DPV1047-連接子tf3-SN38(12分鐘)的半衰期更短。發(fā)現(xiàn)最穩(wěn)定的綴合物是DPV1047-連接子弁5-SN38(400分鐘)，其半衰期比DPV1047-連接子弁2-SN38綴合物長(zhǎng)60倍。包含連接子#5的綴合物在大鼠血漿中也是最穩(wěn)定的。III檢測(cè)4種CPP-MIC-SN38綴合物在植入裸鼠的人HCT116異種移植結(jié)腸腫瘤模型中的功效在載有人源HCT116腫瘤的雌性NMRi裸鼠(6周齡)(Janvier,France)中利用Q4Dx3給藥方案(每四天注射一次，重復(fù)三次)進(jìn)行抗腫瘤功效研究以鑒定感興趣的CPP-連接子弁2-SN38綴合物(按照實(shí)施例1.4描述產(chǎn)生的綴合物)。通過(guò)將細(xì)胞懸液真皮內(nèi)移植到小鼠右脅腹種植HCT116腫瘤細(xì)胞(ATCCNumber:CCl-247)。腫瘤細(xì)胞移植后第3天進(jìn)行第一次藥物注射，當(dāng)腫瘤大小達(dá)到大約100mm、按照下列公式計(jì)算[長(zhǎng)x寬^/2)時(shí)，小鼠被隨機(jī)分組，每組6只，并按照先前確定的最大給藥劑量(MaximalAdministrableDose，MAD)用CPP-MIC-SN38治療，以10^L/g在尾側(cè)靜脈靜脈推注，然后是Q4Dx3給藥方案。最小T/CM反映了實(shí)現(xiàn)的最大腫瘤生長(zhǎng)抑制。在治療臨床癥狀期間或者之后，記錄體重和腫瘤大小以便評(píng)價(jià)注射的綴合物的功效和毒性。藥物治療組相對(duì)載體治療組的平均腫瘤體積百分比(T/CxlOO)和定義為100-T/C(。/。)的腫瘤生長(zhǎng)抑制率(TGI。/。)被用于評(píng)價(jià)治療功效。4種CPP-MIC-SN38綴合物的治療參數(shù)概述于下表2。表2:4種CPP-MIC-SN38綴合物在真皮內(nèi)植入裸鼠的HCT116人結(jié)腸直腸癌腫瘤模型中的功效<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>***:相對(duì)于對(duì)照pO.OOl(Dunnett檢驗(yàn))D-當(dāng)達(dá)到最小T/C時(shí)的天數(shù)在HCT116腫瘤模型中，與鹽水對(duì)照相比，3種CPP-MIC-SN38綴合物(DPV15b-MIC-SN38、DPV15-MIC-SN38和DPV1047-MIC-SN38)顯示顯著的抗腫瘤活性(TGI^60-63。/。)，而DPV3-MIC-SN38綴合物只顯示中等的抗腫瘤活性(TGP32。/。)。當(dāng)按照MAD給予CPP-MIC-SN38綴合物時(shí)，在研究期間沒(méi)有觀察到毒性的臨床癥狀例如體重減輕、腹瀉或者掉毛。用DPV15b-MIC-SN38、DPV15-MIC-SN38和DPV1047-MIC-SN38已經(jīng)證明，與鹽水對(duì)照相比，以高劑量水平(30-50,ol/kg)給藥的綴合物顯示最大的抗腫瘤活性。IV在植入裸鼠小鼠的人HCT116異種移植結(jié)腸腫瘤模型或者植入裸鼠大鼠的人LS174T異種移植結(jié)腸腫瘤模型中評(píng)估連接子穩(wěn)定性對(duì)CPP-連接子-SN38綴合物的治療功效的影響在兩種異種移植模型中評(píng)價(jià)連接子穩(wěn)定性對(duì)CPP-連接子-SN38功效的影響。根據(jù)體外血漿穩(wěn)定性選擇連接子MIC連接子(連接子#2)在人血槳中相對(duì)不穩(wěn)定，而B(niǎo)CH連接子(連接子#5)顯示高人血漿穩(wěn)定性。在小鼠中分析了4種綴合物DPV15-MIC-SN38、DPV1047-MIC-SN38、DPV15-BCH-SN38和DPV1047-BCH-SN38的特征。在大鼠中分析了兩種綴合物DPV1047-MIC-SN38和DPV1047-BCH-SN38的特征。按照實(shí)施例III的描述進(jìn)行移植和HCT116腫瘤生長(zhǎng)。在第一次注射當(dāng)天，小鼠被隨機(jī)分組，每組6只，并用相同等摩爾劑量(30,d/kg)的CPP-連接子-SN38綴合物治療，以10pL/g尾側(cè)靜脈靜脈推注，然后是Q4Dx3(每四天注射一次，三次)給藥方案。利用購(gòu)自Harlan繁殖中心(Gannat，F(xiàn)rance)的雌性裸鼠大鼠(8周齡)進(jìn)行LS174T研究。通過(guò)將細(xì)胞(ATCC號(hào)CC1-188)懸浮液皮下移植到動(dòng)物右脅腹種植LS174T腫瘤。當(dāng)腫瘤達(dá)到大約1000mm3的大小時(shí)，進(jìn)行藥物的第一次注射。利用下列公式計(jì)算腫瘤體積[長(zhǎng)x寬2]/2。在第一次注射當(dāng)天，大鼠被隨機(jī)分組，每組8只，按照先前確定的MAD用CPP-連接子-SN38綴合物治療，以10pL/g尾側(cè)靜脈靜脈推注，然后是Q3/4Dx5(每3天或者4天，5次)給藥方案。實(shí)驗(yàn)期間，每周兩次監(jiān)控臨床癥狀、體重和腫瘤大小。藥物治療組相對(duì)載休(對(duì)照)治療組的平均腫瘤體積百分比(T/CxlOO。/。)和定義為100-T/C的腫瘤生長(zhǎng)抑制率(TGP/。)用于評(píng)價(jià)治療功效。最低T/C。/。反映了實(shí)現(xiàn)的最大腫瘤生長(zhǎng)抑制。4種CPP-連接子-SN38綴合物在HCT116荷瘤小鼠中的治療參數(shù)概述于表3。表3:兩種化學(xué)連接子對(duì)CPP-連接子-SN38綴合物在真皮內(nèi)植入裸鼠的HCT116人結(jié)腸直腸癌腫瘤模型中功效的影響CPP-連接子-SN38綴合物劑量(累積)pmol/kg方案最小T/C(%)(D)TGI(%)DPV1047-MIC-SN3830(90)Q4Dx329(D19)DPV15-MIC-SN3827(D17)DPV1047-BCH-SN3810(D14)DPV15-BCH-SN3830(D19)60***相對(duì)于對(duì)照pO.OOl(Dunnett檢驗(yàn))D^當(dāng)達(dá)到最小T/C時(shí)的天數(shù)在HCT116腫瘤模型中所有4種綴合物均顯示顯著的抗腫瘤功效。DPV1047-BCH-SN38(TGI=80%)的活性顯著高于DPV1047-MIC-SN38(TGI=60%)、DPV15-BCH-SN38(TGI-61。/。)并且高于DPV15-MIC-SN38(TGI=630/o)。當(dāng)按照MAD給予CPP-MIC-SN38或者CPP-BCH-SN38綴合物時(shí)，在研究期間沒(méi)有檢測(cè)到毒性的臨床癥狀例如體重減輕、腹瀉或者掉毛。LS174T荷瘤大鼠中兩種DPV1047-連接子-SN38綴合物的功效顯示于表4。表4:兩種化學(xué)連接部分對(duì)CPP-連接子-SN38綴合物在皮下植入裸鼠大鼠的LS174T人結(jié)腸直腸癌腫瘤模型中功效的影響CPP-連接子-SN38綴合物劑量(累積)|j_moI/kg方案最小T/C(%)(D)TGI(%)DPV1047-MIC-SN38DPV1047-BCH-SN3820(100)Q3/4D>44(D35)44(D35)承氺氺相對(duì)于對(duì)照pO.OOl(Dunnett檢驗(yàn))D二當(dāng)達(dá)到最小T/C時(shí)的天數(shù)DPV1047-MIC-SN38和DPV1047-BCH-SN38(TGI-56-57。/。)在LS174T腫瘤模型中均顯示相同顯著的抗腫瘤活性。當(dāng)按照MAD給予CPP-MIC-SN38或者CPP-BCH-SN38綴合物時(shí)，在研究期間沒(méi)有檢測(cè)到毒性的臨床癥狀例如體重減輕、腹瀉或者掉毛。在荷瘤小鼠中，DPV1047-BCH-SN38是4種被測(cè)綴合物中活性最高的。在荷瘤小鼠中，DPV1047-MIC-SN38和DPV1047-BCH-SN38顯示相同的活性。V比較DPV1047-BCH-SN38綴合物和其他SN38衍生物在植入裸鼠的人HCT116結(jié)腸腫瘤模型中的功效將DPV1047-BCH-SN38^DPV1047-連接子弁5-SN38)綴合物與利用其他輸送系統(tǒng)的SN38衍生物的活性進(jìn)行比較，所述輸送系統(tǒng)使活性分子能夠溶解。DPV1047-BCH-SN38(上文證明其在所有被檢測(cè)的CPP和連接子中具有最大的體內(nèi)功效)與依立替康(SN38的商品化可溶性前體藥物(Campto取Aventis))和(谷氨酸)wCys-MIC-SN38綴合物(PolyEd6)-MIC-SN38)進(jìn)行了比較。因?yàn)槠渖锵嗳菪浴⒎嵌拘?、親水性和增溶性，PolyEd6)肽被選作本發(fā)明的非細(xì)胞滲透肽。按照上文描述進(jìn)行移植和HCT116腫瘤生長(zhǎng)。在第一次注射當(dāng)天，小鼠被隨機(jī)分組，每組6只，并按照最佳給藥條件(參見(jiàn)表5)接受不同的綴合物治療，以10]LiL/g尾側(cè)靜脈靜脈推注。實(shí)驗(yàn)期間，每周兩次監(jiān)控臨床癥狀、體重和腫瘤大小。藥物治療組相對(duì)載體治療組的平均腫瘤體積百分比(T/CxlOOM)和定義為100-T/C(%)的腫瘤生長(zhǎng)抑制率(TGP/。)被用于評(píng)價(jià)治療功效。最低T/C。/。反映了實(shí)現(xiàn)的最大腫瘤生長(zhǎng)抑制。不同SN38綴合物的治療參數(shù)概述于表5。表5:DPV1047-BCH-SN38綴合物和其他SN38衍生物在真皮內(nèi)植入裸鼠的HCT116人結(jié)腸直腸癌腫瘤模型中的功效比較治療分子<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>***.相對(duì)于對(duì)照pX).001(Dunnett檢驗(yàn))D-當(dāng)達(dá)到最小T/C時(shí)的天數(shù)在HCT116腫瘤模型中，無(wú)論采用什么給藥方案，DPV1047-BCH-SN38均顯示相似的TGI。Q2D3x3W方案比其他兩種方案引起更長(zhǎng)的活性。盡管利用Q4Dx3給藥方案以高劑量水平(40pmol/kg)給藥，但是PolyE(16)-MIC-SN38在該模型中是沒(méi)有活性的。綴合親水性肽序列PolyE(16)對(duì)SN38的增溶作用不足以將SN38以體內(nèi)活性形式有效輸送。采用Q2D3x3W方案，DPV1047-BCH-SN38和依立替康顯示最好的功效，導(dǎo)致延長(zhǎng)的腫瘤生長(zhǎng)抑制，在28天后達(dá)到最小的T/C。/。。在小鼠的功效研究中，無(wú)論采用什么給藥方案，依立替康均顯示與DPV1047-BCH-SN38相似的活性。小鼠中依立替康向SN38的轉(zhuǎn)化顯著高于人的，這歸因于羧酸酯酶類的種間變化，因此依立替康的功效在小鼠模型中被高估(J.Thompson等，BBA1998;1400:301-319)。當(dāng)以MAD給予DPV1047-BCH-SN38綴合物時(shí)，在研究期間沒(méi)有觀察到毒性的臨床癥狀例如體重減輕、腹瀉或者掉毛。VIDPV1047-BCH-SN38、DPV1047-MIC-SN38和依立替康在犬中的毒性和藥代動(dòng)力學(xué)比較研究在比格犬中評(píng)價(jià)了DPV1047-連接子-SN38綴合物相對(duì)于依立替康的腸和血液學(xué)毒性。該犬是一種合適的模型，因?yàn)樵撐锓N中依立替康的代謝類似于人的(M.Inaba等，CancerChem.Pharmacol.41:130-108(1998))，并且因?yàn)樵撊@示的延遲腹瀉癥狀與從人類觀察到的一致。成年雌性和雄性比格犬被分籠伺養(yǎng)，可以自由飲用自來(lái)水。每天分發(fā)顆粒食物。通過(guò)頭部靜脈或者隱靜脈對(duì)犬(每種藥物和劑量1條犬)進(jìn)行靜脈內(nèi)灌注。利用一次性導(dǎo)管(Intmflon⑧)以及連接注射泵的塑料注射器完成這些靜脈內(nèi)輸注。注射期間，動(dòng)物被束縛在吊床上。通過(guò)45分鐘輸注(0.3-0.4mL/min)，分別給藥5、10和20mg/kg的DPV1047-BCH-SN38(DPV1047-連接子存5-SN38)。通過(guò)20分鐘輸注(0.3-0.4mL/min)分別給藥10和20mg/kg的DPV1047-MIC-SN38(DPV1047-連接子#2-SN38);通過(guò)45分鐘輸注(0.3-0.4mL/min)分別給藥50和70mg/kg的DPV1047-MIC-SN38(DPV1047-連接子^-SN38)。通過(guò)20分鐘輸注(0.3-0.4mL/min)按照其最大耐受量(MTD)即30mg/kg(RLavelle等，SeminarinOncology(1996))注射依立替康(臨床級(jí))。將綴合物溶于注射用水(終體積的10%)，并用0.9n/。NaCl稀釋至終濃度。根據(jù)體重調(diào)整每只動(dòng)物的給藥體積。在輸注后的15天時(shí)間段監(jiān)測(cè)臨床癥狀、血液學(xué)和腸毒性。每天至少兩次檢測(cè)每只動(dòng)物的死亡或者疾病癥狀。在-1、4、10和13天記錄每只動(dòng)物的體重。在-1、5、11和14天采集外周血樣品到EDTA管以測(cè)定下列參數(shù)紅細(xì)胞，血紅蛋白，平均細(xì)胞體積，細(xì)胞壓積，平均細(xì)胞血紅蛋白濃度，平均細(xì)胞血紅蛋白，血小板，白細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)的差異白細(xì)胞計(jì)數(shù)。接受依立替康治療的犬顯示典型的依立替康毒性臨床癥狀(F.LavdleI，SeminarinOncology,1996):早期(第1天)和晚期腹瀉(第4-6天)，體重減輕(-8.5%)，嘔吐以及第5天報(bào)告嚴(yán)重但可逆的血液毒性(hematoxicity)(92。/。的白細(xì)胞耗竭，參見(jiàn)下表6)。接受5和10mg/kgDPV1047-BCH-SN38治療的犬沒(méi)有顯示任何臨床癥狀，只顯示中度但不依賴于劑量的白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)降低，就像使用低于其MTD的許多細(xì)胞毒性分子觀察到的那樣。當(dāng)DPV1047-BCH-SN38為20mg/kg時(shí)，觀察到白細(xì)胞的顯著降低(WBC降低93M)，并伴隨食物攝入的減少，表明已達(dá)到最大耐受量(MTD)。30mg/kg的DPV1047-BCH-SN38顯示明顯的毒理學(xué)癥狀，包括腹瀉和嚴(yán)重血液毒性。接受10、20、40和50mg/kgDPV1047-MIC-SN38治療的犬沒(méi)有顯示任何臨床癥狀，只顯示白細(xì)胞(WBC)的中度減少。70mg/kg的DPV1047-MIC-SN38顯示毒性癥狀，包括胃腸毒性、腹瀉和嘔吐。并且報(bào)告了嚴(yán)重的血液毒性(94。/。的WBC耗竭)。這些結(jié)果提示DPV1047-BCH-SN38的MTD是大約20mg/kg(相當(dāng)于2.6mgSN38)，DPV1047-MIC-SN38的MTD是50-70mg/kg(相當(dāng)于6.5-9.1mgSN38)。由此可見(jiàn)DPV1047-BCH-SN38的毒性高于DPV1047-MIC-SN38。兩種不同的SN38綴合物在比格犬中的毒性研究概述于表6。表6:輸注依立替康、DPV1047-BCH-SN38和DPV1047-MIC-SN38后比格犬的毒性研究藥物劑量(mg/kg)毒性征兆在D5時(shí)WBC的降低(％)第l天接下來(lái)的天數(shù)依立替康30失衡震顫(顯著的)多涎稀便(顯著的)嘔吐嘔吐D4稀便D5&6-92DPV1047-BCH-SN38無(wú)無(wú)-6010無(wú)無(wú)-5010無(wú)無(wú)-5720無(wú)進(jìn)食減少-9330無(wú)稀便D4-96DPV1047-MIC-SN3810無(wú)無(wú)-4420無(wú)無(wú)-5740無(wú)無(wú)-6950無(wú)無(wú)-5370嘔吐稀便D4-94WBC白細(xì)胞，D天作為這些研究的一部分，比較了DPV1047-BCH-SN38、DPV1047-MIC-SN38、依立替康和其主要代謝產(chǎn)物的藥代動(dòng)力學(xué)。在輸注后不同時(shí)間采集外周血樣品進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析。對(duì)于10和20mg/kg的依立替康和DPV1047-MIC-SN38，在時(shí)間O(輸注前)，輸注即將結(jié)束時(shí)(20分鐘)和輸注結(jié)束后IO、20、40、220、460分鐘從血液取樣。對(duì)于其他所有組，在時(shí)間O(輸注前)，輸注即將結(jié)束時(shí)(45分鐘)和輸注結(jié)束后10、20、40、120、220分鐘從血液取樣。將血液樣品(2.5mL)采集到含2.5mL5%TFA(v/v)的5mL枸櫞酸鈉管(SarstedtS-Monovette9NC)，并在-80。C保存(少于兩周)前渦旋振蕩5秒。然后在TFA和乙腈萃取之后通過(guò)如下所述的HPLC熒光方法分析樣品。樣品在室溫下的水浴中解凍5分鐘，用5毫升含2.5%TFA(v/v)的H20稀釋兩倍。用TFA酸化全血樣品以保護(hù)綴合物的酯鍵免受水解并沉淀蛋白以提高綴合物和SN38的回收。然后每種樣品取500微升到1.5mL微量離心管中，在+4"C以16000xg離心3分鐘。取100微升上清到1.5mL微量離心管中，然后添加20pL新制備的1.12叱/mL喜樹(shù)堿溶液(內(nèi)標(biāo)；在+4"C冰浴靜置不超過(guò)4小時(shí))。然后立即添加甲醇(IOOnL)，并劇烈攪拌所述混合物(渦旋振蕩)5秒。然后將樣品在室溫下以16000xg離心3分鐘。回收150微升上清進(jìn)行HPLC分析。HPLC分析通過(guò)高效液相層析(具有熒光檢測(cè)器的HPLCAgilent1100)使用下列方法分離DPV1047-BCH-SN38和其代謝產(chǎn)物SN38:溶劑A:于H20中的0.1%(v/v)TFA溶劑B:于乙腈中的0.1%(v/v)TFA柱Luna,C18(2)，3100x4.6mm(Phenomenexref.00D-4251-E0)洗脫15-37。/。的B、2min，37-47、6min，到90%的B、0.5min，然后是90。/。的B、2min，15%的B、2min。注射體積100)iL流速1.2mL/min檢測(cè)熒光；激發(fā)375nm，發(fā)射560nm(靈敏度18)通過(guò)高效液相層析(具有熒光檢測(cè)器的HPLCAgilent1100)使用下列方法分離DPV1047-MIC-SN38、依立替康和他們的代謝產(chǎn)物SN38:溶劑A:于H20中的0.1%(V/V)TFA溶劑B:于乙腈中的0.1。/。(V/V)TFA柱Luna，C18(2),3(i，100x4.6mm(Phenomenexref.00D-4251-E0)洗脫15-50。/。的B、10min，到90。/。的B、0.5min，然后是卯。/。的B、2min，15。/。的B、2min。注射體積100jiL流速1.2mL/min檢測(cè)熒光；激發(fā)375nm，發(fā)射560nm(靈敏度18)圖1比較了相對(duì)于30mg/kg依立替康，輸注不同劑量的DPV1047-BCH-SN38禾口DPV1047-MIC-SN38后對(duì)于SN38的血液暴露(AUC)。在DPV1047-BCH-SN38(劑量S20mg/kg)和DPV1047-MIC-SN38(劑量^3/。50mg/kg)的無(wú)毒劑量，SN38C,和AUC均隨綴合物的劑量線性增力口。輸注30mg/kg(其MTD)的依立替康后，SN38(依立替康的活性代謝產(chǎn)物)的AUC比輸注DPV1047-MIC-SN38或者DPV1047-BCH-SN38(劑量大約是它們各自的MTD)后的SN38的AUC低超過(guò)80倍。與依立替康相反，在血液的無(wú)毒劑量水平，DPV1047-連接子-SN38綴合物輸送顯著更多量的活性代謝產(chǎn)物SN38。與等摩爾量的DPV1047-MIC-SN38相比，輸注DPV1047-BCH-SN38后SN38的AUC顯著更高(圖1)。DPV1047-BCH-SN38在血液中的循環(huán)半衰期比DPV1047-MIC-SN38長(zhǎng)，因此DPV1047-BCH-SN38輸送的SN38的AUC大于DPV1047-MIC-SN38釋放的(圖2)。觀察到的DPV1047-BCH-SN38的毒性增加與活性(細(xì)胞毒性)分子SN38的AUC增加密切相關(guān)。犬的毒性研究證明DPV1047-BCH-SN38綴合物的毒性比DPV1047-MIC-SN38綴合物更高。BCH和MIC綴合物均顯示特征為胃腸毒性和血液毒性的相同毒性譜。BCH綴合物的MTD比MIC綴合物低大約3倍，但與BCH綴合物釋放的顯著更多的SN38密切相關(guān)。當(dāng)DPV1047-BCH-SN38的注射劑量在5-20mg/kg和DPV1047-MIC-SN38的注射劑量在10-50mg/kg時(shí)，觀察到SN38的AUC劑量依賴性增加。這些結(jié)果證明DPV1047-連接子-SN38綴合物能夠比依立替康輸送顯著更多的循環(huán)SN38，并且毒性顯著降低。這極其重要，因?yàn)橐阎懒⑻婵祵?duì)人的劑量加強(qiáng)提高對(duì)治療的應(yīng)答，這歸因于對(duì)活性代謝產(chǎn)物SN38的更多暴露(deJongeM.J.,等，JClinOncol,18:195-203,2000;Ychou,M.，等，CancerChemotherapyAndPharmacology,50:383-391,(2002))，但因?yàn)橐懒⑻婵档膭┝肯拗贫拘?，這種劑量加強(qiáng)是基本上不可能的。VII在植入嚙齒類動(dòng)物的人腫瘤模型范圍中評(píng)估DPV1047-BCH-SN38綴合物的體內(nèi)功效在多種不同的腫瘤模型中評(píng)估DPV1047-BCH-SN38綴合物的活性以便確定該綴合物對(duì)各種腫瘤類型的適用性。選擇了5種人腫瘤模型HCT116結(jié)腸直腸癌模型(ATCC號(hào)CC1-247),LS174T結(jié)腸直腸癌模型(ATCC號(hào):CC1-188),HT-29結(jié)腸直腸癌模型(ATCC號(hào)HTB-38)，NCI-H460月市癌(ATCC號(hào)HTB-177)和MDA-MB-231乳腺癌模型(ATCC號(hào)HTB-26)。通過(guò)將細(xì)胞真皮內(nèi)或者皮下移植到7周齡雌性NMRi裸鼠的右脅腹(分64別注射lxl07、lx107、3xl()6和3xl()6個(gè)細(xì)胞)(Janvier,France)建立HCT116、HT-29、NCI-H460和MDA-MB-231腫瘤。LS174T腫瘤細(xì)胞被植入Rhmu/mu裸鼠大鼠(2xl(^個(gè)細(xì)胞)。當(dāng)小鼠中的腫瘤大小達(dá)到100mn^或者大鼠中的腫瘤大小達(dá)到1000mm、利用下列公式計(jì)算[長(zhǎng)x寬勺/2)時(shí)，治療開(kāi)始。第一次注射當(dāng)天，動(dòng)物被隨機(jī)分成不同的組(每組6或者8只動(dòng)物)，并通過(guò)尾側(cè)靜脈靜脈推注(i.v.)將于鹽水中的10^L/gDPV1047-BCH-SN38進(jìn)行輸送(表7)。實(shí)驗(yàn)期間，每周兩次監(jiān)控臨床癥狀、體重和腫瘤大小。藥物治療組相對(duì)載體治療組的平均腫瘤體積百分比(T/Cx100%)和定義為100-T/C(%)的腫瘤生長(zhǎng)抑制率(TGP/。)被用于評(píng)價(jià)治療功效。最低T/Cn/。反映了實(shí)現(xiàn)的最大腫瘤生長(zhǎng)抑制。DPV1047-BCH-SN38綴合物在不同腫瘤模型中的功效概述于表7。表7:DPV1047-BCH-SN38綴合物在真皮內(nèi)或者皮下植入嚙齒類動(dòng)物的不同人類腫瘤模型中功效的評(píng)價(jià)。腫瘤類型腫瘤模型途徑/方案劑量最佳T/C%TGI%(HmoI/kg)沃)乳腺癌MDA-MB-231i.v.Q2D3x3W12.534.1(58)*65.9(小鼠)2530.1(51)***69.9肺癌NCI-H460i.v.Q2D3x3W12.547.5(24)***52.5(小鼠)2522.9(24)***77.1結(jié)腸癌HCTU6(小鼠)i.v.Q2D3x3W253.4(25)***96.6HT-29(小鼠)i.v.Q4Dx312.566.8(38)33.22539.2(31)***60.8LS174T(大鼠)i.v.Q4Dx51047.2(35)***52.82042.8(35)***57.2*p<0.05，***:p<0.001，相對(duì)于對(duì)照(Dunnett檢驗(yàn))D^當(dāng)達(dá)到最小T/C時(shí)的天數(shù)DPV1047-BCH-SN38(-DPV1047-連接子存5-SN38)綴合物在所有被檢測(cè)的結(jié)腸直腸癌、肺癌和乳腺癌模型中均顯示顯著的抗腫瘤活性水平，證明DPV1047-BCH-SN38在大量人類腫瘤中具有活性。此外，當(dāng)檢測(cè)不同的劑量時(shí)，觀察到劑量依賴性功效。VIIIDPV1047-BCH-SN38綴合物與貝伐單抗或者5-氟尿嘧啶聯(lián)用的體內(nèi)功效的評(píng)價(jià)在臨床上已經(jīng)證明依立替康與藥物如5-氟尿嘧啶(5-FU)(TevaPharma)和貝伐單抗(Avastin眠Roche)具有協(xié)同作用。因此進(jìn)行聯(lián)合研究以評(píng)估DPV1047-BCH-SN38與這些藥物聯(lián)用的作用。小鼠被植入HT-29腫瘤并以10pL/g通過(guò)腹膜內(nèi)給予(貝伐單抗)或者靜脈推注(5-FU或者DPV1047-BCH-SN38)進(jìn)行治療。根據(jù)Prewett等，ClinCancerRes.May;8(5):994-1003(2002)和Azrak等，ClinCancerRes.Feb1;10(3):1121-9.(2004)制定方案，給予按照實(shí)驗(yàn)確定的亞適量DPV1047-BCH-SN38、5-FU和貝伐單抗。在用貝伐單抗、5-FU或者DPV1047-BCH-SN38治療后計(jì)算T/C比例。這些T/C比例用于評(píng)價(jià)貝伐單抗和DPV1047-BCH-SN38或者5-FU和DPV1047-BCH-SN38聯(lián)合治療的預(yù)期T/C(DPV1047-BCH-SN38的T/Cx貝伐單抗或者5-FU的T/C)。用實(shí)驗(yàn)方法確定聯(lián)合治療后觀察到的T/C。通過(guò)用預(yù)期T/C除以觀察到的T/C，計(jì)算這兩種分子的組合指數(shù)(combinationindex)。指數(shù)>1證明是協(xié)同作用，指數(shù)大約為l提示疊加作用，指數(shù)<1提示拮抗作用。這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果概述于表8。表8:DPV1047-BCH-SN38與5-FU或者貝伐單抗聯(lián)用在HT-29腫瘤模型中協(xié)同作用的評(píng)價(jià)。_<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>1頁(yè)期的T/C=DPV1047-BCH-SN38T/Cx參照藥物T/C;$組合指數(shù)=預(yù)期的T/C/觀察到的T/C在這些實(shí)驗(yàn)中，DPV1047-BCH-SN38與5-FU或者貝伐單抗聯(lián)用增強(qiáng)抗腫瘤功效。對(duì)于5-FU來(lái)說(shuō)，聯(lián)用效果是協(xié)同的(組合指數(shù)>1)，而對(duì)于貝伐單抗來(lái)說(shuō)，聯(lián)用效果是疊加的(組合指數(shù)大約為1)。IX與DPV1047-BCH-SN38.HC1相比，DPV1047-BCH-SN38'TFA體外和體內(nèi)活性的評(píng)價(jià)然后比較DPV1047-BCH-SN38TFA和DPV1047-BCH-SN38'HC1化合通過(guò)DPV1047-BCH-SN38TFA的離子交換層析形成鹽酸DPV1047-BCH-SN38(DPV1047國(guó)BCH畫SN38.HC1)。AmberliteIRA-410離子交換樹(shù)脂(475g)(Fluka)在2NHC1中懸浮30min。然后將樹(shù)脂裝到柱中并用水洗滌。將24gDPV1047-BCH-SN38'TFA溶于125mL水，上樣到柱上，并用水洗脫。利用HIACHIU-2000分光光度計(jì)通過(guò)364nm的UV吸光度確定不同級(jí)分中DPV1047-BCH-SN38HC1的濃度。然后合并相關(guān)級(jí)分，冰凍干燥。然后將DPV1047-BCH-SN38-HC1綴合物保存在-2(TC的氬氣中。沒(méi)有觀察到DPV1047-BCH-SN38兩種鹽形式功效的差異；NCI-H460肺腺癌模型(ATCC號(hào)HTB-177)的體外細(xì)胞毒性和體內(nèi)功效研究證實(shí)了DPV1047-BCH-SN38.HC1仍保持活性，對(duì)于DPV1047-BCH-SN38TFA和DPV1047-BCH-SN38'HC1的體內(nèi)最佳T/C分別是22.9%和18.4%(參見(jiàn)表9)。表9:DPV1047-BCH-SN38.TFA和DPV1047-BCH-SN38'HC1的體外(IC^)和體內(nèi)功效的評(píng)價(jià)化合物體外毒性IC50(nM)NCI-H460lh暴露+保溫后48h體內(nèi)功效(25pmol/kg)最佳T/C%(天數(shù))TGI%DPV1047-BCH-SN3'TFA16518.4(27)***81.6DPV1047-BCH-SN3-HC117322.9(24)***77.1*p<0.01，***:p<0.001，相對(duì)于對(duì)照(Dunnett檢驗(yàn))XDPV1047-BCH-SN38可溶性的評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)DPV1047-BCH-SN38(-DPV1047-連接子tf5-SN38)在水中的溶解度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于SN38或者依立替康的DPV1047-BCH-SN38'HC1S1g/mL,依立替康S2.5mg/mL和SN38S5|Lig/mL。XI各種CPP-連接子喜樹(shù)堿衍生物的穩(wěn)定性和體外功效的評(píng)價(jià)犬中的比較毒物動(dòng)力學(xué)研究證明了DPV1047和SN38之間連接子的穩(wěn)定性與SN38血漿AUC的增加相關(guān)(參見(jiàn)實(shí)施例VI)。因此進(jìn)行研究以評(píng)價(jià)不同CPP-連接子-喜樹(shù)堿衍生物的體外穩(wěn)定性。用67不同的CPP、不同的連接子和兩種喜樹(shù)堿SN38或者10-羥基喜樹(shù)堿來(lái)合成綴合物。CPP-連接子-SN38綴合物:DPV1047-連接子^5-SN38DPV1047-連接子#1-SN38穿膜肽-連接子W-SN38穿膜肽-連接子W-SN38DPV7-連接子弁5-SN38Tat-連接子W-SN38DPV1047d-逢接子弁5-SN38DPV51d-連接子弁5-SN38CPP連接子-10-羥基喜樹(shù)堿綴合物穿膜肽-連接子#5-10-羥基喜樹(shù)堿穿膜肽-連接子#1-10-羥基喜樹(shù)堿(PCT專利申請(qǐng)WO00/01417中描述)DPV1047-連接子弁5-10-羥基喜樹(shù)堿DPV1047-連接子#1-10-羥基喜樹(shù)堿Tat-連接子tf4-10-羥基喜樹(shù)堿1^-連接子#7-10-羥基喜樹(shù)堿就像實(shí)施例II一樣，在人或者犬血漿中檢測(cè)這些綴合物的穩(wěn)定性。37°C保溫后，通過(guò)實(shí)施例II描述的HPLC熒光方法在TFA乙腈萃取后分析樣品。還評(píng)價(jià)了這些化合物的體外細(xì)胞毒性(ICscO。在添加治療化合物前通過(guò)種植細(xì)胞24h來(lái)進(jìn)行細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)。將細(xì)胞與不同稀釋度的治療化合物保溫48h(37'C)。然后利用WST-1分析(Roche)評(píng)價(jià)細(xì)胞活性。結(jié)果表示為平均細(xì)胞毒性濃度(IC5。值或者抑制50%細(xì)胞活性的摩爾濃度)，這是利用GraphPadPrism3.02軟件根據(jù)sigmoid回歸分析估算的。該研究中使用兩種細(xì)胞系-HCT116(ATCC#:CCL-247):人上皮結(jié)腸癌細(xì)胞。在McCoy's5a培養(yǎng)基+1.5mML-谷氨酰胺和10%胎牛血清中培養(yǎng)細(xì)胞。以8000細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞種于96孔板。-NCI-H460(ATCC#:HTB-177):人上皮肺癌細(xì)胞。在RPMI1640+glutamax和10%胎牛血清中培養(yǎng)細(xì)胞。以10000細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞種于96孔板。CPP-連接子-SN38綴合物如表10所示，DPV1047-連接子弁5-SN38是最穩(wěn)定的綴合物(在人和犬的血漿中半衰期分別為360分鐘和260分鐘)，與之前觀察到的穩(wěn)定性一致(參見(jiàn)實(shí)施例11)。在犬和人的血漿中，無(wú)論哪種CPP與SN38偶聯(lián)，CPP-連接子弁5-SN38綴合物總是比CPP-連接子弁1-SN38綴合物穩(wěn)定，證實(shí)連接子#5^BCH)比連接子tfl更穩(wěn)定。表10:37'C血漿中SN38綴合物的半衰期(分鐘)<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>評(píng)價(jià)最穩(wěn)定化合物(含有連接子#5)的體外細(xì)胞毒性以確定這些化合物的細(xì)胞毒性性質(zhì)是否仍被保留。表ll證實(shí)在被測(cè)的兩種細(xì)胞系中，全部CPP-連接子弁5-SN38綴合物都保留與SN38相當(dāng)?shù)募?xì)胞毒性。表ll:48h連續(xù)暴露后，兩種不同細(xì)胞系中抑制50%細(xì)胞活性的藥物濃度(IC5G)。數(shù)據(jù)以nM表示，代表3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>還評(píng)價(jià)了CPP為D構(gòu)象的CPP-連接子W-SN38綴合物的體外血漿穩(wěn)定性和細(xì)胞毒性。如表12所示，兩種CCP-連接子弁5-SN38D-亞型綴合物的穩(wěn)定性均顯著高于觀察到的CPP-連接子弁1-SN38綴合物的(參見(jiàn)表10)。盡管CCP-連接子弁5-SN38D-亞型綴合物在人血漿中的半衰期大于100分鐘，但其穩(wěn)定性低于DPV1047-連接子W-SN38綴合物。結(jié)果顯示于下表12。表12:37t血漿中SN38綴合物的半衰期(分鐘)<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>評(píng)價(jià)這些綴合物的體外細(xì)胞毒性以確定這些化合物的細(xì)胞毒性性質(zhì)是否仍被保留。表13證實(shí)兩種CPP-連接子弁5-SN38D-亞型綴合物都保留與DPV1047-連接子弁5-SN38相當(dāng)?shù)募?xì)胞毒性。結(jié)果顯示于下表13。表23:48h連續(xù)暴露后，抑制50%細(xì)胞活性的藥物濃度(1(:5())。數(shù)據(jù)以nM表示。<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>CPP-連接子-1o-羥基喜樹(shù)^i綴合物:還檢測(cè)了不同CPP-連接子與10-羥基喜樹(shù)堿連接的穩(wěn)定性。就像CPP-連接子弁5-SN38綴合物一樣，CPP-連接子弁5-10-羥基喜樹(shù)堿綴合物總是比CPP-連接子W-10-羥基喜樹(shù)堿綴合物更穩(wěn)定。就像對(duì)于DPV1047-連接子#5-SN38的觀察一樣，DPV1047-連接子存5-10-羥基喜樹(shù)堿綴合物在人和犬血漿中的穩(wěn)定性大于其他CPP-連接子W-10-羥基喜樹(shù)堿綴合物。結(jié)果顯示于下表14。表14:37'C血漿中10-羥基喜樹(shù)堿綴合物的半衰期(分鐘)<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>評(píng)價(jià)最穩(wěn)定化合物(含有連接子#5)的體外細(xì)胞毒性以確定這些化合物的細(xì)胞毒性性質(zhì)是否仍被保留。表15證實(shí)了對(duì)于被測(cè)的兩種細(xì)胞系，全部CPP-連接子弁5-10羥基喜樹(shù)堿綴合物均顯示相似的活性，稍低但相當(dāng)于10-羥基喜樹(shù)堿的活性。表15:48h連續(xù)暴露后，兩種不同細(xì)胞系中抑制50%細(xì)胞活性的藥物濃度(IC5Q)。數(shù)據(jù)以nM表示，代表3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。細(xì)胞系DPV1047-連接子#5-10羥基喜樹(shù)堿穿膜肽-連接子#5-10羥基喜樹(shù)堿Tat-連接子#4-10羥基喜樹(shù)堿Tat-連接子#7-10羥基喜樹(shù)堿10-羥基喜樹(shù)堿HCT11618519423815864NCI-H4601121618712721對(duì)于所有被檢測(cè)的CPP綴合物，連接子#4和#5都顯示比連接子#1更高的穩(wěn)定性。對(duì)于SN38和10-羥基喜樹(shù)堿衍生物，這種連接子#5的穩(wěn)定性也大于連接子#1。權(quán)利要求1.一種綴合物，包括通過(guò)連接子基團(tuán)與載體部分連接的至少一個(gè)喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物，其中所述載體部分是細(xì)胞滲透肽，并且其中所述綴合物在37℃體外的人血漿中的半衰期等于或者大于5分鐘。2.如權(quán)利要求1所述的綴合物，其中所述連接子基團(tuán)來(lái)自于選自N-6-馬來(lái)酰亞胺基己酸和N-ll-馬來(lái)酰亞胺基十一酸的交聯(lián)劑。3.如權(quán)利要求1所述的綴合物，其中所述綴合物具有下式(VI):其中X代表細(xì)胞滲透肽(CPP)，其通過(guò)硫醚鍵與綴合物的其余部分連接，Y代表喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物，B是取代的或者未取代的環(huán)烷基，及Rl和R2獨(dú)立地是不存在的或者是取代的或者未取代的二價(jià)垸基、雜烷基、芳基或者雜芳基。4.如權(quán)利要求3所述的綴合物，其中Y通過(guò)下列鍵與所述綴合物的其余部分連接硫醚、腙、酰胺、酯、醚、氨基甲酸酯或者硫代氨基甲酸酯鍵，更特別的是通過(guò)醚鍵、二硫鍵或者硫醚鍵。5.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物是生物活性化合物，其在體外和/或尤其是體內(nèi)具有結(jié)合DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的性質(zhì)，并且含有下式(n)所示的喜樹(shù)堿骨架其中t是0、l或者2，Z是-COO-基團(tuán)或者取代的或者未取代的二價(jià)烷基。6.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物包括式(II)所示的喜樹(shù)堿骨架，其中其代表的至少一個(gè)烴基被取代，優(yōu)選1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或者4個(gè)烴基被取代。7.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述取代基選自烷基、芳基、鹵素、-OR'、=0、=NR'、=N-OR'、-NR'R"、-SR'、-SiR'R"R'"、-OC(O)R'、-C(O)R'、-C02R'、-CONR'R"、-OC(O)NR'R"、-NR"C(O)R'、-NR'-C(O)NR"R'"、-NR"C(0)2R'、-NR-C(NR'R")=NR"，、-S(O)R'、-S(0)2R'、-S(0)2NR'R"、-NRS02R'、-CN和-N02、-R'、-N3、-CH(Ph)2、氟(C廣C4)垸氧基、氟(C廣Q)烷基或者兩個(gè)相鄰的基團(tuán)可以與攜帶他們的碳原子一起形成式-0(CH2)u0-所示的基團(tuán)，其中u代表整數(shù)l或者2;并且其中R'、R"、R"'和R""優(yōu)選獨(dú)立選自氫、(Q-C8)烷基、(C,-C8)雜烷基、芳基和雜芳基，(未取代的芳基)-(C,-C4)垸基和(未取代的芳基)氧基-(d-C4)垸基，所述取代基任選被任意一種前述基團(tuán)取代。8.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述取代基選自烷基，優(yōu)選低級(jí)垸基；-OR'，其中R'是H;-OC(O)R'，其中R'是包括雜烷基和更優(yōu)選雜環(huán)烷基的烷基，例如哌啶或者哌嗪基團(tuán)；用-NR'R"或者雜烷基、更優(yōu)選雜環(huán)浣基取代的垸基，例如哌啶或者哌嗪基團(tuán)；兩個(gè)相鄰的基團(tuán)可以與攜帶他們的碳原子一起形成式-0(CH2)uO-所示的基團(tuán)，其中u代表整數(shù)l或者2，優(yōu)選2。9.如權(quán)利要求5-8任一項(xiàng)所述的綴合物，其中喜樹(shù)堿骨架如式(n)所示，其中t是O，Z是COO基團(tuán)，所述骨架可以用下式(III)表示10.如權(quán)利要求5-9任一項(xiàng)所述的綴合物，其中喜樹(shù)堿骨架用下式(IV)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>11.如權(quán)利要求i-io任一項(xiàng)所述的綴合物，其中喜樹(shù)堿、其類似物和衍生物其選自依立替康、托泊替康、GI-147211C、SN38、7-羥甲基喜樹(shù)堿、9-氨基喜樹(shù)堿(9-AC)、7-氨甲基喜樹(shù)堿、10-羥基喜樹(shù)堿和(20S)-喜樹(shù)堿。12.如權(quán)利要求3-11任一項(xiàng)所述的綴合物，其中至少一個(gè)Rl和R2被至少一個(gè)選自以下基團(tuán)的二價(jià)基團(tuán)間斷-O-、-NR'-、-SR'-、-SiR'R"-、-OC(O)-、-C(O)-、-C02-、-CONR'-、-NR'CO陽(yáng)、-OC(O)NR'-、-NR"OC(O)匿和-NR"C(0)2-，其中R鄰R"獨(dú)立地選自氫、(CrCs)烷基、(C廣C8)雜烷基、芳基和雜芳基。13.如權(quán)利要求3-12任一項(xiàng)所述的綴合物，其中Rl是取代的或者未取代的二價(jià)烷基、雜烷基、芳基或者雜芳基，R2是不存在的或者是取代的或者未取代的二價(jià)垸基、雜垸基、芳基或者雜芳基。14.如權(quán)利要求3-13任一項(xiàng)所述的綴合物，其中它具有式(VI)，其中-8是環(huán)0:3^8)烷基，優(yōu)選未取代的環(huán)烷基，包括環(huán)戊基或者環(huán)己基，和/或-Rl是雜垸基，尤其是包括聚(乙二醇)(即PEG)和其衍生物，例如PEG-3、PEG-4、PEG-5或者PEG-6，和/或-R1是直鏈(C1-C8)烷基鏈，尤其是-CH2-或者-CH2CH2-，和/或-Rl是(C1-C8)烷基鏈，任選被選自下列基團(tuán)的至少一個(gè)、優(yōu)選一個(gè)或者兩個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷畫OC(O)-,-C02-，-CONR'-,-NR'CO-,-OC(O)NR'-和-NR"C(0)2-，優(yōu)選-CONR'-或者-NR"OC(O)-，其中R'和R"彼此獨(dú)立優(yōu)選選自氫和(C1-C8)烷基，及任選所述(C1-C8)亞垸基鏈包括至少一個(gè)環(huán)烷基鏈，和/或-R2不存在，和/或-R2是雜烷基，尤其是包括聚(乙二醇)(即PEG)和其衍生物，例如PEG-3、PEG-4、PEG-5或者PEG-6，和/或-112是直鏈((:1-。8)烷基鏈，尤其是-CH2-或者-CH2CH2-，禾口/或-R2是(C1-C8)烷基鏈，任選被選自下列基團(tuán)的至少一個(gè)、優(yōu)選一個(gè)或者兩個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷-OC(O)-，-C02-，-CONR'-，-NR'CO-，-OC(O)NR'-和-NR"C(0)2-，優(yōu)選-CONR'-或者-NR"OC(O)-，其中R'和R"彼此獨(dú)立優(yōu)選選自氫和(C1-C8)垸基，和任選所述(C1-C8)垸基鏈包括至少一個(gè)環(huán)烷基鏈。15.如前述任一權(quán)利要求所述的綴合物，其中喜樹(shù)堿、其類似物或者衍生物通過(guò)連接子與載體部分共價(jià)連接，產(chǎn)生所述連接子的化合物選自4-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己垸-l-羧基-6-酰氨基己酸，4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基乙基)甲酰氨基乙基(Peg)4甲酰氨基甲基]環(huán)己垸羧酸，4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-l-羧基-6-酰氨基己烷甲酰氨基甲基]環(huán)己烷羧酸和4-[((N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷甲酰氨基)甲蜀環(huán)己垸羧酸。16.如前述任一權(quán)利要求所述的綴合物，其中它選自、b其中X如權(quán)利要求3所限定。17.如權(quán)利要求1-16任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述細(xì)胞滲透肽(或者X)是高度陽(yáng)離子化的并且富含精氨酸或者賴氨酸。18.如權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述細(xì)胞滲透肽代表具有細(xì)胞內(nèi)化作用性質(zhì)的蛋白或者其肽衍生物。19.如前述任一權(quán)利要求所述的綴合物，其中所述細(xì)胞滲透肽代表1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)蛋白Tat，皰疹病毒被膜蛋白VP22，穿膜肽，protegrinl(PG-l)抗微生物肽SynB，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，合成的多聚精氨酸肽，或者其具有細(xì)胞內(nèi)化作用性質(zhì)的肽衍生物。20.如權(quán)利要求1-18任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述載體部分是包括具有下式0O的氨基酸序列的肽C(Xl)p[(X)o(B)n(X)sBX(X)rXB]m(X2)qC(I)其中XI和X2獨(dú)立地是1到20個(gè)氨基酸的氨基酸序列；p和q獨(dú)立地是0和5之間的整數(shù)，優(yōu)選0或者1;B獨(dú)立地是堿性氨基酸；X獨(dú)立地是非堿性氨基酸；c獨(dú)立地是不存在或者是包括與所述綴合物的其余部分連接的硫醚鍵的任意部分，優(yōu)選所述部分是半胱氨酸或者半胱胺；m是1或者2;n是1、2或者3;O是0或者l;r是0或者l;s是0、1、2或者3。21.如權(quán)利要求20所述的綴合物，其中所述肽包括式(I)所示的長(zhǎng)度少于50個(gè)氨基酸、優(yōu)選少于25個(gè)的氨基酸序列。22.如權(quán)利要求20-21任一項(xiàng)所述的綴合物，其中C是不存在的或者位于所述氨基酸序列的任何位置，或者更優(yōu)選位于所述氨基酸序列的C或者N末端位置。23.如權(quán)利要求20-22任一項(xiàng)所述的綴合物，其中XI和X2獨(dú)立地是2-15個(gè)氨基酸、更優(yōu)選2-10個(gè)氨基酸的氨基序列。24.如權(quán)利要求20-23任一項(xiàng)所述的綴合物，其中堿性氨基酸是賴氨酸、精氨酸或者組氨酸，更優(yōu)選是賴氨酸或者精氨酸。25.如權(quán)利要求20-24任一項(xiàng)所述的綴合物，其中式(I)的BX(X)rXB部分包含的非堿性氨基酸選自谷氨酸(E)、甘氨酸(G)、谷氨酰胺(Q)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)、亮氨酸(L)、纈氨酸(V)、脯氨酸(P)和瓜氨酸。26.如權(quán)利要求20-25任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述氨基酸序列如式(I)所示，其中-o是1，禾口/或-p和/或q是l，和/或-XI是3-12個(gè)氨基酸的序列，禾口/或-X2是2-10個(gè)氨基酸的序列，禾口/或-r是0和/或-m是lo27.如權(quán)利要求20-26任一項(xiàng)所述的綴合物，其中所述肽源自人肝素結(jié)合蛋白并且能夠進(jìn)入細(xì)胞或者組織，其選自-DPV3(SEQIDNO:1):ArgLysLysArgArgArgGluSerArgLysLysArgArgArgGluSer-DPV6(SEQIDNO:2):GlyArgProArgGluSerGlyLysLysArgLysArgLysArgLeuLysPro-DPV7(SEQIDNO:3):GlyLysArgLysLysLysGlyLysLeuGlyLysLysArgAspPro-DPV7b(SEQIDNO:4):GlyLysArgLysLysLysGlyLysLeuGlyLysLysArgProArgSerArg-DPV10(SEQIDNO:5):SerArgArgAlaArgArgSerProArgHisLeuGlySerGly-DPV3/10(SEQIDNO:6):ArgLysLysArgArgArgGluSerArgArgAlaArgArgSerProArgHisLeu-DPV10/6(SEQIDNO:7):SerArgArgAlaArgArgSerProArgGluSerGlyLysLysArgLysArgLysArg-DPV1047(SEQIDNO:8):ValLysArgGlyLeuLysLeuArgHisValArgProArgValThrArgMetAspVal-DPV1048(SEQIDNO:9):ValLysArgGlyLeuLysLeuArgHisValArgProArgValThrArgAspVal-DPV15(SEQIDNO:10):LeuArgArgGluArgGinSerArgLeuArgArgGluArgGinSerArg,-DPV15b(SEQIDNO:11):GlyAlaTyrAspLeuArgArgArgGluArgGinSerArgLeuArgArgArgGluArgGinSerArg,尤其是SEQIDNO:1、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11和SEQIDNO.8。28.如權(quán)利要求27所述的綴合物，其中所述肽在C或者N位置具有半29.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>30.—種藥物組合物，其在藥學(xué)上可接受的載體中包括至少一種如前述任一權(quán)利要求所述的化合物。31.如前述權(quán)利要求所述的藥物組合物，用于口服、顱內(nèi)、椎管內(nèi)、腸內(nèi)或者腸胃外給藥。32.如權(quán)利要求30和31任一項(xiàng)所述的藥物組合物，用于和其他治療方案或者藥劑同時(shí)或者依次給藥。33.如權(quán)利要求30-32任一項(xiàng)所述的藥物組合物，用于治療癌癥。34.如權(quán)利要求30-33任一項(xiàng)所述的藥物組合物，用于治療結(jié)腸癌、肺癌(即小細(xì)胞、非小細(xì)胞、支氣管癌)、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、頭、胃和頸癌、膀胱癌、非何杰金氏淋巴瘤、黑素瘤、白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤或者惡性膠質(zhì)瘤。35.如權(quán)利要求32所述的藥物組合物，通過(guò)和其他治療方案或者藥劑同時(shí)或者依次治療來(lái)進(jìn)行抗癌治療，所述藥劑例如5-氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸、奧沙利鉬、卡培他濱、長(zhǎng)春花新堿、塞來(lái)昔布、替莫唑胺、硒、沙利度胺、替莫唑胺、西妥昔單抗、吉西他濱、多西紫杉醇、3-AP、卡鉑、硼替佐米、貝伐單抗、索拉非尼、順鉑、吉非替尼、flavopiridol、elvorin、卡鉬、氮柔比星、甲酰四氫葉酸、曲妥珠單抗、培美曲塞、埃羅替尼、絲裂霉素C、AMG706、帕尼妥單抗、紫杉醇、雷替曲塞、伊馬替尼、阿昔單抗、英夫利昔單抗、帕利珠單抗、利妥昔單抗、吉姆單抗奧佐米星、阿侖珠單抗、替伊莫單抗。36.有效量的至少一種如權(quán)利要求1-29任一項(xiàng)所限定的化合物用于制備治療癌癥的藥物組合物的用途。37.—種下式(V)表示的化合物、其鹽和/或異構(gòu)體其中B是取代的或者未取代的環(huán)烷基，Rl和R2獨(dú)立地是不存在的或者是取代或者未取代的二價(jià)烷基、雜烷基、芳基或者雜芳基。38.如前述權(quán)利要求所述的化合物，其中Rl是取代或者未取代的二價(jià)垸基、雜烷基、芳基或者雜芳基，R2是不存在的或者是取代或者未取代的二價(jià)烷基、雜垸基、芳基或者雜芳基。39.如權(quán)利要求37和38任一項(xiàng)所述的化合物，其中至少一個(gè)Rl和R2被至少一個(gè)選自以下基團(tuán)的二價(jià)基團(tuán)間斷-O-,-NR'-，-SR'-,-SiR'R"-,-OC(O)-，-C(O)隱，-COr,-CONR'-,-NR'CO-,-OC(O)NR'-,-NR"OC(O)-和-NR"C(0)2-，其中R'和R"獨(dú)立地如上面所限定，尤其是R'和R"選自氫、(C廣Cs)烷基、(CrC8)雜烷基、芳基和雜芳基。40.如權(quán)利要求37-39任一項(xiàng)所述的化合物，其中-B是環(huán)(C3-C8)烷基，優(yōu)選未取代的環(huán)烷基，包括環(huán)戊基或者環(huán)己基，和/或-Rl是雜烷基，尤其是包括聚(乙二醇)(即PEG)和其衍生物，例如PEG-3、PEG國(guó)4、PEG-5或者PEG扁6，禾口/或-Rl是直鏈(C1-C8)烷基鏈，尤其是-CH2-或者-CH2CH2-，和/或-R1是(C1-C8)烷基鏈，任選被選自下列基團(tuán)的至少一個(gè)、優(yōu)選一個(gè)或者兩個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷-OC(O)-，-COr,-CONR'-,-NR'CO-,-OC(O)NR'-和-NR"C(0)2-，優(yōu)選-CONR'-或者-NR"OC(O)-，其中R'和R"彼此獨(dú)立優(yōu)選選自氫和(C1-C8)烷基，和任選所述(C1-C8)烷基鏈包括至少一個(gè)如上所述的環(huán)垸基鏈，和/或-R2不存在，和/或-R2是雜烷基，尤其是包括聚(乙二醇)(即PEG)和其衍生物，例如PEG-3、PEG-4、PEG-5或者PEG畫6，禾口/或-R2是直鏈(C1-C8)垸基鏈，尤其是-CH2-或者-CH2CH2-，禾口/或-R2是(C1-C8)烷基鏈，任選被選自下列基團(tuán)的至少一個(gè)、優(yōu)選一個(gè)或者兩個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷-OC(O)-,-C02-，-CONR'-,-NR'CO-,-OC(O)NR'-和-NR"C(0)2-，優(yōu)選-CONR'-或者-NR"OC(O)-，其中R'和R"彼此獨(dú)立優(yōu)選選自氫和(C1-C8)烷基，和任選所述(C1-C8)垸基鏈包括至少一個(gè)環(huán)垸基鏈。41.如權(quán)利要求37-40任一項(xiàng)所述的化合物，其中Rl和/或R2被至少一個(gè)二價(jià)基團(tuán)間斷，所述間斷位于Rl和/或R2基團(tuán)的任何位置或者位于Rl和/或R2基團(tuán)與式(V)所示化合物的其余部分連接的位置。42.如權(quán)利要求37-41任一項(xiàng)所述的化合物，其選自4一(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷_(kāi)1-羧基-6-酰氨基已酸，4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基乙基)甲酰氨基乙基(Peg)4甲酰氨基甲基]環(huán)己垸羧酸，4-[(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-l-羧基-6-酰氨基己烷甲酰氨基甲基]環(huán)己烷羧酸，和4-[((N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷甲酰氨基)甲基]環(huán)己垸羧酸。全文摘要本發(fā)明涉及一種在治療藥劑向靶細(xì)胞或者組織的改進(jìn)輸送中使用的新化合物，包含所述化合物的組合物及其用途。所述化合物更特定的是肽部分和喜樹(shù)堿的綴合物，其衍生物或者類似物，它們提供許多益處，包括水溶性、藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布的提高，治療指數(shù)的增加和患者體內(nèi)代謝變異性的限制以及生物活性成分向靶細(xì)胞或者組織輸送的改進(jìn)。文檔編號(hào)A61K47/48GK101516404SQ200780019932公開(kāi)日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年3月30日優(yōu)先權(quán)日2006年3月30日發(fā)明者D·拉威爾,F·里布,I·特郎尚,M·米歇爾申請(qǐng)人:迪亞特斯公司