專利名稱：：用于治療腎病的藥物組合物以及含有草藥提取物的保健食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種草藥提取物用于預(yù)防和治療腎病的新用途，其中所述草藥包括選自由葛根(PeurariaeRadix)、僵蠶(Bombyciscorpus)或長白德木(AraliaeContinentalisRadix)所組成的組中的一種或多種草藥。因此，本發(fā)明的草藥提取物可被有效地用作預(yù)防和治療腎病的藥物組合物或保健食品
背景技術(shù)：
哺乳動(dòng)物具有兩個(gè)腎，背部的中下區(qū)域的兩側(cè)各具有一個(gè)。每個(gè)腎由大約1百萬個(gè)腎單位組成。腎單位由腎小體和用于再吸收和排泄的腎小管組成。腎病是由腎單元的損傷造成的，導(dǎo)致其不能正常工作。腎衰竭可分為急性(快速發(fā)作)和慢性(隨時(shí)間緩慢進(jìn)行)。根據(jù)其病因，許多不同的疾病(例如，血管球性腎炎或與糖尿病或高血壓并發(fā)癥相關(guān)的糖尿病性神經(jīng)病變)均可導(dǎo)致腎病。也可能是直接由感染或?qū)δI臟有毒的藥物造成的。慢性腎衰竭定義為腎臟損害或腎小球過濾率小于50%。忽略一開始的損傷，這是一個(gè)導(dǎo)致終末期腎病(ESRD)的恒定累進(jìn)過程。多年來，ESRD可能是由其它血液、神經(jīng)系統(tǒng)、胃腸系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)中的并發(fā)癥以及感染或骨營養(yǎng)不良引起的一種危及生命的疾病。腎病病人的數(shù)量在全世界范圍內(nèi)增長，但是其癥狀通常并不明顯直到發(fā)展成為腎衰竭。在韓國，大約有450，000人患有腎衰竭，而且包括早期診斷的那些的病人在內(nèi)的總數(shù)有可能進(jìn)一步增長。ESRD發(fā)生后，需要以透滲析或移植的方式進(jìn)行腎臟替換治療。然而，由于在治療下列原因的早期和中期慢性腎衰竭的失敗，并且高額的醫(yī)療費(fèi)用對(duì)于病人及其家屬來說都是沉重的負(fù)擔(dān)，因此它的廣泛使用受到限制。近來，國內(nèi)外的許多研究員就損害的腎臟功能進(jìn)行了充分的研究，并且作為結(jié)果，只要可行，具有簡單化學(xué)結(jié)構(gòu)的一些化合物已經(jīng)被用作控制血壓和治療來源疾病的方法。例如，使用血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑，因?yàn)榧航?jīng)發(fā)現(xiàn)它們可以用來減緩ESRD的發(fā)展。代替被腎臟處理的兩種激素紅細(xì)胞生成刺激因子(ESF)和活化的維他命D3通常是必需的。然而，由于較高的藥物成本和治標(biāo)的療效，這些藥物的廣泛使用十分受限。在此，在該藥物方面急需研發(fā)用于治療腎病的新的藥物。近來的藥品研發(fā)集中于源于天然來源的化學(xué)制品平臺(tái)。綜合了新特性、結(jié)構(gòu)和低毒性，今天的天然產(chǎn)物很可能持續(xù)存在并發(fā)展成為更有價(jià)值的新藥引導(dǎo)來源。為跟上當(dāng)前的藥品研發(fā)趨勢(shì)，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)測(cè)試了許多草藥以確保它們可以有效地改善腎衰竭病人的腎臟功能。葛根屬于豆禾斗(Leguminosae)，是葛藤(Puemriathunbergiana)去除周皮后的根部。該植物已顯示具有降低脂質(zhì)(ModernChineseMedicinesandClinicalApplication,626-632，1994)和抗糖尿病的特性(Anti-senilityChineseMedicineandPharmacology,186-187，1989)。僵蠶，一種僵蠶蛹或白僵蠶，是一種由感染白僵菌(Beauveria)而死掉并變硬的桑蠶(中國家蠶)的干幼蟲組成的藥物。該天然產(chǎn)物也顯示了具有與脂蛋白一起作為活性成分的抗糖尿病作用(JournaloftheKoreanSocietyforHygienicScience,Vol.6，No.l,2，11-33(2000))。長白橡木屬于五加科，是長白橡木的根。該天然產(chǎn)物本性刺鼻、味苦且柔軟并且具備滋補(bǔ)、抗炎和降脂作用的綜合性能(KoreanJ.ofPharmacognosy,24(3),219-222(1993))。長白橡木含有香燭活內(nèi)酯B(angelolB)、苦橙油醇、ostehnol、渥斯腦(osthol)、異英波拉托林(isoimperatorin)、阿魏素(ferulin)和石竹酸。本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)努力篩選了多種列于韓國食品標(biāo)準(zhǔn)法典(KoreaFoodStandardCode)的有研究價(jià)值的草藥和保健食品以發(fā)現(xiàn)一種潛在的能夠預(yù)防和治療腎病的。因此，發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了葛根、僵蠶和長白橡木有助于改善腎功能并完善了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種新的預(yù)防和治療腎病的藥物和保健食品候選物，其選自列于韓國食品標(biāo)準(zhǔn)法典的草藥。本發(fā)明的目的是提供一種含有選自由用于預(yù)防和治療腎病的葛根、僵蠶和長白惚木所組成的組中的至少一種或多種草藥提取物的藥物組合物。另一方面，本發(fā)明提供一種含有草藥提取物以確保更好的腎功能的保健食品。本發(fā)明如下詳細(xì)描述。本發(fā)明含有選自由葛根、僵蠶和長白惚木所組成的組中的一種或多種草藥的提取物。本發(fā)明的草藥提取物已經(jīng)通過血脲氮(BUN)水平、血肌酸酐水平、腎小管壞死細(xì)胞和退化的腎小球細(xì)胞的測(cè)量證明了他們?cè)趧?dòng)物模型中治療腎病的功效。BUN測(cè)量了血液中脲氮(一種蛋白質(zhì)代謝廢物)的量，并且肌酸酐是肌肉新陳代謝產(chǎn)生的一種化學(xué)廢物分子。BUN和肌酸酐通過血液運(yùn)送到腎臟中。腎臟濾出BUN和肌酸酐并且通過尿液將其排除。當(dāng)腎臟受到損耗時(shí)，血液中的BUN和肌酸酐水平將會(huì)上升。因此，BUN和血清肌酸酐已經(jīng)被認(rèn)為是評(píng)價(jià)腎衰竭動(dòng)物模型中藥物效果的清楚可靠的指標(biāo)(ArchMedRes.2004Nov畫Dec;35(6):484-94)。腎單元是腎臟基本的結(jié)構(gòu)和功能單元。當(dāng)腎單元數(shù)量減少時(shí)，腎功能降低。當(dāng)糖尿病患者的腎病發(fā)展時(shí)，被破壞的腎小球數(shù)量增加。腎小球中受影響的血液運(yùn)輸功能可能會(huì)導(dǎo)致腎小球退化。因此，腎小管壞死細(xì)胞和退化的腎小球細(xì)胞被用作腎病的重要標(biāo)志。作為血液中BUN和肌酸酐的測(cè)量結(jié)果，退化的腎小球細(xì)胞和管狀壞死細(xì)胞作為腎病的重要標(biāo)志。盡管蠶皮(MoriCortex)具有利尿作用，葛根、僵蠶和長白橡木的提取物在改善腎功能方面比蠶皮提取物更有效。當(dāng)施用相同的量時(shí)，由于協(xié)同效應(yīng)，混合草藥提取物已經(jīng)顯示出比單個(gè)草藥提取物具有更好的效果。因此，本發(fā)明的草藥提取物可以有效地用作預(yù)防和治療由于各種不同疾病諸如糖尿病、高血壓、血管球性腎炎、藥物毒性(例如抗菌素)和泌尿感染引起的腎病的藥物組合物。作為另一方面，本發(fā)明的草藥提取物選自列于韓國食物標(biāo)準(zhǔn)法典的草藥并且可以有效地用作改善損害腎功能的保健食品。本發(fā)明的草藥提取物可以通過將草藥的5-10倍重量的水或醇添加到一種或多種草藥中而從商購得到的葛根、僵蠶和長白橡木中提取得到。選自葛根、僵蠶和長白惚木的兩種以上草藥被提取，或者可以將各提取物混合以獲得本發(fā)明的草藥提取物。本發(fā)明的草藥提取物可以進(jìn)一步加入用于更好地調(diào)理損害的腎功能的其它草藥提取物，該其它草藥提取物優(yōu)選包括蠶皮提取物。已經(jīng)證明蠶皮提取物具有利尿作用(YAKHAKHOEJI26(4),197-128(1982))，但是該提取物用于腎衰竭的效力還有待證實(shí)。本發(fā)明的草藥提取物可以在60-7(TC減壓條件下制成軟浸膏劑(softextract),或通過冷凍干燥或使用噴霧干燥器或流化床機(jī)床制成干粉形式。本發(fā)明的藥物組合物具備便利的給藥途徑，如口、非腸道、牙齒、舌下、鼻、直腸、或皮下形式。本發(fā)明的藥物組合物可含有生理學(xué)可接受的藥用載體以制備各種劑型。對(duì)于健康人(標(biāo)準(zhǔn)體重；60kg)，本發(fā)明的藥物組合物可以每天10-1000mg的劑量分l-3次施用。劑量和用法可以根據(jù)年齡、病情嚴(yán)重程度和治療方法而改變。本發(fā)明的草藥提取物可用作加強(qiáng)腎功能的保健食品。除上述的草藥提取物以外，本發(fā)明的保健食品可以包括保健食品領(lǐng)域通常以單一或混合形式使用的物質(zhì)；營養(yǎng)素(維他命、氨基酸、抗氧化劑)，pH調(diào)節(jié)劑(檸檬酸、檸檬酸鈉)，增甜劑(液態(tài)葡萄糖、赤蘚醇、巴拉金糖(paratinose))，人造香精，著色劑，賦形劑(乳糖、葡萄糖、淀粉、乳果糖)，穩(wěn)定劑，潤滑劑(硬脂酸鎂)，乳劑(小麥胚油、橄欖油、蜂蠟、蠟、生育酚)。本發(fā)明的保健食品可以通過使用相關(guān)領(lǐng)域可接受的添加劑制備成各種口服劑形狀，如飲料、片劑、丸劑、硬/軟膠囊以及顆粒劑。本發(fā)明提供了一種含有選自由葛根、僵蠶和長白橡木所組成的組中的一種或多種草藥提取物的藥物組合物。這些草藥提取物具有降低BUN和血肌酸酐、管狀壞死細(xì)胞和退化的腎小球細(xì)胞的水平的作用，這樣提供了一種新的用于預(yù)防和治療腎病的藥物候選物和加強(qiáng)腎功能的保健食品。因此，本發(fā)明的草藥提取物可以有效地用作預(yù)防和治療腎病的藥物組合物或者加強(qiáng)腎功能的保健食品。圖1是腎組織病理學(xué)檢測(cè)的顯微圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明將參考下列實(shí)施例和試驗(yàn)實(shí)施例進(jìn)行描述，這些實(shí)施例僅用于說明，本發(fā)明的范圍并不局限于此。實(shí)施例l:制備葛根、僵蠶、長白檢木和蠶皮的單個(gè)提取物葛根;^_6^_長白橡木和蠶皮從市場(chǎng)購得并經(jīng)韓國藥典(KoreanPharmac叩oeia)檢測(cè)。遵照現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，將水以重量比(6:1)添加到各葛根^MM^長白橡木和蠶皮中，用沸水提取2小時(shí)，過濾得到第一沸水提取物。將水以重量比(6:1)進(jìn)一步添加到殘留物中，用沸水提取l小時(shí)并且過濾得到第二沸水提取物。將兩個(gè)沸水提取物的混合物凍干得到粉末狀的四種草藥的單一提取物。實(shí)施例2-10:制備含有選自葛根、僵蠶和蠶皮的兩種草藥的提取物的混合提取物如表1所示，通過不同的重量比，制備得到含有選自實(shí)施例1制得的葛根、僵蠶和蠶皮單一提取物的兩種草藥提取物的9種粉末提取物。表1含有不同重量比的兩種草藥提取物的9種粉末提取物<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例ll:制備含有重量比為l:1:1:1的葛根、僵蠶、長白檢木和蠶皮單一提取物的混合提取物制得含有重量比為1:1:1:1的如實(shí)施例1中得到的葛根僵蠶、長白橡木和蠶皮單一提取物的粉末混合提取物。實(shí)施例12:制備含有重量比為l.l:1.9:0.9:1.3的葛根、僵蠶、長白檢木和蠶皮單一提取物的混合提取物制得含有重量比為l丄1.9:0.9:1.3的如實(shí)施例1中得到的葛根、僵蠶、長白橡木和蠶皮單一提取物的粉末混合提取物。試驗(yàn)實(shí)施例l:糖尿病誘導(dǎo)動(dòng)物的BUN水平測(cè)量由于脲由腎臟從血液中清除，測(cè)量多少脲氮?dú)埩粲谘褐屑纯捎糜跍y(cè)量腎功能。這樣，發(fā)明人測(cè)量了接受單一或混合提取物的糖尿病誘導(dǎo)動(dòng)物的BUN水平。1.單一提取物處理組中BUN水平的測(cè)量由實(shí)施例1制得的單一提取物用做測(cè)量樣品將六周大的雌性SD大鼠隨機(jī)分配成六組(每組5只)1)一個(gè)正常組，2)—個(gè)不處理的鏈脲菌素誘導(dǎo)的糖尿病對(duì)照組和四個(gè)接受200mg/kg各測(cè)試樣品的鏈脲菌素誘導(dǎo)糖尿病組。糖尿病通過大鼠腹內(nèi)注射鏈脲菌素(60mg/kg體重)進(jìn)行誘導(dǎo)。在注射鏈脲菌素3天后和在用各測(cè)試樣品治療28天后收集兩組血液樣品。血糖水平通過使用NaF葡萄糖真空管和血液分析器進(jìn)行測(cè)量。BUN水平的測(cè)量也通過在血清中的血液分析器實(shí)施。血清分析通過位于韓國首爾Dongjak-gu的E-won臨床中心實(shí)施。如表2中顯示，提取物處理組的大鼠和對(duì)照組的BUN水平，比正常組大鼠升高。然而，可觀測(cè)到，與對(duì)照組的水平相比，接受葛根、僵蠶、長白橡木和蠶皮的動(dòng)物的BUN水平顯著降低。特別地，觀察到，與蠶皮提取物相比，葛根、僵蠶和長白橡木提取物處理的大鼠的BUN水豐降低更多。10表2<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>P〈0.05(與正常大鼠相比)，"PO.05(與對(duì)照大鼠相比)2.混合提取物處理組中BUN水平的測(cè)量實(shí)施例11制得的混合提取物用作實(shí)驗(yàn)樣品。將動(dòng)物隨機(jī)分成五組；1)一個(gè)正常組，2)—個(gè)對(duì)照組；3)三個(gè)提取物處理組。提取物處理組和對(duì)照組的動(dòng)物在給鏈脲菌素8天后給鏈脲菌素，測(cè)試樣品在定量給服鏈脲菌素8天后，每天以100mg/kg、200mg/kg和300mg/kg三種不同的劑量口服28天。在開始時(shí)、注射鏈脲菌素5天后和給服測(cè)試樣品28天后采取血液樣品。之后，以與單一提取物中同樣的方法測(cè)量BUN水平。如表3中所示，正常大鼠的BUN水平保持不變，而糖尿病誘導(dǎo)控制大鼠的值增加了5倍。提取物處理的大鼠的BUN水平顯著降低，只有對(duì)照組的一半。以200mg/kg和300mg/kg的劑量用提取物處理的大鼠并沒有顯示出任何劑量依賴并且最大治療效果確定在200mg/kg的劑量。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>試驗(yàn)實(shí)施例2:糖尿病誘導(dǎo)大鼠的管狀壞死細(xì)胞的測(cè)量測(cè)量管狀壞死細(xì)胞以評(píng)定本發(fā)明草藥提取物針對(duì)腎病的有效性1.材料和方法將測(cè)試樣品(實(shí)施例1，11)以200mg/kg的劑量給予大鼠(試驗(yàn)實(shí)施例1)。管狀壞死細(xì)胞通過使用圖像分析儀進(jìn)行測(cè)量。2.結(jié)果如表4所示，可看出所有提取物處理的大鼠的管狀壞死細(xì)胞的量低于(8倍)對(duì)照組。在四組單一提取物處理的大鼠中，用葛根提取物處理的大鼠檢測(cè)出最高的對(duì)管狀壞死細(xì)胞的抑制效果。僵蠶和長白橡木提取物處理的大鼠顯示出與蠶皮提取物相當(dāng)?shù)目构軤顗乃赖目挂种菩Ч?。此外，混合提取物處理的大鼠的抑制效果高?5倍)其它單個(gè)提取物處理的大鼠。表4管狀壞死細(xì)胞(死亡細(xì)胞/1000管狀細(xì)胞，平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>試驗(yàn)實(shí)施例3:測(cè)量糖尿病誘導(dǎo)大鼠的退化腎小球細(xì)胞測(cè)量糖尿病誘導(dǎo)大鼠的退化腎小球細(xì)胞以評(píng)定本發(fā)明草藥提取物對(duì)腎病的效果。1、原料和方法使用同試驗(yàn)實(shí)施例2中相同的測(cè)試樣品和動(dòng)物，腎臟中退化腎小球細(xì)胞的數(shù)量通過使用圖像分析器進(jìn)行計(jì)算。2、結(jié)果如表5中所示，可觀測(cè)到，與正常組大鼠相比，鏈脲菌素處理過的對(duì)照組大鼠中退化腎小球細(xì)胞的數(shù)量顯著增加。與對(duì)照組大鼠相比，在葛根、僵蠶、長白橡木和蠶皮單一提取物處理過的大鼠中，糖尿病退化腎小球細(xì)胞顯著降低。與蠶皮提取物處理過的大鼠相比，葛根、僵蠶和長白惚木處理過的大鼠中可明顯觀測(cè)到退化腎小球細(xì)胞的數(shù)量的減少。此外，與用其它單個(gè)提取物處理的大鼠相比，用混合提取物(實(shí)施例11)處理過的大鼠顯示了較高的(約2倍)對(duì)退化腎小球細(xì)胞增加的抑制效果。表5退化腎小球細(xì)胞的數(shù)量(平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差)退化腎小球細(xì)胞的數(shù)量<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>P〈0.05(與正常組相比)，#P<0.01/##P<0.05(與對(duì)照組相比)試驗(yàn)實(shí)施例4:糖尿病誘導(dǎo)大鼠的組織病理學(xué)測(cè)試腎中發(fā)現(xiàn)的退化和纖維化被用作腎病的標(biāo)記(JPathol.2000Mar;190(4):484-8)。這樣，在腎組織中進(jìn)行病理學(xué)測(cè)試以評(píng)定本發(fā)明草藥提取物對(duì)腎病的治療效果。1、原料和方法本試驗(yàn)使用與試驗(yàn)實(shí)施例1同樣的測(cè)試樣品和動(dòng)物。在服用測(cè)試樣品28天后，將雌性SD大鼠斷食過夜并通過靜脈腔放血將其殺死。將解剖腎放置到10%的福爾馬林中并嵌入石蠟。所需部分是3—4m厚的角質(zhì)層并用蘇丹紅著色。2、結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>試驗(yàn)實(shí)施例5:亞急性腎衰竭大鼠的BUN水平測(cè)量實(shí)施例12中制備的混合提取物用作測(cè)試樣品。6周大的雌性SD大鼠隨機(jī)分成七組(八只動(dòng)物一組)；l)一個(gè)正常組，2)—個(gè)由四氯化碳(CCU)誘導(dǎo)的亞急性腎衰竭對(duì)照組，3)甲巰丙脯酸(CAPT)100mg/kg組作為陽性對(duì)照，4)水飛薊素(silymarin，SILY)25mg/kg組作為陽性對(duì)照，和5)三個(gè)分別以50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg劑量提取物處理的組。在給大鼠服用CCU后，測(cè)試樣品每天同時(shí)以50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg的劑量給藥42天。CAPT100mg/kg和SILY25mg/kg以與上述同樣的方式口服給藥。血糖水平通過使用NaF葡萄糖真空管測(cè)定。BUN水平測(cè)試也通過在血清中使用血液分析器實(shí)施。血清分析通過位于韓國首爾Dongjak-gu的E-won臨床中心實(shí)施。如表7所示，賦形劑處理的(vehicle-treated)對(duì)照組大鼠的BUN水平顯著高于(p<0.01)正常組大鼠，并且比起正常組大鼠，在服用CCU后顯著升高(pO.Ol)。治療組大鼠的BUN水平顯著低于(pO.Ol或p0.05)賦形劑處理的對(duì)照組大鼠。除了SILY處理組大鼠，所有提取物處理組大鼠的BUN水平在服用CCU后都顯著降低(p<0.01或p0.05)。SILY-處理組大鼠的BUN水平比起賦形劑處理的對(duì)照組大鼠在劑量依賴模式方面顯著降低，盡管BUN水平并沒有顯著變化。因此，應(yīng)當(dāng)注意到本發(fā)明的草藥提取物可預(yù)防BUN水平的升高。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>PO.01,P〈0.05(與正常組相比)；#P<0.01，##P<0.05(與正常組相比)試驗(yàn)實(shí)施例6:亞急性腎衰大鼠的血肌酸酐水平測(cè)量通過測(cè)量血肌酸酐水平來評(píng)定本發(fā)明草藥提取物對(duì)腎病的效果。1.原料和方法本試驗(yàn)使用與實(shí)驗(yàn)實(shí)施例5相同的試驗(yàn)樣品和動(dòng)物。殺死動(dòng)物后，通過收集血液樣品來測(cè)量血肌酸酐水平。2.結(jié)果如表8中所示，在給服CCU后，賦形劑對(duì)照組大鼠的血肌酸酐水平顯著高于(pO.Ol)控制組大鼠并且比起正常組大鼠顯著提高(p<0.01)。提取物處理組大鼠的血肌酸酐水平顯著低于(p<0.01)賦形劑處理的對(duì)照組。在給服CCU后，所有提取物處理組的血肌酸酐水平顯著低于(p〈0.01)對(duì)照組。提取物處理組大鼠的血肌酸酐水平在劑量依賴模式方面比這些賦形劑處理組大鼠顯著降低。因此，應(yīng)當(dāng)注意到，本發(fā)明的草藥提取物防止血肌酸酐水平顯著升高。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>PO.01(與正常組相比)；0.01(與正常組相比)試驗(yàn)實(shí)施例7:亞急性腎衰大鼠的退化腎小球細(xì)胞測(cè)量使用與實(shí)驗(yàn)實(shí)施例5中相同的樣品和動(dòng)物。以與實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3相同的方法測(cè)量亞急性腎衰大鼠的退化腎小球細(xì)胞的數(shù)量以評(píng)定本發(fā)明草藥提取物對(duì)腎病的效果。在小管中并沒有異常發(fā)現(xiàn)，但是在CCU處理過的大鼠中觀測(cè)到增加的腎小球細(xì)胞和血管擴(kuò)張萎縮性腎小球細(xì)胞為特征的腎衰。在所有處理組中組織病理學(xué)神經(jīng)病顯著降低。如表9中所示，賦形劑處理對(duì)照組大鼠的退化腎小球數(shù)量顯著高于(pO.Ol)正常組大鼠。提取物處理組大鼠的退化腎小球細(xì)胞的數(shù)量在劑量依賴模式方面組織形態(tài)計(jì)量地(histomorphometrically)顯著低于(pO.Ol)賦形劑處理組大鼠。同樣的，認(rèn)為本發(fā)明草藥提取物可有效治療包括ccu誘導(dǎo)亞急性腎衰竭在內(nèi)的神經(jīng)病，同時(shí)顯示了類似于等當(dāng)量CAPT的腎臟保護(hù)效應(yīng)。50mg/kg的草藥提取物組顯示了類似于SILY25mg/kg組的腎臟保護(hù)效應(yīng)。用于CCU誘導(dǎo)亞急性腎衰的有效劑量范圍為50mg/kg或更少。表9退化腎小球細(xì)胞的測(cè)量<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>'P〈0.01(與正常組相比)；^0.01(與正常組相比)試驗(yàn)實(shí)施例8:急性腎衰竭大鼠的BUN水平測(cè)量實(shí)施例12制備的混合提取物用作測(cè)試樣品。六周大的雌性SD大鼠隨機(jī)分成七組(八只動(dòng)物一組)；l)一個(gè)正常組，2)—個(gè)由順鉑(cisplatin，CCDP)誘導(dǎo)的急性腎衰竭對(duì)照組，3)甲巰丙脯酸(CAPT)100mg/kg組作為陽性對(duì)照組，4)氯沙坦(LOSA)20mg/kg組作為陽性對(duì)照組，和5)三個(gè)50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg劑量的提取物處理組。測(cè)試樣品以50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg的劑量在給服CCDP前28天至給服CCDP后4天的期間范圍內(nèi)口服。在給服CCDP五天后，將所有動(dòng)物殺死評(píng)定BUN水平。比較接受CAPT100mg/kg和LOSA20mg/kg的大鼠的測(cè)試結(jié)果。在將測(cè)試樣品給服動(dòng)物(在給服CCDP28天前)的時(shí)期內(nèi)，觀測(cè)到正常組和對(duì)照組的大鼠BUN水平均有類似改變。在該時(shí)期內(nèi)仔細(xì)觀測(cè)接受200mg/kg測(cè)試樣品的大鼠和LOSA處理的大鼠以評(píng)定它們與對(duì)照的顯著性(p<0.05)。如表10中所示，所有提取物處理的大鼠的BUN水平顯著降低。在CCDP給服后，賦形劑處理的對(duì)照組的大鼠的BUN水平顯著高于(p<0.01)正常組的大鼠。然而，所有藥物處理組的大鼠的BUN水品顯著低于(pO.Ol或p<0.05)賦形劑處理的對(duì)照組大鼠。表10BUN水平測(cè)量組給服順鉑前給服順鉑5天后給服測(cè)試樣品28天后正常組16.91±1,9919.93±1.8720.24±1.81對(duì)照組16.89±1.53205.98±98.27*20.10±1.53陽性對(duì)照組(甲巰丙脯酸)17.05±2.7294.53±59.63"18.24±1.18神'據(jù)陽性對(duì)照組(氯沙坦)16.88±2.1677.34±48.68"17.25±1.45"提取物處理組50mg/kg17.21±2.5785.66±32.23"18.43±2.95100mg/kg16.83±1.9275.88±53.90**'s18.35±1.84**200mg/kg16.73±2.1872.64±53.66"16.75±2.75**'**PO.01,"PO.05(與正常組相比)；#P<0.01，##P<0.05(與對(duì)照組相比)試驗(yàn)實(shí)施例9:急性腎衰竭大鼠的血肌酸酐水平的測(cè)量測(cè)量急性腎衰竭大鼠的血肌酸酐水平以評(píng)定本發(fā)明草藥提取物對(duì)腎病的效果。1.原料和方法使用與試驗(yàn)實(shí)施例8中相同的樣品和動(dòng)物。殺死動(dòng)物，收集血液樣品測(cè)量血肌酸酐水平。2.結(jié)果在將試驗(yàn)樣品給服動(dòng)物(在施加CCDP28天前)的時(shí)期內(nèi)，正常組和對(duì)照組大鼠均可觀察到血肌酸酐水平的類似變化。在該期間內(nèi)仔細(xì)觀察接受200mg/kg測(cè)試樣品的大鼠和LOSA處理的大鼠，以評(píng)定它們與對(duì)照的顯著性。如表11所示，除了用100mg/kg提取物處理的大鼠，所有提取物處理組大鼠的血肌酸酐水平均顯著降低。在給服CCDP后，賦形劑處理的對(duì)照組大鼠的血肌酸酐水平顯著高于(p<0.01)正常組大鼠。然而，所有藥物處理組大鼠的血肌酸酐水平顯著低于(pO.Ol或p〈0.05)賦形劑對(duì)照組大鼠。表11血肌酸酐水平測(cè)量給服順鉑前給服順鉑5天后給服測(cè)試樣品28天后正常組0.55±0.050.66士0,060.63±0.05對(duì)照組0.57±0.033.76±2.41*0.65±0.05甲巰丙脯酸0.58±0.041.65±0.83*'"0.62±0.02氯沙坦0.57±0.031.60±0.98*'*0.60±0.038*提取物處理組50mg/kg0.57±0,031.56±0.66"0,64±0.03100mg/kg0.56±0.021.52士0.95"0.64±0.03200mg/kg0.57±0.021.46±0.81"0.59±0.03**'PO.01,"P〈0.05(與正常組相比)；#P<0.01，##P<0.05(與對(duì)照組相比)試驗(yàn)實(shí)施例10:急性腎衰竭大鼠的退化腎區(qū)域測(cè)量測(cè)量急性腎衰竭大鼠的退化腎區(qū)域以評(píng)定本發(fā)明草藥提取物對(duì)腎病的效果。使用與實(shí)驗(yàn)實(shí)施例8相同的樣品和動(dòng)物。腎衰竭以焦點(diǎn)退化為特征，例如在所有CCDP處理組大鼠中觀察到的上皮細(xì)胞的壞死和退行性病變。如表12所示，在所有處理組中組織病理學(xué)神經(jīng)病顯著降低?？捎^測(cè)到賦形劑處理組大鼠腎臟中退化薄壁細(xì)胞的比率明顯高于(p<0.01)正常組大鼠，而提取物處理組大鼠的退化腎細(xì)胞的數(shù)量則以劑量依賴模式組織形態(tài)計(jì)量地明顯低于(p<0.01)賦形劑處理的對(duì)照組大鼠。如此，可認(rèn)為本發(fā)明草藥提取物能有效治療包括CCDP誘導(dǎo)的急性腎衰竭在內(nèi)的神經(jīng)病。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>><0.01(與正常組相比)；#P<0.01，##P<0.05(與對(duì)照組相比)試驗(yàn)實(shí)施例ll:急性腎衰竭大鼠BUN水平的測(cè)量將實(shí)施例2-10制備的混合提取物用作試驗(yàn)樣品。將六周大的雌性SD大鼠隨機(jī)分成13組(每組5只動(dòng)物)；1)一個(gè)正常組，2)—個(gè)由順鉑(CCDP)誘導(dǎo)的急性腎衰竭對(duì)照組，3)作為陽性對(duì)照組的甲巰丙脯酸(CAPT)100mg/kg組，4)一個(gè)被200mg/kg提取物(實(shí)施例12)處理的陽性對(duì)照組，5)九個(gè)被CCDP誘導(dǎo)并被200mg/kg提取物(實(shí)施例2-10)處理的急性腎衰竭組。試驗(yàn)樣品在給服CCDP前23天至給服CCDP后4天這段時(shí)間內(nèi)以200mg/kg的劑量口服給動(dòng)物。在給服CCDP五天后，將所有動(dòng)物處死評(píng)定BUN水平。比較兩組陽性對(duì)照組的試驗(yàn)結(jié)果。如表13所示，用賦形劑處理的對(duì)照組大鼠的BUN水平明顯高于(p<0.01)正常組大鼠。然而，除了實(shí)施例5-7(僵蠶蠶皮=1:1、3:1、1:3)，所有藥物處理組大鼠的BUN水平明顯低于(pO.Ol或p0.05)賦形劑處理的對(duì)照組大鼠。用實(shí)施例6-7(僵蠶蠶皮=3:1、1:3)的提取物處理的大鼠的BUN水平并不顯著，但是比起賦形劑處理的對(duì)照組大鼠，略微減少。實(shí)施例5的處理組(僵蠶蠶皮=1:1)顯示出與賦形劑處理的對(duì)照組非常相似的BUN水平。注意到CCDP誘導(dǎo)的急性腎衰竭大鼠的BUN水平的升高可明顯地被實(shí)施例8的提取物(葛根蠶皮=1:1)預(yù)防。特別地，實(shí)施例8的提取物(葛根蠶皮=1:1)在抑制BUN水平上要優(yōu)于實(shí)施例12。表13試驗(yàn)樣品的BUN水平的測(cè)量組BUN水平(mg/dL)正常組19.64±2.41對(duì)照組163.04±28.67*陽性對(duì)照組(甲巰丙脯酸)96.82±35.08""陽性對(duì)照組(實(shí)施例12的試驗(yàn)樣品)j63.38±15.11"實(shí)施例2(僵蠶葛根=11)81.84±35.82*'抑實(shí)施例3(僵蠶葛根=31)95.62±38.88*'M實(shí)施例4(僵蠶葛根=13)82.18±36.09*'**實(shí)施例5(僵蠶蠶皮=11)162.88±31.57*實(shí)施例6(僵蠶蠶皮=31)146.36土45.62'實(shí)施例7(僵蠶蠶皮=13)145.74±22.19*實(shí)施例8(葛根蠶皮=11)51.18±17.98"實(shí)施例9(葛根蠶皮=31)86.86±60.37*，實(shí)施例10(葛根蠶皮=1:3)85.04±39.81*'**'PO.01,"PO.05(與正常組相比)；#P<0.01，##P<0.05(與對(duì)照組相比)試驗(yàn)實(shí)施例12:急性腎衰竭大鼠的血肌酸酐水平的測(cè)量測(cè)量血肌酸酐水平以評(píng)定本發(fā)明的兩種混合提取物對(duì)腎病的效果。1、原料和方法22本試驗(yàn)使用與試驗(yàn)實(shí)施例11同樣的試驗(yàn)樣品和動(dòng)物。在處死的動(dòng)物體上收集血液樣品測(cè)量血肌酸酐的水平。2、結(jié)果如表14中所示，賦形劑處理組大鼠的血肌酸酐水平明顯高于(pO.Ol)正常組大鼠。然而，除了實(shí)施例5-7(僵蠶蠶皮=1:1,3:1,1:3)，所有藥物處理組大鼠的血肌酸酐水平明顯低于(pO.Ol或p0.05)賦形劑處理對(duì)照組大鼠。用實(shí)施例6-7(僵蠶蠶皮=3:1,1:3)的提取物處理的大鼠的肌酸酐水平并不顯著，但是比起賦形劑處理的對(duì)照組大鼠略微減少。實(shí)施例5的處理組(僵蠶蠶皮=1:1)顯示與賦形劑處理的對(duì)照組非常相似的肌酸酐水平。注意到CCDP誘導(dǎo)的急性腎衰竭大鼠的肌酸酐水平的升高可明顯被實(shí)施例8(葛根蠶皮=1:1)的提取物預(yù)防，特別是在阻止血肌酸酐水平上與實(shí)施例12的提取物相比較時(shí)。表14血肌酸酐水平的測(cè)量<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>'PO.01，"P〈0.05(與正常組相比)；#P<0.01，##P<0.05(與對(duì)照組相比)試驗(yàn)實(shí)施例13:急性腎衰竭大鼠退化腎區(qū)域的測(cè)量使用與試驗(yàn)實(shí)施例11相同的樣品和動(dòng)物。組織病理學(xué)測(cè)量退化腎區(qū)域的數(shù)量以評(píng)定本發(fā)明草藥提取物對(duì)腎病的效果。腎衰竭以焦點(diǎn)退化為特征，例如在所有CCDP處理組大鼠中觀察到的上皮細(xì)胞的壞死和退行性病變。如表15所示，在所有處理組中組織病理學(xué)神經(jīng)病顯著降低?？捎^測(cè)到賦形劑處理組大鼠腎臟中退化薄壁組織的比率明顯高于(p<0.01)正常組大鼠，而除了實(shí)施例5-7(僵蠶蠶皮=1:1,3:1,1:3)，提取物處理組大鼠的退化區(qū)域的數(shù)量則組織形態(tài)計(jì)量地明顯低于(pO.Ol或p<0.05)賦形劑處理的對(duì)照組大鼠。注意到被CCDP誘導(dǎo)的急性腎衰大鼠的焦點(diǎn)退化可明顯被實(shí)施例8(葛根蠶皮=1:1)的提取物所預(yù)防，特別是與實(shí)施例12的提取物在抑制焦點(diǎn)退化方面相比較時(shí)。表15退化腎區(qū)域的測(cè)量<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>PO.01(與正常組相比)；#P<0.01，##P<0.05(與對(duì)照組相比)試驗(yàn)實(shí)施例14:急性毒性試驗(yàn)1、原料和方法將六周大的雄性和雌性SPF(無特定病原體)ICR小鼠隨機(jī)分配(每組五只動(dòng)物)。將葛根、長白橡木和僵蠶的單一提取物(實(shí)施例l)和這些草藥的混合物(實(shí)施例12)在給服之前懸浮于0.5%甲基纖維素的溶液中分別以單獨(dú)劑量2000mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg和125mg/kg口服給小鼠。對(duì)于所有用試驗(yàn)樣品處理的動(dòng)物，觀察常規(guī)標(biāo)記、體重和死亡的動(dòng)物。將幸存者尸體解剖后，整體檢查器官和組織，例如腹腔和胸腔。此外，將12種具體器官在顯微鏡下進(jìn)行觀測(cè)。2、結(jié)果用試驗(yàn)樣品處理的動(dòng)物中沒有觀測(cè)到臨床征象或癥狀、或者死亡的動(dòng)物。根據(jù)體重或尸體解剖測(cè)定，沒有毒性征象癥狀。本發(fā)明的草藥提取物對(duì)于小鼠的口服LDs。大于2000mg/kg。試驗(yàn)實(shí)施例15:重復(fù)兩周劑量的毒性試驗(yàn)1、原料和方法將六周大的雄性和雌性SPF(無特定病原體)ICR小鼠隨機(jī)分成12組(每組五只動(dòng)物)。將葛根、長白橡木和僵蠶的單一提取物(實(shí)施例l)和這些草藥的混合物(實(shí)施例12)在給服之前懸浮于無菌蒸餾水中，分別以單劑量2000mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg和125mg/kg口服給小鼠，各自持續(xù)兩周。對(duì)于所有用試驗(yàn)樣品處理的動(dòng)物，觀察常規(guī)標(biāo)記、體重和死亡的動(dòng)物。在將所有幸存者的尸體解剖后，在顯微鏡下檢測(cè)器官和組織，例如腹腔和胸腔。2、結(jié)果觀測(cè)接受2000mg/kg劑量的小鼠體重?fù)p失和食物攝取。同樣地，直到2000mg/kg的極限劑量并沒有任何異常發(fā)現(xiàn)，在兩種性別中用作重復(fù)兩周劑量的最大容忍劑量大于2000mg/kg。因此，在兩種性別中建議四周重復(fù)施加的最大劑量為2000mg/kg/10ml/天。中間的和較低的攝生法分別優(yōu)選為1000mg/kg/10ml/天和500mg/kg/10ml/天。本發(fā)明將通過參照下列的制備實(shí)施例進(jìn)行說明，其僅僅用來闡述，本發(fā)明的范圍并不局限于此。制備實(shí)施例l:片劑形式1、含有葛根提取物的片劑形式使用常規(guī)的制備方法，制得含有葛根提取物的片劑形式，其中重量配比為單一葛根提取物(實(shí)施例h70.0重量％)、乳糖(17.5重量％)、硬脂酸鎂(5.0重量％)、維他命C(2.5重量％)和甘露醇(5.0重量％)。2、含有僵蠶提取物的片劑形式含有僵蠶提取物的片劑形式(實(shí)施例1的單個(gè)僵蠶提取物；70.0重量％)以與含有葛根提取物的片劑形式相同的方法而制得。3、含有長白檢木提取物的片劑形式含有長白惚木提取物的片劑形式(實(shí)施例1的單個(gè)長白橡木提取物;70.0重量％)以與含有葛根提取物的片劑形式相同的方法而制得。4、含有混合提取物的片劑形式含有葛根、僵蠶、長白惚木和蠶皮(實(shí)施例12的混合草藥提取物；70.0重量％)的片劑形式通過與含有葛根提取物的片劑形式相同的方法而制得。制備實(shí)施例2:膠囊劑形式1、含有葛根提取物的膠囊劑形式使用常規(guī)的制備方法，制得含有葛根提取物的膠囊劑形式，其中重量配比為單一葛根提取物(實(shí)施例1;85.0重量％)、羧甲基纖維素(10.0重量％)和硬脂酸鎂(5.0重量％)。2、含有僵蠶提取物的膠囊劑形式含有僵蠶提取物的膠囊劑形式(實(shí)施例1的單個(gè)僵蠶提取物；85.0重量%)以與含有葛根提取物的膠囊劑形式相同的方法而制得。3、含有長白檢木提取物的膠囊劑形式含有長白橡木提取物的膠囊劑形式(實(shí)施例1的單個(gè)長白惚木提取物提取物；85.0重量％)以與含有葛根提取物的膠囊劑形式相同的方法而制得。4、含有混合提取物的膠囊劑形式含有葛根、僵蠶、長白橡木提取物和蠶皮(實(shí)施例12的混合草藥提取物；85.0重量％)的膠囊劑形式通過與含有葛根提取物的膠囊劑形式相同的方法而制得。制備實(shí)施例3:制備草藥飲料1、含有單一葛根提取物的草藥飲料使用常規(guī)方法，含有葛根提取物(從實(shí)施例1制備而得)的單一草藥飲料通過將草藥提取物混合到含有糖(7.78重量％)、檸檬酸(O.ll重量％)、香精(O.l重量％)和純凈水(87.01重量％)的混合物中制備而得。2、含有僵蠶提取物的草藥飲料含有僵蠶提取物(從實(shí)施例1制備而得；5.0重量％)和其它原料的草藥飲料通過以與含有葛根提取物的草藥飲料相同的方法制備而得。3、含有長白橡木提取物的草藥飲料含有長白橡木提取物的草藥飲料(從實(shí)施例1制備而得；5.0重量％)和其它原料的草藥飲料通過以與含有葛根提取物的草藥飲料相同的方法制備而得。4、含有混合提取物的草藥飲料含有葛根、僵蠶、長白德木提取物和蠶皮(從實(shí)施例12制備而得；5.0重量％)和其它原料的草藥飲料通過與含有葛根提取物的草藥飲料相同的方法而制得。權(quán)利要求1、一種藥物組合物，該藥物組合物用于預(yù)防和治療腎病，該藥物組合物含有選自由葛根、僵蠶和長白楤木所組成的組中的至少一種或多種草藥的草藥提取物。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，所述草藥提取物還包括蠶皮的提取物。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中，所述草藥提取物包括葛根的提取物和蠶皮的提取物。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中，所述草藥提取物包括葛根、長白橡木、僵蠶和蠶皮的提取物。5、根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述腎病是由糖尿病并發(fā)癥誘導(dǎo)的。6、根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述腎病是由中毒性腎損害誘導(dǎo)的。7、根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述腎病為急性腎衰竭。8、根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述提取物制成軟浸膏劑的形式，或者通過冷凍干燥、或使用嘖霧干燥器或流化床裝置制成干粉的形式。9、一種保健食品，該保健食品用于改善腎功能，該保健食品含有選自由葛根、僵蠶和長白橡木所組成的組中的至少一種或多種草藥的草藥提取物。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的保健食品，其中，所述草藥提取物還包括蠶皮。全文摘要本發(fā)明涉及一種含有選自由葛根、僵蠶和長白楤木所組成的組中的至少一種或多種草藥的草藥提取物的藥物組合物和保健食品。本發(fā)明的含有單一或混合成分的草藥藥物可用于預(yù)防和治療腎病以及改善腎功能。文檔編號(hào)A61K35/64GK101111254SQ200680003311公開日2008年1月23日申請(qǐng)日期2006年1月31日優(yōu)先權(quán)日2005年1月31日發(fā)明者具世光,盧亮局,吳成準(zhǔn),尹周炳,張桓鳳,李政祐,李賢鏞,楊熙福,林文政,柳濟(jì)萬,金尹仲申請(qǐng)人:同和藥品工業(yè)株式會(huì)社