專利名稱：前列腺素E₂注射劑及其制作方法
前列腺素E2注射劑及其制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)制藥技術(shù)，具體地說(shuō)，是涉及以花生四烯酸為起始原
料生產(chǎn)前列腺素E2注射劑的生產(chǎn)技術(shù)。
文獻(xiàn)報(bào)道，孕婦足月生產(chǎn)需要安全有效、質(zhì)量可控的催產(chǎn)引產(chǎn)藥物，縮短 產(chǎn)程，減少疼痛，保證母子平安，是臨床常見(jiàn)的問(wèn)題，目前國(guó)內(nèi)外臨床用于催
產(chǎn)引產(chǎn)的藥物主要是催產(chǎn)素和前列腺素E2。
催產(chǎn)素對(duì)孕婦子宮的收縮作用為強(qiáng)直性收縮，容易引起胎兒窒息和子宮破
裂。前列腺素E2對(duì)孕婦子宮的收縮作用為生理性，有節(jié)奏的收縮，不易引起胎 兒窒息和子宮破裂。但目前前列腺素E2類產(chǎn)品在質(zhì)量控制和給藥途徑等方面存 在著比較嚴(yán)重的問(wèn)題，其中，國(guó)產(chǎn)的滅菌前列腺素E2溶液為前列腺素E2的無(wú)水
乙醇溶液，臨床上可用于靜脈滴注，問(wèn)題是(1)純度要求低，前列腺素E2僅
為不小于總前列腺素E的6(m; (2)穩(wěn)定性差，分別在-8。C和-2(TC條件下貯藏， 有效期僅為3個(gè)月和6個(gè)月。(3)應(yīng)用前，需要將滅菌前列腺素E2溶液和碳酸 鈉溶液各l支加入10ml生理鹽水中，搖勻使成稀釋液，供靜脈滴注給藥。這一 過(guò)程必然造成臨床使用的復(fù)雜性，這不僅僅是使主藥溶解的物理過(guò)程，還包含 了中和反應(yīng)等化學(xué)過(guò)程，這種復(fù)雜的過(guò)程可能會(huì)導(dǎo)致臨床使用的安全性隱患， 不僅增加了染菌機(jī)會(huì)，同時(shí)也會(huì)直接影響藥品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
前列腺素E2陰道栓劑(進(jìn)口的普貝生)和陰道凝膠、臨床效果作用均較緩 慢，給藥途徑不易被患者所接受。
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有產(chǎn)品質(zhì)量不易控制等缺點(diǎn)，通過(guò)提高產(chǎn)品純度 和改變劑型，以及添加穩(wěn)定劑和增溶劑的方法，保證產(chǎn)品的安全性和有效性， 提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性和水溶性，以及患者的易接受性，降低臨床使用的復(fù)雜性。
前列腺素E2注射劑在臨床上主要用于足月引產(chǎn)和催產(chǎn)，是不易引起胎兒窒息和 子宮破裂的新型生化制劑。
本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下措施來(lái)達(dá)到前列腺素E2注射劑的生產(chǎn)工藝是， 以花生四烯酸甘油三酯為起始原料，經(jīng)水解和甲酯化制成花生四烯酸甲酯，采 用多級(jí)尿素包合和真空蒸餾法分離純化出高純度的花生四烯酸甲酯，高純度的 花生四烯酸甲酯水解成高純度的花生四烯酸，用羊精囊前列腺素合成酶和輔助 因子將高純度的花生四烯酸生物轉(zhuǎn)化為前列腺素粗品，前列腺素粗品用硅膠柱 層析分離出前列腺素E粗品，前列腺素E粗品經(jīng)硅膠-硝酸銀柱層析精制為前列
腺素E2精品，前列腺素E2精品經(jīng)重結(jié)晶制得前列腺素E2結(jié)晶，前列腺素E2精品 和前列腺素E2結(jié)晶用無(wú)水乙醇、25%乙醇水溶液或pH7. 5-8. 0的磷酸鹽緩沖液溶 解，與敷料混合后，除菌和灌裝制得前列腺素E2小水針和大輸液，或進(jìn)一步冷 凍干燥制得粉針劑。
花生四烯酸甘油三酯是豬、牛腎上腺油、肝油和高山被孢霉油。 前列腺素E2精品和前列腺素E2結(jié)晶均可作為原料藥生產(chǎn)前列腺素E2注射劑， 分裝前配液時(shí)，增加產(chǎn)品水溶性的溶劑是無(wú)水乙醇、25%乙醇水溶液、pH7.5-8.0 的磷酸鹽緩沖液、羥丙基-環(huán)糊精、聚乙二醇400、聚山梨酯80和泊洛沙姆； 穩(wěn)定劑是輕丙基-P -環(huán)糊精和聚乙二醇400;粉針劑的骨架支持劑是右旋糖酐、 甘露醇、人血白蛋白和乳酸鈣。前列腺素E2注射劑是前列腺素E2小水針、粉針 劑和大輸液三種劑型的總稱。
花生四烯酸甲酯和高純度花生四烯酸甲酯的氣相色譜條件日本島津GC-5A 型氣相色譜(聯(lián)數(shù)據(jù)處理機(jī))，氫火焰離子檢測(cè)器，氮?dú)饬魉?5ml/min，空氣 流速400ml/min，氫氣流速35ml/min;柱溫185。C，檢測(cè)室215°C，氣化室 250°C;柱長(zhǎng)3m,直徑3腿；載體9%DEGS， 60-80目chromosorb W/AM DMCS。
前列腺素E2精品、俞列腺素E2結(jié)晶和前列腺素E2注射劑的液相色譜條件 用十八烷基硅烷鍵鍵合硅膠為填充劑，色譜柱直徑和長(zhǎng)為4.6mmX25cm，流動(dòng)相 為甲醇-乙酸(0.2%) 二58: 42,檢測(cè)波長(zhǎng)210nm,流速lml/min，柱溫30°C。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)l.將花生四烯酸的純度由10-40%提高 到90%以上。2.將原料藥-前列腺素E2的性狀由油狀物提高到結(jié)晶；3.前列 腺素^的純度達(dá)到90%以上；4.前列腺素E2注射劑在陰涼處保存，有效期達(dá)到 1.5-3年。5.前列腺素E2注射劑具有高純度、高穩(wěn)定性、高均一性、臨床使用 方便、高療效、無(wú)毒付作用，具有縮宮作用，臨床上用于中期和足月的催產(chǎn)和 引產(chǎn)。另外，原料來(lái)源豐富，價(jià)格低廉，
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明加以進(jìn)一步說(shuō)明
實(shí)施例1
1、 花生四烯酸甘油三酯的水解
在裝有回流冷凝器和通氮管的2000ml二口瓶中，加入500g高山被孢霉油(花 生四烯酸甘油三酯)、300g氫氧化鉀和900ml乙醇，通氮，加熱回流3小時(shí)。以 18%鹽酸酸化，水洗至中性，干燥得花生四烯酸，收率為92.3%。
2、 花生四烯酸的甲酯化
在裝有回流冷凝器和通氮管的1000ml 二口瓶中，加入300g花生四烯酸、 200ml甲醇和7ml濃硫酸，通氮，加熱回流3小時(shí)，水洗至中性，干燥得花生四 烯酸甲酯，收率為98.3%，純度為41.2%。
3、 多級(jí)尿素包合和真空蒸餾分離高純度花生四烯酸甲酯 在裝有電動(dòng)攪拌機(jī)、回流冷凝器和通氮管的5000ml三口瓶中，加入200g
花生四烯酸甲酯、400g尿素和1200ml乙醇，通氮，攪拌，加熱回流至完全溶解， 室溫下放置24小時(shí)，抽濾。向?yàn)V液中加入適量的尿素(V: W二10: 1)，如上操
作，同樣溶解和結(jié)晶，重復(fù)2次。最后濾液濃縮至干，加18%鹽酸酸化，水洗至 中性，真空干燥。在162-164°C/0. lmmHg的條件下，真空蒸餾得淡黃色油狀物 為高純度花生四烯酸甲酯。收率為19. 6%，純度為92. 1%。
4、 高純度花生四烯酸甲酯的水解 在裝有回流冷凝器和通氮管的500ml 二口瓶中，加入100g高純度花生四烯
酸甲酯、60g氫氧化鉀和180ml乙醇，通氮，加熱回流3小時(shí)。以18%鹽酸酸化 至pH=2，乙醚提取，水洗醚層至中性，回收乙醚得高純度花生四烯酸，通氮保 存。收率為97. 1%。
5、 羊精囊前列腺素合成酶的制備
2.0公斤羊精囊剝?nèi)ブ竞徒Y(jié)締組織，加2000mL0. 154M氯化鉀溶液，分次 勻漿，然后4000rpm離心25rain ，取上清液雙層紗布過(guò)濾，濾渣再用氯化鉀溶 液勻漿，如上法離心及過(guò)濾得上清液。合并濾液，加2M枸櫞酸溶液調(diào)至pH 4.8-5.2，如上法離心棄上層液，得前列腺素合成酶800g，加0. 125MEDTA-Na2 溶液530ml制成混懸液，用2M氫氧化鈉溶液調(diào)pH=8. 0即得酶液。
6、 前列腺素E2的生物轉(zhuǎn)化和提取
在裝有電動(dòng)攪拌機(jī)、通氧管和排氣孔的5000ml三口瓶中，加入上述800g 濕酶的酶液，用50mlEDTA-Na2溶液溶解40mg氫醌、1. 0g谷光甘肽和2g花生四 烯酸后加入酶液中，攪拌通氧，37"C轉(zhuǎn)化1小時(shí)。加3倍體積丙酮，終止反應(yīng)。 反應(yīng)液抽濾，殘?jiān)?00ml丙酮洗滌，于45'C減壓濃縮回收丙酮。濃縮液用 4N鹽酸調(diào)PH=3. 0，用2/3體積(v/v)乙醚分三次萃取，取醚層用2/3體積(v/v) 0.2M磷酸鹽緩沖液(pH=8.0)分三次萃取，水層再以2/3體積(v/v)石油醚分 三次萃取脫脂。水層以4N鹽酸調(diào)PH=3. 0，以2/3體積(v/v) 二氯甲烷分三次 萃取，二氯甲烷層用少量水洗滌，去水層。二氯甲烷層加無(wú)水硫酸鈉密封于冰
箱內(nèi)脫水過(guò)夜，濾去硫酸鈉后，濾液于4crc減壓濃縮制得黃色油狀物即為前列
腺素粗品。按花生四烯酸純品重量計(jì)算，酶促轉(zhuǎn)化率為35.6%。
7、 硅膠柱層析分離
在長(zhǎng)600mm，直徑25腿的層析柱中，加入懸浮于氯仿中的150g活化硅膠 (100-160目)，平衡后，加入7.5克溶解于少量氯仿的前列腺素粗品，依次用 氯仿、98: 2 (v/v)的氯仿-甲醇、96: 4 (v/v)的氯仿-甲醇混合液洗脫，硅 膠薄層層析鑒定追蹤，分別收集前列腺素A和前列腺素E部分。在35"C以下減 壓濃縮，除盡氯仿、甲醇得前列腺素E粗品4.6g。
8、 硅膠-硝酸銀柱層析和結(jié)晶法精制
硅膠-硝酸銀柱層析洗脫液為乙酸乙酯冰醋酸石油醚(90-12(TC):水
=200: 22.5: 125: 5 (v/v)。在長(zhǎng)600mm，直徑25mra的層析柱中，加入懸浮于 洗脫液的130g活化的硝酸銀硅膠(1: 10， w/w, 200-250目)，平衡后，將4. 6g 前列腺素E粗品用少量的洗脫液溶解，上柱、洗脫。用硝酸銀-硅膠G (1: 10， v/w)薄層鑒別追蹤，分別收集前列腺素E和前列腺素E2各管于35。C以下充氮 減壓濃縮至無(wú)醋酸味，用適量醋酸乙酯溶解，少量水洗酸，pH4-5，生理鹽水除 銀。醋酸乙酯溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥，充氮，密塞，置4。C冰箱中過(guò)夜后，濾去 硫酸鈉，在35。C以下充氮減壓濃縮，除盡醋酸乙酯，得前列腺素E2精品2.2g， 純度為91. 5%。前列腺素E2精品經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶2次，得前列腺素E2結(jié)晶1. 6g， 熔點(diǎn)64-71。C，純度為96. 3%。
9、 前列腺素E2注射劑的制備 9.1前列腺素E2粉針劑的制備
處方前列腺素E2精品 500mg 右旋糖酐40 25g
羥丙基-環(huán)糊精 1.9g
加注射用水至 800ml 前列腺素E2粉針劑 1000支
先用100111125%乙醇水溶液將500mg前列腺素&精品溶解，再用100ml注射 用水溶解25g右旋糖酐40和1. 9g羥丙基-P -環(huán)糊精，合并后，加注射用水至 800ml，無(wú)菌過(guò)濾，每支灌裝0.8ml，在-5(TC， 700咖Hg條件下，冷凍干燥、制 得980支前列腺素E2粉針劑，規(guī)格為0.5mg。
9. 2前列腺素E2小水針的制備
處方前列腺素&結(jié)晶 500mg
羥丙基-e-環(huán)糊精 2.0g
加生理鹽水至 1000ml
前列腺素E2小水針 1000支
用100ml生理鹽水溶解2. Og羥丙基-環(huán)糊精和500mg前列腺素&結(jié)晶， 加生理鹽水至1000ml，無(wú)菌過(guò)濾，每支灌裝1.0ml，封口，制得920支前列腺 素E2小水針，規(guī)格lml: 0.5 mg。 9. 3前列腺素E2大輸液的制備
處方前列腺素E2結(jié)晶 500mg
聚乙二醇400 5.0g
葡萄糖 5. Okg
加注射用水至 100L
前列腺素E2大輸液 1000瓶
用100ml注射用水溶解5. Og聚乙二醇400和500mg前列腺素E2結(jié)晶,用10L 注射用水溶解5. Okg葡萄糖，合并后，加注射用水至100L，無(wú)菌過(guò)濾，每瓶灌
裝100ml，加塞，壓蓋制得950瓶前列腺素E2大輸液，規(guī)格100ml: 0. 5 mg。 實(shí)施例2
1、 花生四烯酸甘油三酯的水解
在裝有回流冷凝器和通氮管的500ml 二口瓶中，加入100g牛肝油(花生四 烯酸甘油三酯)、60g氫氧化鉀和200ml乙醇，通氮，加熱回流3小時(shí)。以18% 鹽酸酸化，水洗至中性，干燥得花生四烯酸。收率為90.2%。
2、 花生四烯酸的甲酯化
在裝有回流冷凝器和通氮管的250ml 二口瓶中，加入100g花生四烯酸、70ml 甲醇和2.5ml濃硫酸，通氮，加熱回流3小時(shí)，水洗至中性，干燥得花生四烯 酸的甲酯化。收率為96. 3%，純度為12.8%。
3、 多級(jí)尿素包合和真空蒸餾分離高純度花生四烯酸甲酯 在裝有電動(dòng)攪拌機(jī)、回流冷凝器和通氮管的2000ml三口瓶中，加入100g花
生四烯酸甲酯、200g尿素和500ml乙醇，通氮，加熱回流至完全溶解，室溫下 放置24小時(shí)，抽濾。向?yàn)V液中加入適量的尿素(V: W=5: 2)，如上操作，同樣 溶解和結(jié)晶，重復(fù)2次。最后濾液濃縮至干，加18%鹽酸酸化，水洗至中性，真 空干燥。在176-178°C/0. 35mmHg的條件下，真空蒸餾得淡黃色油狀物為高純度 花生四烯酸甲酯。收率為6.3%，純度為91.2%。
4、 高純度花生四烯酸甲酯的水解
在裝有回流冷凝器和通氮管的100ml 二口瓶中，加入10g高純度花生四烯酸 甲酯，6g氫氧化鉀和50ml乙醇，通氮，加熱，回流3小時(shí)。以18%鹽酸酸化至 ra=2，乙醚提取至醚層無(wú)色，水洗醚層至中性，無(wú)水硫酸鈉脫水。回收乙醚得 高純度花生四烯酸，通氮保存。收率為95.3%。
5、 羊精囊前列腺素合成酶的制
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，得前列腺素合成酶952g，加 0. 125MEDTA-Na2溶液550ml制成混懸液，調(diào)pH=8. 0即得酶液。
6、 前列腺素E2的生物轉(zhuǎn)化和提取
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，按花生四烯酸純品重量計(jì)算，酶促轉(zhuǎn)化 率為56. 8%。
7、 硅膠柱層析分離
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，區(qū)別是洗脫液為氯仿甲醇醋酸水
=90: 8: 1: 0.8 (v/v),加入7. 0克前列腺素粗品，得前列腺素E粗品4.2g。
8、 硅膠-硝酸銀柱層析和結(jié)晶法精制
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，不同的是洗脫液為乙酸乙酯冰醋酸 異辛烷蒸餾水=110: 30: 10: 100 (v/v)，上樣量為4. 2g前列腺素E粗品， 制得前列腺素E2精品1. 9g，純度為90. 8%。前列腺素E2精品用乙酸乙酯和已烷 的混合溶劑重結(jié)晶2次，得前列腺素E2結(jié)晶1.5g，熔點(diǎn)67'C，純度為95.9%。
9、前列腺素E2粉針劑的制備
處方前列腺素E2結(jié)晶 500mg
甘露醇 25g
聚山梨酯80 2g
加注射用水至 800ml
前列腺素E2粉針劑 1000支
先用100mlpH7. 5的磷酸鹽緩沖液將500mg前列腺素E2結(jié)晶溶解，再用200ml 注射用水溶解25g甘露醇和2g聚山梨酯80，合并后，加注射用水至800ml，無(wú) 菌過(guò)濾，每支灌裝0.8ml，在-5(TC， 700mmHg條件下冷凍干燥、制得956支前 列腺素E2粉針劑。
實(shí)施例3
1、 花生四烯酸甘油三酯的水解
在裝有回流冷凝器和通氮管的500ml 二口瓶中，加入50g豬腎上腺油(花生 四烯酸甘油三酯)、30g氫氧化鉀和100ml乙醇，通氮，加熱回流3小時(shí)。以18% 鹽酸酸化，水洗至中性，干燥得花生四烯酸。收率為94.7%。
2、 花生四烯酸的甲酯化
在裝有回流冷凝器和通氮管的100ml 二口瓶中，加入30g花生四烯酸、20ml 甲醇和0.7ml濃硫酸，通氮，加熱回流3小時(shí)，水洗至中性，干燥得花生四烯 酸的甲酯化。收率為93.3%，純度為15.2%。
3、 多級(jí)尿素包合和真空蒸餾分離高純度花生四烯酸甲酯 在裝有電動(dòng)攪拌機(jī)、回流冷凝器和通氮管的500ml三口瓶中，加入20g花
生四烯酸甲酯、80g尿素、160ml石油醚和5.0ml甲醇，通氮，攪拌4小時(shí)，室 溫下放置24小時(shí)，抽濾。向?yàn)V液中加入適量的尿素(V: W二10: 1)，如上操作， 同樣溶解和結(jié)晶，重復(fù)2次。最后濾液濃縮至干，加18%鹽酸酸化，水洗至中性， 真空干燥。在176-184'C/O. 3mmHg的條件下，真空蒸餾得淡黃色油狀物為高純 度花生四烯酸甲酯。收率為10.8%，純度為90.2%。 4、高純度花生四烯酸甲酯的水解
在裝有回流冷凝器和通氮管的lOOml 二口瓶中，加入10g高純度花生四烯 酸甲酯，6g氫氧化鉀和50ml乙醇，通氮，加熱回流3小時(shí)。以18%鹽酸酸化至 pH二2，乙醚提取，水洗醚層至中性?；厥找颐训酶呒兌然ㄉ南┧幔ǖ４?。 收率為96. 1%。
5、羊精囊前列腺素合成酶的制備
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，得前列腺素合成酶880g，加0. 125MEDTA-Na2溶液540ml制成混懸液，調(diào)pH=8. 0即得酶液。
6、 前列腺素E2的生物轉(zhuǎn)化和提取
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，按花生四烯酸純品重量計(jì)算，酶促轉(zhuǎn)化 率為24. 3%。
7、 硅膠柱層析分離
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，不同的是洗脫液為氯仿甲醇醋酸
水=90: 8: 1: 0.8 (v/v)。加入6. 5克前列腺素粗品，得前列腺素E粗品3.8g。
8、 硅膠-硝酸銀柱層析和結(jié)晶法精制
操作方法和步驟與實(shí)施例1相同，不同的是洗脫液為乙酸乙酯冰醋酸
異辛醇蒸餾水=200: 22.5: 140: 5 (v/v)，上樣量為3.8g前列腺素E粗品， 制得前列腺素E2精品1.6g，純度為92.6%。前列腺素E2精品用乙酸乙酯和戊烷 的混合溶劑重結(jié)晶2次，得前列腺素E^結(jié)晶1. 2g，熔點(diǎn)68-69°C，純度為97. 4%。
9、前列腺素E2粉針劑的制備
處方前列腺素E2結(jié)晶 500mg
人血白蛋白(注射用) 40g
泊洛沙姆188 2g
加注射用水至 800ml
前列腺素E2粉針劑 1000支
先用100mlpH8. 0的磷酸鹽緩沖液將500mg前列腺素E2結(jié)晶溶解，再用200ml 注射用水溶解40g人血白蛋白，合并后，加注射用水至800ml,無(wú)菌過(guò)濾，每支 灌裝0.8ml，在-50°C， 700mmHg條件下冷凍干燥、制得980支前列腺素E2粉針 劑。
實(shí)施例41、 花生四烯酸甘油三酯的水解
在裝有回流冷凝器和通氮管的250ml 二口瓶中，加入50g牛腎上腺油(花生 四烯酸甘油三酯)、30g氫氧化鉀和100ml乙醇，通氮，加熱回流3小時(shí)。以18% 鹽酸酸化，水洗至中性，干燥得花生四烯酸，收率為93.8%。
2、 花生四烯酸的甲酯化
在裝有回流冷凝器和通氮管的100ml 二口瓶中，加入30g花生四烯酸、20ml 甲醇和0.7ml濃硫酸，通氮，加熱回流3小時(shí)，水洗至中性，干燥得花生四烯 酸甲酯，收率為93.8%，純度為15.7%。
3、 多級(jí)尿素包合和真空蒸餾分離高純度花生四烯酸甲酯 在裝有電動(dòng)攪拌機(jī)、回流冷凝器和通氮管的500ml三口瓶中，加入20g花生
四烯酸甲酯、80g尿素、160ml石油醚和5ml甲醇，通氮，攪拌4小時(shí)，室溫下 放置24小時(shí)，抽濾。向?yàn)V液中加入適量的尿素(V: W二10: 1)，如上操作，同 樣溶解和結(jié)晶，重復(fù)2次。最后濾液濃縮至干，加18%鹽酸酸化，水洗至中性， 真空干燥。在195-205°C/1.2mmHg的條件下，真空蒸餾得淡黃色油狀物為高純 度花生四烯酸甲酯，收率為9.8%，純度為92.8%。 4、高純度花生四烯酸甲酯的水解 在裝有回流冷凝器和通氮管的100ml 二口瓶中，加入10g高純度花生四烯 酸甲酯，6g氫氧化鉀和40ml乙醇，通氮，加熱，回流3小時(shí)。以18%鹽酸酸化 至pH=2，乙醚提取至醚層無(wú)色，水洗醚層至中性，無(wú)水硫酸鈉脫水?；厥找颐?得高純度花生四烯酸，通氮保存。 5、羊精囊前列腺素合成酶的制備
操作方法和步驟與實(shí)施例1完全相同，得前列腺素合成酶1060g，加 0. 125MEDTA-Na2溶液530ml制成混懸液，調(diào)pH=8. 0即得酶液。
6、 前列腺素E2的生物轉(zhuǎn)化和提取
操作方法和步驟與實(shí)施例1完全相同，按花生四烯酸純品重量計(jì)算，酶促
轉(zhuǎn)化率為47. 8%。
7、 硅膠柱層析分離
操作方法和步驟與實(shí)施例1完全相同，不同的是洗脫液為氯仿甲醇醋 酸；水二90: 8: 1: 0.8 (v/v),加入8. 0克前列腺素粗品，得前列腺素E粗品
4. 5g。
8、 硅膠-硝酸銀柱層析和結(jié)晶法精制
操作方法和步驟與實(shí)施例1完全相同，不同的是洗脫液為氯仿甲醇醋 酸；水=90: 8: 1: 0.8 (v/v)，上樣量為4. 5g前列腺素E粗品，制得前列腺素 E4青品2.4g，純度為90.2%。前列腺素E2精品用乙酸乙酯和石油醚(30-60°C) 的混合溶劑重結(jié)晶2次，得前列腺素&結(jié)晶2. lg，熔點(diǎn)66-67°C ，純度為98. 2%。
9、前列腺素E2粉針劑的制備
處方前列腺素E2精品 400mg
10%聚乙二醇400 25ml
乳酸鈣 40g
加注射用水至 640ml
前列腺素E2粉針劑 800支
先用50ml無(wú)水乙醇將500mg前列腺素&精品溶解，再用200ml注射用水溶 解40g乳酸鈣和25mLl(^聚乙二醇400，合并后，加注射用水至800ml，無(wú)菌過(guò) 濾，每支灌裝0.8ml，在-5(TC， 700mmHg條件下冷凍干燥、制得765支前列腺 素E2粉針劑。
權(quán)利要求
1、 前列腺素E2注射劑的生產(chǎn)工藝，其特征在于以花生四烯酸甘油三酯為起始原料，經(jīng)水解和甲酯化反應(yīng)制成花生四烯酸甲酯，采用多級(jí)尿素包合和真空 蒸餾法分離純化出高純度的花生四烯酸甲酯，高純度的花生四烯酸甲酯水解成 高純度的花生四烯酸，用羊精囊前列腺素合成酶和輔助因子將高純度的花生四烯酸生物轉(zhuǎn)化為前列腺素粗品，前列腺素粗品經(jīng)硅膠柱層析分離為前列腺素E 粗品，前列腺素E粗品經(jīng)硅膠-硝酸銀柱層析精制為前列腺素E2精品、前列腺素E2精品經(jīng)重結(jié)晶技術(shù)制得前列腺素E2結(jié)晶，前列腺素E2精品和前列腺素E2結(jié)晶用無(wú)水乙醇、生理鹽水或緩沖液溶解，并與敷料混合后，制得前列腺素E,注射 劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于作為起始原料的花生四烯 酸甘油三酯是豬、牛腎上腺油、肝油和高山被孢霉油。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于花生四烯酸甲酯、尿素和 溶媒的比例為l: 2-4: 5-8，尿素包合的溶媒可以是石油醚或乙醇，催化劑為甲 醇或乙醇。真空蒸餾的真空度在O. 1-2.0mmHg之間，溫度在160-205。C之間。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于硅膠柱層析的洗脫方法和 洗脫液包括依次用氯仿、98: 2 (v/v)的氯仿-甲醇、96: 4 (v/v)的氯仿-甲醇混合液進(jìn)行的分級(jí)洗脫；以氯仿甲醇醋酸；水(90: 8: 1: 0.8)為洗脫液的連續(xù)洗脫。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于硅膠-硝酸銀柱層析洗脫液包括乙酸乙酯冰醋酸石油醚(90-12CTC):水二200: 22.5: 125: 5 (v/v); 乙酸乙酯冰醋酸異辛烷蒸餾水=110: 30: 10: 100 (v/v);乙酸乙酯冰醋酸異辛醇蒸餾水=200: 22.5: 140: 5 (v/v);氯仿甲醇醋酸水=90: 8: 1: 0.8 (V/V)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于前列腺素E2重結(jié)晶的溶劑 是乙酸乙酯或乙酸乙酯分別與已烷、戊垸和石油醚制成的混合溶劑。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于前列腺素E2精品和前列腺 素E2結(jié)晶均可作為原料藥生產(chǎn)前列腺素E2注射劑，分裝前配液時(shí)，增加產(chǎn)品水 溶性的溶劑是無(wú)水乙醇、25%乙醇水溶液、pH7. 5-8.0的磷酸鹽緩沖液、羥丙基 -P-環(huán)糊精、聚乙二醇400、聚山梨酯80和泊洛沙姆；穩(wěn)定劑是羥丙基-P-環(huán) 糊精和聚乙二醇400;粉針劑的骨架支持劑是右旋糖酐、甘露醇、人血白蛋白和 乳酸鈣。前列腺素E2注射劑是前列腺素E,小水針、粉針劑和大輸液。
全文摘要
本發(fā)明涉及前列腺素E₂注射劑的生產(chǎn)工藝，現(xiàn)有技術(shù)中的前列腺素E₂產(chǎn)品純度低，穩(wěn)定性差，臨床使用方法復(fù)雜，本發(fā)明以高純度的花生四烯酸經(jīng)生物合成和純化技術(shù)，制備出前列腺素E₂結(jié)晶，通過(guò)提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性和水溶性，提高了產(chǎn)品質(zhì)量的可控性，并大大簡(jiǎn)化了臨床使用方法。本發(fā)明的產(chǎn)品是高純度、高穩(wěn)定性、高均一性、臨床使用方便、高療效、無(wú)毒副作用的前列腺素E₂注射劑。前列腺素E₂注射劑在臨床上主要用于足月引產(chǎn)和催產(chǎn)，是不易引起胎兒窒息和子宮破裂的新型生化制劑。
文檔編號(hào)A61K31/185GK101120916SQ20061010433
公開(kāi)日2008年2月13日 申請(qǐng)日期2006年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月8日
發(fā)明者孫啟良 申請(qǐng)人:北京儒展生化藥物研究中心