專利名稱：含有鈣通道阻滯劑和b族維生素的藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有鈣通道阻滯劑和B族維生素的藥物組合物及其用途，尤指一種治療、預(yù)防或延緩高血壓及其相關(guān)疾病的化學(xué)藥組合物，屬于藥學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
原發(fā)性高血壓是最常見(jiàn)的慢性疾病之一，是引起嚴(yán)重的心血管病如心肌梗塞、腦卒中，以及腎臟疾病等的主要原因。高血壓病在我國(guó)患病率為18.8％，目前已有1.6億多患者，并且高血壓患病率的增加迅速。血壓升高是腦卒中和冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，血壓升高增加心力衰竭和腎臟疾病的危險(xiǎn)。治療高血壓病人的主要目的是最大限度地降低心血管病的死亡和病殘的總危險(xiǎn)，藥物降低血壓可以有效地降低心血管并發(fā)癥的發(fā)病率和死亡率，防止腦卒中、冠心病、心力衰竭和腎臟疾病的發(fā)生和發(fā)展。
WHO和我國(guó)高血壓治療指南推薦的一線抗高血壓藥物分別是利尿劑、β-腎上腺素受體拮抗劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑，或者由上述藥物組成的固定劑量的復(fù)方降壓制劑。多數(shù)高血壓患者需要兩種以上的抗高血壓藥物來(lái)達(dá)到控制血壓目標(biāo)，兩種藥物可單獨(dú)處方或?yàn)楣潭▌┝康膹?fù)方制劑(中國(guó)高血壓防治指南起草委員會(huì).中國(guó)高血壓防治指南.高血壓雜志，2000；8(1)94～102，103～112)。國(guó)際大規(guī)模臨床試驗(yàn)證明合并用藥有其需要和價(jià)值，每種藥物的劑量不大，藥物的治療作用應(yīng)有協(xié)同或至少相加作用，其不良作用可以相互抵消或至少不重疊或相加。
在我國(guó)和美國(guó)(美國(guó)預(yù)防、檢測(cè)、評(píng)估與治療高血壓全國(guó)聯(lián)合委員會(huì)第七次報(bào)告)高血壓的治療率分別為28.2％和59％，控制率分別僅為8.1％和34％?？梢?jiàn)，高血壓的藥物治療的降壓作用仍不能盡如人意。另外，雖然降低血壓達(dá)到目標(biāo)血壓是關(guān)鍵，但靶器官保護(hù)是高血壓治療的最終目標(biāo)。目前用于治療高血壓的藥物主要著眼于降壓效果，而對(duì)靶器官保護(hù)的效應(yīng)關(guān)注不夠。
鈣拮抗劑用于治療高血壓已經(jīng)有30年的歷史，通過(guò)降低血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的游離鈣濃度，使血管擴(kuò)張，血壓下降，還能抑制血小板聚集，增強(qiáng)紅細(xì)胞在缺氧的情況下的變形能力，對(duì)脂代謝無(wú)不良影響。臨床上有效治療各種程度高血壓，尤其是老年高血壓或合并心絞痛時(shí)。常用鈣拮抗劑分為二氫吡啶類氨氯地平(amlodipine)、非洛地平(felodipine)、伊拉地平(isradipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼索地平(nisoldipine)、尼群地平(nitrendipine)、拉西地平(lacidipine)；和非二氫吡啶類地爾硫卓(diltiazem)、維拉帕米(verapamil)。
鈣通道阻滯劑降壓藥在臨床應(yīng)用上存在一定問(wèn)題，并且主要表現(xiàn)在靶器官保護(hù)方面。在對(duì)6321名患者為期三年的INSIGHT研究顯示，鈣拮抗劑長(zhǎng)效硝苯地平(拜新同)有效率為73％，在心血管病事件死亡率和發(fā)病率上拜新同組并不比利尿劑組好；心衰、癌癥發(fā)病率在拜新同組顯著高于利尿劑組(Mancia G，et al.Hypertension.2003；41(3)431-6)。1995年美國(guó)Furberg認(rèn)為(Furberg CD，et al.Circulation.1995；92(5)1326～31)鈣拮抗劑尤其是短作用的鈣拮抗劑增加冠心病發(fā)病甚至死亡的危險(xiǎn)，也增加癌癥和消化道出血的危險(xiǎn)，鈣拮抗劑對(duì)糖尿病患者和腎臟保護(hù)沒(méi)有益處。2002年P(guān)ahor等(Pahor M，et al.Lancet.2000；356(9246)1949～54)薈萃9項(xiàng)試驗(yàn)，以鈣拮抗劑與其他一線降壓藥物對(duì)總共27743例患者達(dá)到同樣收縮壓、舒張壓控制水平，認(rèn)為急性心肌梗死、心力衰竭及主要心血管事件危險(xiǎn)，鈣拮抗劑明顯高于利尿劑、β-受體阻滯劑、ACEI或可樂(lè)定。
近年研究表明，葉酸缺乏飲食可引發(fā)大鼠高同型半胱氨酸血癥和動(dòng)脈損傷(高奮，等中華心血管病雜志，2002；30(5)312)。血清葉酸水平與冠心病有顯著的負(fù)相關(guān)，增加葉酸攝入量可降低同型半胱氨酸水平，減少心血管病的死亡率，低血清葉酸鹽水平與致死性冠心病危險(xiǎn)性升高有關(guān)(McCully KS.Mil Med，2004；169(4)325～9)。
Hofmann T公開(kāi)鈣拮抗劑及其硝酸鹽用于治療β-受體阻滯劑耐受或禁忌癥的冠心病患者，可減輕心臟癥狀和改善預(yù)后；高同型半胱氨酸水平是冠心病的危險(xiǎn)因素，補(bǔ)充葉酸或復(fù)合B族維生素可以降低同型半胱氨酸水平，但是此研究并不支持降低的同型半胱氨酸水平有益于冠心病患者的預(yù)后。(Hofmann T.Wien Med Wochenschr.2004；154(11-12)266-81)發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服鈣通道阻滯劑降壓藥存在的上述不足，提供一種在降壓療效和靶器官保護(hù)方面優(yōu)于鈣通道阻滯劑，而毒性不增加的藥物組合物。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的鈣通道阻滯劑及其藥用前體、活性代謝產(chǎn)物、或鹽類中的一種；(2)藥用劑量的B族維生素中的一種或幾種；(3)藥劑學(xué)上可接受的載體。
上述的“藥用劑量”是指具有協(xié)同、預(yù)防或治療的藥理作用的量。
上述鈣通道阻滯劑選自氨氯地平(amlodipine)、非洛地平(felodipine)、伊拉地平(isradipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼索地平(nisoldipine)、尼群地平(nitrendipine)、拉西地平(lacidipine)、地爾硫卓(diltiazem)和維拉帕米(verapamil)及其藥用前體、活性代謝產(chǎn)物或鹽類中的一種。
通過(guò)試驗(yàn)研究，鈣通道阻滯劑的含量分別為氨氯地平(2.5～20mg)、非洛地平(2.5～40mg)、伊拉地平(2.5～20mg)、尼卡地平(30～240mg)、硝苯地平(20～120mg)、尼索地平(5～60mg)、尼群地平(10～60mg)、拉西地平(2～8mg)、地爾硫卓(30～240mg)和維拉帕米(40～480mg)，上述物質(zhì)藥用前體、活性代謝產(chǎn)物或鹽類含量與相應(yīng)的上述物質(zhì)含量等同。
這些藥物在本發(fā)明中更佳的含量分別為氨氯地平(2.5～10mg)、非洛地平(2.5～20mg)、伊拉地平(2.5～10mg)、尼卡地平(60～120mg)、硝苯地平(20～60mg)、尼索地平(10～60mg)、尼群地平(20～60mg)、拉西地平(4～6mg)、地爾硫卓(90～420mg)和維拉帕米(80～360mg)，上述物質(zhì)藥用前體、活性代謝產(chǎn)物或鹽類含量與相應(yīng)的上述物質(zhì)含量等同。
所述的B族維生素選自維生素B6、維生素B12、葉酸和甲酰四氫葉酸鈣中的一種或幾種。
所述維生素B6類物質(zhì)包括吡哆醇、吡哆醛、吡多胺、磷酸吡哆醛、磷酸吡多胺及上述物質(zhì)的衍生物和可在體內(nèi)釋放/生成該類化合物的物質(zhì)。
所述維生素B12類物質(zhì)包括鈷胺素、甲鈷胺素、5’脫氧腺苷鈷胺素、羥鈷胺素、氰鈷胺素及其他鈷胺素的衍生物和可在體內(nèi)釋放/生成鈷胺素的物質(zhì)。
所述葉酸類物質(zhì)包括葉酸、甲酰四氫葉酸鈣、L甲基葉酸、葉酸鹽、葉酸或葉酸鹽的活性代謝物和可在體內(nèi)釋放/生成葉酸的物質(zhì)。
B族維生素類物質(zhì)在本發(fā)明中的治療有效量分別為葉酸類物質(zhì)的含量為0.2～10mg，維生素B12類物質(zhì)含量為0.1～2mg，維生素B6類物質(zhì)含量為0.5～50mg。其更佳的治療有效量分別為葉酸類物質(zhì)0.2～5mg，維生素B12類物質(zhì)0.25～2mg，維生素B6類物質(zhì)5～50mg。
本發(fā)明優(yōu)選由以下含量的組分作為活性成分的藥物組合物其中鈣通道阻滯劑選自氨氯地平(2.5～10mg)、尼群地平(20～60mg)、硝苯地平(20～60mg)、非洛地平(2.5～20mg)及其藥用前體、活性代謝產(chǎn)物或鹽類中的一種；B族維生素選自葉酸(0.2～5mg)、甲酰四氫葉酸鈣(0.2～5mg)、維生素B12(0.25～2mg)和維生素B6(5～50mg)中的一種或幾種。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選，所述鈣通道阻滯劑為苯磺酸氨氯地平、馬來(lái)酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平、苯磺酸左旋氨氯地平、馬來(lái)酸左旋氨氯地平、或甲磺酸左旋氨氯地平中的一種；所述B族維生素為葉酸或甲酰四氫葉酸鈣。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選，所述藥用劑量的鈣通道阻滯劑為苯磺酸氨氯地平、馬來(lái)酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平、苯磺酸左旋氨氯地平、馬來(lái)酸左旋氨氯地平、或甲磺酸左旋氨氯地平中的一種，含量為5～10mg；所述藥用劑量的B族維生素為葉酸或甲酰四氫葉酸鈣，含量為0.4～1.6mg。
本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選，所述藥用劑量的鈣通道阻滯劑為苯磺酸氨氯地平、馬來(lái)酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平、苯磺酸左旋氨氯地平、馬來(lái)酸左旋氨氯地平、或甲磺酸左旋氨氯地平中的一種，含量為5mg；所述藥用劑量的B族維生素為葉酸或甲酰四氫葉酸鈣，含量為0.8mg。
本研究發(fā)現(xiàn)，B族維生素單用無(wú)明顯降壓作用，當(dāng)與鈣通道阻滯劑合用時(shí)，能協(xié)同增強(qiáng)鈣通道阻滯劑的降壓作用。B族維生素單用對(duì)由高血壓引起的靶器官損害具有無(wú)明顯保護(hù)作用，與鈣通道阻滯劑合用能協(xié)同增強(qiáng)其對(duì)高血壓引起靶器官損害的保護(hù)作用。因此，本發(fā)明提供了含有藥用劑量的鈣通道阻滯劑、藥用劑量的B族維生素及藥劑學(xué)上可接受的載體的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療及延緩高血壓、高血壓引起的靶器官損害及高血壓相關(guān)疾病的藥物中的用途。
高血壓引起的靶器官損害，包括左室肥厚、心絞痛、心肌梗死、心功能衰竭、良性小動(dòng)脈性腎硬化癥、惡性小動(dòng)脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動(dòng)脈硬化、高血壓眼底病變、腦卒中。所述高血壓密切相關(guān)的疾病，包括動(dòng)脈粥樣硬化、高血脂、肥胖、冠心病、主動(dòng)脈夾層和高血糖、糖耐量異常、代謝綜合征、糖尿病。
進(jìn)一步，在實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)，藥用劑量的鈣通道阻滯劑和藥用劑量的B族維生素組成的藥物組合物對(duì)治療高血壓合并高血脂有令人驚奇的效果本發(fā)明提供的藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，其協(xié)同作用之一在于協(xié)同降血壓作用，其降壓幅度大于兩藥單用的分別降壓幅度之和；其協(xié)同作用之二在于協(xié)同改善由高血壓合并高血脂引起的血管的順應(yīng)性變化；另外協(xié)同作用還表現(xiàn)在協(xié)同預(yù)防或延緩由高血壓合并高血脂引起的靶器官的損害。
因此，本發(fā)明提供了上述藥用劑量的鈣通道阻滯劑和藥用劑量的B族維生素組成的藥物組合物在制備用于降血壓，和/或改變血管的順應(yīng)性，和/或延緩靶器官損害的藥物中的應(yīng)用。
進(jìn)一步，本發(fā)明還提供了上述藥用劑量的鈣通道阻滯劑和藥用劑量的B族維生素組成的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療及延緩高血壓合并高血脂的藥物中的應(yīng)用。
該藥物組合物的劑型包括但不限于普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、顆粒劑、丸劑、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時(shí)/位釋放片、普通膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的pH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、膜劑或貼劑等劑型，應(yīng)該特別指出的是，將含有苯氧酸類藥物和ACEI的藥物組合物制成片劑、膠囊或顆粒劑。
該藥物組合物中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成普通口服制劑，包括普通片劑、普通膠囊、顆粒劑等，制成片劑時(shí)所述藥學(xué)上可接受的載體包括有助于將活性化合物配制成藥用制劑的賦形劑和輔藥，如淀粉、微晶纖維素、無(wú)機(jī)鹽類、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，屬于本領(lǐng)域常識(shí)。
本發(fā)明制劑可以同時(shí)使用或以任何順序順次使用，最佳的以同時(shí)使用。上述同時(shí)使用中包括以固定組合和非固定組合，最佳的以固定組合使用。
本發(fā)明制劑可以每天服用一次或兩次，或者以緩釋或控釋方式每天或隔天或間隔數(shù)日服用一次。其中優(yōu)選每日服用一次。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”是指藥物組合物，或者是指含有兩個(gè)獨(dú)立藥物的藥盒。當(dāng)“藥物組合物”是指含有兩個(gè)獨(dú)立藥物的藥盒時(shí)，上述“組合藥盒”是一種盒狀容器，內(nèi)置多種劑量形式的藥物組合，及其服用說(shuō)明書?！敖M合藥盒”更適用于個(gè)體化用藥。第一個(gè)藥物為含有鈣通道阻滯劑中的一種藥物或其藥用前體、活性代謝產(chǎn)物、或鹽類作為唯一的活性成分，第二個(gè)藥物中含有B族維生素中的一種或幾種藥物作為的活性成分。該藥盒中的兩個(gè)獨(dú)立的藥物可以伴隨給藥，也可以在同一種藥物制劑中或者在不同的藥物制劑中按順序給藥。如果是按順序給藥，則第二個(gè)藥物給藥的延遲不應(yīng)當(dāng)喪失了活性成分聯(lián)合應(yīng)用的有效作用帶來(lái)的好處。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，其協(xié)同作用在于協(xié)同降血壓、協(xié)同改善血管的順應(yīng)性，及協(xié)同預(yù)防或延緩靶器官的損害。因此，本發(fā)明提供了含有藥用劑量的鈣通道阻滯劑、藥用劑量的B族維生素及藥劑學(xué)上可接受的載體的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療及延緩高血壓、高血壓引起的靶器官損害及高血壓相關(guān)疾病的藥物中的用途；進(jìn)一步，本發(fā)明還提供了上述上述藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療及延緩高血壓合并高血脂的藥物中的應(yīng)用。通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施，提供給患者這種特定用途的藥物組合物可以提高患者依從性，使患者服藥方便，降低醫(yī)療費(fèi)用，具有較好市場(chǎng)前景。
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，藥理作用的實(shí)驗(yàn)支持詳見(jiàn)以下具體實(shí)施方式
。


圖1為氨氯地平+葉酸灌胃給藥連續(xù)26周對(duì)腎性高血壓大鼠的降壓作用圖。
圖2為不同鈣拮抗劑+葉酸連續(xù)灌胃給藥26W對(duì)腎性高血壓伴高血脂大鼠的降壓幅度(mmHg)的影響圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 復(fù)方氨氯地平葉酸片制備配方苯磺酸氨氯地平 5g葉酸0.4g乳糖50g微晶纖維素 50g淀粉10g羧甲基淀粉鈉30g10％聚維酮乙醇溶液 適量硬脂酸鎂適量制備方法將5g苯磺酸氨氯地平、0.4g葉酸、50g乳糖、50g維晶纖維素、10g淀粉粉碎，過(guò)120目篩，按照等量遞加法混合均勻，用適量的10％聚維酮乙醇溶液制成軟材，制粒、干燥、整粒，將含水量為3％左右的顆粒與與適量的硬脂酸鎂混合均勻，按常規(guī)方法壓制成1000片即得。
實(shí)施例2 復(fù)方氨氯地平葉酸片制備配方苯磺酸氨氯地平 5g葉酸0.8g乳糖50g微晶纖維素 50g淀粉10g羧甲基淀粉鈉30g10％聚維酮乙醇溶液 適量硬脂酸鎂適量制備方法同實(shí)施例1，制成每片含氨氯地平5mg、葉酸0.8mg。
實(shí)施例3 復(fù)方氨氯地平葉酸片制備配方苯磺酸氨氯地平 5g葉酸5g乳糖50g微晶纖維素 50g
淀粉10g羧甲基淀粉鈉30g10％聚維酮乙醇溶液 適量硬脂酸鎂適量制備方法同實(shí)施例1，制成每片含苯磺酸氨氯地平5mg、葉酸5mg。
實(shí)施例4 復(fù)方左旋氨氯地平葉酸片制備配方苯磺酸左旋氨氯地平 10g葉酸1g微晶纖維素 20g淀粉80g羧甲基淀粉鈉40聚維酮水溶液適量硬脂酸鎂適量制備方法與實(shí)施例1相同，制成每片含有左旋氨氯地平10mg，葉酸1mg，其質(zhì)量比為10∶1。
實(shí)施例5 復(fù)方尼群地平葉酸片制備配方尼群地平20g葉酸0.4g乳糖50g微晶纖維素 50g淀粉10g羧甲基淀粉鈉30g10％聚維酮乙醇溶液 適量硬脂酸鎂適量制備方法同實(shí)施例1。每片含尼群地平20mg，葉酸0.4mg實(shí)施例6 復(fù)方非洛地平葉酸片制備配方非洛地平5g葉酸0.8g乳糖50g微晶纖維素 50g淀粉10g
羧甲基淀粉鈉 30g10％聚維酮乙醇溶液適量硬脂酸鎂 適量制備方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例7 復(fù)方尼卡地平葉酸片制備配方尼卡地平 60g葉酸 5g乳糖 50g微晶纖維素50g淀粉 10g羧甲基淀粉鈉 30g10％聚維酮乙醇溶液適量硬脂酸鎂 適量制備方法同實(shí)施例1，每片含尼卡地平60mg，葉酸5mg。
實(shí)施例8 復(fù)方甲磺酸氨氯地平B6片制備配方甲磺酸氨氯地平 5g維生素B6 5g直壓型微晶纖維素 60g預(yù)膠化淀粉 40g聚維酮 20硬脂酸鎂 適量制備方法與實(shí)施例1相同，制成每片含有甲磺酸氨氯地平5mg，維生素B65mg。
實(shí)施例9 復(fù)方氨氯地平B12膠囊制備配方苯磺酸氨氯地平 5g維生素B12 1.0g微晶纖維素 15g淀粉 35g羧甲基淀粉鈉 20gPVP水溶液 適量制備方法將5g苯磺酸氨氯地平、維生素B12 1.0g、15g維晶纖維素、35g淀粉粉碎、過(guò)篩后混合均勻，與適量的聚維酮水溶液混合制成軟材后制粒、干燥、加入約1％的硬脂酸鎂混合均勻，按常規(guī)方法裝膠囊1000粒即得。
實(shí)施例10 復(fù)方硝苯地平葉酸片制備配方硝苯地平30.0g葉酸0.4g乳糖50g微晶纖維素 50g淀粉10g羧甲基淀粉鈉30g10％聚維酮乙醇溶液 適量硬脂酸鎂適量制備方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例11 復(fù)方硝苯地平葉酸滲透泵控釋片膠囊制備葉酸普通片層葉酸0.8g淀粉20g羧甲基淀粉鈉20g磷酸氫鈣40g硬脂酸鎂1％硝苯地平滲透泵控釋片1、片芯組成(1)含藥層硝苯地平30g聚氧乙烯90g滑石粉 適量硬脂酸鎂適量10％聚維酮(K30) 適量(2)助推層聚氧乙烯50g羥丙甲纖維素5g氯化鈉 20g聚維酮(K30) 20g
氧化鐵紅適量硬脂酸鎂適量10％聚維酮(K30) 適量制成1000片2、半透膜包衣液組成(每1000片用)醋酸纖維素 22.5g聚乙二醇(PEG4000) 1.0g丙酮水805ml3、防潮包衣液組成羥丙甲纖維素20g1，2-丙二醇 10ml滑石粉 10g二氧化鈦10g乙醇水500ml制備工藝1.含藥層將過(guò)60目篩的硝苯地平、聚氧乙烯，按處方量混合均勻，加入10％聚維酮溶液制軟材，用20目篩制粒，于40℃干燥12小時(shí)，用18目篩整粒，然后加入硬脂酸鎂混合均勻，得顆粒A，測(cè)定顆粒A的含量后，備用。
2.助推層將過(guò)60目篩的聚氧乙烯、羥丙基甲基纖維素、氯化鈉、聚維酮K30和氧化鐵紅按處方量混合均勻，加入10％聚維酮溶液制軟材，用20目篩制粒，于40℃干燥12小時(shí)，用18目篩整粒，然后加入處方量的硬脂酸鎂混合均勻，得顆粒B，備用。
3.壓片與包衣用上述A、B顆粒壓制雙層片心后，用半透膜包衣液進(jìn)行包衣，包衣后的產(chǎn)品在40℃下干燥48小時(shí)，然后在片劑的淺黃色的含藥層表面打成0.8mm的小孔，最后用防潮包衣液進(jìn)行包衣，再于40℃下干燥12小時(shí)，質(zhì)檢，包裝，即得硝苯地平控釋片。
4、將硝苯地平控釋片與葉酸普通片裝入膠囊即得。
實(shí)施例12.復(fù)方硝苯地平葉酸緩釋膠囊制備1)含藥量硝苯地平30g葉酸0.8g2)制備空白丸芯稱取微晶纖維素(CP2000)500g置離心包衣造粒機(jī)內(nèi)，以蒸餾水為粘合劑，按下列參數(shù)開(kāi)動(dòng)離心包衣造粒機(jī)主機(jī)轉(zhuǎn)速200r·min-1，鼓風(fēng)流量400L·min-1，噴氣壓力0.1～0.3MPa，噴氣流量15～20L·min-1，噴漿流量隨造粒時(shí)間而變化，調(diào)節(jié)噴漿泵轉(zhuǎn)速為50r·min-1，持續(xù)5min，再減小噴漿流量至20r·min-1，直至物料呈絮狀流動(dòng)狀態(tài)；然后為供粉階段，控制粉漿比，維持物料呈絮狀流動(dòng)狀態(tài)，此過(guò)程進(jìn)行至起模長(zhǎng)大成目標(biāo)丸核，停止供粉，將噴漿泵轉(zhuǎn)速減少至2r·min-1，拋光4min。開(kāi)啟出料口，取出成品，室溫晾至近干，再于60℃烘干2h，篩分選取目標(biāo)空白丸核。
3)制備含藥丸芯用離心造粒法制備含藥微丸，以500g MCC空白微丸為母核，蒸餾水為粘合劑，采用粉末層積法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。處方中以MCC(CP2000)為稀釋劑，SDS為表面活性劑，藥物占混合粉末總量的80％。固定主機(jī)轉(zhuǎn)速200r·min-1，噴氣流量～20L·min-1，噴氣壓力0.1～0.3MPa，鼓風(fēng)流量400L·min-1，噴漿泵轉(zhuǎn)速16r·min-1，供粉速度8r·min-1。供粉完畢后使微丸在鍋中拋光4min，取出成品，自然陰干，再于40℃烘干2h，篩分即得。
4)含藥丸芯的包衣包衣配方1為含藥丸芯 20gNE30D 15g滑石粉2gSDS 0.06g水12ml包衣液的配制將滑石粉及SDS加入水中，攪拌10分鐘使均勻，將EudragitNE30D慢慢倒入上述混懸液中，攪勻。經(jīng)80目過(guò)篩。在包衣過(guò)程中持續(xù)攪拌。按此包衣液處方進(jìn)行包衣，包衣工藝條件如下鼓風(fēng)流量通過(guò)鼓風(fēng)機(jī)選擇頻率為40Hz，噴氣壓力0.1Mpa，將恒流泵轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)為0.8～1.2ml·min-1，包衣溫度約為25℃。
包衣配方2為含藥丸芯 20gRS30D 6g滑石粉 0.8gPEG60000.1gTEC0.3gSDS0.01g水 10ml包衣液的配制將PEG6000加入水中(適當(dāng)加熱使溶)，然后加入滑石粉及其他添加劑，攪拌10分鐘，將EudragitRS30D慢慢倒入上述混懸液中，攪勻。經(jīng)80目過(guò)篩。在包衣過(guò)程中持續(xù)攪拌。
5)按照處方量的藥物，在膠囊中裝入硝苯地平藥物粉末和葉酸微丸，即得。
實(shí)施例13.氨氯地平+B族維生素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的協(xié)同降壓和靶器官保護(hù)作用自發(fā)性高血壓大鼠購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，8周齡后大鼠血壓升高，13周齡后顯著升高，測(cè)定大鼠血壓1周(第1、6天)，取血壓穩(wěn)定的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。高血壓大鼠分組和給藥劑量見(jiàn)表1。另設(shè)正常對(duì)照組(n＝12)。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)13周。分別測(cè)定給藥前、給藥后不同時(shí)間大鼠血壓(用179型非損傷性小動(dòng)物血壓測(cè)定儀，美國(guó)IITC Life Science Inc.生產(chǎn))，末次給藥后分別測(cè)定24h尿α1微球蛋白。
結(jié)果24小時(shí)尿α1微球蛋白是反映早期腎小管損傷的標(biāo)記物。葉酸、維生素B6、維生素B12單獨(dú)應(yīng)用對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠無(wú)明顯降壓作用和靶器官保護(hù)作用，氨氯地平0.3mg/kg、0.5mg/kg對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠有顯著的降壓作用和靶器官保護(hù)作用，葉酸(0.04mg/kg)、維生素B6(1.0mg/kg)、維生素B12(0.1mg/kg)與氨氯地平(0.3mg/kg)合用后，對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用和靶器官保護(hù)作用顯著增強(qiáng)，其作用甚至超過(guò)0.5mg/kg氨氯地平組，表明氨氯地平與B族維生素合用對(duì)高血壓大鼠有顯著的協(xié)同保護(hù)作用。見(jiàn)表1。
表1 苯磺酸氨氯地平+B族維生素灌胃給藥連續(xù)13周對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的協(xié)同降壓和靶器官保護(hù)作用(x±s)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與氨氯地平0.3mg/kg組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01
實(shí)施例14.尼群地平+B族維生素對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠的協(xié)同降壓和靶器官保護(hù)作用用0.2mm銀夾狹窄Wistar大鼠左腎動(dòng)脈，8～10周后大鼠血壓升高超過(guò)150mmHg以上為高血壓動(dòng)脈模型。高血壓大鼠隨機(jī)分組與給藥見(jiàn)表2，另設(shè)正常對(duì)照組(n＝12)。灌胃給藥，連續(xù)13周。分別測(cè)定給藥前和給藥后不同時(shí)間血壓(用179型非損傷性小動(dòng)物血壓測(cè)定儀，美國(guó)IITC Life Science Inc.生產(chǎn))。末次給藥后分別測(cè)定24h尿α1微球蛋白。
結(jié)果24小時(shí)尿α1微球蛋白是反映早期腎小管損傷的標(biāo)記物。葉酸、維生素B6、維生素B12單獨(dú)應(yīng)用對(duì)二腎一夾高血壓大鼠無(wú)明顯降壓作用和靶器官保護(hù)作用，尼群地平2.0mg/kg、3.0mg/kg對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠有顯著的降壓作用和靶器官保護(hù)作用，葉酸(0.04mg/kg)、維生素B6(1.0mg/kg)、維生素B12(0.1mg/kg)與尼群地平(2.0mg/kg)合用后，對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠的降壓作用和靶器官保護(hù)作用顯著增強(qiáng)，其作用與3.0mg/kg尼群地平組相近，表明尼群地平與B族維生素合用對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠有顯著的協(xié)同保護(hù)作用。見(jiàn)表2。
表2 尼群地平+B族維生素灌胃給藥連續(xù)13周對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠的協(xié)同降壓和靶器官保護(hù)作用(x±s)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與尼群地平2.0mg/kg組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01實(shí)施例15.硝苯地平+葉酸對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的協(xié)同降壓作用自發(fā)性高血壓大鼠購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，8周齡后大鼠血壓升高，10周齡后顯著升高，測(cè)定大鼠血壓1周(第1、6天)，取血壓穩(wěn)定的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。高血壓大鼠分組和給藥劑量見(jiàn)表3。另設(shè)正常對(duì)照組(n＝12)。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)2周。分別測(cè)定給藥前、末次給藥后大鼠血壓(用179型非損傷性小動(dòng)物血壓測(cè)定儀，美國(guó)IITC Life Science Inc.生產(chǎn))。
結(jié)果葉酸單獨(dú)應(yīng)用對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠無(wú)明顯降壓作用，硝苯地平1.0mg/kg、1.5mg/kg對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠有顯著的降壓作用，葉酸(0.08mg/kg)與硝苯地平(1.0mg/kg)合用后，對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用顯著增強(qiáng)，其作用與1.5mg/kg硝苯地平相近，表明硝苯地平與葉酸合用對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠有顯著的協(xié)同降壓作用。見(jiàn)表3。
表3 硝苯地平+葉酸灌胃給藥連續(xù)2周對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用(x±s)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與硝苯地平1.0mg/kg組比較▲P＜0.05，實(shí)施例16.非洛地平+B族維生素對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠的靶器官保護(hù)作用用0.2mm銀夾狹窄Wistar大鼠左腎動(dòng)脈，8～10周后大鼠血壓升高超過(guò)150mmHg以上為高血壓動(dòng)脈模型。高血壓大鼠隨機(jī)分組與給藥如下正常組(等容量)、模型組(等容量)、葉酸(0.04mg/kg)、維生素B6(1mg/kg)、維生素B12(0.1mg/kg)、非洛地平(0.5mg/kg)、非洛地平(1.0mg/kg)、非洛地平+葉酸(0.5+0.04mg/kg)、非洛地平+VitB6(0.5+1.0mg/kg)、非洛地平+VitB12(0.5+0.1mg/kg)。灌胃給藥，連續(xù)13周。分別測(cè)定給藥前和給藥后不同時(shí)間血壓。末次給藥后分別測(cè)定24h尿α1微球蛋白。
結(jié)果葉酸、維生素B6、維生素B12單獨(dú)應(yīng)用對(duì)二腎一夾高血壓大鼠無(wú)明顯降壓作用和靶器官保護(hù)作用，非洛地平0.5mg/kg、1.0mg/kg對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠有顯著的降壓作用和靶器官保護(hù)作用，葉酸(0.04mg/kg)、維生素B6(1.0mg/kg)、維生素B12(0.1mg/kg)與非洛地平(0.5mg/kg)合用后，對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠的降壓作用和靶器官保護(hù)作用顯著增強(qiáng)，其作用與1.0mg/kg非洛地平組相近，表明非洛地平與B族維生素合用對(duì)二腎一夾型高血壓大鼠有顯著的協(xié)同保護(hù)作用。
實(shí)施例17.馬來(lái)酸左旋氨氯地平與葉酸配伍的協(xié)同靶器官保護(hù)作用用0.2mm銀夾狹窄Wistar大鼠左腎動(dòng)脈，8～10周后大鼠血壓升高超過(guò)150mmHg以上為高血壓動(dòng)脈模型。高血壓大鼠隨機(jī)分組與給藥劑量見(jiàn)表4，另設(shè)正常對(duì)照組(n＝12)。灌胃給藥，連續(xù)13周。末次給藥后分別測(cè)定大鼠左室舒張期末壓(LVEDP)、等容舒張期時(shí)間常數(shù)(T)、室重指數(shù)(左心室mg/體重g)。
結(jié)果在改善心功能方面，馬來(lái)酸左旋氨氯地平(0.5mg/kg)組的LVEDP(反映心臟前負(fù)荷)、T值(反映心室等容舒張功能)均低于模型組。葉酸單用對(duì)腎性高血壓大鼠心臟的舒張功能、左心室肥厚無(wú)明顯影響。葉酸與馬來(lái)酸左旋氨氯地平合用能顯著增強(qiáng)腎性高血壓大鼠的心臟舒張功能，但對(duì)左心室肥厚無(wú)明顯影響。見(jiàn)表4。
表4 馬來(lái)酸左旋氨氯地平+葉酸灌胃給藥連續(xù)13周對(duì)高血壓大鼠靶器官保護(hù)作用(x±s，n＝12)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與馬來(lái)酸左旋氨氯地平0.5mg/kg組比較▲P＜0.05實(shí)施例18 氨氯地平+葉酸對(duì)高血壓大鼠的協(xié)同降壓作用和協(xié)同靶器官保護(hù)作用1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物 Wistar大鼠，雌雄各半，150～180g，雌雄各半，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)，合格證為河南省醫(yī)動(dòng)字第02001號(hào)；動(dòng)物飼料購(gòu)自南京安立默科技有限公司。
1.2受試藥物 苯磺酸氨氯地平，為類白色粉末，含量為99.3％，購(gòu)自浙江新賽科藥業(yè)有限公司，批號(hào)040901，臨用前用0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液配制；葉酸，為橙黃色結(jié)晶性粉末，含量為97.4％，購(gòu)自江蘇林海藥業(yè)有限公司制造分公司，批號(hào)021224，臨用前用0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液配制。
1.3主要試劑 尿蛋白試劑盒、肌酐試劑盒、尿素氮試劑盒購(gòu)自上海榮盛生物技術(shù)有限公司；NO檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物技術(shù)研究所；α1微球蛋白試劑盒，購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所。
1.4主要儀器 179型非損傷性小動(dòng)物血壓測(cè)定儀，美國(guó)IITC Life Science Inc.生產(chǎn)。
RM6240BD型多導(dǎo)生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)，成都儀器廠；GC-911型r放免計(jì)數(shù)器，中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司；TU-1901型雙光束紫外分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司。
2方法2.1腎性高血壓動(dòng)物模型制備水合氯醛(320mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，沿腹正中線打開(kāi)腹腔，分離左腎動(dòng)脈，0.2mm銀夾狹窄Wistar大鼠左腎動(dòng)脈，術(shù)后8～10周，取收縮壓≥140mmHg者大鼠為高血壓大鼠。
2.2分組及給藥取腎性高血壓大鼠98只，均分7組，每組14只。設(shè)高血壓組，氨氯地平(0.5mg/kg)組、氨氯地平+葉酸(0.5+0.04mg/kg)組、氨氯地平+葉酸(0.5+0.08mg/kg)組、氨氯地平+葉酸(0.5+0.16mg/kg)組、氨氯地平+葉酸(0.5+0.5mg/kg)組、葉酸(0.08mg/kg)組，另取14只正常大鼠作為正常對(duì)照組。每日灌胃給藥一次，容量1ml/100g，正常對(duì)照組、高血壓組給予等容量蒸餾水。每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)給藥6個(gè)月(共26周)。
2.3檢測(cè)指標(biāo)2.3.1血壓值 采用尾套法，分別測(cè)定給藥前、給藥第1、5、9、13、18、22、26周大鼠血壓，每次測(cè)定3次，取平均值。
2.3.2內(nèi)皮系統(tǒng)功能 26周末，取血按試劑盒說(shuō)明書，測(cè)定血漿一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)水平。
2.3.3腎功能 26周末，收集尿液，測(cè)24h尿肌酐(Scr)、尿蛋白、24h尿α1微球蛋白；取血，測(cè)定血肌酐、血尿素氮(BUN)，血清計(jì)算肌酐清除率(Ccr)。
2.3.4血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)末次給藥前，20％烏拉坦(1g/kg ip)麻醉，仰位固定，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，插入一充滿肝素生理鹽水導(dǎo)管至左心室，通過(guò)壓力換能器，連接RM6240BD型多導(dǎo)生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)，穩(wěn)定10min，ig給藥，分別記錄末次給藥前、藥后3小時(shí)左室峰壓平均值(LVSP)、左室最大變化速率(±dp/dtmax)、左室舒張期末壓(LVEDP)。
2.3.5病理檢查取心、腎、脾、腦等臟器，10％福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡檢查。
2.3.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析分別計(jì)算各組均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)，給藥組與對(duì)照組進(jìn)行t檢驗(yàn)。
3.結(jié)果3.1氨氯地平+葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠血壓的影響 與正常組比較，模型組大鼠血壓顯著升高，葉酸組血壓輕度降低，其中第5、9周有顯著性差異。氨氯地平(0.5mg/kg)組、氨氯地平(0.5mg/kg)+葉酸(0.04～0.5mg/kg)組大鼠血壓顯著降低，與模型組比較有顯著性差異。與氨氯地平(0.5mg/kg)組比較，氨氯地平(0.5mg/kg)+葉酸(0.04～0.5mg/kg)組血壓進(jìn)一步降低，其中第9、13、18、22、26周時(shí)點(diǎn)比較有顯著性差異。表明葉酸單用有輕度降壓作用，氨氯地平灌胃能顯著降低腎性高血壓大鼠血壓，葉酸與氨氯地平長(zhǎng)期合用，對(duì)腎性高血壓大鼠的降壓作用進(jìn)一步增強(qiáng)。見(jiàn)圖1。
3.2氨氯地平+葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠血漿NO、ET水平的影響與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠血漿NO水平顯著降低，ET水平顯著升高。與高血壓組比較，葉酸組、氨氯地平組大鼠血漿NO升高、ET降低。氨氯地平(0.5mg/kg)+不同劑量葉酸(0.04～0.5mg/kg)組大鼠血漿NO進(jìn)一步升高，ET進(jìn)一步降低。表明腎性高血壓大鼠出現(xiàn)顯著的內(nèi)皮細(xì)胞功能降低，氨氯地平、葉酸對(duì)大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能具有保護(hù)作用，兩者合用對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見(jiàn)表5。
表5 氨氯地平+葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠血漿NO、ET水平的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與氨氯地平組比較，★P＜0.053.3氨氯地平+葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠腎功能的影響 與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠尿24hα1-微球蛋白、尿蛋白顯著升高，Ccr明顯降低。氨氯地平組大鼠尿24hα1-微球蛋白、尿蛋白降低，Ccr升高，葉酸單用對(duì)腎性高血壓大鼠腎功能無(wú)明顯影響。氨氯地平(0.5mg/kg)+不同劑量葉酸(0.04～0.5mg/kg)組大鼠尿24hα1-微球蛋白、尿蛋白進(jìn)一步降低，Ccr進(jìn)一步升高，與氨氯地平組比較有顯著性差異。表明腎性高血壓大鼠出現(xiàn)早期腎功能損害，氨氯地平對(duì)腎性高血壓大鼠的腎功能損害具有保護(hù)作用，葉酸與氨氯地平合用，對(duì)腎性高血壓大鼠的腎功能保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見(jiàn)表6～8。
表6 氨氯地平+葉酸連續(xù)給藥26周對(duì)腎性高血壓大鼠尿α1-微球蛋白的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲▲P＜0.01；與氨氯地平組比較，★P＜0.05，★★P＜0.05表7 氨氯地平+葉酸連續(xù)給藥26周對(duì)腎性高血壓大鼠尿白蛋白的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與氨氯地平組比較，★P＜0.05，★★P＜0.053.4氨氯地平+葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響與正常組大鼠比較，高血壓組大鼠LVSP、LVEDP顯著升高，±dp/dtmax下降。氨氯地平組組大鼠LVSP、LVEDP顯著降低，±dp/dtmax升高；葉酸單用對(duì)腎性高血壓大鼠血流動(dòng)力學(xué)無(wú)明顯影響。氨氯地平(0.5mg/kg)+不同劑量葉酸(0.04～0.5mg/kg)組大鼠LVSP、LVEDP進(jìn)一步降低，±dp/dtmax進(jìn)一步升高，與氨氯地平組比較有顯著性差異。表明腎性高血壓大鼠心臟前負(fù)荷、后負(fù)荷增加，心臟收縮、舒張功能障礙，氨氯地平對(duì)腎性高血壓大鼠的心功能損害具有保護(hù)作用，葉酸與氨氯地平合用，對(duì)腎性高血壓大鼠的心功能保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見(jiàn)表9。
表8 氨氯地平+葉酸連續(xù)給藥26周對(duì)腎性高血壓大鼠Scr、BUN、Ccr的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲▲P＜0.01；與氨氯地平組比較，★P＜0.05表9 氨氯地平+葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響(X±SD，n＝8～11)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲▲P＜0.01；與氨氯地平組比較，★P＜0.05，★★P＜0.013.5組織病理學(xué)檢查 正常組大鼠心、腎、腦、脾均未見(jiàn)明顯改變。高血壓組大鼠心肌細(xì)胞肥大，變粗，變長(zhǎng)，核大而深染，部分心肌細(xì)胞有細(xì)胞水腫(表現(xiàn)為濁腫或水樣變性)，少數(shù)動(dòng)物冠狀動(dòng)脈硬化；受夾的腎臟大部分腎小球纖維化，玻璃樣變或毛細(xì)血管球呈分葉狀，球囊壁層上皮增生，相應(yīng)腎小管萎縮，甚至消失；部分腎小球代償性肥大，腎小管擴(kuò)張；細(xì)動(dòng)脈及小動(dòng)脈硬化，間質(zhì)纖維組織增生，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；另一側(cè)腎病變不明顯，腎小球略肥大；脾臟中央動(dòng)脈玻璃樣變；部分動(dòng)物的腦小動(dòng)脈硬化，少數(shù)見(jiàn)有微血管增生。給藥組大鼠上述病變均有不同程度減輕。見(jiàn)表10～11。結(jié)果顯示單用葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠的靶器官損害有輕度保護(hù)作用，氨氯地平對(duì)高血壓大鼠的靶器官損害有顯著的保護(hù)作用，葉酸與氨氯地平合用對(duì)腎性高血壓大鼠的靶器官保護(hù)作用進(jìn)一步增強(qiáng)。
表10 氨氯地平+葉酸對(duì)腎性高血壓大鼠的靶器官保護(hù)作用(鏡下改變)


表11 氨氯地平+葉酸連續(xù)給藥26周對(duì)腎性高血壓大鼠的靶器官保護(hù)作用

實(shí)施例19 不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)高血壓伴高血脂大鼠的降壓作用和靶器官保護(hù)作用1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物 同實(shí)施例18。
1.2受試藥物 左旋苯磺酸氨氯地平片，硝苯地平片，尼群地平片，非洛地平片，地爾硫卓片，葉酸片，均購(gòu)自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，臨用前用0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液配制。
1.3主要試劑 膽鹽3號(hào)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；膽固醇，SeebioBiotechnology，inc生產(chǎn)；丙基硫氧嘧啶，上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；二磷酸腺苷(ADP)，美國(guó)AMRESCO公司生產(chǎn)。余同實(shí)施例18。
1.4主要儀器 MPG-3E多能雙通道血液凝聚儀，上海斯隆醫(yī)電設(shè)備有限公司生產(chǎn)。其他同實(shí)施例18。
2方法2.1腎性高血壓伴高血脂動(dòng)物模型的制備 腎性高血壓大鼠的制備方法同實(shí)施例18。給高血壓大鼠飼喂高脂飼料(配方為膽固醇0.5％，丙基硫氧嘧啶0.1％，膽酸鈉0.2％，豬油5.0％，基礎(chǔ)飼料94.2％)，正常對(duì)照組大鼠飼喂普通飼料。4周后，測(cè)定大鼠血壓(收縮壓SBP)，采血測(cè)血清膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。
2.2分組及給藥 取高血壓伴高血脂大鼠120只，根據(jù)血壓和血脂水平(SBP、TG、TC)將大鼠分為模型組均分6組，每組20只，分別為模型組，氨氯地平+葉酸(0.5+0.08mg/kg)組、硝苯地平+葉酸(3+0.08mg/kg)組、尼群地平+葉酸(3+0.08mg/kg)組、非洛地平+葉酸(1+0.08mg/kg)、地爾硫卓+葉酸(6+0.08mg/kg)組，另取20只正常大鼠作為正常對(duì)照組。高血壓大鼠繼續(xù)飼喂高脂飼料，正常組大鼠飼喂普通飼料。正常對(duì)照組、模型組給予等容量0.5％CMC溶液，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)給藥6個(gè)月(共26周)。
2.3檢測(cè)指標(biāo)2.3.1血壓值 采用尾套法，分別測(cè)定給藥前、給藥第5、9、13、18、22、26周給藥后16～24小時(shí)大鼠血壓，每次測(cè)定3次，取平均值。
2.3.2血清脂質(zhì)過(guò)氧化和血小板聚集功能 6個(gè)月后取血測(cè)定血小板聚集率，血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。
2.3.3內(nèi)皮系統(tǒng)功能、腎功能、血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、病理檢查同實(shí)施例18。
2.3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 同實(shí)施例18。
3.結(jié)果3.1不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)高血壓伴高血脂大鼠血壓的影響 與正常組比較，模型組大鼠血壓顯著升高，不同鈣拮抗劑+葉酸均可以降低高血脂伴高血壓大鼠的血壓，而氨氯地平+葉酸組的降壓作用顯著強(qiáng)于其他鈣拮抗劑+葉酸組。見(jiàn)圖2。
3.2不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)高血脂伴高血壓大鼠血漿NO、ET水平的影響與正常組大鼠比較，模型組大鼠血漿NO水平顯著降低，ET水平顯著升高，與模型組比較，不同鈣拮抗劑+葉酸組大鼠血漿NO升高、ET降低，其中氨氯地平+葉酸組作用強(qiáng)于其他鈣拮抗劑+葉酸組。見(jiàn)表12。
表12 不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)高血壓伴高血脂大鼠血漿NO、ET水平的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+葉酸組比較，★P＜0.05★★P＜0.013.3不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)高血壓伴高血脂大鼠血清脂質(zhì)過(guò)氧化和血小板聚集功能的影響 與正常組大鼠比較，模型組大鼠血清SOD降低、MDA升高，血小板聚集率增加。與模型組比較，不同鈣拮抗劑+葉酸組大鼠血清MDA降低，SOD升高，血小板聚集率降低，其中氨氯地平+葉酸組的效果優(yōu)于其他鈣拮抗劑+葉酸組。見(jiàn)表13。
表13 不同鈣拮抗劑+葉酸連續(xù)灌胃6個(gè)月對(duì)高血壓伴高血脂大鼠血清脂質(zhì)過(guò)氧化和血小板聚集功能的影響(x±s)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+葉酸組比較，★P＜0.05★★P＜0.013.4不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)高血壓伴高血脂大鼠腎功能的影響 與正常組大鼠比較，模型組大鼠尿24hα1-微球蛋白、尿蛋白顯著升高，Ccr明顯降低。與模型組比較，不同鈣拮抗劑+葉酸均可顯著降低大鼠尿24hα1-微球蛋白、尿蛋白，升高Ccr，其中氨氯地平+葉酸組作用最顯著。見(jiàn)表14。
3.5不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)腎性高血壓伴高血脂大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響 與正常組大鼠比較，模型組大鼠LVSP、LVEDP顯著升高，±dp/dtmax下降，表明腎性高血壓伴高血脂大鼠心臟前負(fù)荷、后負(fù)荷增加，心臟收縮、舒張功能障礙。與模型組比較，不同鈣拮抗劑+葉酸組大鼠LVSP、LVEDP顯著降低，±dp/dtmax升高，其中氨氯地平+葉酸組作用最顯著。見(jiàn)表15。
表14 不同鈣拮抗劑+葉酸連續(xù)給藥26周對(duì)高血壓伴高血脂大鼠腎功能的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+葉酸組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01表15 不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)腎性高血壓伴高血脂大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響(X±SD，n＝10～13)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+葉酸組比較，★P＜0.05，★★P＜0.013.5組織病理學(xué)檢查 正常組大鼠心、腎、腦、脾均未見(jiàn)明顯改變。模型組大鼠心肌細(xì)胞肥大，變粗，變長(zhǎng)，核大而深染，部分心肌細(xì)胞有細(xì)胞水腫，少數(shù)動(dòng)物冠狀動(dòng)脈硬化；受夾的腎臟大部分腎小球纖維化，玻璃樣變或毛細(xì)血管球呈分葉狀，球囊壁層上皮增生，相應(yīng)腎小管萎縮，甚至消失；部分腎小球代償性肥大，腎小管擴(kuò)張；細(xì)動(dòng)脈及小動(dòng)脈硬化，間質(zhì)纖維組織增生，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；另一側(cè)腎病變不明顯，腎小球略肥大；脾臟中央動(dòng)脈玻璃樣變；部分動(dòng)物的腦小動(dòng)脈硬化，少數(shù)見(jiàn)有微血管增生。不同鈣拮抗劑+葉酸組大鼠上述病變均有不同程度減輕，以氨氯地平+葉酸組作用最強(qiáng)。見(jiàn)表16。
表16 不同鈣拮抗劑+葉酸對(duì)高血壓伴高血脂大鼠的靶器官保護(hù)作用

權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的鈣通道阻滯劑及其藥用前體、活性代謝產(chǎn)物、或鹽類中的一種；(2)藥用劑量的B族維生素中的一種或幾種；(3)藥劑學(xué)上可接受的載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述鈣通道阻滯劑選自氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、硝苯地平、尼索地平、尼群地平、拉西地平、地爾硫卓、維拉帕米或其藥用前體、活性代謝產(chǎn)物或鹽類中的一種；所述的B族維生素選自維生素B6、維生素B12、葉酸和甲酰四氫葉酸鈣中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述藥用劑量的鈣通道阻滯劑選自2.5～10mg氨氯地平、20～60mg尼群地平、20～60mg硝苯地平和2.5～20mg非洛地平中的一種；所述藥用劑量的B族維生素選自0.2～5mg葉酸、0.2～5mg甲酰四氫葉酸鈣、5～50mg維生素B6和0.25～2mg維生素B12中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述藥用劑量的鈣通道阻滯劑為苯磺酸氨氯地平、馬來(lái)酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平、苯磺酸左旋氨氯地平、馬來(lái)酸左旋氨氯地平、或甲磺酸左旋氨氯地平中的一種，含量為5～10mg；所述藥用劑量的B族維生素為葉酸或甲酰四氫葉酸鈣，含量為0.4～1.6mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于所述藥用劑量的鈣通道阻滯劑為苯磺酸氨氯地平、馬來(lái)酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平、苯磺酸左旋氨氯地平、馬來(lái)酸左旋氨氯地平、或甲磺酸左旋氨氯地平中的一種，含量為5mg；所述藥用劑量的B族維生素為葉酸或甲酰四氫葉酸鈣，含量為0.8mg。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任一所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的制藥劑型為口服制劑，包括片劑、膠囊或顆粒劑。
7.權(quán)利要求1～6中任一所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療及延緩高血壓、高血壓引起的靶器官損害及高血壓相關(guān)疾病的藥物中的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述高血壓引起的靶器官損害，包括左室肥厚、心絞痛、心肌梗死、心功能衰竭、良性小動(dòng)脈性腎硬化癥、惡性小動(dòng)脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動(dòng)脈硬化、高血壓眼底病變、腦卒中。所述高血壓密切相關(guān)的疾病，包括動(dòng)脈粥樣硬化、高血脂、肥胖、冠心病、主動(dòng)脈夾層和高血糖、糖耐量異常、代謝綜合征、糖尿病。
9.權(quán)利要求1～6中任一所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療及延緩高血壓合并高血脂的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求1～6中任一所述的藥物組合物在制備具有協(xié)同降血壓、或/和協(xié)同改變血管的順應(yīng)性，或/和協(xié)同延緩靶器官損害作用的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有鈣通道阻滯劑和B族維生素的藥物組合物，由藥用劑量的鈣通道阻滯劑及其藥用前體、活性代謝產(chǎn)物、或鹽類中的一種，藥用劑量的B族維生素中的一種或幾種，和藥學(xué)上可接受的載體組成。該藥物組合物可以提高鈣通道阻滯劑降壓藥的療效，增強(qiáng)鈣通道阻滯劑的靶器官保護(hù)作用，減少眼底出血、心絞痛、心肌梗死、腦卒中、心功能衰竭、腎功能衰竭等并發(fā)癥的發(fā)生率。還提供該藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療及延緩高血壓合并高血脂藥物中的應(yīng)用。通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施，提供給患者的藥物組合物不但療效可靠，而且還可以提高患者依從性，使患者服藥方便，降低醫(yī)療費(fèi)用，具有較好市場(chǎng)前景。
文檔編號(hào)A61K31/714GK1824320SQ20061000069
公開(kāi)日2006年8月30日 申請(qǐng)日期2006年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月13日
發(fā)明者陳光亮, 王琳琳, 段炎炎, 李莉, 徐希平 申請(qǐng)人:安徽省生物醫(yī)學(xué)研究所