專利名稱：：重組多價(jià)疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及重組水痘帶狀皰滲病毒、特別是使用BAC(大腸桿菌人工染色體)制備的重組水痘帶狀皰瘆病毒、以及含有上迷病毒的藥物組合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有水痘帶狀皰滲病毒基閨組基因和BAC載體序列的栽體、以及含有上述栽體的細(xì)胞。本發(fā)明又涉及制備重組水痘帶狀皰滲病毒的方法。本發(fā)明還涉及含有可以與水痘帶狀皰滲病毒基因組同源重組的片段、和BAC載體序列的核酸盒。
背景技術(shù)：
：水痘帶狀皰滲病毒(Varicella-zostervirus,VZV)是屬于人皰瘆病毒科的病毒，是呈現(xiàn)兩種不同的臨床現(xiàn)象的疾病(水痘和帶狀皰滲)的病因該病毒的初期感染引發(fā)水疽。然后病毒潛伏感染神經(jīng)節(jié)，經(jīng)過漫長的年月后由于某些誘因而再次激活，引發(fā)帶狀皰滲(形成病毒顆粒，經(jīng)由神經(jīng)細(xì)胞，到達(dá)表皮細(xì)胞，在神經(jīng)細(xì)胞分布區(qū)域形成水痘的癥狀)。VZV的基因組是雙鏈DNA，含有約125000個(gè)堿基。全部堿基序列已由Davison等人確定，已知在基因組上至少存在72個(gè)基因。VZV的疫苗的開發(fā)較為困難，VZV疫苗Oka林是由高橋等人(日本特公昭53-41202號(hào))所開發(fā)的世界上唯一的用于水痘帶狀皰滲病毒的疫苗?，F(xiàn)行的水痘減毒活疫苗是使用來自減毒水痘病毒Oka抹的病毒為種制備，在世界各國得到廣泛應(yīng)用(RequirementsforVaricellaVaccine(Live)Adopted1984;Revised1993:WHOTechnicalReportSeries,No,848,22~38頁，1994)。該Oka林是將由出現(xiàn)典型的水痘的患兒分離的病毒(Oka親本林)用人胚胎肺細(xì)胞在34。C下繼代12代、.再用豚鼠胚胎細(xì)胞繼代11代、然后用人二倍體細(xì)胞數(shù)代繼代之后所得。Oka原株具有強(qiáng)的病原性，而Oka疫苗抹(Oka抹傳種于健康兒童幾乎未見任何副作用。因此，Oka林作為幾乎沒有病原性的疫苗林是有用的。病毒疫苗在其繼代培養(yǎng)的同時(shí)具有基因型發(fā)生變化的可能性。Oka林本身的制備過程中經(jīng)多代繼代培養(yǎng)，因此Oka林本身也可能在遺傳上具有多樣性。實(shí)際上，為了確保疫苗的安全性和有效性，考慮到由于疫苗制備步驟中的繼代可能產(chǎn)生的病毒的遺傳變異，人們制定了允許制備的水痘種子病毒的繼代數(shù)目的限制，即，制定了種子批系統(tǒng)，該系統(tǒng)是以認(rèn)可的種子的繼代數(shù)為0代，將之后的總繼代數(shù)10代以內(nèi)的病毒用作疫苗。另一方面，從水疽疫苗的效果的追蹤或上市后藥物監(jiān)測(cè)(PMS)、以及免疫學(xué)的角度考慮，需要對(duì)從自然感染的水痘患者中分離的水痘病毒的新型野生抹和來自上述Oka株的疫苗株之間的病毒學(xué)差異進(jìn)行分析，通過免疫學(xué)和基因工程等進(jìn)行的分析已經(jīng)進(jìn)行了各種嘗試。例如已經(jīng)報(bào)道了下述分析水痘病毒林間的基因結(jié)構(gòu)或DNA堿基序列的差異(JournalofGeneralViroogy，59,660~668,1986;同前，67，1759-1816,1986)、是否有限制酶PstI位點(diǎn)(JapaneseJournalofExperimentalMedicine,59，233~237，1989)、基于使用PCR(聚合驗(yàn)反應(yīng))的RFLP(限制片段長度多態(tài)性)進(jìn)行的判定(JournalofVirology,66，1016~1020，1992)、將上述Pstl位點(diǎn)的有無與RFLP的組合(JoumalofClinicalMicrobiology,33，658~660,1995)等。但是，這些均是鑒別新型野生林與來自O(shè)ka林的疫苗抹的條件，由于Oka林本身的遺傳多樣性的問題，欠缺可靠性、不確定，因此在疫苗的品質(zhì)管理方面仍有問題。并且，已知有使用水痘病毒的基因14區(qū)域的水痘病毒Oka林的鑒定方法(美國專利第6,093,535號(hào))、或使用基因62區(qū)域的水痘減毒活疫苗用的病毒林的鑒定方法(國際公開號(hào)WO00/50603)等，但是這些技術(shù)可以鑒定水痘病毒Oka株(強(qiáng)毒親本林)、由此派生的病毒林(減毒Oka株)、以及Oka林以外的水痘病毒林三者之間的差異，但是作為水痘減毒活疫苗的品質(zhì)管理以及品質(zhì)保證的制劑基準(zhǔn)仍不足夠。目前，尚未確立評(píng)價(jià)和確認(rèn)疫苗品質(zhì)的方法，例如尚未通過種子病毒或疫苗病毒的基因組DNA的直接或定量性的基因分析進(jìn)行品質(zhì)管理，因此，對(duì)于活疫苗用的減毒抹的品質(zhì)管理和品質(zhì)保證的精度尚無法計(jì)算。因此，提高品質(zhì)管理和品質(zhì)保證的精度，這對(duì)于確保水痘減毒活疫苗的有效性、安全性、均勻性是極為重要的。但是如上所述,這些方法尚未建立，是要解決的當(dāng)務(wù)課題。為了開發(fā)比Oka林更為優(yōu)異的變異體水痘帶狀皰滲病毒疫苗，人們需求誘變的重組水痘帶狀皰疹病毒及其制備方法。并且，在使用BAC載體序列的病毒疫苗的制備方法中，需要對(duì)用于導(dǎo)入BAC載體序列的非必需基因進(jìn)行鑒定。并且，在使用BAC載體制備多價(jià)疫苗時(shí)，還存在必須將多個(gè)抗原插入到病毒基因組上的問題。因此，人們希望開發(fā)出用于制備多價(jià)疫苗的來自BAC載體的栽體。專利文獻(xiàn)1:日本特公昭53"41202號(hào)專利文獻(xiàn)2:美國專利第6,093,535號(hào)專利文獻(xiàn)3:國際公開號(hào)WO00/50603非專利文獻(xiàn)1:RequirementsforVaricellaVaccine(Live)Adopted1984;Revised1993:WHOTechnicalReportSeries,No.848,22~38頁，1994非專利文獻(xiàn)2:JournalofGeneralVirology,59，660~668，1986非專利文獻(xiàn)3:JournalofGeneralVirology,67,1759~1816，1986非專利文獻(xiàn)4:JapaneseJournalofExperimentalMedicine,59，233~237，1989非專利文獻(xiàn)5:JournalofVirology,66,1016~1020,1992非專利文獻(xiàn)6:JournalofClinicalMicrobiology,33，658~660,199
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的課題在于提高水痘帶狀皰療病毒疫苗的品質(zhì)管理和品質(zhì)保證的精度，確保水痘減毒活疫苗的有效性、安全性、均勻性。本發(fā)明的課題還在于為了開發(fā)比Oka抹更為優(yōu)異的變異體水痘帶狀皰瘆病毒疫苗，確立制備誘變的重組水痘帶狀皰療病毒的方法，并提供上述病毒。本發(fā)明的課題進(jìn)一步在于提供具有上述優(yōu)點(diǎn)的多價(jià)疫苗。在使用BAC載體制備多價(jià)疫苗時(shí)，必須向病毒基因組序列中插入編碼多種抗原的基因。但是已知由于外源基因的插入使得基因組尺寸過大，基罔組DNA無法包裝在病毒殼體中，無法制備重組病毒。因此，為了將多個(gè)抗原基因插入到Oka疫苗抹中，必須考慮將Oka疫苗抹的非必需基因敲除，減小基因組DNA的尺寸。另一方面，本發(fā)明中出人意料地發(fā)現(xiàn)在以往被預(yù)測(cè)為非必需基因的基因中存在敲除會(huì)對(duì)病毒的增殖產(chǎn)生影響的基因。因此，本發(fā)明的課題在于提供不會(huì)出現(xiàn)病毒生產(chǎn)量降低等問題的、使用BAC載體的多價(jià)疫苗的制備方法。解決i果題的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明人等開發(fā)了重組水痘帶狀皰疹病毒的制備方法，從而完成了本發(fā)明。所述重組水痘帶狀皰滲病毒的制備方法是將水痘帶狀皰瘆病毒基因組的特定基因用作BAC載體序列的插入序列。因此，本發(fā)明提供以下內(nèi)容。1,重組水痘帶狀皰瘆病毒，該重組水痘帶狀皰滲病毒是BAC栽體序列的至少一部分插入到水痘帶狀皰瘆病毒基因組的非必需區(qū)域內(nèi)得到的，這里，該非必需區(qū)域選自下迷的區(qū)域基固13的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域、和與基因58的ORF相鄰的區(qū)&戈。2.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰療病毒，其中該水痘帶狀皰瘆病毒中選自基因13、基因56、基因57、和基因58的基因至少有2個(gè)缺損。3.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰疹病毒，其中該水痘帶狀皰疹病毒中選自基因13、基因56、基因57、和基因58的基因至少有3個(gè)缺損。4.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述BAC載體序列包含重組蛋白依賴性重組序列。5.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰療病毒，其中上述BAC載體序列包含選自腮腺炎病毒、麻瘆病毒、風(fēng)瘆病毒、西尼羅病毒、流感病毒、SARS冠狀病毒、和日本腦炎病毒的病毒的基因。6.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述BAC載體序列包含選自腮腺炎病毒、麻滲病毒、和風(fēng)滲病毒的病毒的基因。7.項(xiàng)目6的重組水痘帶狀皰療病毒，其中上述BAC載體序列包含腮腺炎病毒的基因、麻瘆病毒的基因、和風(fēng)滲病毒的基因。8.項(xiàng)目6的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述腮腺炎病毒的基因選自HN基因、F基因、和N基因。9.項(xiàng)目6的重組水痘帶狀皰瘆病毒，其中上迷麻滲病毒的基因選自H基因、F基因、和N基因。10.項(xiàng)目6的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述風(fēng)滲病毒的基因選自C基因、El基因、和E2基因。.11.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰療病毒，其中上述水痘帶狀皰滲病毒基因組來自野生株。12.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述水痘帶狀皰瘆病毒基因組來自變異抹。13.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰瘆病毒，其中上迷水疽?guī)畎挐B病毒基因組來自O(shè)ka疫苗林。14.項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰瘆病毒，其中上述水痘帶狀皰滲病毒基因組在基因62和基因6上具有變異。15.項(xiàng)目14的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述基因62是在SEQIDNCU的絲序列中至少具有以下(a)(d)的堿基置換(a)2110位堿基置換為G;(b)3100位堿基置換為G;(c)3818位堿基置換為C;和Cd)4006位堿基置換為G,以及上述基因6是在SEQIDN0.4的tt序列中至少具有5745位堿基為G的堿基置換。16.藥物組合物，該藥物組合物含有項(xiàng)目l的病毒。17，項(xiàng)目16的藥物組合物，其中該藥物組合物是疫苗形態(tài)。18.載體，該栽體從項(xiàng)目1的重組水痘帶狀皰滲病毒中分離。19.細(xì)胞，該細(xì)胞含有項(xiàng)目18的載體。20.項(xiàng)目19的細(xì)胞，其中該細(xì)胞為細(xì)菌。21.項(xiàng)目20的細(xì)菌，其中該細(xì)菌為大腸桿菌。22.項(xiàng)目19的細(xì)胞，其中該細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。23.項(xiàng)目22的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其中該哺乳動(dòng)物細(xì)胞為來自人的細(xì)胞。24，病毒，該病毒由項(xiàng)目22的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)。25.藥物組合物，該藥物組合物含有項(xiàng)目24的病毒。26.重組水痘帶狀皰滲病毒的制備方法，該方法包含以下步驟將項(xiàng)目18的載體導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中的步驟；以及培養(yǎng)該哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，生產(chǎn)重組水痘帶狀皰滲病毒的步驟。27.項(xiàng)目26的方法，其中上述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞是來自人的細(xì)胞。28.項(xiàng)目26的方法，該方法進(jìn)一步包含在上迷2個(gè)重組蛋白依賴性重組序列之間發(fā)生重組的步驟。29.向項(xiàng)目18的載體導(dǎo)入變異的方法，該方法包含以下步驟將該載體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；將含有由水痘帶狀皰瘆病毒基因組的一部分形成的片段的質(zhì)粒載體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中，該片段至少具有一個(gè)變異；培養(yǎng)該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；以及從該培養(yǎng)的細(xì)菌宿主細(xì)胞中分離具有BAC栽體序列的栽體的步驟。30.向項(xiàng)目18的載體導(dǎo)入變異的方法，該方法包含以下步驟將該載體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；將含有由水痘帶狀皰滲病毒基因組的一部分形成的第1片段的第l質(zhì)粒載體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中該第1片段具有至少l個(gè)變異；將含有由水痘帶狀皰滲病毒基因組的一部分形成的第2片段的第2質(zhì)粒載體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中該第2片段具有至少1個(gè)變異，該第2片段與該第1片段不同；培養(yǎng)該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；以及從該培養(yǎng)的細(xì)菌宿主細(xì)胞中分離具有BAC載體序列的載體的步驟。31.核酸盒，該核酸盒含有在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)可以與水痘帶狀皰滲病毒基因組同源重組的第1片段、BAC載體序列、以及在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)可以與水痘帶狀皰滲病毒基因組同源重組的第2片段，其中該BAC序列的兩端分別與第1片段和第2片段連接，這里，上迷第1和第2片段各自獨(dú)立，來自選自水痘帶狀皰瘆病毒基因組的以下區(qū)域的區(qū)域基因13的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域、與基因58的ORF相鄰的區(qū)域、和基因56、57、58的連續(xù)的區(qū)域。32.項(xiàng)目31的核酸盒,其中上述笫l片段和第2片段至少為lkb。33.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述第1片段和第2片段至少為1.5kb。34.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述第1片段和第2片段至少為2kb。35.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上迷第1片段和第2片段與水痘帶狀皰滲病毒基因組的序列至少80%相同。36.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述第1和第2片段來自不同的區(qū)域。37.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述BAC載體序列含有重組蛋白依賴性重組序列。38.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述BAC載體序列含有選擇標(biāo)志。39.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述水痘帶狀皰疹病毒基因組來自野生抹。40.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述水痘帶狀皰滲病毒基因組來自變異株。41.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述水痘帶狀皰滲病毒基因組來自O(shè)ka疫苗林。42.項(xiàng)目31的核酸盒，其中上述BAC載體序列具有SEQIDN0.3的核^列。發(fā)明效果本發(fā)明提供重組水痘帶狀皰疹病毒及其制備方法。例如，本發(fā)明提供使用BAC(大腸桿菌人工染色體)、將病毒的特定基因作為BAC載體的插入部分、由單一的病毒林制備重組水痘帶狀皰疹病毒的方法，以及通過該方法制備的重組水痘帶狀皰滲病毒。本發(fā)明還提供含有重組水痘帶狀皰滲病毒的藥物組合物，本發(fā)明進(jìn)一步提供含有水痘帶狀皰疹病毒基因組基因和BAC載體序列的載體、和含有上述載體的細(xì)胞，以及含有可與水痘帶狀皰滲病毒基因組同源重組的片段和BAC載體序列的核酸盒。附圖簡述圖1是表示CMV啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的結(jié)構(gòu)的模式圖。圖2模式表示通過同源重組向基因13的ORF區(qū)域插入腮腺炎病毒抗原的方法。實(shí)施發(fā)明的最佳方式以下，說明本發(fā)明。本說明書全體中，如無特別說明，單數(shù)形式的表現(xiàn)應(yīng)理解為也包含其復(fù)數(shù)形式的概念。如無特別說明，本說明書中使用的術(shù)語應(yīng)理解為以該領(lǐng)域中通常使用的含義使用。因此，如無其它定義，本說明書中所使用的全部專業(yè)術(shù)語和科學(xué)技術(shù)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬的領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的相同的含義。如發(fā)生矛盾則本說明書(包括定義)優(yōu)先。(術(shù)語的定義)以下例舉本說明書中特別使用的術(shù)語的定義。..在本說明書中使用時(shí)，水痘帶狀皰滲病毒的"必需基因"是指水痘帶狀皰滲病毒增殖所必需的基因。另外，水痘帶狀皰瘆病毒的"非必需基因"是水痘帶狀皰滲病毒增殖中不是必需的基因，是指例如即使缺損，水痘帶狀皰滲病毒也可增殖的基因。水痘帶狀皰滲病毒的非必需基因例如有以下，但并不限于此基因11、基因12、基因13、基因56、和基因58。這些基因中，適合插入到BAC載體中的基因例如有基因13、基因56、和基因58,但并不限于此。病毒基因組中的基因?yàn)楸匦杌驎r(shí)，通過破壞該基因可使病毒無法增殖。因此，通過破壞病毒基因組中的任意基因、檢測(cè)該病毒的增殖，可以確定該基因是必需基因還是非必需基因。本說明書中，水痘帶狀皰參病毒的"野生林"是指未經(jīng)人工變異，從天然中分離的水痘帶狀皰滲病毒株。野生株的例子有:在Davison,A.J.和Scott,J.E,(J.Gen.Virol.67(Pt9),1759~1816(1986))中鑒定的Dumas抹，但并不限于此。該Dumas株的核酸序列記載于SEQH)N0.4。該Dumas株的ORF編號(hào)和位置如下。ORF編號(hào)讀框的方向基因組上的位置絲酸殘基數(shù)ORF13，~>5'方向589~915氨基酸l掘ORF25W方向1134~1850氨基酸1-238ORF33'~>5'方向1908~2447氨基酸1-179O鵬3'—5'方向2783-4141氨基酸1-452ORF53'~>5'方向4252~5274氨基酸1-340ORF63'—5'方向5326~8577氨基酸1-1083ORF75，~3，方向8607~9386氨基酸1-259ORF89477~10667氨基酸1—3960RF95'—3'方向11009-'11917氨基酸1-302ORF9A5'－3'方向10642－10902氨基酸1一87ORF105，~>3'方向12160-'13392氨基酸1"410ORF115，~>3，方向13590-'16049氨基酸1-819ORF125，~>3，方向16214'18199氨基酸1~661ORF133－5方向18441'19346氨基酸l一301ORF143'~>5'方向測(cè)l-'21113氨基酸1—560ORF153，~>5，方向21258-'22478氨基酸1－406ORF163'~>5'方向22568-'23794氨基酸1~408ORF175'—3，方向24149-'25516氨基酸1~455ORF183'~>5'方向25573-'26493氨基酸1—306ORF193，~5，方向26518-'28845氨基酸l一775ORF203'—5，方向29024-'30475氨基酸1-483ORF215'~3'方向30759-'33875氨基酸l一腦ORF225'—3'方向34083-'42374氨基酸1—2763ORF233'~>5'方向42431--43138氨基酸1-235ORF243'~>5'方向43212-'44021氨基酸1—269ORF253,~>5，方向44148-'44618氨基酸1—156ORF265'—3'方向44506-'46263絲酸l一585ORF275'~>3'方向46127-'47128氨基酸1—333ORF283'—5'方向47052-'50636氨基酸1—1194ORF295'~>3'方向50857-'54471氨基酸1—1204ORF305，~>3'方向54651~'56963氨基酸1-770ORF315'—3，方向57008—'59614氨基酸l－868ORF325，~>3'方向59766-'60197氨基酸1—143ORF333'->5，方向60321-'62138氨基酸1-605ORF33.53，~>5，方向60321-61229氨基酸l-301ORF343'~>5'方向62171-'63910氨基酸1—579ORF353'—5'方向63977-'64753氨基酸1-258ORF365，—3'方向64807-'65832氨基酸1-341ORF375，—3'方向66074-'68599氨基酸1—841ORF383'~5'方向68668-'70293氨基酸1—541ORF395'—3，方向70633-'71355氨基酸1—240ORF4071540-'75730氨基酸1-1396ORF415'~>3'方向75847-'76797氨基酸1-316ORF42+453，卄5，方向76851--78038<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>上述表中，"5，—3'方向"表示ORF與SEQIDN0.4的核酸序列相同方向，"3，—5'方向"表示ORF與SEQIDN0.4的核酸序列相反方向。通過鑒定與上述ORF的核酸序列和/或核酸序列同源的序列，所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員可以容易地鑒定來自Dumas株以外的林的基因組中的ORF。本說明書中，"變異株"是指通過對(duì)野生林的病毒林進(jìn)行誘變、多代繼代培養(yǎng)等而誘變的水痘帶狀皰療病毒抹。對(duì)水痘帶狀皰療病毒林進(jìn)行誘變時(shí)，該誘變可以是隨機(jī)誘變，也可以是定點(diǎn)特異性誘變。在本說明書中使用時(shí)，"減毒病毒"是病毒突變林的一種，是指毒性比野生林減弱的病毒。對(duì)于確定病毒突變抹的毒性是否比野生林減弱的方法、即測(cè)試水痘帶狀皰滲病毒的病原性的方法，建立了兩種方法，作為使用動(dòng)物模型的方法，眾所周知有制備移植了人的皮膚的重度聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠，使其感染水痘帶狀皰滲病毒，對(duì)病原性進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法(J.Virol,1998Feb;72(2):965~74)。與此相對(duì)，作為在試管內(nèi)進(jìn)行病原性評(píng)價(jià)的方法，在用孔徑3^m的trans-well分隔的雙層孔的下側(cè)加入單層培養(yǎng)的人黑素瘤細(xì)胞，上側(cè)加入感染了水痘帶狀皰滲病毒的臍帶血單核細(xì)胞(CBMC),培養(yǎng)7~8天后觀察黑素瘤細(xì)胞的CPE(細(xì)胞變性效杲)的程度。這也是眾所周知的方法(J.Virol.2000Feb;74(4):1864~70)。本發(fā)明人等以往的試驗(yàn)結(jié)果(J.Virol.2002Nov;76(22):11447~59)表明，病毒的病原性與增殖性密切相關(guān)，因此，可以通過感染中心測(cè)定來研究細(xì)胞到細(xì)胞的增殖性，由此間接性地對(duì)病原性進(jìn)行評(píng)價(jià)，但這不是直接確認(rèn)病原性的方法。病毒的人工減毒的方法是公知的。例如可以使用具有以下堿基置換的水痘帶狀皰滲病毒作為減毒病毒在SEQIDNO.l的基因62中至少有以下(a)~(d)的堿基置換(a)2110位堿基置換為G;(b)3100位堿基置換為G;(c)3818位堿基置換為C;和(d)4006位堿基置換為G,以及SEQIDNO.4的基因6中，至少5745位^tt為G的^^置換。也可以使用具有除(a)~(d)的堿基置換外還有以下(e)~(g)的至少1個(gè)以上的堿基置換的減毒水痘病毒代替上迷水痘帶狀皰滲病毒(e)1251位4tt置換為G;(f)2226位堿基置換為G;和(g)3657位堿基置換為G。本發(fā)明中，還可以進(jìn)一步使用除(a)~(g)的至少一個(gè)以上堿基置換之外還有以下(h)""(o)的至少一個(gè)以上的堿基置換的減毒水痘病毒，以此代替上述水痘帶狀皰滲病毒(h)162位減基置換為C;(i)225位堿基置換為C;(j)523位威基置換為C;(k)1565位堿基置換為C;(1)1763位堿基置換為C;(m)2652位堿基置換為C;(n)4052位;威基置換為C;和(0)4193位堿基置換為C。或者，"減毒病毒，，例如可以使用在基因62中具有選自以下的至少一個(gè)磁基置換的病毒(a)2110位堿基置換為G;(b)3100位堿基置換為G;(c)3818位堿基置換為C;(d)4006位堿基置換為G;(e)1251位戚基置換為G;①2226位-成基置換為G;(g)3657位堿基置換為G。(h)162位堿基置換為C;(1)225位4置換為C;(j)523位4tt置換為C;(k)1565位堿基置換為C;(1)1763位堿基置換為C;(m)2652位堿基置換為C;(n)4052位堿基置換為C;和(o)4193位堿基置換為C。本說明書中使用的術(shù)語"蛋白質(zhì)"、"多肽"、"寡肽"和"肽，，在本說明書中以相同舍義使用，是指任意長度的氨基酸的聚合物。本說明書中使用的術(shù)語"多核苷酸"、"寡核苷酸"和"核酸"在本說明書中以相同含義使用，是指任意長度的核苷酸的聚合物。如果未標(biāo)示其它含義，則特定的核酸序列與所標(biāo)示的序列同樣，包含其保守性變異的變異體(例如筒并密碼子置換體)和互補(bǔ)序列。具體來說，簡并密碼子置換體可通過制成下述序列來實(shí)現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)選擇的(或者全部)密碼子的第3號(hào)位置用混合堿基和/或脫氧肌苷殘基置換(Batzer等人,NucleicAcidRes,19:5081(1991);Ohtsuka等人，J,Biol.Chera.260:2605~2608(1985);Rossolini等人,Mol.Cell.Probes8:91~98(1994》。本說明書中，"基因，，是指確定遺傳性狀的因子。通常在染色體上排列成一定的序列。確定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)的基因稱為結(jié)構(gòu)基因，調(diào)節(jié)其表達(dá)的稱為調(diào)節(jié)基因。本說明書中，"基因"指"多核苷酸"、"寡核苷酸"和"核酸"和/或"蛋白質(zhì)"、"多肽"、"寡肽"和"肽"。本說明書中，基因的"可讀框"或"ORF"是將基因的樣序列按每3個(gè)賄進(jìn)行劃分時(shí)3個(gè)成為一組，具有起始密碼子，中途未出現(xiàn)終止密碼子，具有一定程度的長度，實(shí)質(zhì)上可編碼蛋白質(zhì)的讀框。7jc疽?guī)畎挐B病毒基因組其全部堿基序列都已確定，至少鑒定出71個(gè)基因，各基因分別具有可讀框"ORF，，這是公知的。本說明書中，水痘帶狀皰瘆病毒基因組內(nèi)的基因的"ORF內(nèi)的區(qū)域"是指在水痘帶狀皰瘆病毒基因組內(nèi)的基因中，形成ORF的#所存在的區(qū)域。本說明書中，水痘帶狀皰滲病毒基因組內(nèi)的基因的"與ORF相鄰的區(qū)域"是指在水痘帶狀皰滲病毒基因組內(nèi)的基因中，ORF附近的堿基所存在的區(qū)域，是指該基因或其它基因不在ORF內(nèi)的區(qū)域的區(qū)域。本說明書中，基因的"同源性"是指2個(gè)以上的基因序列相互的同一性的程度，因此，2個(gè)基因同源性越高則它們的序列的同一性或類似性越高。兩種基因是否具有同源性，這可通過序列的直接比較、或者如果為核酸時(shí)，通過嚴(yán)*件下的雜交的方法確認(rèn)。將2個(gè)基因序列直接比較時(shí)，該基因序列間的DNA序列代表性的至少為50%同一時(shí)、優(yōu)選至少70%同一時(shí)、更優(yōu)選至少80%、卯％、95%、96%、97%、98%或99°/。同一時(shí)，這些基因具有同源性。本說明書中，堿基序列的類似性的比較和同源性的計(jì)算可以使用序列分析工具BLAST、使用缺省參數(shù)計(jì)算。本說明書中，基因、多核苷酸、多肽等的"表達(dá)"是指該基因等在體內(nèi)受到一定的作用，變成另外的形態(tài)，優(yōu)選"表達(dá)"表示基因、多核苷酸等被轉(zhuǎn)錄和翻譯成為多肽的形態(tài)，也可以是被轉(zhuǎn)錄，制成mRNA，這也是表達(dá)的一個(gè)方式。更優(yōu)選上迷多肽的形態(tài)是可以在翻譯后經(jīng)過力p工修飾。氨基酸通常是以3個(gè)字母或者由IUPAC-IUBBiochemicalNomenclatureCommission(國際生物化學(xué)聯(lián)合會(huì)雨國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)組成的生物化學(xué)命名委員會(huì))推薦的單字母的形式在本說明書中提及。核苷酸也同樣，以通常所接受的單字母編碼的形式提及。本說明書中，"片段"是指相對(duì)于全長多肽或多核苷酸(長度為n),具有1至n-l的序列長度的多肽或多核苷酸。片段的長度根據(jù)其目的可以適當(dāng)變更，例如為多肽時(shí)，其長度的下限可以是3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50以及更多的氨基酸，這里，以未具體例舉的整數(shù)所表示的長度(例如11等)也適合作為下限。為多核苷酸時(shí)，有5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100、200、300、400、500、600、600、700、800、900、1000以及更多的核苷酸，這里，以未具體例舉的整數(shù)所表示的長度(例如11等)也適合作為下限。BAC載體內(nèi)的基因所編碼的多肽只要具有與天然型的多肽實(shí)質(zhì)上具有相同的作用即可，M酸序列中的1個(gè)以上(例如1或多個(gè))的氨基酸可以置換、附加和/或缺失，l個(gè)以上的糖鏈可以置換、附加和/或缺失。在本說明書中使用時(shí)，"糖鏈"是指1個(gè)以上單元糖(單糖和/或其衍生物)相連而成的化合物。2個(gè)以上羊元糖相連時(shí)，各單元糖之間可以通過糖苷鍵的脫水縮合來連結(jié)，上迷糖鏈例如有在生物體中含有的多糖類(葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、木糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰半乳糖胺、唾液酸以及它們的復(fù)合物和衍生物)，除此之外還有分解的多糖，由糖蛋白、蛋白聚糖、葡糖胺聚糖、糖脂等的復(fù)合生物體分子分解或衍生的糖鏈等廣范圍的糖類。但并不限于此。因此，本說明書中，"糖鏈"可以與"多糖"、"糖類"、"碳水化合物"互換使用。如無特別說明，本說明書中，"糖鏈"包含糖鏈和舍糖鏈的物質(zhì)兩者。將某種氨基酸用具有同樣的疏水性指數(shù)的其它的氨基酸置換，可生成依然具有同樣的生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)(例如在酶活性中的等效蛋白質(zhì))，這是本領(lǐng)域所周知的。上迷氨基酸置換中，優(yōu)選疏水性指數(shù)在±2以內(nèi)，更優(yōu)#土1以內(nèi)，進(jìn)一步優(yōu)選在士0.5以內(nèi)。在本領(lǐng)域中，可以理解基于疏水性的上述氨基酸的置換是高效率的。親水性指標(biāo)還可以在突變體的制備中考慮。如美國專利第4,554,101號(hào)中所記載，以下的親水性指數(shù)對(duì)應(yīng)各氨基酸殘基精氨酸(+3.0);賴氨酸(+3.0);天冬氨酸(+3,0±1);谷氨酸(+3.0±1);絲氨酸(+0.3);天冬酰胺(+0.2);谷氨酰胺(+0.2);甘氨酸(O);蘇氨酸(-0,4);脯氨酸(-0.5±1);丙氨酸(-0.5);組氨酸(-0.5);半胱氨酸(-1.0);甲辟4酸(-1.3);纈氨酸(-l,5);亮氨酸(-1.8);異亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3);苯丙氨酸(-2.5);以及色氨酸(-3.4)?？梢岳斫獍被峥梢灾脫Q成具有同樣的親水性指數(shù)、且依然可以獲得生物學(xué)等價(jià)物的其它的氨基酸。上述氨基酸置換中，優(yōu)選親水性指數(shù)在±2以內(nèi)，更優(yōu)i^EJrl以內(nèi)，進(jìn)一步優(yōu)選在士0.5以內(nèi)。本發(fā)明中，"保守性置換"是指在M酸置換中，原有的M酸與被置換的氨基酸的親水性指數(shù)或/和疏水性指數(shù)如上所述地類似的置換。保守性置換的例子是本領(lǐng)域所周知的，例如有以下各組內(nèi)的置換精氨酸和賴氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；絲氨酸和蘇氨酸；谷氨酰胺和天冬觥胺；以及纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸等，但并不限于此。本說明書中，"變異體"是指相對(duì)于原有的多肽或多核苷酸等物質(zhì)，有一部分發(fā)生變更。上述變異體有置換變異體、附加變異體、缺失變異體、截短的變異體、等位基因變異體等。等位基因是指屬于同一基因座、互相區(qū)別的遺傳性變異體。因此，"等位基因變異體，，是指對(duì)于某種基因存在等位基因關(guān)系的變異體。"種同源物或同系物"是指在某一種中，與某種基因在氨基酸水平或核苷酸水平上具有同源性(優(yōu)選60%以上的同源性，更優(yōu)選80%以上、85%以上、90%以上、95%以上的同源性)。獲得上迷種同源物的方法從本說明書的記栽即可明確。"直向同源物"也稱為直向同源基因，是指兩種基因來自由某一共同祖先種分化而來的基因。例如，以具有多重基因結(jié)構(gòu)的血紅蛋白基因家族為例，人與小鼠的a血紅蛋白基因是直向同源物，但人的a血紅蛋白基因與p血紅蛋白基因是種內(nèi)同源基因(基因重復(fù)而產(chǎn)生的基因)。直向同源物可用作分子系統(tǒng)樹的推定，.因此本發(fā)明的直向同源物在本發(fā)明中可以是有用的。"保守性(保守性修飾)變異體"適用于氨基酸序列和核酸序列兩者。關(guān)于特定的核酸序列，保守性變異的變異體是指編碼同一或本質(zhì)上同一的氨基酸序列的核酸，核酸不編碼tt酸序列時(shí)，是指本質(zhì)上同一的序列。由于遺傳編碼的簡并，很多功能性同一的核酸編碼任意的規(guī)定的蛋白質(zhì)。例如密碼子GCA、GCC、GCG和GCU均編碼tt酸的丙氨酸。因此，丙氨酸在由密碼子確定的所有的位置上，都可以在不改變?cè)撁艽a子所編碼的多肽的情形下變更為上述的對(duì)應(yīng)的任意密碼子。上述核酸的變異是保守性修飾變異的一種"沉默變異"。編碼多肽的本"E明書中的所有的核酸序列都記載了該核酸的可能的所有的沉默變異，該領(lǐng)域中，可以理解核酸中的各密碼子(通常的甲石危氨酸的唯一密碼子AUG和通常的色氨酸的唯一密碼子TGG除外)可以為產(chǎn)生功能相同的分子而變異。因此，編碼多肽的核酸的各沉默變異隱舍在所述的各序列中，優(yōu)選上述變異可避免對(duì)多肽的高級(jí)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生較大影響的氨基酸半胱氨酸的置換。本說明書中，為了制備含有功能性地編碼等效的多肽的基因的BAC載體，除氨基酸的置換之外還可進(jìn)行氨基酸的附加、缺失或修飾。氨基酸的置換是指將原有的多肽用1個(gè)以上、例如i~10個(gè)、優(yōu)選1~5個(gè)、更優(yōu)逸13個(gè)氮基酸置換。氨基酸的附加是在原有的肽鏈上附力口1個(gè)以上例如1~10個(gè)、優(yōu)選H個(gè)、更優(yōu)選1~3個(gè)氨基酸。氨基酸的缺失是指使1個(gè)以上例如1~10個(gè)、優(yōu)選1~5個(gè)、更優(yōu)選1~3個(gè)氨基酸從原有的肽上缺失。氨基酸修飾包含酰胺化、羧基化、硫酸化、卣化、烷基化、糖基化、磷酸化、氫氧化、?；?例如乙酰化)等，但并不限于此。置換或附加的氨基酸可以是天然的氨基酸，也可以是非天然的tt酸或氨基酸類似物。優(yōu)選天然的氨基酸。本說明書中使用的多肽的核酸形態(tài)是指可表達(dá)該多肽的蛋白質(zhì)形態(tài)的核酸分子。該核酸分子只要是被表達(dá)的多肽與天然型的多肽實(shí)質(zhì)上具有相同活性即可，可以如上所述，該核酸序列的一部分可以缺失或被其它的威基置換，或者插入一部分其它的核酸序列.或者可在5，末端和/或3，末端結(jié)合其它核酸。還可以是將編碼多肽的基因在嚴(yán)格條件下雜交，編碼與該多肽實(shí)質(zhì)上具有相同功能的多肽的核酸分子。上述基因在本領(lǐng)域是公知的，可在本發(fā)明中利用。上述核酸可通過周知的PCR法獲得，也可以化學(xué)合成。這些方法中例如可以將定點(diǎn)特異性誘變法、雜交法等組合。本說明書中，多肽或多核苷酸的"置換、附加或缺失"是指相對(duì)原有的多肽或多核苦酸，分別有M酸或其替代物、或者核苷酸或其替代物置換、附加或者除去。上述置換、附加或缺失的技術(shù)是該領(lǐng)域所周知的，上述技術(shù)的例子有定點(diǎn)特異性誘變技術(shù)等。置換、附加或缺失只要是1個(gè)以上即可，可以是任意數(shù)(大于零)，上述數(shù)目只要是在具有該置換、附加或缺失的變異體中可保持目標(biāo)功能即可，可以增多。例如，上述數(shù)目可以是1或多個(gè)，優(yōu)選為全長的20%以內(nèi)、10%以內(nèi)，或100個(gè)以下、50個(gè)以下、25個(gè)以下等。高分子結(jié)構(gòu)(例如多肽結(jié)構(gòu))對(duì)于各種水平的構(gòu)成均有闡述。上迷構(gòu)成的常規(guī)理論例如可參照Akberts等人，MolecularBiologyoftheCell(第3版>1994);以及Cantor和Schimmel，BiophysicalChemistryPaetI:TheConformationofBiologicalMacromolecules(1980)。本發(fā)明中可利用的常規(guī)的分子生物學(xué)方法可參考AusubdF.A.等人編著(1988),CurrentProtocolsinMolecularBiology,Wiley,NewYork,NY;SambrookJ等人,(1987)MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY等，本領(lǐng)域技術(shù)人員均容易實(shí)施。本說明書中，提a因時(shí)，"載體，，是指可以將目標(biāo)多核苷,列轉(zhuǎn)入目標(biāo)細(xì)胞中的物質(zhì)。上迷載體的例子包括可以在原核生物細(xì)胞、酵母、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、動(dòng)物個(gè)體和植物個(gè)體等的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制，或者可插入染色體中，且在適合本發(fā)明的多核苷酸轉(zhuǎn)錄的位置上含有啟動(dòng)子的栽體。"BAC栽體，，是指以大腸桿菌的F質(zhì)粒為基礎(chǔ)制備的質(zhì)粒，是可以將約300kb以上的巨大尺寸的DNA片段在;U^桿菌等細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定保持并增殖的栽體。BAC載體至少含有BAC載體的復(fù)制所必需的區(qū)域。該復(fù)制所必需的區(qū)域例如有:F質(zhì)粒的復(fù)制起始位點(diǎn)oriS或其變異體，但并不限于此。本說明書中，"BAC載體序列"是指含有發(fā)揮BAC載體功能所必需的序列的序列。根據(jù)需要，BAC載體序列可以進(jìn)一步含有"重組蛋白依賴性重組序列"和/或"選擇標(biāo)志"。本說明書中，核酸的"重組"可與術(shù)語"同源重組"互換使用，是由2種不同的同源核酸分子結(jié)合引發(fā)，發(fā)生交換，產(chǎn)生核酸的新的組合。在本說明書中使用時(shí)，同源重組包含"重組蛋白依賴性重組，，和"重組蛋白非依賴性重組"兩者。"重組蛋白依賴性重組"是指在重組蛋白存在下發(fā)生、但在重組蛋白非存在下不發(fā)生的同源重組。"重組蛋白非依賴性重組"是指與重組蛋白的存在無關(guān)地發(fā)生的同源重組。本說明書中，"重組蛋白依賴性重組序列，，是指發(fā)生重組蛋白依賴性重組的序列，"重組蛋白非依賴性重組序列"是指發(fā)生重組蛋白非依賴性重組的序列。重組蛋白依賴性重組序列是在重組蛋白存在下發(fā)生重組、但在重組蛋白非存在下不發(fā)生重組。重組蛋白優(yōu)選特異性地作用于重組蛋白依賴性重組序列，而不作用于重組蛋白依賴性重組序列以外的序列。代表性的重組蛋白依賴性重組序列與重組蛋白對(duì)例如有以下，但并不限于此來自噬菌體P1的loxP(Pl的交換的基因座)序列與Cre(環(huán)化重組)蛋白的組合，F(xiàn)ip蛋白與FRT位點(diǎn)的組合，q)C31與attB、attP的組合(Thorpe,HelenaM.;Wilson,StuartE.;Smith，MargaretC,M.;Controlofdirectionalityinthesite-specificrecombinationsystemoftheStreptomycesphage(pC31,;MolecularMicrobiology(2000),38(2),232~241)、解離酶與res位點(diǎn)的組合(SadowskiP,，Site-specificrecombinases:changingpartnersanddoingthetwist,J.Bacteriol"1986年2月；165(2)341-7)(通常參照SauerB.，Site-specificrecombination:developmentsandapplications.,Curr.Opin.Biotechnol.，1994年10月；5(5):521-7)。在本說明書中使用時(shí)，"選擇標(biāo)志"是指選擇含有BAC載體的宿主細(xì)胞，以此為指標(biāo)發(fā)揮功能的基因。選擇標(biāo)志例如有熒光標(biāo)志、發(fā)光標(biāo)志和藥物選擇標(biāo)志，但并不限于此。"熒光標(biāo)志"有編碼綠色熒光蛋白(GFP)等的熒光蛋白的基因，但并不限于此。"發(fā)光標(biāo)志"是指編碼螢光素酶等發(fā)光蛋白的基因，但并不限于此。"藥物選擇標(biāo)志，，是指編碼選自以下蛋白的基因，但并不限于此二氫葉酸還原酶基因、谷氨酰胺合成酶基因、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶基因、金屬硫蛋白(MT)、腺苷脫氨酶(ADA)、腺苷脫氨酶(AMPD1，2)、黃嗜呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、UMP合成酶、P-糖蛋白、天冬酰胺合成酶和鳥氨^l^羧酶。這些藥物選擇標(biāo)志與所使用的藥物的組合例如如下二氫葉酸還原酶基因(DHFR)與氯甲蝶呤(MTX)的組合，谷氨酰胺合成酶(GS)基因與蛋氨酸磺基辨(methioninesdfoximine(Msx))的組合，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(CAD)基因與N-磷酸乙酰-L-天冬氨酸(PALA)的組合，MT基因和鎘(CcP)的組合，腺苷脫氨酶(ADA)基因與腺苷、亞硝基羥基丙氨酸、2，-脫氧助間型霉素的組合，腺苷脫氨酶(AMPD1，2)基因與腺嘌呤、重氮絲氨酸、助間型霉素的組合，黃噪呤-鳥噪呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因與霉酚酸的組合，UMP合成酶基因與6-氮尿苷、pyrazofiiran的組合，P-糖蛋白(P-gp,MDR)基因與多種藥物的組合，天冬酰胺合成酶(AS)基因與p-天冬氨酰異羥肟酸或合歡氨酸的組合，烏氨酸脫羧酶(ODC)基因與a-二氟甲基-鳥氨酸(DFMO)的組合。在本說明書中使用時(shí)，"表達(dá)載體，，是指除結(jié)構(gòu)基因及其調(diào)節(jié)其表達(dá)的啟動(dòng)子之外，各種調(diào)節(jié)元件以在宿主的細(xì)胞中可動(dòng)作的狀態(tài)連接而成的核酸序列。調(diào)節(jié)元件優(yōu)選終止子、抗藥性基因(例如，卡那霉素抗性基因、潮霉素抗性基因等)等的選擇標(biāo)志和增強(qiáng)子。生物(例如，植物)的表達(dá)栽體的類型和所使用的調(diào)節(jié)元件的種類根椐宿主細(xì)胞而不同，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所周知的事項(xiàng)。為植物時(shí)，本發(fā)明中使用的植物的表達(dá)載體可以進(jìn)一步具有T-DNA區(qū)域。T-DNA區(qū)域特別是在使用農(nóng)桿菌屬轉(zhuǎn)化該植物時(shí)，可以提高基因的導(dǎo)入效率。在本說明書中使用時(shí)，"重組載體"是指可將目標(biāo)多核苷酸序列移入目標(biāo)細(xì)胞中的載體。上迷載體的例子包括可以在原核細(xì)胞、酵母、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、動(dòng)物個(gè)體和植物個(gè)體等的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制，或者插入染色體中，且在適合本發(fā)明的多核苷酸轉(zhuǎn)錄的位置上^^有啟動(dòng)子的載體。本說明書中使用的"終止子"位于基因的編碼蛋白的區(qū)域的下游，是與DNA轉(zhuǎn)錄為mRNA時(shí)轉(zhuǎn)錄的終止、polyA序列的附加有關(guān)的序列。已知終止子與mRNA的穩(wěn)定性有關(guān)、對(duì)于棊因的表達(dá)量有影響。終止子例如有CaMV35S終止子、胭脂氨酸合成酶基因的終止子(Tons)、煙草PRla基因的終止子，但并不限于此。本說明書中使用的"啟動(dòng)子"是指確定基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、并且直接調(diào)節(jié)其頻率的DNA的ORF內(nèi)的區(qū)域，是RNA聚合酶與之結(jié)合、起始轉(zhuǎn)錄的堿基序列。啟動(dòng)子的區(qū)域通常大多為推定蛋白編碼區(qū)域的第1外顯子上游約2kbp以內(nèi)的區(qū)域，因此，使用DNA分析軟件預(yù)測(cè)基因組磁J^序列中的蛋白編碼區(qū)域，則可以推定啟動(dòng)子區(qū)域。推定啟動(dòng)子區(qū)域隨每個(gè)結(jié)構(gòu)基因而有所變動(dòng)，通常位于結(jié)構(gòu)基因的上游，但并不限于此，也可能位于結(jié)構(gòu)基因的下游。優(yōu)選推定啟動(dòng)子區(qū)域存在于第1外顯子翻譯起始位點(diǎn)上游約2kbp以內(nèi)。本說明書中，本發(fā)明的啟動(dòng)子的表達(dá)是"構(gòu)成性的"，這是指在生物的所有的組織中，在該生物的發(fā)生的任意階段都以大致定量進(jìn)行表達(dá)的性質(zhì)。具體來說，在與本說明書實(shí)施例同樣的條件下進(jìn)行RNA印跡分析時(shí)，例如在任意時(shí)間點(diǎn)(例如兩個(gè)點(diǎn)以上(例如第5天和第15天))的相同或?qū)?yīng)的部位均可見同等程度的表達(dá)量，此時(shí)，在本發(fā)明的定義中，稱表達(dá)為構(gòu)成性的?？梢哉J(rèn)為構(gòu)成性啟動(dòng)子在通常的生長環(huán)境中在維持生物的恒態(tài)穩(wěn)定性方面發(fā)揮作用。這些性質(zhì)可通過由生物的任意部分提取RNA,通過RNA印跡分析來分析表達(dá)量；或者通過蛋白質(zhì)印跡法對(duì)表達(dá)的蛋白進(jìn)行定量來確定。"增強(qiáng)子"是用于提高目標(biāo)基因的表達(dá)效率而使用的。在動(dòng)物細(xì)胞中使用時(shí)，增強(qiáng)子優(yōu)選^^有SV40啟動(dòng)子內(nèi)上游一側(cè)的序列的增強(qiáng)子區(qū)域。增強(qiáng)子可使用多個(gè)，但也可以使用一個(gè)，或不《吏用。在本說明書中使用時(shí)，"可動(dòng)作地連接"是指所需的序列的表達(dá)(動(dòng)作)配置在某種轉(zhuǎn)錄翻譯調(diào)節(jié)序列(例如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等)或翻譯調(diào)節(jié)序列的控制下。為了使啟動(dòng)子與基因可動(dòng)作地連接，通常在該基因的緊靠上游配置啟動(dòng)子，但也未必相鄰配置。在本發(fā)明中使用時(shí)，如無特別說明，術(shù)語"轉(zhuǎn)化，'、"轉(zhuǎn)導(dǎo)"和"轉(zhuǎn)染，，可以互換使用，是指向宿主細(xì)胞中導(dǎo)入核酸。轉(zhuǎn)化方法只要是可以向宿主細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入DNA的方法均可使用，例如有電穿孔法、使用基因槍的方法、磷酸鈞法等各種周知的技術(shù)。"轉(zhuǎn)化體"是指通過轉(zhuǎn)化制備的細(xì)胞等的生命體的全部或一部分。轉(zhuǎn)化體可例舉原核細(xì)胞、酵母、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞等。轉(zhuǎn)化體與其對(duì)象相關(guān)，也稱作轉(zhuǎn)化細(xì)胞、轉(zhuǎn)化組織、轉(zhuǎn)化宿主等，本說明書中包含所有這些形態(tài)，是指在特定的語義中指特定的形態(tài)。原核細(xì)胞有屬于埃希氏桿菌屬(Es&erjc/K'a)、沙雷氏菌屬(<Se;r#a)、芽孢桿菌屬(5"<///"》、短桿菌屬(5rew'6c7"er/"附)、棒狀4干菌屬(Cw>>etocfm'Mm)、微桿菌屬(M/cro&acfen'MW)、假單孢菌屬(戶《e說/owo"as)等的原核細(xì)胞，例如有大腸桿菌CEscten'c似"co//)XLl-blue、大腸桿菌XL2-blue、大腸桿菌DH1、大腸桿菌MC1000、大腸桿菌KY3276、大腸桿菌W1485、大腸桿菌JM109、大腸桿菌HBIOI、大腸桿菌No.49、大腸桿菌W3110、大腸桿菌NY49、大腸桿菌BL21(DE3)、大腸桿菌BL21(DE3)pLysS、大腸桿菌HMS174(DE3)、大腸桿菌HMS174(DE3)pLysS、無花果沙雷氏菌OSe/raft'fl力cfl^a)、居泉沙雷氏菌(5ferraft'fl々加'co/a)、液化沙雷氏菌(&rraft'a/^^e》de")、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serraft'a附arcesce"s)、枯草芽孢桿菌(5ac飾《s由/嗣、解淀粉芽孢桿菌(5""7/w《fl/wjW^—dmy),產(chǎn)氨短桿菌(firev邊ac^en'WKo附附附o附'agewes)、JSreW&acten'ww/wwan'op/w7"wATCC14068、解糖短桿菌(5/^v訪"cfen'wmj(3cc/zaro/j^'cw附)ATCC14066、谷氛酸才奉狀軒菌(Cto^"e6acten'M附g/wtom'c"附)ATCC13032、谷氨酸棒狀桿菌(O0^eftflcfeWw附g/Mto附/cw傷)ATCC14067、谷氨酸棒狀桿菌(OvTW功acfen'w附g/wtowicw/n)ATCC13869、嗜乙酰乙酸棒狀桿菌(Ovy"e&a;ter/w附orceto"c/fifo//H7w附)ATCC13870、嗜氨微桿菌(M/c/*o6acte"'"wa附mowz'a;A!'/ww)A丁GG15354、假單抱菌屬的一種CP《ewcto加owaysp.)D-0110等。動(dòng)物細(xì)胞例如有人MRC-5細(xì)胞、人HEL細(xì)胞、人WI-38細(xì)胞、小鼠骨髓瘤細(xì)胞、大鼠骨髓瘤細(xì)胞、人骨髓瘤細(xì)胞、小鼠雜交瘤細(xì)胞、中國倉鼠的細(xì)胞-CHO細(xì)胞、BHK細(xì)胞、非洲綠猴腎細(xì)胞、人白血病細(xì)胞、HBT5637(日本特開昭63-299)、人直腸癌細(xì)胞株等。小鼠骨髓瘤細(xì)胞可例舉ps20、NSO等，大鼠骨髓瘤細(xì)胞可例舉YB2/0等，人胚胎腎細(xì)胞可例舉HEK293(ATCC:CRL-1573)等，人白血病細(xì)胞可例舉BALL-1等，非洲綠猴腎細(xì)胞可例舉C0S-1、C0S-7、Vero細(xì)胞，人直腸癌細(xì)胞林可例舉HCT-15等。本說明書中，"動(dòng)物，，在該領(lǐng)域中以最廣義使用，包含脊推動(dòng)物和無脊推動(dòng)物。動(dòng)物例如有哺乳綱、鳥綱、爬蟲綱、兩棲綱、魚綱、昆蟲綱、蠕蟲綱等，但并不限于此。本說明書中，生物的"組織，，是細(xì)胞的集團(tuán)，在該集團(tuán)中具有一定的同樣的作用。因此，組織可以是器官的一部分。器官內(nèi)，大多具有具相同功能的細(xì)胞，但也有具有稍有差異的功能的細(xì)胞混雜其中，因此，本說明書中，組織只要是共有一定的特性即可，可以混有各種細(xì)胞。本說明書中，"器官，，是指具有一個(gè)獨(dú)立的形態(tài)，1種以上的組織組合，形成可發(fā)揮特定功能的結(jié)構(gòu)體。植物中，例如有愈傷組織、根、莖、干、葉、花、種子、胚芽、胚、果實(shí)等，但并不限于此。動(dòng)物中，例如有胃、肝臟、腸、胰臟、肺、氣管、鼻、心臟、動(dòng)脈、靜脈、淋巴結(jié)(淋巴系統(tǒng))、胸腺、卵巢、眼、耳、舌、皮膚等，但并不限于此。本說明書中，"轉(zhuǎn)基因，，是指將特定的基因插入到某種生物中或者是插入了上述基因的生物(例如包含植物或動(dòng)物(小鼠等))。本發(fā)明的生物為動(dòng)物時(shí)，轉(zhuǎn)基因生物可以使用利用了微注射法、病毒載體法、ES細(xì)胞法(胚性干細(xì)胞法)、精子栽體法、導(dǎo)入染色片段的方法(transsomicmethod)、游離體法等的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備技術(shù)制備。上述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備技術(shù)是該領(lǐng)域所周知的。在本說明書中使用時(shí)，"篩選"是指通過特定的操作和/或評(píng)價(jià)方法，從很多候選中選出具有作為目標(biāo)的特定性質(zhì)的物質(zhì)或宿主細(xì)胞或者病毒等。本發(fā)明中，應(yīng)理解為通過具有所需活性的篩選而得到的病毒也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本說明書中，"芯片"或"微芯片，，是指可以互換使用，是指具有多種功能、成為系統(tǒng)的一部分的超小型集成電路。芯片例如有DNA芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片等，但并不限于此。本"^兌明書中，"陣列"是指舍有1以上(例如1000以上)的靶物質(zhì)的組合物(例如，DNA、蛋白質(zhì)、細(xì)胞)整齊排列配置的圖案，或具有圖案的差4良(例如芯片)。陣列中，在小基板(例如10x10mm上等)上圖案化的稱為微陣列，本說明書中，"微陣列"與"陣列"可互換使用。因此，在比上述基板大的基板上圖案化的也可以稱作微陣列。例如，陣列由其本身固定在固相表面或膜上的所需的轉(zhuǎn)染混合物組構(gòu)成，陣列優(yōu)選至少含有102個(gè)、更優(yōu)逸至少103個(gè)、進(jìn)一步優(yōu)選至少104個(gè)、更進(jìn)一步優(yōu)逸至少105個(gè)含有相同的或者不同的病毒的細(xì)胞。這些細(xì)胞優(yōu)選配置在表面為125x80mm、更優(yōu)選10x10mm_h。，車歹'j伊J96孑L微量滴定板、384孔微量滴定板、載玻片大小的微量滴定板等，但并不限于此。被固定的組合物可以含有l(wèi)種或多種耙物質(zhì)。上述耙物質(zhì)種類的數(shù)目可以是1個(gè)至樣點(diǎn)數(shù)的任意范圍。例如可以固定含有約10種、約100種、約500種、約1000種把物質(zhì)的組合物。如上所述，可在基板等的固相表面或膜上配置任意數(shù)目的把物質(zhì)(例如，細(xì)胞等生物體分子)，但通常一個(gè)基板上可最多配置108個(gè)生物體分子，在其它的實(shí)施方案中，最多可配置107個(gè)生物體分子、106個(gè)生物體分子、105個(gè)生物體分子、104個(gè)生物體分子、103個(gè)生物體分子、102個(gè)生物體分子，也可以配置含有超過108個(gè)生物體分子的乾物質(zhì)的組合物，這種情況下，優(yōu)選基板的大小更小。特別是含有耙物質(zhì)的組合物(例如，細(xì)胞)的點(diǎn)樣大小可以是與單一的生物體分子尺寸同樣小(這可以是1~2nm級(jí))。在某些情況下，最小限的基仗面積可根椐基板上生物體分子數(shù)目確定。陣列上可以配置生物體分子的"樣點(diǎn)"。本說明書中，",點(diǎn)"是指含有靶物質(zhì)的組合物的一定的集合。本說明書中，"點(diǎn)樣"是指將含有某種靶物質(zhì)的組合物的樣點(diǎn)制作在基板或板上。點(diǎn)樣可以按任何方法進(jìn)行，例如可通過移液操作等實(shí)現(xiàn)，或者通過自動(dòng)裝置進(jìn)行，上述方法是本領(lǐng)域所周知的。本說明書中使用的術(shù)語"地址"是指絲上的獨(dú)特的位置，可以與其它獨(dú)特位置辨別。地址與伴隨著該地址的樣點(diǎn)相關(guān)較為適當(dāng)，所有的各個(gè)地址上的存在物可以與其它地址上的存在物識(shí)別(例如，光學(xué)上)，可以采用任意的形狀。規(guī)定地址的形狀例如可以是圓狀、楠圃狀、正方形、長方形、或者是不規(guī)則形狀。罔此，"地址，，表示抽象的概念，"樣點(diǎn)"表示具體的概念，無需將兩者區(qū)別時(shí)，本說明書中"地址"和"樣點(diǎn)"可互換4吏用。規(guī)定了各個(gè)地址的尺寸依賴于基板的大小、特定基板上的地址數(shù)目、含有靶物質(zhì)的組合物的量和/或可利用的試劑、微粒的尺寸以及該陣列所采用的任意方法所必須的分辨率程度。大小例如可以是1~2nra至數(shù)cm的范圍，可以是與其陣列的適用一致的任意大小。規(guī)定地址的空間配置和形狀可以設(shè)計(jì)成適合于該微陣列所使用的特定的用途。地址可以緊密配置，常用的較為分歉，或者對(duì)于特定類型的分析物進(jìn)行亞組分組，制成所希望的圖案。在本說明書中使用時(shí)，"支撐體"是指可以擔(dān)栽細(xì)胞、細(xì)菌、病毒、多核苷酸或多肽的物質(zhì)。支撐體的材料可以是滿足下述條件的任意的固體材料，為共價(jià)鍵或者非共價(jià)鍵的任意形式，具有與本發(fā)明中所使用的細(xì)胞等結(jié)合的特性，或者可誘導(dǎo)至具有上述特性。作為支撐體4吏用的材料可以4吏用形成固體表面的任意的物質(zhì)，例如有玻璃、砝石、硅、陶瓷、二氧化硅、塑料、金屬(也包括合金)、天然和合成的聚合物(例如聚苯乙烯、纖維素、殼聚糖、葡聚糖和尼龍)，但并不限于此。優(yōu)選支撐體舍有進(jìn)行疏水性結(jié)合的部分。支撐體可以由多種不同材料的層形成。例如可使用玻璃、石英玻璃、氧化鋁、藍(lán)寶石、硅灰石、碳化硅、氧化珪、氮化硅等無機(jī)材料，還可以使用聚乙烯、乙烯、聚丙烯、聚異丁烯、聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯、不飽和聚酯、含氟樹脂、聚氯乙烯、聚偏氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇、聚乙烯縮醛、丙烯酸類樹脂、聚丙烯腈、聚苯乙烯、縮趁樹脂、聚碳酸酯、聚酰胺、酚醛樹脂、尿素樹脂、環(huán)氧樹脂、三聚氰胺樹脂、苯乙烯/丙烯腈共聚物、丙烯腈丁二烯苯乙烯共聚物、有機(jī)硅樹脂、聚苯醚、聚砜等有機(jī)材料?；蛘撸误w可以使用硝基纖維素膜、尼龍膜、PVDF膜等在印跡法中使用的膜。本發(fā)明的水痘帶狀皰發(fā)病毒可以作為感染癥的處置、預(yù)防和/或治療的藥物組合物的成分使用。本說明書中，藥物的"有效量"是指該藥物可以發(fā)揮目標(biāo)藥效的量。本說明書中，上述有效量中，將最低濃度稱為最低有效量。上迷最低有效量在該領(lǐng)域中是周知的，通常藥物的最低有效量由技術(shù)人員確定，或者技術(shù)人員可適當(dāng)確定。上述有效量的確定除實(shí)際給予之外，還可以采用模型動(dòng)物等。本發(fā)明還可用于確定上迷有效量。本說明書中，"藥學(xué)上可接受的載體"是指制備醫(yī)藥或動(dòng)物藥等農(nóng)藥時(shí)所使用的物質(zhì)，是指對(duì)有效成分沒有有害影響的載體。上述藥學(xué)上可接受的載體例如有以下，但并不限于此抗氧化劑、防腐劑、著色劑、風(fēng)味劑、以及稀釋劑、乳化劑、懸浮劑、溶劑、填料、增量劑、緩沖劑、遞送栽體、賦形劑和/或農(nóng)學(xué)上或藥學(xué)上的佐劑。本發(fā)明的處置方法中使用的藥物的種類和量可根據(jù)由本發(fā)明的方法所得的信息(例如，疾病的相關(guān)信息)，考慮使用目的、對(duì)象疾病(種類、嚴(yán)重程度等)、患者的年齡、體重、性別、既往史、所給予的被檢體的部位的形態(tài)或種類等，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定。對(duì)被檢體(或患者)實(shí)施本發(fā)明的監(jiān)控方法的頻率還可考慮使用目的、對(duì)象疾病(種類、嚴(yán)重程度等)、患者的年齡、體重、性別、既往史和治療過程等，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定。監(jiān)測(cè)疾病狀態(tài)的頻率例如是每天至數(shù)月一次(例如，一周一次至一個(gè)月一次)的監(jiān)測(cè)。優(yōu)逸一周至一個(gè)月一次的監(jiān)測(cè)i^f見察過程邊實(shí)施。本說明書中，"使用說明書"是對(duì)醫(yī)生、患者等進(jìn)行給予的人記述本發(fā)明的治療方法的文件。該使用說明書可以記栽例如要求在放射線治療直后或者治療直前(例如，24小時(shí)以內(nèi)等)給予本發(fā)明的藥物等的文字。該使用說明書按照實(shí)施本發(fā)明的國家的監(jiān)督機(jī)構(gòu)(例如，日本為厚生勞動(dòng)省，美國為食品藥品管理局(FDA)等)所規(guī)定的樣式制成，并明確標(biāo)記得到了該監(jiān)督機(jī)構(gòu)的承認(rèn)。使用說明書是所謂的內(nèi)附文件(包裝說明書)，通常以書面形式提供，但并不限于此，例如也可以以電子形式(例如通過互聯(lián)網(wǎng)提供的主頁、電子郵件)等形式提供。根據(jù)需要，在本發(fā)明的治療中可以使用2種以上的藥物。使用2種以上藥物時(shí)，這些藥物可以使用具有類似的性質(zhì)或來源類似的物質(zhì)，也可以使用具有不同的性質(zhì)或來源不同的藥物。關(guān)于給予上述2種以上的藥物的方法的疾病水平的信息也可以通過本發(fā)明的方法獲得。本發(fā)明中，關(guān)于類似的種類(例如，與人相對(duì)應(yīng)的小鼠等)的生物、培養(yǎng)細(xì)胞、組織等，當(dāng)某種特定的糖鏈結(jié)構(gòu)分析結(jié)果與疾病水平相關(guān)時(shí)，對(duì)應(yīng)的糖鏈結(jié)構(gòu)的分析結(jié)果可以與疾病水平建立相關(guān)關(guān)系，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解的。上述事項(xiàng)例如在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)、瀨野等人編著、共立出版、1993年等中記栽，本說明書中也引用其全部記栽。(本說明書中使用的常規(guī)技術(shù))本說明書中使用的常規(guī)技術(shù)如果沒有具體指示，都是使用在該領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的糖鏈科學(xué)、射流技術(shù)、微細(xì)加工、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、基因工程、分子生物學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)和相關(guān)領(lǐng)域所周知的常用的技術(shù)。上述技術(shù)例如可在以下例舉的文獻(xiàn)和本說明書中其它場(chǎng)合所引用的文獻(xiàn)中均有充^i兌明。精細(xì)加工例如在Campbell,S.A.(1996).TheScienceandEngineeringofMicroelectronicFabrication,OxfordUniversityPress(牛津大學(xué)出版社)；Zaut,P.V.(1996).MicromicroarrayFabrication:aPracticalGuidetoSemiconductorProcessing,SemiconductorServices;Madou，M.J.(1997).FundamentalsofMicrofabrication,CRC15Press;Rai-Choudhury,P.(1997).HandbookofMicro她ography,Micromachining,&Microfabrication:Microlithography等中有記載,其中的相關(guān)部分也作為參考被引用進(jìn)本說明書中。本說明書中所采用的分子生物學(xué)的方法、生物化學(xué)方法、微生物學(xué)方法、糖鏈科學(xué)的方法是本領(lǐng)域所周知且常用的，例如在Maniatis，T.，等人.(1989).MolecularCloning(分子克隆)ALaboratoryManual(實(shí)驗(yàn)室指南),ColdSpringHarbor及其第3版(2001);Ausubel,F.M.,等人.eds，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&SonsInc.,NY，10158(2000);Innis，M.A.(19卯).PCRProtocols:AGuidetoMethodsandApplications,AcademicPress(美國學(xué)術(shù)出版S土)；Innis,M.A,等人.(1995).PCRStrategies,AcademicPress;Sninsky，J丄等人，(1999).PCRApplication:ProtocolsforFunctionalGenomics,AcademicPress;Gait,M丄(1985).OligonucleotideSynthesis:APracticalApproach,IRLPress;Gait,M.J.(1990).OligonucleotideSynthesis:APraticalApproach,IRLPress;Eckstein,F.(1991).OligonucleotideandAnalogues:APracticalApproach,IRLPress;Adams,RX.等人(1992).TheBiochemistryoftheNucleicAcids，Chapman&Hall;Shabarova,Z.等人.(1994).AdvancedOrganicChemistryofNucleicAcids,Weinheim;Blackburm，G.M.等人.(1996).NucleicAcidsinChemistryandBiology,OxfordUniversityPress;Herm肌son，G.T.(1996),BioconjugateTechniques,AcademicPress;MethodinEnzymology230、242、247,AcademicPress,1994;別冊(cè)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)"遺伝子導(dǎo)入&幾現(xiàn)解析実験法(基因?qū)?amp;表達(dá)分析實(shí)驗(yàn)法)"羊土社、1997等中有記載，它們的相關(guān)部分(也可能是全部)均作為參考引用到本說明書中。(優(yōu)選實(shí)施方案的說明)以下，記載了優(yōu)選實(shí)施方案的說明，但該實(shí)施方案只是本發(fā)明的例舉，應(yīng)理解本發(fā)明的范圍只通it^利要求范圍的限定并不受上述優(yōu)選實(shí)施方案的限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員參考本說明書，可以容易地進(jìn)行本發(fā)明的范圍內(nèi)的改變、變更等。本發(fā)明的一個(gè)方案提供重組水痘帶狀皰瘆病毒。優(yōu)選該水痘帶狀皰滲病毒在其基因組序列中含有BAC載體序列。通,建含有BAC載體序列的水痘帶狀皰滲病毒基因組，可以以BAC分子的形式在細(xì)菌內(nèi)處理水痘帶狀皰滲病毒基因組。所使用的BAC載體序列優(yōu)選含有來自F質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)，也可以是來自F質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)以外的序列，只要是作為細(xì)菌人工染色體可在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)保持并增殖300kb以上的序列即可，可以利用任意的復(fù)制起點(diǎn)。本發(fā)明的BAC載體可在細(xì)菌宿主細(xì)胞、優(yōu)選大腸桿菌細(xì)胞中保持和/或擴(kuò)增。優(yōu)選該BAC載體的一部分插入到水痘帶狀皰滲病毒基因組的非必需區(qū)域內(nèi)，可以以舍有水痘帶狀皰滲病毒基因組的BAC的形式操作。含有該水痘帶狀皰疹病毒基園組的BAC導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中時(shí)，可以生產(chǎn)并增殖重組水痘帶狀皰滲病毒。重組水痘帶狀皰療病毒的宿主細(xì)胞可以使用野生型水痘帶狀皰滲病毒林可增殖的任意的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。優(yōu)選該宿主細(xì)胞來自人，但并不限于此，例如有人MRC-5細(xì)胞、人HEL細(xì)胞、人WI-38細(xì)胞。(多價(jià)疫苗)本發(fā)明的BAC可以舍有編碼除了由水痘帶狀皰滲病毒基因組所編碼的蛋白質(zhì)以外的任意的抗原蛋白的基因。對(duì)抗原蛋白并沒有特別限定，但優(yōu)選水痘帶狀皰滲病毒以外的病毒的蛋白質(zhì)，結(jié)果，本發(fā)明可以提供多價(jià)疫苗。作為抗原蛋白來源的、水痘帶狀皰疹病毒以外的病毒例如有選自腮腺炎病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、西尼羅病毒、流感病毒、SARS冠狀病毒和日本腦炎病毒的病毒，但并不限于此。在一個(gè)方案中，水痘帶狀皰疹病毒以外的病毒例如有選自腮腺炎病毒、麻滲病毒和風(fēng)滲病毒的病毒，但并不限于此。在另一方案中，舍有水痘帶狀皰瘆病毒基因組的單一的BAC載體含有腮腺炎病毒的基因、麻參病毒的基因和風(fēng)瘆病毒的基因。優(yōu)選腮腺炎病毒的基因選自HN基因、H基因和N基因。優(yōu)選麻滲病毒的基因選自H基因、F基因和N基因。優(yōu)選風(fēng)滲病毒的基因選自C基因、E1基因和E2基因。優(yōu)選流感病毒的基因?yàn)镠A基因。優(yōu)選SARS冠狀病毒的基因?yàn)镾(突起)基因。優(yōu)選西尼羅病毒的基因選自Pr基因和E基因。優(yōu)選日本腦炎病毒的基因選自Pr基因和E基因。這些病毒基因是公知的，因此使用PCR法和雜交法等周知的技術(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以分離這些病毒的基因。(舍有水痘帶狀皰滲病毒基因組的BAC載體的制備方法)使用水痘帶狀皰滲病毒基因組和BAC栽體，制M有水痘帶狀皰滲病毒基因組的BAC栽體，這可以使用各種周知的方法(采用同源重組的方法等)。采用同源重組的方法例如有使用具有將與水痘帶狀皰疹病毒基因組同源的序列連接的環(huán)狀BAC載體序列的核酸的方法。使用具有將與水痘帶狀皰疹病毒基因組同源的序列連接而成的環(huán)狀BAC栽體序列的核酸的、制名"^有水痘帶狀皰疹病毒基因組的BAC載體的方法的代表性例子包含以下步驟(l)將該核酸與水痘帶狀皰滲病毒基因組一起導(dǎo)入宿主內(nèi)(例如，人抹化細(xì)胞內(nèi))；(2)培養(yǎng)宿主細(xì)胞，在與環(huán)狀BAC載體序列連接的同源序列和水痘帶狀皰疹病毒基因組序列之間發(fā)生同源重組；(3)選擇通過該同源重組產(chǎn)生的、含有插入了BAC載體序列的水痘帶狀皰滲病毒基因組序列的宿主細(xì)胞；(4)培養(yǎng)該宿主細(xì)胞，提取環(huán)狀病毒DNA。為了使用水痘帶狀皰滲病毒基因組和BAC序列制備含有水痘帶狀皰滲病毒基因組的BAC，無需使用同源重組，也可以采用用核酸的限制酶片段等的各種公知的方法，在水痘帶狀皰滲病毒基因組內(nèi)，用于導(dǎo)入BAC載體序列的非必需區(qū)域可選自以下區(qū)域基因13的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與基因11的ORF相鄰的區(qū)域、與基因12的ORF相鄰的區(qū)域、與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域和與基因58的ORF相鄰的區(qū)域、以及基因56、57、58相連續(xù)的區(qū)域。優(yōu)選該非必需區(qū)域?yàn)榛?3的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域、與基因58的ORF相鄰的區(qū)域、以及基因56、57、58相連續(xù)的區(qū)域。這是由于本發(fā)明中明確了，基因13、基因56、基因58、基因56、57、58相連續(xù)的區(qū)域即使在水痘帶狀皰療病毒基因組上發(fā)生缺損，也不會(huì)對(duì)病毒的增殖產(chǎn)生影響?；蛘?，BAC載體序列的一部分可以插入到水痘帶狀皰滲病毒基因組的基因62的ORF內(nèi)的區(qū)域。本發(fā)明中使用的BAC載體序列優(yōu)選含有重組蛋白依賴性重組序列和/或含有選擇標(biāo)志。優(yōu)選選擇標(biāo)志序列為藥物選擇標(biāo)志和/或編碼綠色熒光蛋白的基因。這是由于可以簡便地確認(rèn)所需的基因的存在。本發(fā)明中，作為起始物質(zhì)使用的水痘帶狀皰滲病毒可以來自野生林，也可以來自變異株。優(yōu)選作為起始物質(zhì)的水痘帶狀皰瘆病毒使用減毒的病毒，例如Oka疫苗林或在基因62具有變異的水痘帶狀皰滲病毒。減毒的水痘帶狀皰滲病毒例如可以是具有選自以下的基因62的1或多個(gè)變異的組合的病毒(a)2110位堿基置換為G;(b)3100位石tt置換為G;(c)3818位堿基置換為C;(d)4006位堿基置換為G;(e)i251偉4tt置換為G;⑦2226位堿基置換為G;(g)3657位堿基置換為G。(h)162位堿基置換為C;(i)225位堿基置換為C;(0523位堿基置換為C;(k)1565位威基置換為C;(1)1763位堿基置換為C;(m)2652位堿基置換為C;(n)4052位堿基置換為C;和(o)4193位堿基置換為C。本發(fā)明的另一方案中，還提供用于制備上述病毒的載體、和上述病毒的制備方法。本發(fā)明的另一方案中，可提供舍有上述病毒的藥物組合物和疫苗形式的藥物組合物。本發(fā)明的重組水痘帶狀皰滲病毒可用作疫苗。這是由于它含有很多與野生型病毒具有同樣的結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的另一方案提供向用于生產(chǎn)本發(fā)明的疫苗的栽體中導(dǎo)入變異的方法。該方法包含以下步驟將該載體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)胞中的步驟；將含有由水痘帶狀皰瘆病毒基因組的一部分形成的片段的質(zhì)粒載體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，這里,該片段至少具有一個(gè)變異；培養(yǎng)該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；由該培養(yǎng)的細(xì)菌宿主細(xì)胞中分離具有BAC載體序列的載體的步驟。上述方法中，在細(xì)菌宿主細(xì)胞內(nèi)，在用于生產(chǎn)本發(fā)明疫苗的載體和含有由水痘帶狀皰滲病毒基因組的一部分形成的片段的質(zhì)粒載體之間發(fā)生同源重組，結(jié)果，用于生產(chǎn)本發(fā)明的疫苗的載體具有由水痘帶狀皰瘆病毒基因組的一部分形成的片段上的變異。上述方法中，將載體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟可以使用電穿孔等各種周知的方法。同樣，可以將含有由水痘帶狀皰瘆病毒基因組的一部分形成的片段的質(zhì)粒栽體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)胞中。另外，作為向該片l更導(dǎo)入變異的方法，使用PCR的變異導(dǎo)入法是周知的，例如，在四個(gè)核苷酸中有一個(gè)缺少的奈件下使用不具有校正功能的耐熱性聚合酶，由此可以隨機(jī)誘變。另外，通過使用變異磁基序列的引物進(jìn)行PCR,可以向所需位置導(dǎo)入所需變異。通過培養(yǎng)該細(xì)菌細(xì)胞，可以在用于生產(chǎn)本發(fā)明的疫苗的載體和含有由水痘帶狀皰滲病毒基因組的一部分形成的片段的質(zhì)粒載體之間發(fā)生同源重組，結(jié)果，用于生產(chǎn)本發(fā)明的疫苗的載體具有由水痘帶狀皰疹病毒基因組的一部分形成的片段上的變異。由細(xì)菌宿主細(xì)胞制備BAC載體序列時(shí)，可以使用堿法等各種周知的方法和市售的試劑盒。本發(fā)明的另一方案中，可以進(jìn)一步提供向用于生產(chǎn)本發(fā)明的疫苗的載體中導(dǎo)入變異的方法。該方法包含以下步驟將該載體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)胞中的步驟；將含有由水痘帶狀皰瘆病毒基因組的一部分形成的第1片段的第l質(zhì)粒載體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中，該第1片段至少具有一個(gè)變異；將含有由水痘帶狀皰滲病毒基因組的一部分形成的第2片段的第2質(zhì)粒栽體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中，該第2片段至少具有一個(gè)變異，該笫2片段與該第1片段不同；培養(yǎng)該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；由該培養(yǎng)的細(xì)菌宿主細(xì)胞中分離具有BAC載體序列的載體的步驟。本發(fā)明的一個(gè)方案中，可以提供可在制備本發(fā)明的疫苗中使用的核酸盒。該核酸盒優(yōu)選含有在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)可以與水痘帶狀皰滲病毒基因組同源重組的第1片段、BAC載體序列、在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)可與人水痘帶狀皰滲基因組同源重組的第2片段，其中，該BAC序列的兩端分別與第1片段和第2片段連接。這里，第1片段和第2片段優(yōu)選至少為1kb、至少1.5kb、至少2kb。該第1片段和第2片段相對(duì)于水痘帶狀皰滲病毒基因組的序列優(yōu)選至少為80%同一、至少85%同一、至少90%同一、至少95°/。同一。優(yōu)逸上述第l和第2片段各自獨(dú)立，來自選自水痘帶狀皰滲病毒基罔組的下述區(qū)域的區(qū)域，或者與選自下述區(qū)域的區(qū)域至少為80%、85%、90%、95%同一基因13的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與基因11的ORF相鄰的區(qū)域、與基因12的ORF相鄰的區(qū)域、與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域和與基因58的ORF相鄰的區(qū)域。優(yōu)選該第l和第2片段來自水痘帶狀皰疹病毒基因組的不同的區(qū)域。該第l和第2片段各自獨(dú)立，可以來自基因13的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與基因11的ORF相鄰的區(qū)域、與基因12的ORF相鄰的區(qū)域、與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域和與基因58的ORF相鄰的區(qū)域。為了控制同源重組、簡便地檢測(cè)所需的基因，優(yōu)選BAC載體序列含有重組蛋白依賴性重組序列和/或選擇標(biāo)志。該逸擇標(biāo)志可以是藥物選擇標(biāo)志，也可以是編碼像緣色熒光蛋白那樣的熒光蛋白的基因。該BAC栽體序列的代表性的是具有SEQIDN0.3所示的核酸序列。(變異型重組水痘帶狀皰滲病毒的制備)使用本發(fā)明的方法，可以筒便地制備具有誘變的水痘帶狀皰滲病毒基因組的變異型水痘帶狀皰滲病毒。上述誘變例如可采用以下方法進(jìn)行向大腸桿菌內(nèi)導(dǎo)入(a)VZV-BAC-DNA質(zhì)粒、以及(b)作為變異核酸，具有任意變異、具有水痘帶狀皰滲病毒基因組的部分序列的穿梭栽體或PCR產(chǎn)物。VZV-BAC-DNA質(zhì)粒與其變異核酸之間發(fā)生重組，由此可以向VZV-BAC-DNA質(zhì)粒中導(dǎo)入變異。另外通過使用轉(zhuǎn)座子，也可以隨機(jī)誘變。導(dǎo)入了變異的VZV-BAC-DNA質(zhì)?？稍诖竽c桿菌內(nèi)容易地進(jìn)行選擇和擴(kuò)增。由具有變異的VZV-BAC-DNA生產(chǎn)病毒，由此可以獲得重組水痘帶狀皰滲病毒(MarkusWagner，TRENDSinMierobilogy,10巻,No.7,2002年7月)。其具體例子如下。(1)使用含有變異水痘帶狀皰發(fā)病毒基因作為變異核酸的溫度感受性穿梭栽體時(shí)首先，將穿梭栽體和VZV-BAC-DNA質(zhì)粒經(jīng)由第1同源區(qū)域重組，生產(chǎn)穿梭載體與VZV-BAC-DNA質(zhì)粒連接而成的共插入體。接著，由于穿梭載體的復(fù)制起點(diǎn)具有溫度感受性，由此除去穿梭質(zhì)粒。在第2重組的情形中，除去共插入的部分。第2重組的情形經(jīng)由笫1同源區(qū)域發(fā)生時(shí)，生成與重組中所使用的VZV-BAC-DNA具有同一序列的質(zhì)粒。與此相對(duì)，第2重組的情形經(jīng)由與第1同源區(qū)域不同的第2同源區(qū)域發(fā)生時(shí)，可得到具有穿梭載體上的變異的變異型VZV-BAC-DNA質(zhì)粒。第1同源區(qū)域和第2同源區(qū)域?yàn)榇笾孪嗤L度時(shí)，第2重組的情形在笫2同源區(qū)域發(fā)生的概率與第2重組的情形在第1同源區(qū)域發(fā)生的概率大致相同。因此，所得的VZV-BAC-DNA質(zhì)粒的約二分之一是具有與在重組中使用的序列為同一序列的質(zhì)粒，是約二分之一具有導(dǎo)入到穿梭載體中的變異的質(zhì)粒。(2)使用線性DNA片段時(shí)該方法中，例如采用來自原噬菌體Rac的recET的重組功能，或者利用來自噬菌體X的redap重組功能，使用線性DNA片段，向環(huán)狀VZV-BAC-DNA分子中導(dǎo)入變異。具體來說，將與粑序列相鄰的選擇標(biāo)志和含有同源序列的線性DNA片段與VZV-BAC-DNA—起導(dǎo)入到可以發(fā)生同源重組的大腸桿菌中。為了避免線性DNA在大腸桿菌內(nèi)的分解，優(yōu)選使用外切核酸^損的大腸桿菌，或者是使來自嗛菌體的外切核酸酶抑制劑redy(gam)表達(dá)。線性DNA是在其兩端具有與VZV-BAC-DNA質(zhì)粒同源的區(qū)域。經(jīng)由該同源區(qū)域發(fā)生同源重組，由此可以將線性DNA片段內(nèi)的所需序列導(dǎo)入到VZV-BAC-DNA內(nèi)。recET和redctp經(jīng)由具有25~50個(gè)核苷酸左右長度的同源序列顯示同源重組，因此，可以比recA中介的同源重組更簡便地使用。(3)使用轉(zhuǎn)座子時(shí)采用轉(zhuǎn)座子元件向大腸桿菌內(nèi)的核酸中隨機(jī)插入的功能。例如，將具有所需外源基因的轉(zhuǎn)座子元件和VZV-BAC-DNA導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)，以便向VZV-BAC-DNA內(nèi)隨機(jī)插入轉(zhuǎn)座子元件，由此獲得具有插入了外源基因的VZV-BAC-DNA。并且，例如將具有向VZV-BAC-DNA的重組水痘帶狀皰瘆病毒的宿主細(xì)胞本身用"^秀變劑(例如，亞硝基胍)處置，由此可以向重組水痘帶狀皰瘆病毒基因組內(nèi)導(dǎo)入隨機(jī)的變異。(處方)本發(fā)明還提供通過對(duì)受試體給予有效量的治療藥、預(yù)防藥來進(jìn)行疾病或障礙(例如，感染癥)的處置和/或預(yù)防的方法。治療藥、預(yù)防藥是指與藥學(xué)上可接受的載體型(例如，無菌載體)組合而成的本發(fā)明的組合物。治療藥、預(yù)防藥可以考慮每位患者的臨床狀態(tài)(特別是用治療藥、預(yù)防藥單獨(dú)處置的副作用)、傳遞部位、給予方法、給予計(jì)劃和本領(lǐng)域所公知的其它因素來給予，以遵守醫(yī)療實(shí)施基準(zhǔn)(GMP-良好醫(yī)療規(guī)范)的方式進(jìn)行處方和給藥。因此，本說明書中，作為目標(biāo)的"有效量，，是依據(jù)上述考慮而確定。作為通常的提案，每日的用量、非口服給予的治療藥、預(yù)防藥的合計(jì)藥學(xué)上的有效量是患者體重的約1ug/kg/天10mg/kg/天的范圍，如上所述，這根據(jù)治療上的裁量。進(jìn)一步優(yōu)選相對(duì)于本發(fā)明的細(xì)胞生理活性物質(zhì)，該用量至少為0.01mg/kg/天，最優(yōu)選每人為約0.01mg/kg/天和約1mg/kg/天之間。連續(xù)給予時(shí)，代表性的方式是以約1^tg/kg/小時(shí)~約50ug/kg/小時(shí)的給藥速度、以每天1~4次注射或者是連續(xù)皮下注射(例如，使用微量泵)的任意方式給予治療藥、預(yù)防藥。也可以使用靜脈內(nèi)用的袋溶液(intravenousbagsolution)。為了觀察變化，必要的處置期間以及產(chǎn)生應(yīng)答的處置后的間隔才艮據(jù)所需效果來變化?？梢詫⒅委熕?、預(yù)防藥以口另艮、直腸內(nèi)、非口J3艮、腦池內(nèi)(intracistemally)、陰道內(nèi)、腹腔內(nèi)、局部(粉劑、軟膏、、輸液劑或透皮貼劑等)、口內(nèi)或經(jīng)口或鼻腔的噴霧的形式給予。"藥學(xué)上可接受的載體，，是指非毒性的固體、半固體或液體的填充劑、稀釋劑、包覆材料或任意形式的處方助劑。本說明書中使用的術(shù)語"非口服"是指包含靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射和注入的給藥方式。本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥可以通iM釋系統(tǒng)適當(dāng)給藥。緩釋性治療藥、預(yù)防藥的適當(dāng)例子可以以口服、直腸內(nèi)、非口服、腦池(intracistemally)、陰道內(nèi)、腹腔內(nèi)、局部(粉劑、軟膏、凝膠、輸液劑或透皮貼劑等)、口內(nèi)或經(jīng)口或者鼻腔的噴霧的形式給予。"藥學(xué)上可接受的載體，，是指非毒性的固體、半固體或液體的填充劑、稀釋劑、包覆材料或任意形式的處方助劑。本說明書中使用的術(shù)語"非口服"是指包含靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射和注入的給藥方式。。由于是非口服給予，在一個(gè)實(shí)施方案中的處方通常是治療藥、預(yù)防藥以所需程度的純度，以單位給藥量可注射的形式(溶液、混懸液或乳濁液)與藥學(xué)上可接受的載體，即，在所使用的給藥量和濃度下對(duì)受體沒有毒性且與處方物的其它成分能夠配合的栽體混合。例如該處方物優(yōu)逸不含有氧化和已知對(duì)治療藥、預(yù)防藥有害的其它化合物。通常，將治療藥、預(yù)防藥與液體載體或微細(xì)分割的固體載體或其兩者均勻緊密接觸，制備處方物。接著，如果需要，可以將生成物成型為所需的處方物。優(yōu)選栽體為非口服的栽體，更優(yōu)選與受體的血液等滲的溶液。上述栽體的例子有水、生理鹽水、林格氏溶液和右旋糖溶液。不揮發(fā)性油和油酸乙酯等非7]c性載體與脂質(zhì)體同樣，也可用于本說明書。載體可以適當(dāng)含有可提高等滲性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)等的微量添加劑。上迷物質(zhì)在所使用的給藥量和濃度下對(duì)受體沒有毒性，上述物質(zhì)例如有磷酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、乙酸及其它有機(jī)酸或其它鹽類等緩沖劑；抗壞血酸等抗氧化劑；低分子量(約比10個(gè)殘基少)的多肽(例如，聚精氨酸或三肽)；血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白等蛋白質(zhì)；聚乙烯吡咯烷酮等親水性聚合物；甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸等氨基酸；含有纖維素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖或糊精的單糖類、二糖類及其它碳水化合物；EDTA等螯合劑；甘露醇或山梨醇等糖醇；鈉的抗衡離子；和/或聚山梨醇酯、泊洛沙姆或PEG等非離子性表面活性劑。在治療性給予中使用的任何藥物，可以是不含有作為有效成分的病毒以外的生物、病毒的狀態(tài)，即為無菌狀態(tài)?？赏ㄟ^無菌濾膜(例如0.2pm的膜)過濾來容易地實(shí)現(xiàn)無菌狀態(tài)。通常，治療藥、預(yù)防藥是裝在具有無菌進(jìn)入孔的容器、例如可用皮下注射針穿刺的帶塞的靜脈內(nèi)用的溶液袋或管形瓶中。治療藥、預(yù)防藥通常是在單位用量或多個(gè)用量容器、例如密封安瓿瓶或管形瓶中，以水溶液或用于重構(gòu)的凍干處方物的形式儲(chǔ)存。凍干處方物的例子有在10mL的管形瓶中填充5mL無菌過濾的1%(w/v)治療藥、預(yù)防藥水溶液，然后將所得混合物凍干。凍干的治療藥、預(yù)防藥用注射用無菌水重構(gòu)，制備注入溶液。本發(fā)明還提供藥品包裝或試劑盒，該藥品包裝或試劑盒具備裝滿了本發(fā)明的治療藥，預(yù)防藥的一種以上成分的一個(gè)以上的容器。政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的藥物或生物學(xué)制品的制備、使用或銷售的認(rèn)證許可可附著于上述容器上，該認(rèn)證許可表示給予人的制造、使用或銷售得到有關(guān)的政府機(jī)構(gòu)的承認(rèn)。并且可以將治療藥、預(yù)防藥與其它治療用化合物組合使用。本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥可以單獨(dú)或者與其它治療藥、預(yù)防藥組合給予?？膳c本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥組合給予的治療藥、預(yù)防藥例如有化學(xué)療法制劑、抗生素、類固醇和非類固醇的抗炎癥劑、以往的免疫治療藥、預(yù)防藥、其它細(xì)胞因子和/或生長因子，但并不限于此。組合例如可以是以混合物的形式同時(shí)；同時(shí)或者并行《旦分別；或者是不同時(shí)間分別給予。這包含組合的藥物以治療用混合物的形式一起給予，以及組合的藥物分別但同時(shí)給予、例如對(duì)同一個(gè)體通過不同的靜脈導(dǎo)管給予的順序。"組合"的給予進(jìn)一步包含給予第1、接著第2的化合物或藥物中的一種的分別給予。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥可以與抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物、核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、和/或蛋白酶抑制劑等組合給予。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥可以與抗生素組合給予?？梢允褂玫目股乩缬衪t糖苷系抗生素、多烯系抗生素、青霉素系抗生素、頭孢烯系抗生素、肽系抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、四環(huán)素系抗生素，但并不限于此。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥可以單獨(dú)或者與抗炎癥藥組合給予?？膳c本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥一起給予的抗炎癥藥例如有糖皮質(zhì)激素和非類固醇抗炎癥藥、氨基芳基羧酸衍生物、芳基乙酸衍生物、芳基丁酸衍生物、芳基羧酸、芳基丙酸衍生物、吡唑、吡唑酮、水楊酸衍生物、瘞溱甲酰胺、e-乙酰胺己酸、S-腺芬甲硫氨酸、3-氨基-4-羥基丁酸、阿米西群、節(jié)達(dá)酸、千達(dá)明、布可隆、聯(lián)笨他胺、地他唑、依莫法宗、愈創(chuàng)藍(lán)油烴、萘丁美酮、尼美舒利、奧古蛋白、奧沙西羅、瑞尼托林、哌立索唑、哌福肟、普羅喹宗、普羅沙唑、替尼達(dá)普等，但并不限于此。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療藥、預(yù)防藥可以與其它治療方案/預(yù)防方案(例如放射線治療)組合給予。以下，通過實(shí)施例等進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受限于這些實(shí)施例。(實(shí)施例l:插入BAC載體的區(qū)域(基因)的選擇)利用BAC栽體制備插入了外源抗原基因的重組病毒時(shí)，由于插入多數(shù)外源基因而使因組尺寸增大。已知基因組尺寸過大，則基因組DNA無法包裝到病毒殼體中，結(jié)果無法制備重組病毒。因此，為了將多數(shù)抗原基因插入到Oka疫苗抹中，必須考慮將Oka疫苗林的非必需基因敲除，減小基因組DNA的尺寸。另外，即使敲除病毒也可以增殖的非必需基因是適合作為將BAC載體序列或編碼來自其它病毒的抗原蛋白的基因等的外源序列插入的部位。因此，使用將水痘病毒Oka原林基因組插入到BAC載體中得到的重組DNA(P-Oka林VZV-BAC-DNA)，研究基因7的ORF(HSVUL51同系物)、基因13的ORF(胸腺嘧咬核苷合成酶)、基因21的ORF(核殼)、基因48的ORP(蛋白激酶)、基因46的ORF(HSVUL16同系物)、基因56的ORF(HSVUL4同系物)、基因58的ORF(HSV-1UL3同系物)、基因66的ORF(蛋白激酶)基因分別是非必需基因還是必需基因。(方法)在卡那霉素基因的兩端連接作為敲除目標(biāo)的基因序列，使其與作為目標(biāo)基因的基因組內(nèi)的取向?yàn)橥环较?，制備敲除載體。將該敲除載體導(dǎo)入到保持有P-Oka株VZV-BAC-DNA的大腸桿菌中，在敲除載體和P-Oka林VZV-BAC-DNA之間發(fā)生同源重組，敲除目標(biāo)基因。(結(jié)果)將^&因13的ORF、基因56的ORF、基因58的ORF和基因560RF-基因570RF-基因580RF的連續(xù)區(qū)域缺損的P-Oka抹VZV-BAC-DNA轉(zhuǎn)染MRC-5細(xì)胞，產(chǎn)生重組病毒。由此表明這些基因是非必需基因。關(guān)于基因13和57的ORF，認(rèn)為其是非必需基因，這在本次試驗(yàn)中得到確認(rèn)。將以往被認(rèn)為是必需基因的基因21敲除，無法獲得重組病毒。與此相對(duì)，使以往被認(rèn)為是非必需基因的基因7、基因46、基因48和基因66缺損，無法得到重組病毒。在通過本次試驗(yàn)證實(shí)為非必需基因的基因中，將基因56缺損P-Oka的噬斑尺寸與P-Oka比銀，<錄因56缺損P-Oka感染MRC-5細(xì)胞時(shí)的噬斑尺寸比其它非必需基因缺損時(shí)稍小，但沒有顯著差異。由以上結(jié)果表明，單由結(jié)構(gòu)是難以判斷水痘帶狀皰瘆病毒基因是否為病毒增殖所必需的。由本次結(jié)果表明，除以往被認(rèn)為是非必需基因的基因13、基因57之外，基因56和基因58也是非必需基因，即使敲除對(duì)于病毒的增殖也不會(huì)有影響。特別是基因58即使缺損，對(duì)病毒增殖沒有任何影響。因此，表明除基因13和57之外，基因56和基因58、特別是從基因56至基因58的連續(xù)區(qū)域是敲除以乂作為外源序列(例如，BAC載體序列和編碼其它抗原的基因序列)的插入位點(diǎn)的適合基因。(實(shí)施例2:通過向基因13的ORF中插入腮腺炎病毒HN基因來制備多價(jià)疫苗)實(shí)施例1中表明，基因13是敲除和/或插入外源序列的適合基因，因此，通過向該基因13的ORF中插入腮腺炎病毒HN基因來制備多價(jià)疫苗。使用PCR由野外流行株一巖崎林?jǐn)U增腮腺炎病毒的HN基因和F基因。對(duì)克隆的巖崎株的F基因和HN基因的g^列進(jìn)行分析，F(xiàn)基因與野外林或疫苗林相比，顯示較高的同源性(>98.5),而HN基因與90年代后期以后的野外株的同源性高，與卯年代前期以前的野外林或疫苗林的同源性低(約96°/0)。接著，在克隆的基因的上游可動(dòng)作地連接人巨細(xì)胞病毒(CMV)的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子序列。將使用了HN基因和F基因的質(zhì)粒分別命名為pDEST26/MeV-HN和pDEST26/MeV-F。人巨細(xì)胞病毒的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子序列具有NF-kB結(jié)合位點(diǎn)、AP-1結(jié)合位點(diǎn)和TATA盒(圖1)。將pDEST26/MeV-F和pDEST26/MeV-HN轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，通過熒光抗體法與多種抗MeV抗體反應(yīng)。結(jié)果，轉(zhuǎn)染pDEST26/MeV-F的293細(xì)胞不與任何抗體反應(yīng)，但轉(zhuǎn)染pDEST26/MeV-HN的細(xì)胞與一些抗MeV抗體(也包括具有中和活性的抗體)反應(yīng)。在結(jié)合有該腮腺炎病毒HN基因和CMV啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的核,列的兩端連接基因13的上游和下游，制備載體(堿基編號(hào)為P-0ka的堿基編號(hào)，為SEQIDN0.4所示的Dumas抹時(shí)，分別對(duì)應(yīng)17037~18440和19347~20350)。將該載體導(dǎo)入到保有P-Oka抹的VZV-BAC-DNA的大腸桿菌內(nèi)，在載體和P-Oka株VZV-BAC-DNA之間發(fā)生同源重組，基因13的ORF、與腮腺炎病毒NH基因與CMV啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的連接序列發(fā)生同源重組(圖2)。通過PCR和限制酶消化來確認(rèn)發(fā)生了同源重組。接著，將通過同源重組制備的BAC載體通過電穿孔轉(zhuǎn)染MRC-5細(xì)胞。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的噬斑尺寸與使用未破壞基因13的病毒時(shí)同樣。為了檢測(cè)腮腺炎病毒的HN基因產(chǎn)物，分別使用FITC標(biāo)記的抗腮腺炎病毒HN蛋白抗體(小鼠免疫球蛋白/FITC山羊F(ab，)2,DakoCytomationDenmarkA/S，Produktionsvej42，DK-2600Glostrup，Denmark)和Alexa594標(biāo)記的抗腮腺炎病毒HN蛋白抗體(AlexaHour(注冊(cè)商標(biāo))594、山羊的抗小鼠IgG(H+L)的F(ab，)2片段，MolecularProbesinvitrogendetectiontechnologiesEugene,Oregon,U,S.A)，確認(rèn)了HN基因在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果，使用任何標(biāo)記抗體都可以確認(rèn)HN蛋白的表達(dá)。通過本實(shí)施例，在不抑制病毒的增殖的情況下，可以簡便地制備針對(duì)水痘帶狀皰滲病毒和腮腺炎病毒兩者的多價(jià)疫苗。(實(shí)施例3)(病原性弱的變異型重組水痘帶狀皰滲病毒林的制備)根據(jù)本發(fā)明，通過采用以下的方法可以制備變異型重組水痘帶狀皰滲病毒，可以從變異病毒中獲得病原性弱的變異水痘帶狀皰滲病毒抹。(1:變異型重組水痘帶狀皰滲病毒的制備)變異型重組水痘帶狀皰疹病毒的制備方法例如有通過在含有變異基因的核酸和VZV-BAC-DNA質(zhì)粒之間發(fā)生同源重組來制備變異型重組水痘帶狀皰瘆病毒。與VZV-BAC-DNA質(zhì)粒發(fā)生同源重組中所使用的變異基因可以具有隨機(jī)的變異，也可以具有定向位點(diǎn)變異。使用上述任一種方法，可以獲得具有隨機(jī)變異的變異型重組水痘帶狀皰疹病毒集閎、和具有定向位點(diǎn)變異的變異型重組水痘帶狀皰滲病毒。以下，對(duì)各情況進(jìn)行更詳細(xì)地說明。(1.1:具有隨機(jī)變異的變異型重組水痘帶狀皰滲病毒的制備)幾種在水痘帶狀皰滲病毒基因組的基因62上具有變異的病毒是減毒病毒，這是公知的。因此，本實(shí)施例中，使用PCR制備隨機(jī)誘變的基因62。使用PCR的誘變的方法是周知的，例如在4個(gè)核苷酸中缺少一個(gè)的條件下使用不具有校正功能的耐熱性聚合酶，由此可以隨機(jī)誘變。還可根據(jù)需要，在變異型62基因上連接抗藥性基因等標(biāo)志基因。通過電穿孔法，將上述制備的變異型基因62與VZV-BAC-DNA質(zhì)粒一起導(dǎo)入到大腸桿菌中，使變異型基固62與VZV-BAC-DNA之間發(fā)生同源重組。然后，分離發(fā)生了同源重組的水疽?guī)畎捳畈《镜腄NA，導(dǎo)入到大腸桿菌中，得到含有發(fā)生了同源重組的VZV-BAC-DNA的大腸桿菌。所得的多數(shù);U^桿菌具有VZV-BAC-DNA,該VZV-BAC-DNA含有具各種不同的變異的基因62。因此，采用下述(2:水痘帶狀皰疹病毒的病原性試驗(yàn)方法)，對(duì)由于各大腸桿菌中所含的變異型VZV-BAC-DNA所產(chǎn)生的水痘帶狀皰瘆病毒的病原性程度進(jìn)行篩選。(i.2:具有定向位點(diǎn)變異的變異型重組水痘帶狀皰滲病毒的制備)導(dǎo)入所需的定向位點(diǎn)變異的方法也是本領(lǐng)域所周知的。例如，使用具有所需變異的引物進(jìn)行PCR，制備具有該所需變異的基因片段，然后使用該變異基因片段進(jìn)一步進(jìn)行PCR,或者是進(jìn)行限制酶等的酶處理，制備具有所需變異的全長基因。對(duì)于上述制備的變異基因，采用上述(l丄)的順序，制備具有定向位點(diǎn)變異的變異型重組水痘帶狀皰滲病毒。(2:水痘帶狀皰滲病毒的病原性的試驗(yàn)方法)關(guān)于對(duì)水痘帶狀皰滲病毒的病原性進(jìn)行試驗(yàn)的方法，確立了兩種方法。使用動(dòng)物模型的方法是制備移植了人皮膚的聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠，通過對(duì)其感染水痘帶狀皰滲病毒來評(píng)價(jià)病原性，該方法為眾所周知(J.Virol.1998Feb,72(2):965~74)。與此相對(duì)，在試管內(nèi)進(jìn)行病原性的評(píng)價(jià)的方法是在用孔徑3^im的trans-well分隔的雙層孔的下側(cè)加入單層培養(yǎng)的人黑素瘤細(xì)胞，上側(cè)加入感染了水疸帶狀皰滲病毒的臍帶血單核細(xì)胞(CBMC),培養(yǎng)7~8天后觀察黑素瘤細(xì)胞的CPE(細(xì)胞變性效果)的程度。這也是眾所周知的方法(J.Virol.2000Feb;74(4):1864~70)。本發(fā)明人等以往的試驗(yàn)結(jié)果(J.Virol.2002Nov;76(22):11447~59)表明，病毒的病原性與增殖性密切相關(guān)，因此，可以通過感染中心測(cè)定來研究細(xì)胞到細(xì)胞的增殖性，由此間接性地對(duì)病原性進(jìn)行評(píng)價(jià)，但這不是直接確認(rèn)病原性的方法。(實(shí)施例4)(疫苗的制備)在培養(yǎng)面積210cm2的20個(gè)Roux扁瓶中培養(yǎng)MRC-5細(xì)胞，接種實(shí)施例2所得的重組水痘帶狀皰滲病毒，然后培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后舍去培養(yǎng)液，將備Roux扁瓶內(nèi)的感染細(xì)胞用200mL的PBS(-)洗滌2次。接著將20mL的0.03%(w/v)EDTA-3Na鋪在各Roux扁瓶的感染細(xì)胞上，使細(xì)胞由Roux扁瓶內(nèi)壁面剝離并浮游，合并各Roux扁瓶內(nèi)的感染細(xì)胞浮游液，以2,000rpm、在4。C下離心10分鐘，收集感染細(xì)胞的沉淀。將其重新懸浮于100mL的PBS(-)中，進(jìn)行1次冷凍溶化。接著，在水水浴中進(jìn)行超聲波處理(20KHz、150mA、0.3秒/mL),然后以3,000rpm、在4。C下離心20分鐘，收集舍有細(xì)胞游離病毒的上清，將其作為活疫苗原液。從該原液中取樣30mL作為檢測(cè)用，向70mL殘余的原液中添加并混合溶解于PBS(-)的蔗糖和明膠水解物，作為疫苗穩(wěn)定劑，終濃度為5%(w/v)和2.5%(w/v)，結(jié)果，制備140mL活疫苗最終批。從該最終批中取樣30mL作為檢測(cè)用，然后將其余的批以0.5ml分別分注到3mL容量的管形瓶中，凍干后填充氮?dú)猓孟鹌どw密封，使管形瓶內(nèi)部密閉。該活疫苗在4"C下保存，在即將使用之前添加0.5mL注射用蒸餾7jc,將干燥內(nèi)容物完全溶解使用。另一方面，對(duì)取樣的上述疫苗原液、最終批、以及20瓶分注品進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)。該檢測(cè)試驗(yàn)是為了確認(rèn)安全性、有效性和均勻性，為了確定活疫苗的適合性，可按照日本厚生省告示第195號(hào)規(guī)定的生物學(xué)制劑基準(zhǔn)(1989年)"千燥減毒活水痘疫苗"，且考慮該規(guī)定的基準(zhǔn)"重組沉淀B型肝炎疫苗(來自酵母)"實(shí)施。該檢測(cè)試驗(yàn)的結(jié)果表明上述分注品的病毒含量為2xl04PFU(噬斑形成單位)/0.5mL,且在按照上述基準(zhǔn)進(jìn)行各種規(guī)定的試驗(yàn)合格時(shí)，可以作為具備適合性的活疫苗用于之后的應(yīng)用中。(實(shí)施例5)(重組水痘帶狀皰滲病毒疫苗的免疫原性的判定)使用豚鼠對(duì)實(shí)施例4制備的重組水痘帶狀皰滲病毒疫苗林的免疫原性進(jìn)行測(cè)定。作為比較對(duì)照，使用Oka林活疫苗。將這些疫苗分別皮下接種于三只3周齡的平均體重250g的豚鼠。疫苗接種中的接種量是在重組抹和Oka株活疫苗中，用PBS(-)稀釋調(diào)節(jié)各疫苗，使其濃度為3，000PFU或2,000PFU/豚鼠。疫苗接種后第4、6和8周，從各被接種豚鼠的股靜脈部分采血，測(cè)定血液抗體效價(jià)?？贵w敢價(jià)的測(cè)定采用中和試驗(yàn)法(JoumaiofGeneralVirology,61，255~269，1982)。確認(rèn)上迷重組水痘帶狀皰滲病毒疫苗與Oka林同等程度地誘導(dǎo)抗VZV抗體。由上述結(jié)果可以選擇免疫原性良好的重組水痘帶狀皰滲病毒。如上所述，采用本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案例舉了本發(fā)明,但應(yīng)理解本發(fā)明只通過權(quán)利要求范圍來解釋其范圍并不受上述優(yōu)選實(shí)施方案的限定。本領(lǐng)域技術(shù)人員參考本說明書，可以容易地進(jìn)行本發(fā)明的范圍內(nèi)的各種變更、相應(yīng)改進(jìn)等。應(yīng)理解本說明書中所引用的專利、專利申請(qǐng)和文獻(xiàn)，其內(nèi)容本身與本說明書中具體記栽的同樣，其內(nèi)容是作為本說明書的參考引用。產(chǎn)業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供例如使用BAC(大腸桿菌人工染色體)制備舍有重組水痘帶狀皰滲病毒抗原以及其它病毒抗原的疫苗的方法，以及由該方法制備重組水痘帶狀皰滲病毒。本發(fā)明還提供含有重組水疸帶狀皰疹病毒等的抗原的多價(jià)疫苗。本發(fā)明進(jìn)一步提供舍有水痘帶狀皰滲病毒基因組基因和BAC載體序列的載體、含有該載體的細(xì)胞、以及含有可以與水痘帶狀皰瘆病毒基因組同源重組的片段和BAC載體序列的核酸盒。序列表的描述SEQIDNO.l:基因62的核酸序列SEQIDN0.2:基因62的氨基酸序列SEQIDN0.3:質(zhì)粒PHA-2的序列SEQIDN0.4:水痘帶狀皰滲病毒Dumas抹SEQIDN0.5:在SEQIDN0.4的1134位~1850位沿5，—3'方向編碼的氛基,列(基因2)SEQIDN0.6:在SEQIDN0.4的8607位~9386位沿5，—3'方向編碼的tt^^列(基因7)SEQIDN0.7:在SEQIDNO.4的10642位~10卯2位沿5，—3'方向編碼的tt酸序列(基因9A)SEQIDN0.8:在SEQIDN0.4的11009位~11917位沿5，—3，方向編碼的M酸序列(基因9)SEQIDN0.9:在SEQIDN0.4的12160位~13392位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因10)SEQIDNO.10:在SEQIDN0.4的135卯位~16049位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因11)SEQIDNO.l1:在SEQIDN0.4的16214位~18199位沿5，—3，方向編碼的tt酸序列(基因12)SEQIDNO.12:在SEQIDN0.4的18441位~19346位沿5，—3，方向編碼的tt酸序列(基因13)SEQIDN0.13:在SEQIDNO.4的24149位~25516位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因17)SEQIDN0.14:在SEQIDN0.4的30759位~33875位沿5，—3'方向編碼的tt酸序列(基因21)SEQIDNO.15:在SEQIDN0.4的34083位~42374位沿5，—3，方向編碼的M酸序列(基因22)SEQIDN0.16:在SEQIDN0.4的44506位~46263位沿5，—3，方向編碼的H&酸序列(基因26)SEQIDN0.17:在SEQIDN0.4的50857位~54471位沿5，—3'方向編碼的M酸序列(基因29)SEQIDN0.18:在SEQIDN0.4的54651位~56963位沿5，—3'方向編碼的氛基酸序列(基因30)SEQIDN0.19:在SEQIDNO,4的57008位~59614位沿5，—3'方向編碼的M酸序列(基因31)SEQIDNO.20:在SEQIDN0.4的59766位~60197位沿5，—3，方向編碼的M酸序列(基因32)SEQIDN0.21:在SEQIDN0.4的64807位~65832位沿5，—3，方向編碼的tt酸序列(基因36)SEQIDN0.22:在SEQIDNO,4的66074位~68599位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因37)SEQIDN0.23:在SEQIDN0.4的70633位~71355位沿5，—3'方向編碼的氨基酸序列(基因39)SEQIDN0.24:在SEQIDN0.4的71540位~75730位沿5，—3'方向編碼的氨基酸序列(基因40)SEQIDN0.25:在SEQIDN0.4的75847位~76797位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因41)SEQIDN0.26:在SEQIDN0.4的78170位~80200位沿5，—3'方向編碼的氨基酸序列(基因43)SEQIDN0.27:在SEQIDN0.4的80360位~81451位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因44)SEQIDN0.28:在SEQIDN0.4的82719位~83318位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因46)SEQIDN0.29:在SEQIDNO,4的84667位~86322位沿5，—3'方向編碼的氨基酸序列(基因48)SEQIDNO.30:在SEQIDN0.4的87881位~卯388位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因51)SEQIDNO.31:在SEQIDN0.4的卯493位~92808位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因52)SEQIDN0.32:在SEQIDN0.4的95996位~98641位沿5，—3'方向編碼的氨基酸序列(基因55)SEQIDN0.33:在SEQIDN0.4的110581位~U1417位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因63)SEQIDN0.34:在SEQIDN0.4的111565位~112107位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因64)SEQIDN0.35:在SEQIDNO,4的113037位~114218位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因66)SEQIDN0.36:在SEQIDN0.4的114496位~115560位沿5，—3，方向編碼的氨基酸序列(基因67)犯QIDN0.37:在SEQIDN0.4的115808位~117679位沿5，—3，方向編碼的tt酸序列(基因68)SEQIDN0.38:在SEQIDN0.4的120764位~124696位沿5，—3，方向編碼的tt^列(基因71)SEQIDN0.39:SEQIDN0.4的部分序列(基因27)SEQIDNO.40:在SEQIDN0.39的1位~999位沿5，—3'方向編碼的tt酸序列(基因27)SEQIDN0.41:SEQIDN0.4的部分序列(基罔47)SEQIDN0.42:在SEQIDN0.41的1位~1530位沿5，—3'方向編碼的氨基^列(基因47)SEQIDN0.43:SEQIDN0.4的部分序列SEQIDN0.44:在SEQIDN0.43的1位~243位沿5，屮3，方向編碼的tt,列(基因49)SEQIDNO.45:SEQIDN0.4的部分序列SEQIDN0.46:在SEQIDN0.45的1位~732位沿5，—3，方向編碼的tt^列(基因56)SEQIDN0.47:SEQIDN0.4的序列的互補(bǔ)序列SEQIDN0.48:在SEQIDN0.4的118480位~119316位沿3，—5，方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的5569位~6405位對(duì)應(yīng))(基因70)SEQIDNO.49:在SEQIDNO.4的1177卯位~118332位沿3，—5，方向編碼的氨基^列(與SEQIDN0.47的6553位~7095位對(duì)應(yīng))(基因69)SEQIDNO.50:在SEQIDN0,4的112332位~112640位沿3，—5，方向編碼的M酸序列(與SEQIDN0.47的12245位~12553位對(duì)應(yīng))SEQIDN0.51:在SEQIDNO.4的105201位~109B3位沿3，—5，方向編碼的^J^酸序列(與SEQIDN0.47的15752位~19684位對(duì)應(yīng))(基因62)SEQIDN0.52:在SEQIDN0.4的103082位~104485位沿3，—5，方向編碼的tt酸序列(與SEQIDN0.47的20400位~21803位對(duì)應(yīng))(基因61)SEQIDN0.53:在SEQIDNO,4的100302位~101219位沿3，—5，方向編碼的氨基,列(與SEQIDN0.47的23666位~24583位對(duì)應(yīng))(基因59)SEQIDN0.54:在SEQIDN0.4的99411位~99626位沿3，—5，方向編碼的M酸序列(與SEQIDN0.47的25259位~25474位對(duì)應(yīng))(基因57)SEQIDN0.55:在SEQIDNO,4的92855位~93850位沿3，—5'方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的31035位~32030位對(duì)應(yīng))(基因53)SEQIDN0.56:在SEQIDNO.4的68668位~702930位沿3，—5'方向編碼的tt酸序列(與SEQIDN0.47的54592位~56217位對(duì)應(yīng))(基因38)SEQIDN0.57:在SEQIDNO.4的63977位~64753位沿3，—5，方向編碼的絲酸序列(與SEQIDN0.47的60132位~60908位對(duì)應(yīng))(基因35)SEQIDN0.58:在SEQIDNO.4的62171位~63910位沿3，—5，方向編碼的tt酸序列(與SEQIDN0.47的60975位~62714位對(duì)應(yīng))(基因34)SEQIDN0.59:在SEQIDNO.4的60321位~62138位沿3，—5，方向編碼的絲醋列(與SEQIDN0.47的62747位~64564位對(duì)應(yīng))(基因33)SEQIDNO.60:在SEQIDNO.4的47052位~50636位沿3，—5'方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的74249位~77833位對(duì)應(yīng))(基因28)SEQIDN0.61:在SEQIDN0.4的44148位~44618位沿3，—5'方向編碼的tt酸序列(與SEQIDNO.47的80267位~80737位對(duì)應(yīng))(基因25)SEQIDN0.62:在SEQIDN0.4的43212位~44021位沿3，—5，方向編碼的tt齡列(與SEQIDN0.47的80864位~81673位對(duì)應(yīng))(基因24)SEQIDN0.63:在SEQIDN0.4的42431位~43138位沿3，—5'方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的81747位~82454位對(duì)應(yīng))(基因23)SEQIDN0.64:在SEQIDN0.4的2卯24位~30475位沿3，—5，方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的94410位~95861位對(duì)應(yīng))(基因20)SEQIDN0.65:在SEQIDN0.4的26518位~28845位沿3，—5，方向編碼的絲酸序列(與SEQIDNO.47的96040位~98367位對(duì)應(yīng))(基因19)SEQIDN0.66:在SEQIDN0.4的25573位~26493位沿3，—5，方向編碼的tt酸序列(與SEQIDNO.47的98392位~99312位對(duì)應(yīng))(基因18)SEQIDN0.67:在SEQIDN0.4的22568位~23794位沿3，—5，方向編碼的AJ-酸序列(與SEQIDNO.47的101091位~102317位對(duì)應(yīng))(基因16)SEQIDN0.68:在SEQIDN0.4的21258位~22478位沿3，—5，方向編碼的tt酸序列(與SEQIDNO.47的102407位~103627位對(duì)應(yīng))(基因15)SEQIDN0.69:在SEQIDN0.4的19431位~21113位沿3，—5，方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDNO.47的103772位~105454位對(duì)應(yīng))(基因14)SEQIDNO.70:在SEQIDN0.4的9477位~10667位沿3，—5，方向編碼的氨基齡歹ij(與SEQIDN0.47的114218位~U5408位對(duì)應(yīng))(基因8)SEQIDN0.71:在SEQIDNO.4的5326位~8577位沿3，—5'方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的116308位~119559位對(duì)應(yīng))(基因6)SEQIDN0.72:在SEQIDNO.4的4252位~5274位沿3，—5，方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的119611位~120633位對(duì)應(yīng))(基因5)SEQIDN0.73:在SEQIDNO.4的2783位~4141位沿3，—5，方向編碼的M酸序列(與SEQIDN0.47的120744位~122102位對(duì)應(yīng))(基因4)SEQIDN0.74:在SEQIDNO.4的1908位~2447位沿3，—5，方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的122438位~122977位對(duì)應(yīng))(基因3)SEQIDN0.75:在SEQIDNO.4的589位~915位沿3，—5，方向編碼的氨基賄列(與SEQIDN0.47的123970位~124296位對(duì)應(yīng))(基因1)SEQIDN0.76:SEQIDN0.47的部分序列SEQIDNO,77:在SEQIDN0.76的1位~1056位和4556位~5740位沿3，—5'方向編碼的M酸序列(與SEQIDN0.47的46847位~48034位和42292位~43347位對(duì)應(yīng))(基因42和基因45)SEQIDN0.78:SEQIDN0.47的部分序列SEQIDN0.79:在SEQIDN0.78的1位~1305位沿3，—5，方向編碼的氨基絲歹'K與SEQIDN0.47的123580位~124884位對(duì)應(yīng))(基因50)SEQIDNO.80:SEQIDN0.47的部分序列SEQIDN0.81:在SEQIDNO.80的1位~2307位沿3，—5'方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDNO.47的122578位~124884位對(duì)應(yīng))(基因54)SEQIDN0.82:SEQIDN0.47的部分序列SEQIDNO.83:在SEQIDN0.82的1位~663位沿3，—5'方向編碼的M酸序列(與SEQIDN0.47的124222位~124884位對(duì)應(yīng))(基因58)SEQIDN0.84:SEQIDN0.47的部分序列SEQIDN0.85:在SEQIDN0.84的1位~427位沿3，—5，方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的124458位~124884位對(duì)應(yīng))(基因60)SEQIDN0.86:SEQIDNO,47的部分序列SEQIDN0.87:在SEQIDN0.86的1位~卯3位沿3，—5，方向編碼的氨基酸序列(與SEQIDN0.47的60321位~61229位對(duì)應(yīng))(基因33,5)權(quán)利要求1.重組水痘帶狀皰疹病毒，該重組水痘帶狀皰疹病毒是BAC載體序列的至少一部分插入到水痘帶狀皰疹病毒基因組的非必需區(qū)域內(nèi)得到的，其中該非必需區(qū)域選自下述的區(qū)域基因13的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域、和與基因58的ORF相鄰的區(qū)域。2.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中該水疽?guī)畎捳畈《局羞x自基因13、基因56、基因57、和基因58的基園至少有2個(gè)缺損。3.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中該7JC痘帶狀皰疹病毒中選自基因13、基因56、基因57、和基因58的基因至少有3個(gè)缺損。4.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述BAC栽體序列舍有重組蛋白依賴性重組序列。5.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰瘆病毒，其中上述BAC載體序列含有選自腮腺炎病毒、麻滲病毒、風(fēng)滲病毒、西尼羅病毒、流感病毒、SARS冠狀病毒、和日本腦炎病毒的病毒的基因。6.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰疹病毒，其中上述BAC載體序列含有選自腮腺炎病毒、麻滲病毒、和風(fēng)疹病毒的病毒的基因。7.權(quán)利要求6的重組水痘帶狀皰疹病毒，其中上述BAC載體序列含有腮腺炎病毒的基因、麻滲病毒的基因、和風(fēng)疹病毒的基因。8.權(quán)利要求6的重組水痘帶狀皰瘆病毒，其中上迷腮腺炎病毒的基因選自HN基因、F基因、和N基因。9.權(quán)利要求6的重組水痘帶狀皰瘆病毒，其中上i^Nf病毒的基因選自H基因、F基因、和N基因。10.權(quán)利要求6的重組水痘帶狀皰疹病毒，其中上述風(fēng)滲病毒的基因選自C基因、El基因、和E2基因。11.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述水痘帶狀皰瘆病毒基因組來自野生株。12.權(quán)利要求1的重組水疽?guī)畎挐B病毒，其中上迷水痘帶狀皰滲病毒基因組來自變異林。13.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述水痘帶狀皰滲病毒基因組來自O(shè)ka疫苗抹。14.權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰瘆病毒，其中上迷水痘帶狀皰滲病毒基因組在基因62和基因6上具有變異。15.權(quán)利要求14的重組水痘帶狀皰滲病毒，其中上述基因62是在SEQIDNCU的tt序列中至少具有以下(a)(d)的堿基置換(a)2110位減基置換為G;(b)3100位堿基置換為G;(c)3818位堿基置換為C;和(d)4006位4tt置換為G,以及上述基因6是在SEQIDN0.4的堿基序列中至少具有5745位堿基置換為G的堿基置換。16.藥物組合物，該藥物組合物含有權(quán)利要求1的病毒。17.權(quán)利要求16的藥物組合物，其中該藥物組合物是疫苗形態(tài)。18.載體，該栽體從權(quán)利要求1的重組水痘帶狀皰滲病毒中分離。19.細(xì)胞，該細(xì)胞含有權(quán)利要求18的載體。20.權(quán)利要求19的細(xì)胞，其中該細(xì)胞為細(xì)菌。21.權(quán)利要求20的細(xì)菌，其中該細(xì)菌為大腸桿菌。22.權(quán)利要求19的細(xì)胞，其中該細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞。23.權(quán)利要求22的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其中該哺乳動(dòng)物細(xì)胞為來自人的細(xì)胞。24.病毒，該病毒由4又利要求22的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)。25.藥物組合物，該藥物組合物舍有權(quán)利要求24的病毒。26.重組水痘帶狀皰滲病毒的制備方法，該方法包含以下步驟將權(quán)利要求18的栽體導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中的步驟；以及培養(yǎng)該哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞，生產(chǎn)重組水痘帶狀皰滲病毒的步驟。27.權(quán)利要求26的方法，其中上述哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞是來自人的細(xì)胞。28.權(quán)利要求26的方法，該方法進(jìn)一步包含在上述2個(gè)重組蛋白依賴性重組序列之間發(fā)生重組的步驟。29.向權(quán)利要求18的載體導(dǎo)入變異的方法，該方法包含以下步驟將該載體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；將含有由水痘帶狀皰滲病毒基因組的一部分形成的片段的質(zhì)粒栽體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中該片段至少具有一個(gè)變異；培養(yǎng)該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；以及從該培養(yǎng)的細(xì)菌宿主細(xì)胞中分離具有BAC栽體序列的栽體的步驟。30.向權(quán)利要求18的載體導(dǎo)入變異的方法，該方法包含以下步驟將該載體導(dǎo)入到細(xì)菌宿主細(xì)J3包的步驟；將含有由水痘帶狀皰滲病毒基因組的一部分形成的第1片段的第l質(zhì)粒載體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中該第l片段具有至少l個(gè)變異；將含有由水痘帶狀皰疹病毒基因組的一部分形成的第2片段的笫2質(zhì)粒栽體導(dǎo)入到該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟，其中該第2片段具有至少l個(gè)變異，該第2片段與該第l片段不同；培養(yǎng)該細(xì)菌宿主細(xì)胞的步驟；以及從該培養(yǎng)的細(xì)菌宿主細(xì)胞中分離具有BAC載體序列的栽體的步驟.。31.核酸盒，該核酸盒含有在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)可以與水痘帶狀皰滲病毒基因組同源重組的第1片段、BAC載體序列、以及在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)可以與水痘帶狀皰滲病毒基因組同源重組的第2片段，其中該BAC序列的兩端分別與第1片段和第2片段連接，這里，上述第1和第2片段各自獨(dú)立，來自選自水痘帶狀皰滲病毒基因組的以下區(qū)域的區(qū)域基因13的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因56的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因57的ORF內(nèi)的區(qū)域、基因58的ORF內(nèi)的區(qū)域、與基因13的ORF相鄰的區(qū)域、與基因56的ORF相鄰的區(qū)域、與基因57的ORF相鄰的區(qū)域、與基因58的ORF相鄰的區(qū)域、以及基因56、57和58的連續(xù)的區(qū)域。32.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上述第1片段和第2片段至少為lkb。33.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上述第1片段和第2片段至少為1.5kb。34.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上迷第1片段和第2片段至少為2kb。35.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上述第1片段和第2片段與水痘帶狀皰滲病毒基因組的序列至少80%同一。36.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上述第1和第2片段來自不同的區(qū)域。37.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上述BAC栽體序列含有重組蛋白依賴性重組序列。38.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上述BAC載體序列含有選擇標(biāo)志。39.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上迷水痘帶狀皰發(fā)病毒基因組來自野生林。40.4又利要求31的核酸盒，其中上述水痘帶狀皰滲病毒基因組來自變異株。41.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上迷水痘帶狀皰滲病毒基因組來自O(shè)ka疫苗株。42.權(quán)利要求31的核酸盒，其中上述BAC載體序列具有SEQIDN0.3的核酸序列。全文摘要本發(fā)明的課題在于提供重組水痘帶狀皰疹病毒；及其制備方法；含有重組水痘帶狀皰疹病毒的藥物組合物；在水痘帶狀皰疹病毒基因組基因的特定基因上含有BAC載體序列的載體；含有該載體的細(xì)胞；可以與水痘帶狀皰疹病毒基因組同源重組的片段；含有BAC載體序列的核酸盒；以及多價(jià)疫苗。通過開發(fā)在特定的病毒基因上插入BAC載體序列的重組水痘帶狀皰疹病毒的制備方法，可以解決上述課題。文檔編號(hào)A61P37/04GK101360823SQ20058005251公開日2009年2月4日申請(qǐng)日期2005年11月24日優(yōu)先權(quán)日2005年11月24日發(fā)明者P·索姆布恩圖姆,五味康行,吉井洋紀(jì),山西弘一,森康子,高橋理明申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人阪大微生物病研究會(huì);獨(dú)立行政法人醫(yī)藥基盤研究所