專(zhuān)利名稱(chēng)：包囊的轉(zhuǎn)移因子組合物及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包囊的組合物，包括(1)用疏水性或脂質(zhì)包衣包被的轉(zhuǎn)移因子和/或(2)用疏水性或脂質(zhì)包衣包被的葡聚糖，諸如真菌葡聚糖或雜交葡聚糖。這類(lèi)組合物可用于預(yù)防和治療病理性情況。
背景技術(shù)：
由白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的轉(zhuǎn)移因子為具有約44個(gè)氨基酸的小的水溶性多肽類(lèi)，它們刺激或轉(zhuǎn)移細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性從一個(gè)個(gè)體至另一個(gè)并且跨越物種，但不產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。由于轉(zhuǎn)移因子小于抗體，所以它們不會(huì)轉(zhuǎn)移抗體介導(dǎo)的反應(yīng)，也不會(huì)誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生。轉(zhuǎn)移因子的特性、特征和獲得轉(zhuǎn)移因子的方法描述在美國(guó)專(zhuān)利US4,816,563、US5,080,895、US5,840,700、US5,883,224和US6,468,534中，將這些文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本申請(qǐng)作為參考。
已將轉(zhuǎn)移因子描述為單純皰疹病毒的有效治療劑(Viza等)；對(duì)痤瘡污點(diǎn)的治療(美國(guó)專(zhuān)利US4,435,384)和作為對(duì)白色念珠菌的治療手段(Khan等)。轉(zhuǎn)移因子還用于治療用特異性轉(zhuǎn)移因子治療的接受者中的腸隱孢子蟲(chóng)病(McMeeking等)。Still等還證實(shí)通過(guò)用來(lái)自患過(guò)水痘，或換句話(huà)說(shuō)已對(duì)水痘抗原致敏的個(gè)體的轉(zhuǎn)移因子預(yù)治療兒童來(lái)預(yù)防水痘感染。抗原特異性轉(zhuǎn)移因子為最充分得到研究的并且已經(jīng)證實(shí)它們能夠給首次應(yīng)用的接受者輸送已經(jīng)歷供體的抗原識(shí)別能力。可以推定為轉(zhuǎn)移因子來(lái)源的個(gè)體或動(dòng)物已對(duì)所關(guān)注的抗原致敏。本文中將術(shù)語(yǔ)抗原定義為引起細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的任意物質(zhì)。然而，作為在來(lái)源于動(dòng)物群(例如牛)的商品牛初乳提取物中發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)移因子含有來(lái)自所有群體的獲得免疫性且由此提供一類(lèi)免疫性的全身過(guò)繼性轉(zhuǎn)移。一種或多種轉(zhuǎn)移因子可以獲自溶解細(xì)胞的可透析提取物或獲自含有轉(zhuǎn)移因子的胞外液提取物。轉(zhuǎn)移因子的通常來(lái)源為初乳和卵。通常的實(shí)踐是將是含有轉(zhuǎn)移因子的制劑稱(chēng)為活性成分(即轉(zhuǎn)移因子或TF)。含有轉(zhuǎn)移因子的轉(zhuǎn)移因子提取物在本文中也稱(chēng)作轉(zhuǎn)移因子。將來(lái)自牛初乳提取物的轉(zhuǎn)移因子定義為來(lái)自初乳的通過(guò)標(biāo)稱(chēng)10,000分子量濾膜的脫脂水溶性物質(zhì)。制備了對(duì)各種生物體包括牛鼻傳染性氣管炎病毒具有活性的初乳來(lái)源的轉(zhuǎn)移因子。轉(zhuǎn)移因子的特異性作用之一為顯著增加的天然殺傷(NK)細(xì)胞活性。天然殺傷細(xì)胞提供了對(duì)抗病毒的防衛(wèi)作用作為先天免疫防御系統(tǒng)的組成部分。
盡管轉(zhuǎn)移因子為多肽，但是據(jù)報(bào)導(dǎo)它在胃腸道中驚人地穩(wěn)定。例如，Kirkpatrick在臨床研究中比較了轉(zhuǎn)移因子的口服與非腸道給藥。Kirkpatrick，Biotherapy，913-16，1996。他的結(jié)論是結(jié)果反駁了胃腸道的酸性或酶環(huán)境可能妨礙使用轉(zhuǎn)移因子的口服療法的任何論點(diǎn)。
當(dāng)嘗試對(duì)TF進(jìn)行測(cè)序時(shí)，據(jù)報(bào)導(dǎo)轉(zhuǎn)移因子肽的N-末端耐受順序埃德曼降解。Kirkpatrick，Molecular Medicine，6(4)332-341(2000)。
轉(zhuǎn)移因子還已成功地用于治療動(dòng)物疾病和綜合征包括反芻動(dòng)物的組合物。參見(jiàn)2003年4月24日公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)US2003/0077254。
因此，認(rèn)為轉(zhuǎn)移因子在胃腸道和瘤胃中穩(wěn)定。
發(fā)明概述本發(fā)明基于轉(zhuǎn)移因子并非如曾經(jīng)認(rèn)為的那樣穩(wěn)定這一發(fā)現(xiàn)。這在反芻動(dòng)物的情況中特別真實(shí)。
本發(fā)明提供了組合物，其中轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖為“包囊的”。包囊保護(hù)轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖免于在胃腸道中失活。這類(lèi)包囊對(duì)發(fā)現(xiàn)在瘤胃內(nèi)消化成為問(wèn)題的反芻動(dòng)物中尤其重要。已經(jīng)證實(shí)當(dāng)對(duì)轉(zhuǎn)移因子包囊并且對(duì)反芻動(dòng)物給藥時(shí)，生物利用度得以提高。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)與疏水性物質(zhì)或脂質(zhì)混合將轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖包囊而在轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖周?chē)纬砂隆?br> 可以將含有包囊的轉(zhuǎn)移因子和/或包囊的葡聚糖的包囊制劑與礦物、抗氧化劑、氨基酸和其它營(yíng)養(yǎng)制品組合。本文所用的“包囊制劑”指的是包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑和/或包囊的葡聚糖制劑。因此，包囊的制劑可以指包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑、包囊的葡聚糖制劑或既含有包囊的轉(zhuǎn)移因子又含有包囊的葡聚糖的包囊制劑。
本發(fā)明的一個(gè)方面在于為預(yù)防對(duì)動(dòng)物給予包囊的制劑。
另一個(gè)方面在于對(duì)動(dòng)物給予包囊的制劑以便治療病理性情況，諸如心臟病、炎癥和血管疾病。
另一個(gè)方面在于對(duì)動(dòng)物給予包囊的制劑以便增加食物轉(zhuǎn)化。
另一個(gè)方面在于提供轉(zhuǎn)移因子制劑，諸如包括一種或多種靶向的轉(zhuǎn)移因子的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供轉(zhuǎn)移因子制劑，其中轉(zhuǎn)移因子包括靶向的轉(zhuǎn)移因子，例如，其靶向至單純皰疹病毒1、單純皰疹病毒2、幽門(mén)螺桿菌、Champhobactor或衣原體。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括乳酸菌的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括肌醇六磷酸、橄欖葉提取物、蘆薈提取物粉和β-谷甾醇的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括酵母提取物的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括抗壞血酸的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括磷酸氫二鉀的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括氯化鉀、硫酸鎂和泛酸鈣的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括維生素E的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括維生素C、維生素A、維生素D3、維生素B1、維生素B2和維生素B12的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供還包括鋅例如蛋白鋅的包囊的制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供轉(zhuǎn)移因子制劑，其中通過(guò)將所述的制劑例如通過(guò)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射注入動(dòng)物實(shí)現(xiàn)瘤胃分流。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供轉(zhuǎn)移因子制劑，其中通過(guò)將該制劑經(jīng)陰道內(nèi)、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)施用給動(dòng)物、直接施用在粘膜上或通過(guò)誘導(dǎo)食管溝開(kāi)放實(shí)現(xiàn)瘤胃分流。
本發(fā)明的另一個(gè)方面在于提供制備本文所述的包囊的制劑的方法，通過(guò)將各種組分合并成所述制劑來(lái)進(jìn)行。
另一個(gè)方面在于提供制備雜交葡聚糖類(lèi)的方法，通過(guò)使兩種不同的真菌在培養(yǎng)物中接觸諸如使真菌細(xì)胞壁降解的蛇毒這類(lèi)組合物來(lái)進(jìn)行。這允許在兩種真菌之間進(jìn)行遺傳交換，所述的兩種真菌提供制備雜交葡聚糖類(lèi)和其它雜交組合物的雜交真菌制品。
還披露了通過(guò)該方法制備的雜交真菌以及在這類(lèi)雜交真菌中發(fā)現(xiàn)的雜交葡聚糖類(lèi)和其它雜種分子。
附圖簡(jiǎn)述附

圖1列出了使用表7的包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑獲得的結(jié)果。當(dāng)將用包囊的轉(zhuǎn)移因子治療的動(dòng)物與未使用轉(zhuǎn)移因子治療的對(duì)照組相比時(shí)，發(fā)病率從15.5％降至3.1％，而死亡率從5.5％降至0％。此外，對(duì)照組的每日體重增加為1.85lbs/天，與之相比，使用包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑治療的那些動(dòng)物的每日體重增加為3.05lbs/天。
附圖2為涉及表7的包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑在使用高應(yīng)激牛的不同現(xiàn)場(chǎng)研究中的應(yīng)用的第二項(xiàng)研究。在本研究中，與未接受轉(zhuǎn)移因子的對(duì)照組相比，在那些使用包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑治療的動(dòng)物中，動(dòng)物發(fā)病率從83％降至2.6％，而死亡率從24％降至0％。此外，對(duì)照組群體具有0.9lbs/天的體重增加，與之相比，那些使用包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑治療的動(dòng)物的體重增加為3.1lbs/天。
發(fā)明詳述本發(fā)明的包囊的制劑含有包囊的轉(zhuǎn)移因子和/或包囊的葡聚糖，包括雜交葡聚糖類(lèi)?？梢詫⑥D(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖各自分別包囊或作為混合物包囊?；蛘?，可以對(duì)整體制劑包囊。
本發(fā)明可以使用各種形式的轉(zhuǎn)移因子。它們包括從含有轉(zhuǎn)移因子的細(xì)胞諸如淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞和卵中釋放并且從胞外液諸如初乳和血液中采集的分泌轉(zhuǎn)移因子。另一種形式包括在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞表面上發(fā)現(xiàn)的預(yù)分泌的轉(zhuǎn)移因子。還可以使用來(lái)源于白細(xì)胞、初乳或卵并且具有低于10,000道爾頓分子量和在214納米處具有至少5000單位/吸光度單位的比活性的大體上純化的轉(zhuǎn)移因子。本發(fā)明實(shí)施例中使用并且在下表中涉及且進(jìn)一步在詳細(xì)描述的剩余部分中涉及的轉(zhuǎn)移因子提取自從泌乳的奶牛的總體庫(kù)中采集的初乳和卵。將在實(shí)施例、表和下文描述中使用的轉(zhuǎn)移因子進(jìn)一步定義為來(lái)自牛初乳的通過(guò)標(biāo)稱(chēng)10,000分子量濾膜的脫脂水溶性物質(zhì)。盡管牛初乳衍生的轉(zhuǎn)移因子用于研發(fā)本發(fā)明的制劑，但是本領(lǐng)域任何技術(shù)人員眾所周知可以使用其它的轉(zhuǎn)移因子種類(lèi)和來(lái)源。
轉(zhuǎn)移因子的可選來(lái)源包括但不限于鳥(niǎo)類(lèi)的轉(zhuǎn)移因子、卵轉(zhuǎn)移因子和分離自從非-牛動(dòng)物諸如山羊、豬、馬和人中采集的初乳的轉(zhuǎn)移因子。此外，本發(fā)明的制劑中可以使用來(lái)自任意數(shù)量來(lái)源的轉(zhuǎn)移因子組合。轉(zhuǎn)移因子還可以來(lái)源于為表達(dá)一種或多種轉(zhuǎn)移因子或通過(guò)白細(xì)胞的克隆擴(kuò)充而遺傳改造的重組細(xì)胞。
轉(zhuǎn)移因子的可選種類(lèi)包括但不限于靶向的轉(zhuǎn)移因子。靶轉(zhuǎn)移因子包括采集自已暴露于如下物質(zhì)的來(lái)源的轉(zhuǎn)移因子(1)一種或多種病毒，或其它感染性生物體；(2)一種或多種產(chǎn)生免疫反應(yīng)的抗原；或(3)生物體和抗原的組合。這類(lèi)病毒或其它感染性生物體的實(shí)例包括單純皰疹病毒1、單純皰疹病毒2、幽門(mén)螺桿菌、Champhobactor和衣原體、牛鼻氣管炎病毒、副流感、呼吸道合胞體病毒疫苗、減毒的(modified)活病毒、胎兒彎曲桿菌、犬鉤端螺旋體、感冒傷寒型、哈爾喬型、Leterohaemorrhagiae、波蒙納型鉤端螺旋體菌苗、牛輪狀病毒-冠狀病毒、大腸埃希桿菌菌苗、肖氏梭菌、壞疽抗毒素、溶血性不動(dòng)桿菌、Novy、Sordellii、產(chǎn)氣莢膜桿菌C&D型、菌苗、類(lèi)毒素、睡眠嗜血菌、溶血巴斯德氏菌、Multocida菌苗。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員易于認(rèn)識(shí)到多種其它病毒和其它感染性生物體可以應(yīng)用于本發(fā)明。實(shí)例包括附錄I和附錄II中所列的那些。
表1中列舉了蒙脫石的典型成分。
表2-6中列舉了已經(jīng)用于治療各種動(dòng)物和病理情況的轉(zhuǎn)移因子制劑。在每種情況中，并未如本文所述包囊轉(zhuǎn)移因子。不過(guò)，易于使用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊這些制劑各自中的轉(zhuǎn)移因子，此后與制劑中的其它成分混合。
表2表示了用于治療庫(kù)欣綜合征、庫(kù)欣病、腺瘤、盤(pán)尾絲蟲(chóng)病、甲狀腺機(jī)能減退或EPM的轉(zhuǎn)移因子營(yíng)養(yǎng)制品和載體的制劑的分解。在表2和所有其它表中涉及的“l(fā)b”(磅)指的是體重的磅數(shù)。
表2-6的第2、3和4欄中分別顯示了以量/體重計(jì)的有待以單劑量給予動(dòng)物的制劑成分的大致的高、低和優(yōu)選量。表3和4中的制劑與表2中的制劑極為相似，但它們分別專(zhuān)門(mén)用于狗和貓。表2中表示的制劑主要是為家畜設(shè)計(jì)的。設(shè)計(jì)第5欄中列出的5盎司配方是為了給予1000磅的動(dòng)物，但可以改變并且在某些情況中可以給予500磅動(dòng)物。馬的平均體重約為1000磅。表3中的28.3gm劑量是為體重約為100-200磅的狗計(jì)算的，但也可以將該劑量給予15磅的狗。表4中的2.2gm配方用于體重約為15磅的貓。不過(guò)，由于這些制劑由營(yíng)養(yǎng)制品和轉(zhuǎn)移因子組成，所以本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到該范圍并非確定的且不如對(duì)抗療法的藥物范圍那樣關(guān)鍵。
此外，設(shè)計(jì)表2-4中的制劑主要是為了治療慢性病，設(shè)計(jì)表5中的制劑主要是為了急性病，而表6中的制劑既用于急性病，又用于慢性病。所有制劑可以以大劑量給予以實(shí)現(xiàn)急性反應(yīng)。
表7提供了用于治療病理情況的包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑。該轉(zhuǎn)移因子制劑至少包括包囊的來(lái)源于牛和鳥(niǎo)類(lèi)來(lái)源的轉(zhuǎn)移因子和/或一種或多種雜交葡聚糖類(lèi)。優(yōu)選該制劑中的葡聚糖部分也是包囊的。其它成分包括蛋白鋅、靶向的鳥(niǎo)類(lèi)轉(zhuǎn)移因子、β-谷甾醇、肌醇六磷酸(IP6)、橄欖葉提取物、蘆薈提取物粉、益生菌、枯草芽孢桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、嗜熱芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌和啤酒糖酵母。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該轉(zhuǎn)移因子制劑中包括所有上述成分。
在優(yōu)選的包囊實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)移因子在制劑中的存在量為10mg-12gm/oz，更優(yōu)選100mg-6gm/oz，且最優(yōu)選10mg-3gm/oz。
使用優(yōu)選為轉(zhuǎn)移因子的25％-150wt/％，約50-150wt/％和約75-125wt/％的疏水性或脂質(zhì)包衣給轉(zhuǎn)移因子包囊，其中最優(yōu)選等重量。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的雜交葡聚糖類(lèi)存在于冬蟲(chóng)夏草屬且特別是冬蟲(chóng)夏草雜交株中或來(lái)源于這些雜交株。誘導(dǎo)冬蟲(chóng)夏草屬雜交的一種技術(shù)包括將兩種不同菌株或種類(lèi)平板接種在已經(jīng)用響尾蛇毒接種的單一瓊脂平板上，如實(shí)施例17和18中詳述。正如所述的，蛇毒起削弱冬蟲(chóng)夏草屬菌株/種類(lèi)的細(xì)胞壁的作用，這使得在它們彼此生長(zhǎng)接近時(shí)在菌株/種類(lèi)之間進(jìn)行核質(zhì)交換。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，產(chǎn)生本發(fā)明雜交葡聚糖類(lèi)的雜交株為獲自Pacific Myco Products，Santa Cruz，California的冬蟲(chóng)夏草Alohaensis。
存在許多不同的冬蟲(chóng)夏草菌株，并且因其可變的無(wú)性菌絲生長(zhǎng)形式而導(dǎo)致許多分類(lèi)學(xué)家認(rèn)為它們?yōu)椴煌N類(lèi)。菌株的非窮盡列舉包括Paecilomyces hepiali Chen、Cephalsporim sinensis、Paecilomycessinensis Cn80-2、Scydalilum sp.、Hirstutella sinenis、Mortierella hepiali，Chen Lu、Topycladium sinensis、Scytalidiumhepiali，G.L.Li。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案利用了來(lái)自這些不同菌株中的一種或多種的雜交體的雜交葡聚糖類(lèi)，然而，本發(fā)明可以可選地優(yōu)先包括來(lái)自非-雜交株的葡聚糖類(lèi)。備選實(shí)施方案使用了全雜交冬蟲(chóng)夏草屬，例如冬蟲(chóng)夏草Alohaensis。雜交葡聚糖類(lèi)還包括通過(guò)雜交飼料的來(lái)源例如燕麥等獲得的那些雜交葡聚糖。
當(dāng)使用葡聚糖類(lèi)或雜交葡聚糖類(lèi)時(shí)，制劑優(yōu)選含有10mg-18gm完整生物體/oz，更優(yōu)選100mg-10gm完整生物體/oz且最優(yōu)選100mg-5gm完整生物體/oz。
還可以使用等量的純化或部分純化的葡聚糖或雜交葡聚糖類(lèi)以及與之相關(guān)的核苷類(lèi)(例如蛹蟲(chóng)草菌素(3’脫氧腺苷)、腺苷和N6-(2羥乙基)-腺苷)。
就包囊的轉(zhuǎn)移因子而言，優(yōu)選疏水性或脂質(zhì)包衣的量約為雜交葡聚糖的25％-150wt/％，約50-150wt％或約75-125wt/％，其中最優(yōu)選相等重量。
還可以包囊制劑中的其它成分。例如，可以分別包囊IP6、β-谷甾醇、橄欖葉提取物、蘆薈提取物和/或維生素C或可以將它們與一種或多種成分合并，此后進(jìn)行包囊。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，IP6的存在量為10mg-3gm/oz，或一種優(yōu)選的情況為100mg-2gm/oz，且最優(yōu)選100mg-1gm/oz。β-谷甾醇的優(yōu)選量為10mg-3gm/oz，或優(yōu)選100mg-2gm/oz，，且最優(yōu)選100mg-1gm/oz。橄欖葉提取物的優(yōu)選存在量為2mg-2gm/oz，更優(yōu)選5mg-1gm/oz，且最優(yōu)選5mg-500gm/oz。蘆薈提取物優(yōu)選的存在量為2mg-1000mg，更優(yōu)選5-500mg/oz，且最優(yōu)選5-250mg/oz。維生素C的存在量可以為10mg/oz-10gm/oz，或優(yōu)選100mg-8gm/oz，且最優(yōu)選100mg-5gm/oz。
制劑中使用的轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖的量或給予的制劑的量根據(jù)呈現(xiàn)的臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度而改變。此外，與接受者種類(lèi)相比，對(duì)接受者給予的轉(zhuǎn)移因子的量隨轉(zhuǎn)移因子所來(lái)源的種類(lèi)而改變。已經(jīng)觀察到對(duì)牛給予來(lái)源于牛種類(lèi)的轉(zhuǎn)移因子比來(lái)自另一種類(lèi)諸如鳥(niǎo)類(lèi)的轉(zhuǎn)移因子更為有效。因此，當(dāng)轉(zhuǎn)移因子的來(lái)源和接受者為不同種類(lèi)時(shí)，優(yōu)選增加轉(zhuǎn)移因子的量。
預(yù)計(jì)給予包囊的轉(zhuǎn)移因子與鋅和至少一種必需脂肪酸的制劑可以對(duì)庫(kù)興綜合征、庫(kù)欣病、腺瘤和其它良性腫瘤、盤(pán)尾絲蟲(chóng)病、甲狀腺機(jī)能減退或EPM產(chǎn)生至少部分有效的治療。當(dāng)加入表2中所列的其它營(yíng)養(yǎng)制品時(shí)，這種治療更為有效。除非另有說(shuō)明，劑量按毫克/磅計(jì)。存在于含有其它優(yōu)選營(yíng)養(yǎng)制品的5盎司轉(zhuǎn)移因子制劑中的成分的量如表2第5欄中所示。
對(duì)患有庫(kù)興綜合征、庫(kù)欣病、腺瘤或其它良性腫瘤、盤(pán)尾絲蟲(chóng)病、甲狀腺機(jī)能減退或馬原生動(dòng)物脊髓炎(myelytis)的動(dòng)物每日一次給予的劑量約0.75mg/lb轉(zhuǎn)移因子的包囊的轉(zhuǎn)移因子聯(lián)合約0.49mg/lb鋅和必需脂肪酸(即3，6，9ω脂肪酸)來(lái)源的20.57mg/lb蕓苔油、紅花油或亞麻油應(yīng)使得良性腫瘤的大小和/或這些所列疾病的癥狀減少約30％-50％。當(dāng)然，所有這些成分對(duì)接受它們的動(dòng)物而言應(yīng)為藥物上可接受的。
約2.16mg/lb的維生素C和2.29mg/lb的酵母與上述轉(zhuǎn)移因子和其它脂肪酸營(yíng)養(yǎng)制品的組合應(yīng)使得良性腫瘤的大小和/或上述疾病的癥狀減少約40％-50％。
在本發(fā)明的所有制劑中，優(yōu)選使金屬營(yíng)養(yǎng)制品蛋白鹽化，因?yàn)檫@些形式對(duì)動(dòng)物而言更易于消化并且還因蛋白鹽形式對(duì)pH更為穩(wěn)定。表2-7中制劑中的營(yíng)養(yǎng)成分為用于治療各種所述疾病和綜合征的活性成分。包括填充劑和載體是使制劑對(duì)動(dòng)物而言更為適口并且還有助于保存混合物。它們包括二氧化硅、麥芽糖糊精、大豆和花生粉、花生油、葡萄糖、乳清、香料和矯味劑。混合的生育酚類(lèi)和氯化膽堿為營(yíng)養(yǎng)制品，但通過(guò)從制劑中刪除這兩種成分仍然可以獲得本文所述的有效的效果。
未包囊的轉(zhuǎn)移因子在反芻動(dòng)物例如牛中的先前應(yīng)用產(chǎn)生了顯著的有益效果。例如，參見(jiàn)2003年4月24日公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)US2003/0077254，將該文獻(xiàn)完整地引入本文作為參考。隨后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移因子在應(yīng)激牛群中的口服給藥并不穩(wěn)定。在發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移因子在有瘤胃液和菌群存在下在體外失活后，確定先前使用轉(zhuǎn)移因子在反芻動(dòng)物中的成功是因存在食管溝所致。當(dāng)非應(yīng)激時(shí)，食管溝提供瘤胃的部分分流。不過(guò)，在應(yīng)激群體中，食管溝關(guān)閉并且將轉(zhuǎn)移因子制劑分流入瘤胃。發(fā)現(xiàn)用疏水性物質(zhì)或脂質(zhì)包囊轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖類(lèi)而形成包囊的制劑甚至在應(yīng)激群體中也足以提供瘤胃的實(shí)質(zhì)分流(例如85％)。
已知用于瘤胃分流的各種其它方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，將包囊或未包囊的制劑直接注射(皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi))，從而不僅繞過(guò)瘤胃而且還繞過(guò)整個(gè)消化系統(tǒng)。類(lèi)似地，陰道內(nèi)、直腸內(nèi)或其它直接給藥至粘膜，諸如眼結(jié)膜下，繞過(guò)消化系統(tǒng)且特別是瘤胃?；蛘?，可以將制劑與各種能夠允許直接皮膚吸收的溶劑混合。此外，本領(lǐng)域中公知刺激各種反芻動(dòng)物食管溝開(kāi)放的方法，并且這類(lèi)開(kāi)放能夠使口服給藥的制劑立即通過(guò)而達(dá)到胃腸道，從而繞過(guò)瘤胃。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)使用包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑有利于瘤胃分流。
可以按照各種方式生產(chǎn)包囊的轉(zhuǎn)移因子和/或包囊的葡聚糖制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，如美國(guó)專(zhuān)利US5,190,775、US6,013,286和US申請(qǐng)2003/0129295中所述包囊制劑中的轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖的每一種，將上述文獻(xiàn)各自的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。簡(jiǎn)單地說(shuō)，引述的專(zhuān)利和申請(qǐng)中所述的方法集中在應(yīng)用提供保護(hù)作用以避免瘤胃的降解性質(zhì)的疏水性或脂質(zhì)包衣，聯(lián)合抑制包囊的制劑漂浮的附加表面活性劑包衣，以便有利于制劑離開(kāi)瘤胃并且進(jìn)一步通過(guò)消化系統(tǒng)。疏水性包衣的優(yōu)選實(shí)例包括但不限于植物油和氫化植物油，它們各自來(lái)源于棕櫚、棕櫚仁、棉子、大豆、玉米、花生、巴巴蘇、向日葵或紅花油及其混合物或由它們制成。此外，可以將這類(lèi)包衣與蠟混合，諸如，但不限于蜂蠟、石油蠟、米糠蠟、蓖麻蠟、微晶蠟及其混合物。表面活性劑的優(yōu)選實(shí)例包括但不限于聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、丙二醇、二辛基琥珀?；撬徕c、十二烷基硫酸鈉、脂肪酸的乳酰酸酯類(lèi)、脂肪酸的聚甘油酯類(lèi)及其混合物。
這類(lèi)包囊的制劑除其在瘤胃分流中的作用外，還具有多種益處。首先，包囊防止制劑降解并且提供明顯較長(zhǎng)的貯存期限。這類(lèi)包囊的制劑可以耐受加熱至高于135的溫度，而這一溫度是許多包括給動(dòng)物飼料制粒或加工人類(lèi)消耗品的生產(chǎn)方法中所必需的。包囊還除去了通常存在于制劑中的苦味和氣味，且由此極大地增加了適口性。包囊還在制劑中賦予了柔韌性，使得脆弱成分不會(huì)與粗糙的礦物、鹽或可變pH發(fā)生相互作用。
由于貯存期限、熱穩(wěn)定性、適口性和柔韌性增加，所以包囊的制劑諸如包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑優(yōu)選用于人類(lèi)和動(dòng)物消耗。用于人類(lèi)消耗的優(yōu)選實(shí)施方案包括但不限于在加工食品諸如谷類(lèi)、點(diǎn)心、土豆片或塊條狀食品中引入包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑。用于動(dòng)物消耗的優(yōu)選實(shí)施方案包括但不限于混入飼料顆粒、舔鹽、舔食糖蜜或其它加工飼料產(chǎn)品中的包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑。
包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑應(yīng)用于增加食物轉(zhuǎn)化效率。食物轉(zhuǎn)化效率為生物體可以將食物轉(zhuǎn)化成體重的比率，并且在牛工業(yè)中還稱(chēng)作飼料轉(zhuǎn)化效率。包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑已經(jīng)成功地用于以比未治療的牛增加的速率增加牛的體重，甚至在治療的?；疾〉那闆r中也是如此。因此，包囊的制劑并不限于預(yù)防和治療病理情況，而且應(yīng)用于生物體總體健康和發(fā)育的其它方面。
本發(fā)明包囊的轉(zhuǎn)移因子制劑包括適合于給藥的藥物組合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物為水溶性形式，諸如作為藥物上可接受的鹽存在，其含義是包括酸和堿加成鹽?！八幬锷峡山邮艿乃峒映甥}”指的是那些保持游離堿的生物有效性并且不是生物學(xué)或其它方面不希望的鹽，其與無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸形成，所述的無(wú)機(jī)酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，且有機(jī)酸諸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)-甲苯磺酸、水楊酸等。“藥物上可接受的堿加成鹽”包括那些來(lái)源于無(wú)機(jī)堿的鹽，諸如鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。特別優(yōu)選銨、鉀、鈉、鈣和鎂鹽。來(lái)源于藥物上可接受的有機(jī)無(wú)毒性堿的鹽包括如下化合物的鹽伯、仲和叔胺類(lèi)，取代的胺類(lèi)，包括天然存在的取代的胺類(lèi)，環(huán)胺類(lèi)，和堿離子交換樹(shù)脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。
藥物組合物還可以包括一種或多種如下成分載體蛋白，諸如血清白蛋白；緩沖劑，諸如乙酸鈉；填充劑，諸如微晶纖維素、乳糖、玉米和其它淀粉；粘合劑；增甜劑和其它矯味劑；著色劑；和聚乙二醇。添加劑為本領(lǐng)域眾所周知的并且用于各種制劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，將藥物組合物加入到膠束制劑中；參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利US5,833,948，將該文獻(xiàn)完整地引入本文作為參考。
可以給予藥物組合物的組合。此外，可以將組合物與其它治療劑聯(lián)合給藥。
在表2、3或4中的第5欄中的任意制劑的141mg/磅體重的每日劑量持續(xù)14天已經(jīng)成功地治療貓肺炎、貓白血病、貓自身免疫機(jī)能障礙、貓?jiān)橐云ぱ?、貓甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、貓病毒感染、貓潰瘍形成、貓細(xì)菌感染、犬蚤咬性皮炎、犬庫(kù)欣病、惡性腫瘤、犬自身免疫機(jī)能障礙、犬病毒和細(xì)菌感染。這些治療大部分已經(jīng)導(dǎo)致完全的治愈。預(yù)期包囊的轉(zhuǎn)移因子在這些制劑中的應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生相同或更好的結(jié)果。
對(duì)患有良性腫瘤的動(dòng)物給予包括優(yōu)選劑量的所有表2中營(yíng)養(yǎng)制品的制劑使得良性腫瘤的大小減小了約60％且使得患有上述疾病和綜合征的動(dòng)物表現(xiàn)出的癥狀減少了約90％。預(yù)期包囊的轉(zhuǎn)移因子在這些制劑中的應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生相同或更好的結(jié)果。
給予那些表中第3欄中低劑量的表2中所有營(yíng)養(yǎng)制品使得腫瘤的大小減小了約7％-100％且使得患有那些疾病或綜合征的動(dòng)物表現(xiàn)出的癥狀減少了30％-100％。預(yù)期包囊的轉(zhuǎn)移因子在這些制劑中的應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生相同或更好的結(jié)果。
表5中的應(yīng)激制劑也用于治療眾多動(dòng)物疾病和綜合征，并且如前所述，主要用于其急性期。這種制劑還為水溶性的，由此可以在動(dòng)物的飲用水中給予。每天給予兩次約0.75mg/lb轉(zhuǎn)移因子和約1.42mg/lb嗜酸乳桿菌109菌落形成單位(CFU)的混合物會(huì)導(dǎo)致因腺疫、粉塵咳嗽、甲狀腺機(jī)能減退和淋巴細(xì)胞減少產(chǎn)生的臨床癥狀至少減少30％。對(duì)幼小的牛給予相同劑量也會(huì)使發(fā)病率下降約30％。向上述用量的轉(zhuǎn)移因子和產(chǎn)乳酸的細(xì)菌中添加近似表5第4欄中那些的量的每天兩次鈣、鎂、鈉和鉀的離子鹽或螯合物使得上述疾病的臨床癥狀減少了40％。向上述制劑中添加約0.482mg/lb的檸檬酸使得上述疾病的癥狀減少約45％。進(jìn)一步添加維生素A、B2、B6、B12、C和E和硫胺使得這些疾病的癥狀減少50％。每天給予一次或兩次表5第4欄中所示劑量的應(yīng)激制劑會(huì)治愈或至少治療和減輕自身免疫性粉塵咳嗽、由病毒病因?qū)W導(dǎo)致的腹瀉、膿腫、腺疫中、腺疫中的流鼻涕鼻、豬中的急性病毒血癥、馬中的葡萄瘡、因葡萄瘡和盤(pán)尾絲蟲(chóng)病導(dǎo)致的超敏反應(yīng)、PURRS、BRD、小牛痢疾、大腸菌感染、紅球菌屬感染、梭狀芽孢桿菌屬感染、鳥(niǎo)類(lèi)中的圓環(huán)病毒和貓中的肺炎的癥狀。轉(zhuǎn)移因子和產(chǎn)乳酸的細(xì)菌的組合或如表5中所示將該組合進(jìn)一步與酵母合并也可以治療這些疾病，但程度較低。預(yù)期包囊的轉(zhuǎn)移因子的應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生相同或更好的結(jié)果。
每天一次或兩次給予如表5中所示的應(yīng)激制劑也會(huì)提高家畜的體重增加和飼料效率。體重增加可以提高至少8％。轉(zhuǎn)移因子和產(chǎn)乳酸的細(xì)菌的組合或?qū)⒃摻M合如表5中所示進(jìn)一步與酵母合并也可以提高體重增加，但程度較低。預(yù)期包囊的轉(zhuǎn)移因子的應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生相同或更好的結(jié)果。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用含有1gm雜交葡聚糖的2gm包囊的雜交葡聚糖。
表6中顯示了用于治療和治愈眾多疾病的轉(zhuǎn)移因子和營(yíng)養(yǎng)制品的性能制劑的分解，所述的疾病諸如關(guān)節(jié)炎、蹄葉炎、炎癥和惡性腫瘤。還可以使用如下組合治療這些疾病轉(zhuǎn)移因子和超氧化物歧化酶；轉(zhuǎn)移因子和葡糖胺鹽；轉(zhuǎn)移因子、葡糖胺鹽和超氧化物歧化酶；轉(zhuǎn)移因子、葡糖胺鹽、超氧化物歧化酶和甘氨酸；轉(zhuǎn)移因子、葡糖胺鹽、超氧化物歧化酶、甘氨酸和二甲砜；轉(zhuǎn)移因子、葡糖胺鹽、超氧化物歧化酶、甘氨酸、二甲砜和octocosonol；或轉(zhuǎn)移因子、葡糖胺鹽、超氧化物歧化酶、甘氨酸、二甲砜、octocosonol和蒙脫石。
表7顯示了含有轉(zhuǎn)移因子與雜交和非-雜交葡聚糖的制劑。
可以將任意上述制劑摻入包囊的配方。
表1蒙脫石成分每盎司平均營(yíng)養(yǎng)物含量(1湯匙＝～0.36oz.)(mg)硅6933 鎢 0.218鋁硅石(Aluminum Silica) 2505 釩 0.215氯化鈉1320 釕 0.210鉀1293 Baron0.189蛋白質(zhì)1116 溴 0.140鈣1104 鈷 0.129硫431 硒 0.110鐵431 Syprosium0.107鎂224 氟 0.102氯164 鈧 0.0997鈦61.9 釤 0.0943碳48.2 锘 0.0754鈉37.2 銅 0.0593鋇10.5 鐠 0.0539磷酸鹽8.62 鉺 0.0539鍶6.46 鉿 0.0539銫4.93 鐿 0.0377錳4.04 鋰 0.0377釷2.69 釔 0.0323鈾2.69 鈥 0.0296砷1.97 鎘 0.0296鉻1.89 鈀 0.0189鉬1.64 鋱 0.0161鎳1.62 銩 0.0161碘1.28 金 0.0161鉛1.17 鉭 0.0135鈰1.08 銥 0.0135銣0.983 镥 0.0108銻0.781 銪 0.0108鎵0.673 銠 0.0108鍺0.673 錫 0.0108釹0.539 銀 0.00808鋅0.539 銦 0.00808鑭0.486 氧 0.00539鉍0.385 汞 0.00269鋯0.269 碲 0.00269錸0.269 鈹 0.00269鉈0.269
表2預(yù)混合物制劑(除非另有說(shuō)明，按mg/lb體重計(jì)的量)
(*)產(chǎn)乳酸的細(xì)菌占該成分的三分之二且酵母為三分之一；產(chǎn)乳酸的細(xì)菌為500,000,000 CFU/gm，酵母(例如“糖酵母屬”)250,000,000 CFU/gm
表3犬預(yù)混合物制劑(除非另有說(shuō)明，按mg/lb體重計(jì)的量)
(*)產(chǎn)乳酸的細(xì)菌占該成分的三分之二且酵母占三分之一；產(chǎn)乳酸的細(xì)菌為500,000,000 CFU/gm，酵母(例如“糖酵母屬”)250,000,000 CFU/gm
表4貓預(yù)混合物制劑(除非另有說(shuō)明，按mg/lb體重計(jì)的量)
(*)產(chǎn)乳酸的細(xì)菌占該成分的三分之二且酵母占三分之一；產(chǎn)乳酸的細(xì)菌為500,000,000 CFU/gm，酵母(例如“糖酵母屬”)250,000,000 CFU/gm
表5應(yīng)激制劑(除非另有說(shuō)明，按mg/lb體重計(jì)的量)
(*)109菌落形成單位(CFU)/gm
表6性能制劑(除非另有說(shuō)明，按mg/lb體重計(jì)的量)
*這些量是為體重約為450-1,000磅的家畜動(dòng)物、體重約為150磅的山羊以及體重為約8-約15磅的狗和貓計(jì)算的。
1轉(zhuǎn)移因子的量可以根據(jù)不同物種而改變，但其它成分的量對(duì)每個(gè)物種而言保持相同。
表7家畜應(yīng)激瘤胃分流劑(除非另有說(shuō)明，按mg/lb體重計(jì)的量)
*這些量是為體重約為450-1,000磅的家畜動(dòng)物、體重約為150磅的山羊以及體重為約8-約15磅的狗和貓計(jì)算的。
1在50％大豆油和50％活性組分的制劑中包括經(jīng)穩(wěn)定的活性組分。
下列實(shí)施例用于更完整地描述使用上述發(fā)明的方式并且列舉了為實(shí)施本發(fā)明各個(gè)方面所預(yù)期的最佳模式。應(yīng)理解這些實(shí)施例決不用于限定本發(fā)明的真實(shí)范圍，而是提供用于解釋目的。特別將本文引述的所有專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、公開(kāi)出版物和參考文獻(xiàn)完整地引入作為參考。
實(shí)施例1I組將240頭雜種小母牛隨機(jī)分成各80頭小牛的三組。分別給它們稱(chēng)重且它們接受由牛傳染性鼻氣管炎(IBR)病毒、滅活的牛病毒性腹瀉病毒(BVD)、減毒的-活的牛呼吸道合胞病毒(BRSV)和滅活的副流感-3(PI3)病毒、對(duì)7個(gè)梭狀芽孢桿菌種類(lèi)的多價(jià)菌苗類(lèi)毒素組成的聯(lián)合減毒活病毒疫苗；dormectin dewormer(Ivomec)；和黃體酮植入物。在處理后10天，對(duì)小牛給予加強(qiáng)劑量它們最初接受的同一減毒活疫苗。一組平均440.1磅的80頭小牛在處理的同時(shí)通過(guò)劑量注射器接受1盎司劑量的溶于1盎司水的如表5第5欄中所列的應(yīng)激制劑。此后，在處理后對(duì)它們給予混合在飼料(總混合定量-TMR)中每日1盎司的應(yīng)激制劑的劑量持續(xù)4天。第二組平均為440磅的80頭小牛在最初處理的同時(shí)接受1.5ml/cwt替米考星(Micotil)。第三組平均為449.9磅的80頭小牛用作對(duì)照組。在處理后對(duì)這些組觀察26天，此時(shí)再次給每頭小牛稱(chēng)重并且對(duì)每組共同計(jì)算飼料效率。
II組將200頭雜種原種小母牛隨機(jī)分成各50頭小牛的四組。按照與I組中的原種相同的方式處理它們。一組平均441磅的50頭小牛每天在其TMR中接受1盎司如表4第5欄中所列的應(yīng)激制劑，持續(xù)5天。第二組平均為433磅的50頭小牛在其TMR中接受1/2盎司的相同應(yīng)激制劑，持續(xù)5天。第三組平均為47磅的50頭小牛在最初處理的同時(shí)接受metaphylactic 1.5ml/cwt替米考星/cwt。第四組平均為432磅的50頭小牛用作對(duì)照組。所有四組中的每頭小母牛在最初處理后10天接受加強(qiáng)劑量的IBR、PI3、BVD和BSV的減毒活病毒組合疫苗。在處理后對(duì)各組觀察26天，此時(shí)再次給每頭小牛稱(chēng)重并且對(duì)每組共同計(jì)算飼料效率。
對(duì)體重增加進(jìn)行單向方差統(tǒng)計(jì)分析。使用α＝0.05作為第一類(lèi)誤差率進(jìn)行F-檢驗(yàn)和LSD平均值分離。軟件為SAS(1999)，程序GLM。
所用BRD發(fā)病率的統(tǒng)計(jì)分析使用Fisher’s精確檢驗(yàn)的卡方分析，具有0.05或0.05以下幾率解釋為解釋各組之間發(fā)病率差異有顯著性。
下文的表8和9中列出了結(jié)果。
就I組而言，在處理的當(dāng)天通過(guò)劑量注射器用在1盎司水溶液中的1盎司應(yīng)激制劑并且在處理后將1盎司應(yīng)激制劑/天加入到TMR中持續(xù)4天而治療的80頭小母牛中沒(méi)有患病的牽出(pull)(即進(jìn)行治療的患病的小牛)。在來(lái)自對(duì)照組中有17頭患病的牽出和4頭因BRD再牽出，而在來(lái)自替米考星組中有12頭患病的牽出和1頭再牽出。
在I組中小母牛在26天測(cè)試期限內(nèi)具有的平均每日體重增加為3.63磅，在與其它兩組相比時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。替米考星和對(duì)照組的每日平均體重增加(ADG)分別為2.96和3.08磅。應(yīng)激制劑、替米考星和對(duì)照組的飼料效率分別為6.73，6.94和6.66。
在II組中1盎司應(yīng)激制劑劑量組中的小母牛的平均每日體重增加為3.2磅，那些在0.5盎司應(yīng)激制劑劑量組中的小母牛具有的平均每日體重增加為3.05磅，替米考星和對(duì)照組具有的每日平均體重增加分別為2.88和2.92磅。1盎司應(yīng)激制劑的飼料效率為5.31，而對(duì)半盎司應(yīng)激制劑、替米考星和對(duì)照組而言的值分別為6.09、6.10和5.99。
在接受從處理的當(dāng)天開(kāi)始持續(xù)5天的加入到總混合定量中的1盎司應(yīng)激制劑/天的50頭小母牛的組中存在進(jìn)行BRD治療的11頭患病牽出和再牽出，而接受TMR中1/2盎司TF持續(xù)5天的組中存在進(jìn)行BRD治療的13頭患病牽出和4頭再牽出。在30天的測(cè)試期限過(guò)程中在來(lái)自替米考星組中存在5頭患病牽出和2頭再牽出。對(duì)照組小母牛中存在11頭BRD患病牽出和2頭再牽出。
在I組中的各組之間患病牽出比例的差異進(jìn)行比較時(shí)，應(yīng)激制劑在26天測(cè)試期限過(guò)程中表現(xiàn)出提供對(duì)BRD的顯著性防護(hù)。應(yīng)激制劑還顯著地增加了平均每日體重增加。
在II組中，在兩組中的小母牛比另兩組中的小母牛獲得了更好的體重增加。然而，在II組中，對(duì)BRD的防護(hù)看起來(lái)低于替米考星。當(dāng)比較I組與II組之間TF對(duì)BRD的作用時(shí)，結(jié)果看起來(lái)不一致，直到認(rèn)識(shí)到II組中的小母牛在處理過(guò)程中未通過(guò)劑量注射器接受起始劑量的應(yīng)激制劑。該證據(jù)有力論證了通過(guò)劑量注射器或膠囊給予起始劑量以確保每一受試者接受至少完整首次劑量而不完全依賴(lài)于通過(guò)TMR接受應(yīng)激制劑。在兩個(gè)應(yīng)激制劑組中牽出進(jìn)行治療的小母?？赡茉诘谝粋€(gè)關(guān)鍵應(yīng)激天時(shí)未食用TMR的完整部分且由此未接受足以刺激免疫系統(tǒng)的足夠的應(yīng)激制劑。
當(dāng)將每天接受完整盎司應(yīng)激制劑的小母牛與每天接受半盎司的組相比時(shí)，在小母牛的性能上不存在顯著性差異。極為可能的是如果最初通過(guò)劑量注射器或膠囊給予兩種劑量，那么差異甚至可能更小。
在此應(yīng)注意在II組中應(yīng)激制劑組增加的體重值超過(guò)其它組增加的體重值超過(guò)了足以補(bǔ)償應(yīng)激制劑組中治療BRD的成本。
在未預(yù)處理的高危牛諸如在這些研究中的小母牛中，用應(yīng)激制劑直接刺激免疫系統(tǒng)與疫苗給藥看起來(lái)確實(shí)提高了對(duì)BRD的免疫性水平。應(yīng)激制劑表現(xiàn)出減少了對(duì)抗生素治療的需求和或增強(qiáng)了抗生素療法的有效性。
表8I組的結(jié)果每天1oz.應(yīng)激制劑-第1天頓服，隨后4天敷面
表9II組的結(jié)果每天應(yīng)激制劑-5天僅敷面
實(shí)施例2在Fort Bidwell，California的牛群存在牛犢痢疾的長(zhǎng)期問(wèn)題，其中死亡率為63％且發(fā)病率為90％。該問(wèn)題已經(jīng)持續(xù)了7年。沒(méi)有產(chǎn)生改善的治療包括抗生素四環(huán)素、mycotil、硫和青霉菌與其它傳統(tǒng)的治療，諸如液體和止瀉藥，如白陶土和果膠制劑。The University ofCalifronia，Davis和the University of Washington不能提供解決方案。每天用1盎司如表5第5欄中所示的應(yīng)激制劑治療體重約為100磅的40頭測(cè)試小牛，以膠囊形式遞送2天，并且60頭充當(dāng)對(duì)照的小牛不接受任何物質(zhì)用于預(yù)防。在測(cè)試小牛中，1頭動(dòng)物死亡，因?yàn)樗帟r(shí)間過(guò)晚，但其它測(cè)試動(dòng)物中沒(méi)有1頭表現(xiàn)出任何的疾病癥狀。然而，對(duì)照組小牛的痢疾比例占90％，與在先前年中的比例相同。在小牛暴發(fā)痢疾后立即使用應(yīng)激制劑治療它們，小牛好轉(zhuǎn)。目前用1盎司如表5第5欄中所示的應(yīng)激制劑以膠囊形式治療牛群中的新小牛，且它們表現(xiàn)出以每日1粒膠囊持續(xù)2天與測(cè)試小牛相同的結(jié)果。已經(jīng)用應(yīng)激制劑方案治療的牛群中的最后20頭小牛已經(jīng)被放牧吃草并且體重增加7％且具有優(yōu)于測(cè)試小牛的外皮和體態(tài)。小牛中存在類(lèi)似痢疾問(wèn)題的鄰近大農(nóng)場(chǎng)經(jīng)營(yíng)者也開(kāi)始測(cè)試應(yīng)激制劑方案并且已經(jīng)獲得了類(lèi)似的成功結(jié)果。
實(shí)施例3在Pennsylvania的農(nóng)場(chǎng)有40頭卵供體奶牛失去了其所有小牛，并且某些成年奶牛也表現(xiàn)出患病。The University of Ohio將奶牛和小牛診斷為存在產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌A型。最初用幾種可利用的抗生素治療這些奶牛和小牛，但沒(méi)有成功。小牛的發(fā)病率為100％且死亡率為80％。方案開(kāi)始，各自用每天1盎司如表5第5欄中所示的應(yīng)激制劑治療體重約為80-100磅的小牛，從它們初生時(shí)開(kāi)始持續(xù)7天。對(duì)這些小牛不給予抗生素。自從該方案開(kāi)始已治療了約30頭小牛，在牛群中未觀察到痢疾并且不再有小牛死亡。
實(shí)施例4在Columbus Nebraska有130頭奶牛和小牛的牛群患有大腸菌來(lái)源的慢性痢疾。約60％的小牛表現(xiàn)出受到侵害。使用抗生素和液體治療產(chǎn)生了中等程度的成功，死亡率約為10％。然后每天用1盎司如表5第5欄中所示的應(yīng)激制劑將體重各自約為80-100磅并且患有這種痢疾的其中10頭小牛治療3天。在使用該方案3天后，這10頭小牛不再表現(xiàn)出痢疾征象。然而，未治療的小牛仍然存在痢疾問(wèn)題。
實(shí)施例5用預(yù)混合物制劑治療了貓(如表4第5欄中所示2.2gm/每天)、狗(如表3第5欄中所示28.37gm/每天)以及馬和牛(如表2第5欄中所示5oz./每天)中超過(guò)50例的良性腫瘤。這些腫瘤的范圍從良性類(lèi)肉瘤到乳頭瘤(pappilomas)?？傮w來(lái)說(shuō)，腫瘤減小了40％-80％并且甚至在某些病例中完全消失。在接受28.37gm/每天的如表3第5欄中所示預(yù)混合物制劑的狗中且在接受2.2gm/每天的如表4第5欄中所示的預(yù)混合物制劑的貓中，惡性腫瘤諸如口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌得以減少。
實(shí)施例6體重為450磅的100頭牛從大農(nóng)場(chǎng)經(jīng)2小時(shí)卡車(chē)運(yùn)送到達(dá)飼育場(chǎng)并且恰為從奶牛斷奶。通過(guò)常規(guī)的疫苗接種和殺蟲(chóng)劑除蟲(chóng)和注射一次Micotil處理已經(jīng)接種疫苗的牛中的50頭并且用作對(duì)照組。給另外50頭牛接種疫苗，殺蟲(chóng)劑除蟲(chóng)和并且對(duì)它們各自給予1盎司的如表5中所示的含有1500mg轉(zhuǎn)移因子和1418mg產(chǎn)乳酸的細(xì)菌的溶液。將該劑量通過(guò)口服給予各測(cè)試牛再持續(xù)4天。在使用轉(zhuǎn)移因子和產(chǎn)乳酸的細(xì)菌30天后，測(cè)試牛的體重各自比使用Micotil的牛重10磅。
實(shí)施例7產(chǎn)小牛的100頭奶牛存在嚴(yán)重的產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌A型爆發(fā)，其中給予傳統(tǒng)治療的小牛的發(fā)病率為80％且死亡率為30％。對(duì)體重約為110磅的小牛各自給予750mg轉(zhuǎn)移因子和1418mg嗜酸乳桿菌(109菌落形成單位(CFU)/gm)，連續(xù)2天，梭狀芽孢桿菌的發(fā)病率降至20％，死亡率降至5％。
實(shí)施例8500頭體重約600磅的原種牛在6小時(shí)拖車(chē)運(yùn)送后各自從大農(nóng)場(chǎng)進(jìn)入飼育場(chǎng)并且即刻進(jìn)行處理(即殺蟲(chóng)劑除蟲(chóng)和接種疫苗)。按照表5對(duì)250頭或每隔一頭小牛給予750mg轉(zhuǎn)移因子、283mg酵母和2368mg乳酸。處理其它小牛，對(duì)某些給予Micotil，而對(duì)另一部分給予Liquarnycin和磺胺類(lèi)以便在推薦劑量下測(cè)試不同的產(chǎn)品。40天后，轉(zhuǎn)移因子、酵母和乳酸菌小牛比其它小牛重12磅且在轉(zhuǎn)移因子等組中的小牛發(fā)病率比其它小牛低30％。屠宰產(chǎn)量數(shù)據(jù)表明使用轉(zhuǎn)移因子的牛具有大ribeye、低屠宰廢物和較高產(chǎn)量的重大改善。
實(shí)施例9小奶牛場(chǎng)的100頭奶牛群在其首批出生的小牛中存在產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌A型慢性痢疾。使用常規(guī)的治療仍在失去小牛。將剩余的小牛在其出生后每天用如表5中所示的1300mg轉(zhuǎn)移因子和1418mg產(chǎn)乳酸的細(xì)菌和283mg酵母的制劑治療5天，將所述產(chǎn)品混入溶液并且灌服每頭小牛。發(fā)病率減少了60％且死亡率減少了80％。
實(shí)施例10本實(shí)施例比較了口服給予牛轉(zhuǎn)移因子與metaphylactic抗生素(Micotil)治療小牛及其對(duì)應(yīng)激育肥牛的性能和健康的作用。
將約600-700頭育肥牛(各400-500lb)放入圍欄并且提供隨意飲用的清潔水和長(zhǎng)莖干草，此后進(jìn)行處理。在到達(dá)后的24小時(shí)內(nèi)，對(duì)每頭動(dòng)物記錄體重和直腸溫度。通過(guò)加工設(shè)備隨機(jī)操縱牛，并且使用編號(hào)的耳標(biāo)記進(jìn)行惟一鑒定。對(duì)每頭動(dòng)物處理內(nèi)外寄生蟲(chóng)(Phonectin)并且接種疫苗以對(duì)抗常見(jiàn)的病毒(Bovishield 4)和梭狀芽孢桿菌(Fortress-7)疾病。
將每次裝載的小牛以四路分選成23-28頭的各組。每隔一頭動(dòng)物接受1-盎司口服劑量的如表5中所示的未-包囊的牛轉(zhuǎn)移因子(作為口服液體獸用頓服藥給予)，且剩余的動(dòng)物接受1.5ml/100lb BW的Micotil。在第2、3、4和5天給指定牛轉(zhuǎn)移因子組的動(dòng)物補(bǔ)充1盎司/頭/天的牛轉(zhuǎn)移因子作為定量敷面藥。將各組隨機(jī)分配到連續(xù)編號(hào)的圍欄。在最初處理后的第7天使用4-路病毒疫苗(Bovishield-4)給牛重新接種疫苗并且記錄溫度。
實(shí)驗(yàn)膳食提供了約45％的粗飼料和55％的濃縮物。在每天早晨約0700時(shí)確定給每一欄牛提供的飼料量。給牛飼喂足夠的量以便在第2天早晨槽中僅有微量的未消耗的飼料。每天在約0800時(shí)遞送每一圍欄的全部每日定量。在過(guò)量時(shí)，從槽中取出剩余的飼料以防止腐敗。給取出的飼料稱(chēng)重并且在隨后飼料消耗的計(jì)算中予以考慮。
每天監(jiān)測(cè)動(dòng)物的呼吸系統(tǒng)疾病的臨床體征，將表現(xiàn)出呼吸系統(tǒng)疾病臨床征象，包括抑郁、昏睡、食欲缺乏、咳嗽、呼吸急促、鼻和/或眼排出物的牛鑒定為治療的候選者。給動(dòng)物指定范圍從1到4的臨床評(píng)分。臨床評(píng)分為1用于鑒定輕度的呼吸系統(tǒng)疾病，臨床評(píng)分為2表示中等程度的疾病，評(píng)分為3表示重度呼吸系統(tǒng)疾病，而臨床評(píng)分為4代表瀕臨死亡的動(dòng)物。從圍欄中移出(牽出)指定臨床評(píng)分為1或大于1的動(dòng)物并且使其到達(dá)用于測(cè)量體重和直腸溫度的處理區(qū)域。具有1或大于1的臨床評(píng)分的動(dòng)物接受抗生素療法。
治療的所有動(dòng)物均接受用于呼吸系統(tǒng)疾病的標(biāo)準(zhǔn)方案，包括皮下注射10mg/kg劑量的替米考星(Micotil)。記錄直腸溫度并且在治療后使牛返回到其原始的圍欄。如果必要，在48小時(shí)后重復(fù)治療。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采集涉及發(fā)病率、死亡率、體重增加率和飼料攝取的信息。
在接受期間結(jié)束時(shí)，分別給牛稱(chēng)重并且保留10-ml血液的等分部分用于血漿的回收。合并接收圍欄以便來(lái)自每一治療的牛均等分布入兩個(gè)牧場(chǎng)中的每一個(gè)中。然后運(yùn)送牛以便在天然草場(chǎng)上進(jìn)行夏季的放牧。在完成放牧期時(shí)，從牧場(chǎng)中集合起牛并且運(yùn)送以便最后的加工。使牛分布在4個(gè)飼育場(chǎng)的圍欄中，其中將來(lái)自6個(gè)圍欄的牛合并入單一飼育場(chǎng)圍欄(約150-180頭)。
將來(lái)自本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果列在表10中。正如可以觀察到的，這些接受轉(zhuǎn)移因子治療的動(dòng)物具有顯著高于使用Micotil治療的動(dòng)物的抗生素治療牽出率，即對(duì)首次治療而言為73％比48％，而對(duì)二次治療而言為32％比14％，且對(duì)第三次治療而言為17％比50％。
這些結(jié)果表明轉(zhuǎn)移因子在用于治療應(yīng)激牛群時(shí)所起的作用不如替米考星好。
表10
實(shí)施例11體外蛋白質(zhì)降解。將瘤胃液?jiǎn)为?dú)(對(duì)照組)、與酪蛋白或與TF進(jìn)行體外溫育。瘤胃內(nèi)含物獲自2頭瘤胃插管的Jersey肉牛，其飼喂的膳食含有76％蒸玉米片、10％苜蓿干草、3％大豆粉、1.2％脲、5％甘蔗糖蜜和4.8％的礦物維生素預(yù)混合物(DM基礎(chǔ))，供隨意攝取。通過(guò)兩層干酪包布粗濾整個(gè)瘤胃內(nèi)含物并且通過(guò)用制備的McDougall’s緩沖液將遺留在干酪包布上的固體殘余物洗滌4次嘗試除去任何顆粒結(jié)合的生物體，其中使用的緩沖液的總體積與粗濾瘤胃液的原始體積相等。然后通過(guò)八層干酪包布過(guò)濾粗濾的瘤胃液和緩沖溶液混合物并且將它們合并。
最終的接種物含有(每升)450mL粗濾的瘤胃液、450mL來(lái)自洗滌固體的緩沖液提取物、234mg 2-巰基乙醇、50L含有100mg/mL麥芽糖的麥芽糖溶液、25mL60mM硫酸肼溶液和25mL含有1.80mg/mL氯霉素的氯霉素溶液。加入硫酸肼和氯霉素是為了試圖抑制微生物攝取以及NH3和AA的代謝。
將來(lái)自酪蛋白或應(yīng)激制劑(按照Kjeldahl N16的分析預(yù)定酪蛋白和應(yīng)激制劑的N濃度)的40mgN稱(chēng)入500mL埃倫邁爾燒瓶并且加入100mL McDougall’s緩沖液。然后在39℃下溫度-受控的室內(nèi)將含有單獨(dú)的緩沖液(對(duì)照組)、緩沖液+酪蛋白或緩沖液+應(yīng)激制劑的燒瓶溫育1小時(shí)?？偣彩褂?2個(gè)燒瓶，每種處理復(fù)制四份。
通過(guò)向每個(gè)燒瓶中添加200mL接種物，同時(shí)充CO2而啟動(dòng)體外溫育。將溫育進(jìn)行4小時(shí)期限并且在添加接種物(0小時(shí))后立即收集1-mL樣品并且在此后每隔30分鐘收集一次。在取樣時(shí)，將1-mL樣品放入含有0.25mL冷卻的25％w/v三氟乙酸的一次性微量離心管內(nèi)并且儲(chǔ)存在-20℃下直至隨后的分析。
在分析時(shí)，在室溫下融化樣品且然后以21,000xg離心15分鐘并且按照Broderick和Kang17所述，使用Technicon III AutoAnalyzerf分析所得上清液中的NH3和總氨基酸濃度。
蛋白質(zhì)降解率的計(jì)算。盡管在4小時(shí)過(guò)程中進(jìn)行了體外溫育，但是NH3和總氨基酸濃度僅增加了1.5小時(shí)過(guò)程，此后NH3和總AA濃度開(kāi)始下降，提示NH3和總氨基酸被微生物攝取。因此，在計(jì)算體外蛋白質(zhì)降解率的過(guò)程中僅使用0-1.5小時(shí)之間的時(shí)間點(diǎn)。使用如下公式計(jì)算每一時(shí)間點(diǎn)處的體外蛋白質(zhì)降解蛋白質(zhì)降解百分比＝空白校正值([NH3-N])+([總氨基酸-N])/加入到燒瓶中的mg N。使用如下公式計(jì)算每一時(shí)間點(diǎn)處的未降解蛋白質(zhì)百分比100-未降解蛋白質(zhì)百分比。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用使未降解蛋白質(zhì)百分比的自然對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間回歸的回歸分析確定蛋白質(zhì)降解率。所得斜率代表以分?jǐn)?shù)/小時(shí)計(jì)的蛋白質(zhì)降解率。使用ANOVAg分析代表蛋白質(zhì)降解率的斜率，其中將燒瓶用作實(shí)驗(yàn)單位并且模型效應(yīng)由蛋白質(zhì)源組成。
實(shí)施例12具3,800頭育肥牛的牛飼育場(chǎng)運(yùn)行參與使用表7中詳述的組合物的研究。用于該工業(yè)大部分的典型實(shí)踐在于從大農(nóng)場(chǎng)或售賣(mài)庫(kù)購(gòu)買(mǎi)育肥牛且然后將牛運(yùn)送至飼育場(chǎng)。在到達(dá)時(shí)，動(dòng)物一般體重為350-550lbs。對(duì)牛進(jìn)行治療，飼喂并且最終達(dá)到上市重量。參與本研究的飼育場(chǎng)在幾年內(nèi)使用如下治療方案以1.5cc/cwt給予Micotil；TSV-2(鼻內(nèi)IBR-PI-3)；Triangle 4(IBR-PI-3、BVD、BRSV、溶血巴斯德氏菌(Pasturella hemolyticum)和睡眠嗜血菌(Haemophilussomis))；伊維菌素(澆潑劑)；以每天80mg的比例在切碎的包括微量無(wú)機(jī)鹽的混合草料中給予金霉素，持續(xù)21-天。在本研究的前1年，上述方案導(dǎo)致15頭動(dòng)物死亡(3.9％)，1140頭動(dòng)物發(fā)病(30％)，且200頭發(fā)生慢性肺病(肺病患者)(5.3％)。參與的飼育場(chǎng)的方案產(chǎn)生了與對(duì)3,800頭牛的國(guó)家平均值相似或優(yōu)于這一數(shù)值的統(tǒng)計(jì)學(xué)值，所述國(guó)家平均值的死亡率為247頭(6.4％)且發(fā)病率為25％-35％。
在本研究過(guò)程中，使用表7中詳述的組合物補(bǔ)充參與飼育場(chǎng)的標(biāo)準(zhǔn)方案。方案的補(bǔ)充包括三次連續(xù)的治療，各自包括在第1天單次口服給予1oz.膠囊，隨后連續(xù)2天給予1oz.敷面的制劑。
本研究結(jié)果反映出，通過(guò)向先前方案中添加表7中詳述的組合物，顯著和異常地比前一年以及國(guó)家平均值改善。特別地，死亡率降低90％至15頭(0.39％)，發(fā)病率降低68％至342頭(9％)，且慢性肺病降低84％至32頭(0.84％)。
除改善的死亡率和發(fā)病率結(jié)果外，本研究還反映出向先前的方案添加表7中詳述的組合物使得體重增加顯著提高。在先前的治療方案中，在前30天中平均體重增加為45磅。在補(bǔ)充的方案中，在前30天中的平均體重增加為80磅。
實(shí)施例13為維持可接受的Bulk Tank體細(xì)胞計(jì)數(shù)(BTSCC)的持久和進(jìn)行中的奮戰(zhàn)代表了對(duì)乳品工業(yè)的單一最大財(cái)政消耗之一。每頭牛治療的個(gè)體成本可能超過(guò)$250。近期的研究表明所有奶牛中的34.5％具有的SSC在200,000-229,000范圍。對(duì)減少抗生素使用、耐藥微生物株的出現(xiàn)和近來(lái)國(guó)家BTSCC中向上的趨勢(shì)的逐步增長(zhǎng)的壓力進(jìn)一步表明這一問(wèn)題的嚴(yán)重性以及降低和維持減少的體細(xì)胞計(jì)數(shù)的增長(zhǎng)需求。品質(zhì)獎(jiǎng)金形式的財(cái)政獎(jiǎng)賞給SCC控制添加了額外的重要性。因此，進(jìn)行研究以便確定表7中詳述的組合物是否可以用于有效降低BTSCC。
本研究包括因高體細(xì)胞計(jì)數(shù)選擇的26頭奶。對(duì)照組(13頭奶牛)具有1,854,811的SCC起始平均值。治療組(13頭奶牛)具有2,374,000的SCC起始平均值。對(duì)照組中的奶牛在60-天的研究期限過(guò)程中接受標(biāo)準(zhǔn)方案。治療的奶牛接受連續(xù)3天的1oz.表7中詳述的組合物，隨后是3天的休息期，總計(jì)三個(gè)周期(總計(jì)九次治療)。
26天后對(duì)照組和治療組的SCC測(cè)試揭示出對(duì)照組具有的SCC為2,049,636(增加10.5％)，而治療組具有的SCC為957,455(減少59.7％)。因此，治療組具有70.2％的改善，優(yōu)于對(duì)照組。此外，在90-天測(cè)試時(shí)的SCC計(jì)數(shù)顯示SCC減少了26％，表明了所述組合物的殘留效應(yīng)。
實(shí)施例14購(gòu)買(mǎi)64頭高應(yīng)激原種牛并且最初對(duì)32頭(治療組)給予兩粒含有表7中詳述的組合物的1oz.膠囊，而對(duì)剩余的32頭(對(duì)照組)保持不治療。還對(duì)治療組每天給予1oz.的該組合物，再持續(xù)2天。治療組或?qū)φ战M都不接受抗生素治療。在3周后，來(lái)自治療組的5頭小牛因發(fā)病而需要治療，而來(lái)自對(duì)照組有12頭小牛需要這類(lèi)治療(發(fā)病率降低有60％的改善)。此外，盡管在對(duì)照組中有1頭小牛死亡，但是在研究組中無(wú)小牛死亡。
實(shí)施例157只山羊各自患有嚴(yán)重的紅眼、Chlymidia、其它細(xì)菌感染或近乎失明。對(duì)所有7只山羊使用標(biāo)準(zhǔn)用藥3周，幾乎沒(méi)有或無(wú)改善。然后對(duì)所有患病山羊每天給予1oz.表7中詳述的組合物，持續(xù)14天。2只暴發(fā)疾病的山羊在約48小時(shí)內(nèi)停止進(jìn)展，其它山羊在10天內(nèi)恢復(fù)到正常，眼部無(wú)瘢痕形成且感染的山羊中疣突亦減少。在本方案中未使用抗生素。
實(shí)施例16冬蟲(chóng)夏草屬真菌的生長(zhǎng)用于冬蟲(chóng)夏草屬固體底物生長(zhǎng)的理想培養(yǎng)基如下1份白黍子(帶外殼)-4份白蜀黍(帶外殼)，添加0.8％w/w牡蠣粉和1％w/w植物油(花生油或大豆油)。加入水至等于無(wú)菌底物中50％總水分。將該谷物混合物預(yù)煮4-6小時(shí)，此后進(jìn)行滅菌，這一過(guò)程趨向于引起冬蟲(chóng)夏草屬的更為快速的生長(zhǎng)反應(yīng)。在該培養(yǎng)基上，冬蟲(chóng)夏草屬可以生長(zhǎng)長(zhǎng)時(shí)間期限，接近完全轉(zhuǎn)化底物成菌絲體并且完全表達(dá)來(lái)自冬蟲(chóng)夏草屬的次生代謝產(chǎn)物。所得冬蟲(chóng)夏草屬在該底物上生長(zhǎng)時(shí)約為3-4％殘余谷?；蚣s96-98％的純菌絲體。對(duì)該生長(zhǎng)方法實(shí)際的有益性在于贏得了在自始至終的完全生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的胞外代謝物的全部饋贈(zèng)。由于向該混合物中添加了一定的引發(fā)生長(zhǎng)的化合物，所以易于在無(wú)任何昆蟲(chóng)物質(zhì)存在下誘導(dǎo)冬蟲(chóng)夏草在培養(yǎng)物中產(chǎn)生子實(shí)體。然而，子實(shí)體在該培養(yǎng)基上的形成對(duì)分析化學(xué)特性不會(huì)產(chǎn)生任何顯著性改變。
使用上述底物，栽培的冬蟲(chóng)夏草屬的完整化學(xué)特性仍然無(wú)法達(dá)到野生采集的冬蟲(chóng)夏草屬，除非它生長(zhǎng)在極為特殊的條件下。冬蟲(chóng)夏草在正?？諝庋跛胶褪覝叵律L(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生相對(duì)大量的游離腺苷。它還產(chǎn)生大量的尿苷和鳥(niǎo)苷。如果有的話(huà)，僅有極為少量的蛹蟲(chóng)草菌素產(chǎn)生，并且實(shí)際上無(wú)羥乙基腺苷。就產(chǎn)生這些化合物的生物體而言，它需要通過(guò)不存在氧、溫度下降和完全無(wú)光而脅迫生長(zhǎng)。僅從開(kāi)始就在冷和厭氧條件下生長(zhǎng)沒(méi)有用，因?yàn)楫?dāng)冬蟲(chóng)夏草屬在那些條件下生長(zhǎng)時(shí)，它形成具有極為不同化學(xué)特性的酵母樣無(wú)性型。必須首先在熱和快速條件下生長(zhǎng)，然后誘使它們將其“夏季”代謝物轉(zhuǎn)化成靶藥用化合物。為了獲得這些靶化合物，遵循嚴(yán)格的生長(zhǎng)方案。在接種在磨碎的/蜀黍底物上后，使冬蟲(chóng)夏草屬生長(zhǎng)在20-22℃下、發(fā)散光中和海平面空氣氧下28-30天。然后將其移入受控環(huán)境室內(nèi)，其中氧降至50％空氣氧，即約10％的氧。生長(zhǎng)空氣中的剩余部分由氮、一氧化碳和二氧化碳構(gòu)成。使溫度降至3℃，并且排除所有的光。將其保持在這些條件下約15-20周。這一過(guò)程導(dǎo)致大多數(shù)腺苷轉(zhuǎn)化成蛹蟲(chóng)草菌素、雙脫氧-腺苷和羥乙基-腺苷。還產(chǎn)生了許多其它獨(dú)特的核苷類(lèi)，最終化學(xué)特性完全匹配野生冬蟲(chóng)夏草屬。
實(shí)施例17雜交葡聚糖制劑一旦為優(yōu)化靶化合物而確定了底物和生長(zhǎng)參數(shù)，就確定了來(lái)自冬蟲(chóng)夏草不同菌株的化學(xué)特性差異。由于存在如此多的冬蟲(chóng)夏草屬菌株并且菌株各自具有其自身獨(dú)特的化學(xué)特性，所以測(cè)試了所有獲得的菌株。證實(shí)已知菌株中沒(méi)有一種產(chǎn)生近似在野生冬蟲(chóng)夏草屬中發(fā)現(xiàn)的活性組分的量。為了定量地增加靶化合物的產(chǎn)量，進(jìn)行冬蟲(chóng)夏草屬菌株的雜交實(shí)驗(yàn)；對(duì)它們進(jìn)行雜交以便獲得更大產(chǎn)量的靶化合物。進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)以便獲得不同的真菌菌株而實(shí)施其自身的核融合。例如，煙酸可以用于生成雜交菌絲體。該化合物難以使用并且產(chǎn)生不可靠的結(jié)果。在嘗試幾種不同化合物以引起這種融合后，發(fā)現(xiàn)蛇毒起的作用最佳。
從西方有菱形斑紋的響尾蛇(響尾蛇(Crotalus atrox))中純化用于雜交實(shí)驗(yàn)的蛇毒[Sigma Scientific，St.Louis，Missouri，USA]。將該蛇毒加入到瓊脂培養(yǎng)基中，其加入量改變生長(zhǎng)，但證實(shí)不會(huì)對(duì)所述的菌株產(chǎn)生毒性。這種蛇毒的用量范圍在10mg-30mg/300ml瓊脂培養(yǎng)基。該毒液為熱不穩(wěn)定的并且必須在培養(yǎng)基滅菌后以無(wú)菌方式加入。用于這種雜交的為瓊脂稱(chēng)作R7瓊脂的Aloha Medicinals，Inc.，Maui，Hawaii專(zhuān)有瓊脂，它由麥芽汁、活性炭、礦物和腐殖質(zhì)-來(lái)自煤燃燒工業(yè)過(guò)程的富含碳的灰殘?jiān)M成。將確切的制劑列在表11中。也可以使用其它瓊脂。
表11蛇毒/R7瓊脂處方
給這種R7瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿接種來(lái)自?xún)煞N不同冬蟲(chóng)夏草屬菌株的菌絲體。它們通常為兩種冬蟲(chóng)夏草變種，不過(guò)，我們還將冬蟲(chóng)夏草與其它冬蟲(chóng)夏草屬的種類(lèi)，諸如蛹蟲(chóng)草、蟬茸和大團(tuán)囊蟲(chóng)進(jìn)行了雜交。這些不同菌株在被共同接種到一個(gè)培養(yǎng)皿上時(shí)一般彼此相向生長(zhǎng)，直到它們幾乎相遇，此時(shí)它們形成抑制區(qū)帶，在其中無(wú)一菌株可以生長(zhǎng)。最終，一種菌株可強(qiáng)于另一種并在平板上過(guò)度生長(zhǎng)，但它們?nèi)匀槐３诌z傳上的不同；兩種不同的培養(yǎng)物居留于相同的培養(yǎng)皿上。
將足夠的蛇毒添加到瓊脂，兩種培養(yǎng)物彼此相向生長(zhǎng)，直到它們相遇并且形成其相互抑制區(qū)帶。然而，該抑制期限為短壽命的，僅約2或3小時(shí)內(nèi)，菌落各自開(kāi)始將菌絲條發(fā)送入抑制區(qū)帶。這些菌絲條共同生長(zhǎng)并且通過(guò)其經(jīng)毒液弱化的細(xì)胞壁交換核物質(zhì)。它們?cè)诖嗣黠@不同于親代株的新雜交菌株相互接觸點(diǎn)上形成雜交株。在最初形成抑制區(qū)帶后約4小時(shí)內(nèi)，雜交完成并且菌落重新開(kāi)始彼此相向快速生長(zhǎng)。它們變成三種菌落，兩種原始菌落和一種新雜交株。
在菌落開(kāi)始融合的準(zhǔn)確時(shí)間時(shí)從原始的抑制區(qū)帶中小心取出新形成的雜種的一部分。即在菌落最初相遇后3-4小時(shí)過(guò)程中。將雜種轉(zhuǎn)入新的含有一般(無(wú)-蛇毒)瓊脂的培養(yǎng)皿中。一種測(cè)定雜交的方法在于給含有一般瓊脂的新平皿接種所有三種菌株，即兩種原始的和懷疑為雜種的。如果雜交實(shí)際上已經(jīng)發(fā)生，那么它們現(xiàn)在為三種不同的菌落，并且會(huì)形成相互的三向抑制區(qū)帶。如果雜交并未發(fā)生，那么懷疑的雜種易于彼此或與另一種原始菌落融合，從而證實(shí)懷疑的雜種易于原始菌落中的一種或另一種融合，證實(shí)懷疑的雜種并非在遺傳上不同于原始菌株。
一旦證實(shí)了雜種，就測(cè)試其生長(zhǎng)參數(shù)。如果在底物上出現(xiàn)旺盛的和耐寒的生長(zhǎng)物，那么使其長(zhǎng)出一定量的菌絲體，收集并且分析活性組分。通過(guò)按照這種方式重復(fù)測(cè)試，制備了易于在固體底物培養(yǎng)物中生長(zhǎng)的雜交株，它具有比任意其它栽培的菌株更高的效能且至少在效力上等同于最高質(zhì)量野生冬蟲(chóng)夏草屬。這種新的菌株為冬蟲(chóng)夏草(Cordyceps sinensis)Alohaenis。
實(shí)施例18應(yīng)激牛的治療表7中所列的轉(zhuǎn)移因子制劑用于研究應(yīng)激下的活原種牛。對(duì)小牛給予1盎司/頭/天的用量的這種瘤胃分流制劑，持續(xù)4天。有318頭小牛用該轉(zhuǎn)移因子制劑治療。在對(duì)照組群體中有180頭小牛。給所有小牛接種疫苗并且保溫。
來(lái)自本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果出現(xiàn)在附圖1中。正如可以觀察到的，對(duì)照組群體中的發(fā)病率約為15.5％，而轉(zhuǎn)移因子治療群體中的發(fā)病率為3.1％。此外，對(duì)照組群體中的死亡率為5.5％，而轉(zhuǎn)移因子治療的群體中的死亡率為0％。對(duì)照組的每日體重增加為1.85磅/天，而使用轉(zhuǎn)移因子治療的群體具有的日體重增加約為3.05磅/天。
實(shí)施例19在另一研究中，每天用1盎司表7的轉(zhuǎn)移因子制劑對(duì)585頭小牛治療3天并且在第12天時(shí)再接種疫苗的過(guò)程中用1盎司表7的制劑治療。29頭小牛的對(duì)照組群體不接受表7的制劑。在本研究中的所有小牛均接受疫苗和抗生素(Micotil或A-1A)和殺蟲(chóng)劑除蟲(chóng)(Ibomec)。將這些小牛培養(yǎng)4-6天至45天，如果必要，切去角并且將所有公牛閹割?；谠谂囵B(yǎng)場(chǎng)的進(jìn)入和離開(kāi)體重計(jì)算平均日體重增加。
正如可以在附圖2中觀察到的，對(duì)照組的發(fā)病率占83％，而轉(zhuǎn)移因子治療的群體中的發(fā)病率僅為2.6％。類(lèi)似地，對(duì)照組群體中的死亡率為24.1％，與之相比，使用轉(zhuǎn)移因子治療的群體中死亡率為0％。在每一病例中，對(duì)照組群體中的死亡為牛呼吸系統(tǒng)疾病的結(jié)果。此外，對(duì)照組中的日體重增加低于1磅/天，而使用轉(zhuǎn)移因子治療的那些動(dòng)物獲得了約3.1磅/天的體重增加。
附錄1.人和牛病原體潛在的交叉反應(yīng)性
附錄2.人和鳥(niǎo)類(lèi)病原體潛在的交叉反應(yīng)性
權(quán)利要求
1.方法，包括對(duì)動(dòng)物給藥轉(zhuǎn)移因子制劑，其中所述的制劑包括用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊的轉(zhuǎn)移因子。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的疏水性包衣包括必需脂肪和/或植物油。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述的植物油包括大豆油。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的制劑進(jìn)一步包括葡聚糖。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的葡聚糖為雜交葡聚糖。
6.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的葡聚糖用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的疏水性包衣包括必需脂肪和/或植物油。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中所述的植物油包括大豆油。
9.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的轉(zhuǎn)移因子為靶向的轉(zhuǎn)移因子。
10.權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的靶向的轉(zhuǎn)移因子靶向至單純皰疹病毒1、單純皰疹病毒2、幽門(mén)螺桿菌、Champhobactor或衣原體。
11.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的給藥用于預(yù)防。
12.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的給藥用于治療病理性情況。
13.權(quán)利要求12所述的方法，其中所述的病理性情況選自心臟病、炎性疾病和血管疾病組成的組。
14.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的給藥用于增加食物轉(zhuǎn)化的效率。
15.組合物，包括用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊的轉(zhuǎn)移因子。
16.權(quán)利要求15所述的組合物，其中所述的疏水性包衣包括必需脂肪或植物油。
17.權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述的植物油包括大豆油。
18.權(quán)利要求15所述的組合物，進(jìn)一步包括葡聚糖。
19.權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述的葡聚糖為雜交葡聚糖。
20.權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述的葡聚糖用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊。
21.權(quán)利要求20所述的組合物，其中所述的疏水性包衣包括必需脂肪和/或植物油。
22.權(quán)利要求21所述的組合物，其中所述的植物油包括大豆油。
23.權(quán)利要求15所述的組合物，其中所述的轉(zhuǎn)移因子為靶向的轉(zhuǎn)移因子。
24.權(quán)利要求22所述的組合物，其中所述的靶向的轉(zhuǎn)移因子靶向至單純皰疹病毒1、單純皰疹病毒2、幽門(mén)螺桿菌、Champhobactor或衣原體。
25.方法，包括對(duì)動(dòng)物給藥包括葡聚糖的制劑，其中所述的葡聚糖用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的葡聚糖為雜交葡聚糖。
27.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的疏水性包衣包括必需脂肪和/或植物油。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述的植物油包括大豆油。
29.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述的制劑進(jìn)一步包括轉(zhuǎn)移因子。
30.權(quán)利要求29所述的方法，其中所述的轉(zhuǎn)移因子用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊。
31.權(quán)利要求30所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)移因子的所述疏水性包衣包括必需脂肪和/或植物油。
32.權(quán)利要求28所述的方法，其中包囊所述轉(zhuǎn)移因子的所述植物油包括大豆油。
33.組合物，包括用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊的葡聚糖。
34.權(quán)利要求33所述的組合物，其中所述的葡聚糖為雜交葡聚糖。
35.權(quán)利要求33所述的組合物，其中所述的疏水性包衣包括必需脂肪或植物油。
36.權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述的植物油包括大豆油。
37.權(quán)利要求33所述的組合物，進(jìn)一步包括轉(zhuǎn)移因子。
38.權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述的轉(zhuǎn)移因子用疏水性或脂質(zhì)包衣包囊。
39.權(quán)利要求38所述的組合物，其中所述轉(zhuǎn)移因子的所述疏水性包衣包括必需脂肪或植物油。
40.權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述的植物油包括大豆油。
41.組合物，包括轉(zhuǎn)移因子和雜交葡聚糖。
全文摘要
包括用疏水性或脂質(zhì)包衣包被的轉(zhuǎn)移因子和/或葡聚糖諸如雜交葡聚糖的組合物。可以將該組合物與營(yíng)養(yǎng)制品合并，包括鋅、必需脂肪酸、產(chǎn)乳酸的細(xì)菌等。還提供了使用這些組合物預(yù)防和治療動(dòng)物病理情況的方法以及制備這些組合物的方法。
文檔編號(hào)A61K9/52GK1988888SQ200580022833
公開(kāi)日2007年6月27日 申請(qǐng)日期2005年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月20日
發(fā)明者D·V·M·約瑟夫·C·拉馬克斯 申請(qǐng)人:D·V·M·約瑟夫·C·拉馬克斯