專利名稱：用無(wú)規(guī)共聚物治療疾病的方法
相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考本申請(qǐng)要求2004年5月7日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/569292和2005年3月18日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/663333的優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
自身免疫性疾病是由直接抵抗自身抗原的不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答導(dǎo)致的，該免疫應(yīng)答是正常自身耐受狀態(tài)的偏離。當(dāng)在免疫系統(tǒng)早期發(fā)展中發(fā)生的事件阻止了能反應(yīng)抵抗自身抗原的T細(xì)胞和B細(xì)胞的生成時(shí)，出現(xiàn)了自身耐受。通過(guò)能夠結(jié)合肽并將將處理過(guò)的肽呈現(xiàn)于T細(xì)胞上的能力而在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答方面起到重要的作用的細(xì)胞表面蛋白是主要的組織相容性復(fù)合體(MHC)分子(Rothbard，J.B.，等人，1991，Annu.Rev.Immunol.9527)。自身免疫性疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、多發(fā)性硬化(MS)、人I型或胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、自身免疫性葡萄膜炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)和乳糜瀉。
抑制自身免疫應(yīng)答的一個(gè)靶點(diǎn)是淋巴細(xì)胞表面蛋白MHC分子的集合，特別是由MHC II類基因編碼的蛋白，例如HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP。在哺乳動(dòng)物中，每個(gè)MHC基因都發(fā)現(xiàn)以大量替代基因或等位基因的形式存在。感染了某些自身免疫性疾病，例如MS和RA的受試者的基因組，更有可能攜帶一個(gè)或多個(gè)特征的、疾病與之相關(guān)聯(lián)的MHC II類等位基因。
已經(jīng)開發(fā)出很多治療劑用于治療自身免疫性疾病，包括常見的抗炎藥，例如COX-2抑制劑，即通過(guò)抑制環(huán)氧合酶可防止低分子量炎癥化合物形成的藥劑；通過(guò)抑制炎癥的蛋白介質(zhì)，例如通過(guò)用抗TNF特異性單克隆抗體或抗體片段，或用可溶形式的TNF受體隔離炎癥蛋白腫瘤壞死因子(TNF)而起作用的藥劑；以及靶向于T細(xì)胞表面上的蛋白和通常通過(guò)抑制CD4受體或細(xì)胞粘著受體ICAM-1而防止與抗原呈遞細(xì)胞(APC)相互作用的藥劑。然而，作為治療劑的具有天然折疊蛋白的組合物在生產(chǎn)、配制、儲(chǔ)存和遞送方面存在問(wèn)題。這些問(wèn)題中有幾個(gè)使它們必需在醫(yī)院環(huán)境中遞送給患者。
與幾種MHC II類分子相對(duì)非特異性地相互作用和結(jié)合的試劑為共聚物1(Copolymer 1，Cop 1)-合成氨基酸雜聚物，其被報(bào)導(dǎo)可抑制實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE；Sela，M.等人，1990，Bull.Inst.Pasteur(Paris))，所述EAE可以在小鼠中誘導(dǎo)并作為MS的模型。共聚物1為聚(Y，E，A，K)，還已知為醋酸格拉默(glatiramer acetate)或用一個(gè)字母的氨基酸符號(hào)表示的“YEAK”(參見下文；Y表示酪氨酸，E表示谷氨酸，A表示丙氨酸和K表示賴氨酸)，其已經(jīng)用于治療復(fù)發(fā)型MS，但它不能完全抑制該疾病(Bornstein，M.B.等人，1987，N.Engl.J.Med.317408；Johnson，K.P.等人，1995，Neurology 451268)。
盡管無(wú)規(guī)共聚物可有效用于治療自身免疫性疾病(Simpson，D.等人，2003，BioDrugs 17(3)207-10)，但它們重復(fù)的給藥可導(dǎo)致不希望的副作用。因此，需要用導(dǎo)致較少副作用的無(wú)規(guī)共聚物改進(jìn)用于治療自身免疫性疾病的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供用于在受試者中，優(yōu)選在人中治療或預(yù)防疾病的方法和試劑盒。本發(fā)明的一個(gè)方面提供治療或預(yù)防疾病的方法，該方法包括向所述的受試者給藥有效量的無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案用于改善可用所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，所述的有效量以大于24小時(shí)、36小時(shí)或更優(yōu)選大于48小時(shí)的時(shí)間間隔對(duì)所述的受試者遞送。本發(fā)明相關(guān)的方面提供用于治療有需要的受試者的方法，其包括向所述的受試者給藥有效量的無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案用于改善可用所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，使用緩釋制劑對(duì)所述的受試者遞送所述的有效量，所述的緩釋制劑在至少2天、至少4天或至少6天的時(shí)段內(nèi)給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，其中所述的有效量為如果每天遞送可有效的量。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明方法的疾病為由T-細(xì)胞，和特別是TH1細(xì)胞或具有TH1免疫狀態(tài)(immune posture)的細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，或?yàn)楸贿^(guò)量的炎癥細(xì)胞因子所惡化的疾病。在一些實(shí)施方案中，所述疾病為自身免疫性疾病，例如多發(fā)性硬化。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物包含酪氨酸(Y)、苯丙氨酸(F)、丙氨酸(A)和賴氨酸(K)(YFAK共聚物)。在另一些實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物是共聚物1(YEAK)。本發(fā)明并不受任何具體的無(wú)規(guī)共聚物或給藥方式限制。
本發(fā)明還提供用于治療疾病的試劑盒。本發(fā)明的一個(gè)方面提供用于治療自身免疫性疾病的試劑盒，其包含(i)包含無(wú)規(guī)共聚物的組合物和(ii)用于將該組合物在至少24小時(shí)或更優(yōu)選36或48小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間間隔的條件下給藥到受試者的用法說(shuō)明。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的組合物被配制成用于皮下注射的制劑，所述的無(wú)規(guī)共聚物為YFAK或共聚物1，并且所述疾病為自身免疫性疾病，例如多發(fā)性硬化，特別是復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。
本發(fā)明進(jìn)一步提供用于制備治療疾病的藥物的試劑。本文中公開的用于通過(guò)向受試者給藥無(wú)規(guī)共聚物而治療或預(yù)防疾病的所有方法可應(yīng)用于所述無(wú)規(guī)共聚物在制備治療那種疾病的藥劑的應(yīng)用中。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供無(wú)規(guī)共聚物在治療受試者的疾病中的應(yīng)用，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物被配制成可向受試者在大于24小時(shí)、36小時(shí)或更優(yōu)選至少48小時(shí)的時(shí)間間隔的條件下給藥的制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物為共聚物1(YFAK)，并且所述疾病為自身免疫性疾病，例如多發(fā)性硬化，特別是復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。
本發(fā)明還提供經(jīng)營(yíng)醫(yī)藥商業(yè)(pharmaceutical business)的方法。


圖1說(shuō)明共聚物給藥對(duì)于EAE的疾病進(jìn)展的作用。
圖2說(shuō)明當(dāng)用無(wú)規(guī)共聚物給藥時(shí)，患有EAE的小鼠的存活率。
圖3說(shuō)明抵抗在每天或每周劑量下給藥的共聚物所產(chǎn)生的IgG抗體。
圖4說(shuō)明抵抗在每天或每周劑量下給藥的共聚物所產(chǎn)生的IgG1抗體。
圖5說(shuō)明抵抗在每天或每周劑量下給藥的共聚物所產(chǎn)生的IgG2b抗體。
圖6說(shuō)明在治療過(guò)程中抵抗共聚物的抗體效價(jià)的變化。
圖7說(shuō)明在給藥無(wú)規(guī)共聚物的小鼠中，抵抗PLP肽所產(chǎn)生的IgG1抗體。
圖8說(shuō)明在給藥無(wú)規(guī)共聚物的小鼠中，抵抗PLP肽所產(chǎn)生的IgG2b抗體。
圖9說(shuō)明在給藥無(wú)規(guī)共聚物的小鼠中，IL-13對(duì)IFNγ的比例。
圖10說(shuō)明在給藥無(wú)規(guī)共聚物的小鼠中，與TH1相關(guān)細(xì)胞因子相比TH2相關(guān)細(xì)胞因子的誘導(dǎo)偏差。
發(fā)明詳述I.總論本發(fā)明總體上涉及通過(guò)給藥無(wú)規(guī)共聚物進(jìn)行的疾病的治療和預(yù)防，涉及無(wú)規(guī)共聚物在制備用于治療疾病的藥物中的應(yīng)用，并涉及包含無(wú)規(guī)共聚物和用法說(shuō)明二者的試劑盒。本發(fā)明還涉及自身免疫性疾病的治療和涉及用于治療疾病的長(zhǎng)效無(wú)規(guī)共聚物制劑。
本發(fā)明的一個(gè)方面提供治療受試者的方法，其包括向所述的受試者給藥有效量的無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案用于改善對(duì)可用所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，所述有效量以大于36小時(shí)的時(shí)間間隔對(duì)所述的受試者遞送。本發(fā)明相關(guān)的方面提供用于治療受試者的方法，該方法包括向所述的受試者給藥有效量的至少一種無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案用于改善可用所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，所述的有效量的至少一種共聚物以大于24小時(shí)，特別是大于48小時(shí)的時(shí)間間隔對(duì)所述的受試者遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，以大于24小時(shí)的時(shí)間間隔給藥的所述無(wú)規(guī)共聚物的有效量為當(dāng)每天給藥時(shí)可有效的量。在相關(guān)的實(shí)施方案中，以大于24小時(shí)的時(shí)間間隔給藥的有效量為如果每天給藥可有效果的量。在另一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，以大于24小時(shí)的時(shí)間間隔給藥的有效量為如果每天給藥已知有效的量。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的有效量為10mg至30mg、或者15mg至25mg。在另一些實(shí)施方案中，所述的有效量為約20mg。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的有效量為低于20mg。在特定的實(shí)施方案中，所述的有效量為“x”mg，其中“x”為1至20之間的任意整數(shù)。
在本文中所提供的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的受試者患有可用所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的疾病為由T細(xì)胞，和特別是TH1細(xì)胞或具有TH1免疫狀態(tài)的細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，或者是由過(guò)量炎癥細(xì)胞因子惡化的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的受試者患有至少一種自身免疫性疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的受試者患有選自以下的至少一種疾病多發(fā)性硬化、I型糖尿病、橋本甲狀腺炎、克隆病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、胃炎、自身免疫性肝炎、溶血性貧血、自身免疫性血友病、自身免疫性淋巴增生性綜合征(ALPS)、自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎、腎小球性腎炎、吉-巴綜合征、銀屑病、重癥肌無(wú)力、自身免疫性腦脊髓炎、吉德帕斯丘綜合征、格雷夫斯病、副腫瘤性天皰瘡、自身免疫性血小板減少性紫癜、具有抗膠原抗體的硬皮病、混合性結(jié)締組織病、惡性貧血、多肌炎、特發(fā)性阿狄森病、與自身免疫有關(guān)的不育癥、腎小球性腎炎、大皰性類天皰瘡、舍格倫綜合征、特發(fā)性粘液水腫和結(jié)腸炎。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的疾病為多發(fā)性硬化或復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。在本文中所提供的方法的另一些實(shí)施方案中，所述的疾病為宿主抗移植物病(HVGD)或移植物抗宿主病(GVHD)或兩者。在本文中所述的方法的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的受試者為哺乳動(dòng)物或更優(yōu)選為人。
在本文中所述的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的給藥方案包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)或口服給藥。所述的無(wú)規(guī)共聚物還可通過(guò)裝置給藥，所述裝置被設(shè)計(jì)為可持續(xù)遞送所述無(wú)規(guī)共聚物，例如為透皮貼片或泵或植入物。例如，透皮貼片可用于在每48小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間的12小時(shí)時(shí)距內(nèi)給藥所述無(wú)規(guī)共聚物，或者泵可用于在每四天或更多天的兩天時(shí)段內(nèi)給藥所述共聚物。在相關(guān)的方面，所述共聚物在緩釋制劑中給藥。
本發(fā)明還提供用于治療有需要的受試者的方法，該方法包括向所述的受試者給藥有效量的無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案用于改善可用所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，所述的有效量使用緩釋制劑對(duì)所述的受試者遞送，所述緩釋制劑在至少2天、至少4天或至少6天的時(shí)段內(nèi)給藥所述無(wú)規(guī)共聚物，其中所述的有效量為如果每天給藥可有效果的量。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的緩釋制劑在至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天的時(shí)段內(nèi)給藥所述共聚物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)緩釋制劑每天遞送的總劑量為小于已知在所述疾病的治療中是有效的每天劑量的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％。在特定的實(shí)施方案中，所述的緩釋制劑每天給藥的劑量為已知當(dāng)每天給藥時(shí)在所述疾病的治療中是有效的無(wú)規(guī)共聚物的劑量的25％或更少。作為例舉的實(shí)施例，如果共聚物1(YEAK)，當(dāng)每天給藥劑量為20mg，例如通過(guò)每天一次皮下注射20mg時(shí)，已知在復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化的治療中是有效的，則本發(fā)明提供共聚物1的緩釋制劑，其導(dǎo)致每天給藥小于20mg的共聚物，特別是小于約10mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg的共聚物1。
在本文中所述的方法的一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括向受試者給藥另外的治療活性劑，例如抗炎藥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療活性劑可用于治療所述疾病。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述治療活性劑協(xié)同增強(qiáng)所述無(wú)規(guī)共聚物的作用以治療所述疾病。
在本文中所述的方法的一些實(shí)施方案中，所述的給藥方案包括向所述的受試者多次給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，在每次給藥之間具有時(shí)間間隔。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少36、48、72、96、120或144小時(shí)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，每次給藥之間的時(shí)間間隔為36小時(shí)至14天，或至少7天。在相關(guān)的實(shí)施方案中，給藥之間的時(shí)間間隔的至少之一為至少36、48、72、96、120或144小時(shí)，至少7天，或36小時(shí)至14天。在另一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，至少10％、20％、30％、40％或更優(yōu)選50％的給藥之間的時(shí)間間隔為至少36、48、72、96、120或144小時(shí)，至少7天，或36小時(shí)至14天。在另一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少36、48、72、96、120或144小時(shí)，至少7天，或36小時(shí)至14天。
在本文中所述的方法的一些實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物的有效量為每劑0.02mg至每劑2000mg，或者更優(yōu)選每劑2mg至每劑200mg。
在本文中所述的方法的一些實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物選自共聚物1(YEAK)、YFAK、VYAK、VWAK、VEAK和FEAK。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物為共聚物1。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物為YFAK。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物為三元共聚物，例如選自YAK、YEK、KEA和YEA中的一個(gè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物具有1至10個(gè)錨定殘基。
本發(fā)明還提供用于治療疾病的試劑盒。本發(fā)明的一個(gè)方面提供用于治療自身免疫性疾病的試劑盒，其包含(i)包含無(wú)規(guī)共聚物的組合物，和(ii)用于以至少36小時(shí)的時(shí)間間隔向受試者給藥所述組合物的用法說(shuō)明。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在試劑盒中的無(wú)規(guī)共聚物為共聚物1。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在試劑盒中的無(wú)規(guī)共聚物為YFAK。在一些實(shí)施方案中，將在試劑盒中的無(wú)規(guī)共聚物配成用于約每24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)給藥的制劑。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒的用法說(shuō)明指出將所述的無(wú)規(guī)共聚物向受試者給藥的時(shí)間間隔為至少24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)。
在本發(fā)明提供的試劑盒的一些實(shí)施方案中，將所述的組合物配制成緩釋制劑。在特定的實(shí)施方案中，所述的緩釋制劑遞送的總劑量應(yīng)為如果將所述的總劑量每天給藥時(shí)可有效治療所述疾病的量。在另外的實(shí)施方案中，所述的總劑量為約20mg，小于20mg或x mg，其中x為1至20之間的任意整數(shù)。
在本發(fā)明提供的試劑盒的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑盒包含用法說(shuō)明，其用于以至少24、36、48、72、96、120或144小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間間隔，在每次給藥約20mg的劑量下，向有需要的受試者給藥所述的組合物，而在另外的實(shí)施方案中，所述的劑量為小于20mg，例如x mg，其中x為1至20之間的任意整數(shù)。在相關(guān)的實(shí)施方案中，所述的試劑盒包含用法說(shuō)明，其用于以至少24小時(shí)的時(shí)間間隔向有需要的受試者給藥所述組合物，給藥劑量為如果將其每天給藥時(shí)可有效治療所述疾病的量。在另一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，所述的試劑盒包含用法說(shuō)明，其用于以至少24小時(shí)的時(shí)間間隔向有需要的受試者給藥所述組合物，給藥劑量為當(dāng)將其每天給藥時(shí)可有效治療所述疾病的量。
在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒所要治療的疾病是由T細(xì)胞，和特別是TH1細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，或者是由過(guò)量炎癥細(xì)胞因子惡化的疾病。在另一些實(shí)施方案中，所述的疾病為所述試劑盒提供治療的自身免疫性疾病，選自多發(fā)性硬化、I型糖尿病、橋本甲狀腺炎、克隆病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、胃炎、自身免疫性肝炎、溶血性貧血、自身免疫性血友病、自身免疫性淋巴增生性綜合征(ALPS)、自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎、腎小球性腎炎、吉-巴綜合征、銀屑病、重癥肌無(wú)力、自身免疫性腦脊髓炎、吉德帕斯丘綜合征、格雷夫斯病、副腫瘤性天皰瘡、自身免疫性血小板減少性紫癜、具有抗膠原抗體的硬皮病、混合性結(jié)締組織病、惡性貧血、多肌炎、特發(fā)性阿狄森病、與自身免疫有關(guān)的不育癥、大皰性類天皰瘡、舍格倫綜合征、特發(fā)性粘液水腫和結(jié)腸炎。在特定的實(shí)施方案中，所述的疾病為多發(fā)性硬化、糖尿病或關(guān)節(jié)炎。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的疾病為復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。所述的試劑盒還可包含包裝和給藥所述共聚物的裝置，例如皮下注射器、針、測(cè)量?jī)x器例如匙或有刻度的容器、吸入器或泵。關(guān)于試劑盒的用法說(shuō)明可還包括用于家用的用法說(shuō)明。
本發(fā)明進(jìn)一步提供用于生產(chǎn)治療疾病的藥物的試劑。本文中所公開的通過(guò)向受試者給藥無(wú)規(guī)共聚物而用于治療或預(yù)防疾病的任何方法可以應(yīng)用于所述無(wú)規(guī)共聚物在制備治療所述疾病的藥物中的應(yīng)用中。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供無(wú)規(guī)共聚物在治療受試者的疾病中的應(yīng)用，其中將所述的無(wú)規(guī)共聚物配制成以大于24小時(shí)，并更優(yōu)選至少48小時(shí)的時(shí)間間隔向所述的受試者給藥的制劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物為共聚物1，并且所述的疾病為自身免疫性疾病，例如多發(fā)性硬化或更具體為復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。在另一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物為YFAK。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供一些管理事務(wù)(doing business)的方法。具體而言，本發(fā)明提供經(jīng)營(yíng)醫(yī)藥商業(yè)的方法，其中將所述的試劑盒和制劑銷售給保健提供者或直接銷售給需要這種試劑盒的受試者。本發(fā)明的一個(gè)方面提供用于經(jīng)營(yíng)醫(yī)藥商業(yè)的方法，其包括銷售給保健提供者、或者銷售給需要這種試劑盒的受試者使用本文中所述的任何試劑盒在治療疾病或病癥中的益處。本發(fā)明相關(guān)的方面提供經(jīng)營(yíng)醫(yī)藥商業(yè)的方法，其包括(a)生產(chǎn)本文中所述的任何試劑盒；和(b)向保健提供者銷售、或者向需要這種試劑盒的受試者銷售使用所述的試劑盒在治療疾病或病癥中的益處。在一些實(shí)施方案中，開發(fā)和銷售這種制劑或?qū)嵤┻@種生產(chǎn)步驟的權(quán)利可以許可給要考慮的第三方。在一些實(shí)施方案中，所述的疾病為多發(fā)性硬化，例如復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑盒包含共聚物1或YFAK。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的向保健提供者或者向患者的銷售包括每5至7天給藥50mg、或更優(yōu)選20mg或更少的無(wú)規(guī)共聚物的用法說(shuō)明。在另一些實(shí)施方案中，所述的銷售包括至少每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物的用法說(shuō)明。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的向保健提供者或者向患者的銷售包括每5至7天給藥50mg、或更優(yōu)選20mg或更少的所述的無(wú)規(guī)共聚物的用法說(shuō)明。在又一些實(shí)施方案中，所述的銷售包括與相同的或不同的無(wú)規(guī)共聚物的已有的制劑相比，在使用描述于本文中的試劑盒或制劑中降低副作用的用法說(shuō)明。在特定的實(shí)施方案中，所述的已有的制劑更加頻繁地向患者給藥，或者給藥的時(shí)間間隔更短，而在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的已有的制劑導(dǎo)致比所銷售的試劑盒的平均每天劑量更高的平均每天劑量。所述的更高的平均每天劑量可以比由所述試劑盒提供的平均每天劑量高例如20％、50％、100％、200％或500％。
II.定義為了方便，在本說(shuō)明書、實(shí)施例以及權(quán)利要求中所用的某些術(shù)語(yǔ)在此說(shuō)明。除非另外明確定義，本文中所用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。
本文中所用的冠詞“a”指該冠詞語(yǔ)法賓語(yǔ)的一個(gè)或大于一個(gè)(即指至少一個(gè))。例如“元素”指一種元素或多于一種元素。
本文中所用的術(shù)語(yǔ)“包括”意思為術(shù)語(yǔ)“包括但不限于”，并可與其互換使用。
本文中所用的術(shù)語(yǔ)“或”意思為術(shù)語(yǔ)“和/或”，并可與其互換使用，除非上下文中另外明確指出。
本文中所用的術(shù)語(yǔ)“例如”意思為術(shù)語(yǔ)“例如但不限于”，并可與其互換使用。
待用本發(fā)明的方法治療的“患者”或“受試者”可以指人或非人的動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物。
術(shù)語(yǔ)“自身免疫性病癥”或“自身免疫性疾病”指由不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答導(dǎo)致的疾病狀態(tài)，其中所述的不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答針對(duì)已知作為自身抗原的自編碼實(shí)體。本文中所提供的共聚物化合物可用于治療自身免疫性疾病的綜合征，包括以下的一組病癥橋本甲狀腺炎、特發(fā)性粘液水腫、嚴(yán)重甲狀腺機(jī)能減退、多發(fā)性硬化、由在腦或脊髓中的斑或變硬組織標(biāo)記的脫髓鞘性疾病、重癥肌無(wú)力，其為由在神經(jīng)肌肉接頭處自身免疫攻擊乙酰膽堿受體而導(dǎo)致的進(jìn)行性肌衰退疾病、吉-巴綜合征、多神經(jīng)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、葡萄膜炎、自身免疫性卵巢炎、慢性免疫性血小板減少性紫癜、結(jié)腸炎、糖尿病、作為甲狀腺機(jī)能減退形式的格雷夫斯病、銀屑病、尋常性天皰瘡和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)。
術(shù)語(yǔ)“脫髓鞘性疾病”包括這樣的疾病狀態(tài)，其中髓鞘部分由于降解而移除，所述的髓鞘部分由卷繞于神經(jīng)細(xì)胞伸長(zhǎng)部分的質(zhì)膜組成。脫髓鞘性疾病可引起接種后感染、抗TNF治療后感染、病毒后感染和MS。
術(shù)語(yǔ)氨基酸的“衍生物”指具有另外的取代基的氨基酸的化學(xué)相關(guān)形式，所述取代基為例如連接于所述氨基酸的原子上的N-羧酸酐基團(tuán)、γ-芐基、ε-N-三氟乙?；螓u化物基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“類似物”指具有不同構(gòu)型的氨基酸的化學(xué)相關(guān)形式，例如異構(gòu)體，或D-構(gòu)型而不是L-構(gòu)型，或具有所述氨基酸的相近大小、電荷和形狀的有機(jī)分子，或具有對(duì)包含于肽鍵中的原子進(jìn)行修飾的氨基酸，因此與不具有所述類似物殘基的共聚物相比，具有類似物殘基的共聚物比其它類似的缺少這種類似物殘基的共聚物具有更高的蛋白酶抗性，無(wú)論該類似物在所述的共聚物的內(nèi)部或位于共聚物的邊界。
表述“氨基酸”和“氨基酸共聚物”可包括一種或多種組分，其中所述的組分為如本文中所定義的氨基酸衍生物和/或氨基酸類似物，所述的衍生物或類似物包含殘基的一部分或包含整個(gè)殘基，所述殘基為由所述組成確定的20個(gè)天然存在的氨基酸中的任何一個(gè)或多個(gè)。例如，在具有一個(gè)或多個(gè)酪氨酸殘基的氨基酸共聚物組合物中，所述的一個(gè)或多個(gè)殘基的一部分可由人酪氨酸替代。另外，本定義中包括具有在兩個(gè)相鄰殘基之間的一個(gè)或多個(gè)非肽鍵或擬肽鍵的氨基酸共聚物。
術(shù)語(yǔ)“疏水性”氨基酸指脂肪族氨基酸，丙氨酸(A或ala)、甘氨酸(G或gly)、異亮氨酸(I或ile)、亮氨酸(L或leu)、蛋氨酸(M或met)、脯氨酸(P或pro)和纈氨酸(V或val)，在括號(hào)中的術(shù)語(yǔ)為每個(gè)氨基酸的一個(gè)字母或三個(gè)字母的標(biāo)準(zhǔn)編碼縮寫，以及芳香族氨基酸，色氨酸(W或trp)、苯丙氨酸(F或phe)和酪氨酸(Y或tyr)。這些氨基酸，當(dāng)作為在共聚物或其它多肽中的殘基時(shí)，賦予作為脂肪族側(cè)鏈的長(zhǎng)度和芳香族側(cè)鏈的大小的函數(shù)的疏水性。
術(shù)語(yǔ)“帶電的”氨基酸指氨基酸，天冬氨酸(D或asp)、谷氨酸(E或glu)、精氨酸(R或arg)和賴氨酸(K和lys)，當(dāng)共聚物或其它氨基酸組合物的水溶液包含一個(gè)或多個(gè)這些氨基酸的殘基時(shí)，其在生理pH值處具有正電荷(1ys和arg)或負(fù)電荷(asp、glu)。組氨酸(H或his)在pH為7時(shí)是疏水的，并且在pH為6時(shí)是帶電的。
術(shù)語(yǔ)“病癥”和“疾病”包含性地使用并指身體的任何部位、器官或全身(或其組合)的正常結(jié)構(gòu)或功能的任何偏差。特定的疾病由特征性癥狀和征兆，包括生物的、化學(xué)的和物理的變化而顯現(xiàn)，并經(jīng)常與很多不同的其它因素有關(guān)，包括但不限于種群統(tǒng)計(jì)學(xué)的、環(huán)境的、職業(yè)的、遺傳的和醫(yī)療史的因素。一些特征性病癥、癥狀和相關(guān)的因素可通過(guò)很多方法定量以獲得重要的診斷信息。
術(shù)語(yǔ)“預(yù)防”或“治療”處理指向受試者給藥一個(gè)或多個(gè)主題組合物。如果在不希望的癥狀(例如宿主動(dòng)物的疾病或其它不希望的狀態(tài))的臨床表現(xiàn)之前給藥，那么所述的處理就是預(yù)防，即它的貢獻(xiàn)在于保護(hù)宿主抵抗不希望癥狀的發(fā)展，而如果在不希望的癥狀顯現(xiàn)之后給藥，那么所述的處理就是治療(即，它意于減少、改善或防止不希望的癥狀或來(lái)源于其的副作用的進(jìn)展)。
術(shù)語(yǔ)“治療效果”指在動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，更特別是人中由藥理活性物質(zhì)產(chǎn)生的局部或全身性效果。因此該術(shù)語(yǔ)指意于在疾病的診斷、治愈、緩解、治療或預(yù)防中或在動(dòng)物或人中增強(qiáng)想要的身體或心理發(fā)展和狀況中使用的任何物質(zhì)。表述“治療有效量”指在合理的適用于任何治療的效益/風(fēng)險(xiǎn)比下，產(chǎn)生一些想要的局部或全身作用的這樣的物質(zhì)的量。在一些實(shí)施方案中，化合物的治療有效量將依賴于其治療指數(shù)、溶解性等而定。例如由本發(fā)明方法發(fā)現(xiàn)的某些化合物可以有效量給藥以產(chǎn)生合理的適用于這種治療的效益/風(fēng)險(xiǎn)比。
術(shù)語(yǔ)“有效量”指當(dāng)向受試者給藥適當(dāng)劑量和方案時(shí)產(chǎn)生想要的結(jié)果的治療劑的量。
術(shù)語(yǔ)“需要治療疾病的受試者”為被診斷的受試者具有這種疾病，好像發(fā)展出所述疾病或懷疑具有所述疾病。
本文中所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”意于包括全部抗體，例如任何同型(IgG、IgA、IgM、IgE等)，并包括還特異性與脊椎動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物的蛋白質(zhì)反應(yīng)的其片段?？墒褂贸Ｒ?guī)技術(shù)將抗體切成片段，并且所述片段進(jìn)行實(shí)用性和/或可與感興趣的特異性表位相互作用的篩選。因此，該術(shù)語(yǔ)包括經(jīng)蛋白酶剪切的或重組制備的抗體分子部分的片段，其能夠選擇性地與某些蛋白反應(yīng)。這種蛋白酶解和/或重組片段的非限制性的例子包括Fab、F(ab′)2、Fab′、Fv和單鏈抗體(scFv)，包含由肽連接體連接的V[L]和/或V[H]區(qū)域。所述的scFv′s可共價(jià)或非共價(jià)地連接以形成具有兩個(gè)或多個(gè)連接位點(diǎn)的抗體。術(shù)語(yǔ)抗體還包括抗體和重組抗體的多克隆產(chǎn)品、單克隆產(chǎn)品或其它純化產(chǎn)品。
術(shù)語(yǔ)“中心耐受”指對(duì)于由在胸腺中的事件控制的抗原的耐受性，即對(duì)胸腺體中的抗原有反應(yīng)性的T細(xì)胞的克隆排除。對(duì)于所述抗原具有高親合力受體的部分活化的T細(xì)胞，在胸腺中通過(guò)Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、由共表達(dá)觸發(fā)和在細(xì)胞表面上FasL向Fas的結(jié)合，而經(jīng)歷了負(fù)選擇和克隆排除。相比之下，術(shù)語(yǔ)“外周耐受”指在脾中通過(guò)激活-誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(AICD)而使T細(xì)胞排除和不用克隆排除而使T細(xì)胞功能沉默(克隆無(wú)能(clonal anergy))。同樣，當(dāng)缺乏輔助T細(xì)胞的協(xié)同作用時(shí)，推測(cè)B細(xì)胞“無(wú)助于”對(duì)T細(xì)胞依賴性抗原的應(yīng)答。中心耐受和外周耐受由p56lck和ZAP-70的磷酸化作用調(diào)節(jié)。這些蛋白的關(guān)鍵殘基的磷酸化作用的狀態(tài)和程度導(dǎo)致影響外周耐受和中心耐受的信號(hào)分子的正調(diào)控或負(fù)調(diào)控。T細(xì)胞受體信號(hào)的抑制也在誘導(dǎo)耐受性方面起到重要作用。
本文中所用的其它技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有在它們所用的領(lǐng)域中通常的含義，如很多技術(shù)字典所例舉的那樣。
III.無(wú)規(guī)共聚物本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物的組合物具有編譯多種多樣的交叉反應(yīng)性T細(xì)胞表位的特性。本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物的組合物可進(jìn)一步具有修飾肽配體的特性。本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物的組合物的多功能性結(jié)果在于一個(gè)是與數(shù)千，優(yōu)選數(shù)十萬(wàn)，更優(yōu)選數(shù)百萬(wàn)的T細(xì)胞表位，經(jīng)過(guò)由MHC分子，優(yōu)選MHC II類分子的表達(dá)而功能性相互作用的能力；而另一個(gè)是無(wú)規(guī)共聚物特異性T細(xì)胞的產(chǎn)生，該細(xì)胞可分泌可溶性傳遞質(zhì)，例如細(xì)胞因子。
本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物可具有特異性氨基酸序列特性，使得所選擇的氨基酸的子群優(yōu)先與特異性T細(xì)胞表位相互作用，所述的T細(xì)胞表位中的一些可直接與致病性病癥有關(guān)。優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物可具有特異性氨基酸序列特性，使得所選擇的氨基酸的子群包含2至8個(gè)氨基酸，該氨基酸優(yōu)先與特異性T細(xì)胞表位相互作用，所述的T細(xì)胞表位中的一些可直接與致病性病癥有關(guān)，所述的病癥由可溶性傳遞質(zhì)如細(xì)胞因子的異常產(chǎn)生而惡化。
優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物可具有特異性氨基酸序列特性，使得所選擇的氨基酸的子群包含2至8個(gè)氨基酸，該氨基酸借助于所述氨基酸的選擇和所述氨基酸相互之間的比例，優(yōu)先與特異性T細(xì)胞表位相互作用，所述的T細(xì)胞表位中的一些可直接與致病性病癥有關(guān)，所述的病癥由可溶性傳遞質(zhì)如細(xì)胞因子的異常產(chǎn)生而惡化。所述的致病性病癥與特異性MHC II類等位基因如HLA-DR或HLA-DQ相關(guān)聯(lián)。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物包含從2個(gè)至8個(gè)優(yōu)選經(jīng)過(guò)肽鍵無(wú)規(guī)連接的氨基酸的聚合物，其優(yōu)先與特異性T細(xì)胞表位相互作用，所述的T細(xì)胞表位中的一些可直接與致病性病癥有關(guān)，所述的致病性病癥通過(guò)可溶性傳遞質(zhì)如細(xì)胞因子的異常產(chǎn)生而惡化，所述的致病性病癥與MHC II類等位基因如HLA-DR或HLA-DQ相關(guān)聯(lián)。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物包含從3個(gè)至5個(gè)優(yōu)選經(jīng)過(guò)肽鍵無(wú)規(guī)連接的氨基酸的聚合物，其優(yōu)選與特異性T細(xì)胞表位相互作用，所述的T細(xì)胞表位中的一些可直接與致病性病癥相關(guān)，所述的致病性病癥通過(guò)可溶性傳遞質(zhì)如細(xì)胞因子的異常產(chǎn)生而惡化，所述的致病性病癥與MHC II類等位基因如HLA-DR或HLA-DQ相關(guān)聯(lián)。
本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物可包含適當(dāng)量的帶有正電荷的氨基酸，例如賴氨酸或精氨酸，與帶有負(fù)電荷的氨基酸(優(yōu)選較少量)，例如谷氨酸或天冬氨酸組合，任選與電中性氨基酸如丙氨酸或甘氨酸組合作為填充劑，并任選與適于賦予共聚物以免疫性的氨基酸如芳香族氨基酸如酪氨酸或色氨酸組合。這種組合物可包括在WO 00/005250中公開的所有的那些，該文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本發(fā)明中。
包含4種氨基酸的共聚物在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物包含4種不同的氨基酸，每個(gè)得自如下組中的不同的一個(gè)(a)賴氨酸和精氨酸；(b)谷氨酸和天冬氨酸；(c)丙氨酸和甘氨酸；(d)酪氨酸和色氨酸。
本發(fā)明的這個(gè)實(shí)施方案的特定共聚物包含丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和酪氨酸的組合，并具有凈的總正電荷。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案為YEAK，也指為共聚物1(Cop 1)或醋酸格拉默，其平均分子量為約4,700至約13,000道爾頓。優(yōu)選的共聚物的分子量為約2,000至約40,000道爾頓，或約2,000至約13,000道爾頓。優(yōu)選的分子量范圍和用于制備共聚物1的優(yōu)選形式的方法描述于美國(guó)專利5,800,808中，其全部?jī)?nèi)容全部并入本發(fā)明中。因此，所述共聚物可以為具有約15至約100，優(yōu)選約40至約80個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的多肽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，共聚物1的長(zhǎng)度為35至75個(gè)氨基酸殘基。更優(yōu)選地，共聚物1的長(zhǎng)度為35至65個(gè)氨基酸殘基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，共聚物1的長(zhǎng)度為約50個(gè)氨基酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，共聚物1的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，共聚物1的平均摩爾產(chǎn)出比(output ratio)對(duì)于Y∶E∶A∶K分別為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，其通過(guò)固相化學(xué)而合成，如更詳細(xì)描述于下的那樣。產(chǎn)出比的可變性包含不同氨基酸間的約10％的范圍。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，共聚物1長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸殘基，在氨基酸位置31-52中丙氨酸的組成比大于在氨基酸位置11-30中的組成比，并且在氨基酸位置11-30中丙氨酸的組成比大于在氨基酸位置1-10中的組成比。更具體地，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案為組合物YEAK(L-酪氨酸、L-谷氨酸鹽、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物，其平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中所述共聚物序列的殘基1-10的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0。
為了本發(fā)明的目的，“Cop 1或Cop 1相關(guān)肽或多肽”意于包括所有的肽或多肽，包括無(wú)規(guī)共聚物，其在抗原呈遞中與髓鞘堿性蛋白(MBP)官能性地交叉反應(yīng)并能與在MHC II類上的MBP相競(jìng)爭(zhēng)。商品名為COPAXONETM的共聚物1已經(jīng)在數(shù)個(gè)國(guó)家被批準(zhǔn)用于治療多發(fā)性硬化(MS)。COPAXONETM是Teva Pharmaceuticals Ltd.，Petah Tikva，Israel的商標(biāo)。共聚物1以高親合力和肽特異性方式結(jié)合于純化的MS相關(guān)HLA-DR2(DRB1*1501)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)相關(guān)HLA-DR1(DRBI*0101)或HLA-DR4(DRB1*0401)分子。因?yàn)楣簿畚?為無(wú)規(guī)多肽的混合物，它可以包含結(jié)合于不同HLA蛋白的不同序列；在這個(gè)情況下，在整個(gè)化合物中只有一部分將是“活性成分”?；蛘撸麄€(gè)化合物可能是有效的，即所有多肽結(jié)合于任何HLA-DR分子。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物包含經(jīng)過(guò)肽鍵無(wú)規(guī)連接的氨基酸共聚物1或YFAK的聚合物，其優(yōu)先與特異性T細(xì)胞表位相互作用，所述的T細(xì)胞表位與通過(guò)炎癥細(xì)胞因子的異常產(chǎn)生而惡化的自身免疫性疾病相關(guān)聯(lián)，所述的自身免疫性疾病與特異性MHC II類等位基因如HLA-DR或HLA-DQ相關(guān)聯(lián)。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物包含經(jīng)過(guò)肽鍵無(wú)規(guī)連接的氨基酸共聚物1或YFAK的聚合物，其優(yōu)先與特異性T細(xì)胞表位相互作用，所述的T細(xì)胞表位與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、糖尿病、乳糜瀉、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類固醇敏感型腎病綜合征、系膜IgA腎病、發(fā)作性睡病、神經(jīng)性多發(fā)性硬化、復(fù)發(fā)型多發(fā)性軟骨炎、皮膚病例如皰疹樣皮炎、特應(yīng)性皮炎、白塞病、天皰瘡、銀屑病、原發(fā)性舍格倫綜合征、系統(tǒng)性脈管炎(vasculitides)、紅斑、腸胃疾病例如克隆病、呼吸系疾病例如Sommer型超敏性肺炎和自身免疫性甲狀腺疾病(AITD)相關(guān)聯(lián)。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，所述的無(wú)規(guī)共聚物包含YFAK、VYAK、VWAK、VEAK和FEAK。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物由氨基酸殘基YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)組成，摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶XA∶6.0，其中XA大于11.0并小于30.0，并且關(guān)于產(chǎn)出比的可變性包含不同氨基酸間的約10％的范圍。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物由YFAK組成，摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.0∶XA∶6.0，其中XA大于5.0并小于15.0，并且關(guān)于產(chǎn)出比的可變性包含不同氨基酸間的約10％的范圍。優(yōu)選實(shí)施方案的無(wú)規(guī)共聚物的YFAK的摩爾產(chǎn)出比示于下表I中表I無(wú)規(guī)共聚物的氨基酸組合比

在優(yōu)選的實(shí)施方案中，任何這種共聚物的長(zhǎng)度為35至75個(gè)氨基酸殘基。更優(yōu)選地，無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為35至65個(gè)氨基酸殘基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為約50個(gè)氨基酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案為組成為YFAK的無(wú)規(guī)共聚物，其平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，其通過(guò)固相化學(xué)合成，如由下文更詳細(xì)描述的那樣。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，YFAK的平均摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶XA∶6.0，其中XA大于18，并且丙氨酸的比例隨著共聚物的長(zhǎng)度增加。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸殘基，并且在氨基酸位置31-52中的丙氨酸的組成比比氨基酸位置11-30中的組成比更大，并且在氨基酸位置11-30中的丙氨酸的組成比比氨基酸位置1-10中的組成比更大。更特別地，本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案為組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物，其平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，其通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中所述共聚物序列的殘基1-10的摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18∶6，和殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶20∶6。
包含三個(gè)氨基酸的共聚物在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物包含三種不同的氨基酸，每種得自如上所述的組(a)至(d)中的三個(gè)組中的不同的一個(gè)。這些共聚物本文中指作“三元聚合物”。平均分子量為2,000至約40,000道爾頓，并且優(yōu)選約3,000至約35,000道爾頓。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，平均分子量為約5,000至約25,000道爾頓。
在一個(gè)實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的三元聚合物包含酪氨酸、丙氨酸和賴氨酸，下文中指定為YAK。在這些三元聚合物中，這些氨基酸的平均摩爾分?jǐn)?shù)可以變化。例如，存在的酪氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.250；存在的丙氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.3至約0.6；和存在的賴氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.1至約0.5?？梢杂镁彼岽尜嚢彼?，用甘氨酸代替丙氨酸和/或用色氨酸代替酪氨酸。酪氨酸、丙氨酸和賴氨酸，或者YAK的更優(yōu)選的三元聚合物的單體摩爾比為約0.10∶約0.54∶約0.35。典型的YAK共聚物描述于Fridkis-Hareli M.，HumImmunol.2000；61(7)640-50中。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的三元聚合物包含酪氨酸、谷氨酸和賴氨酸，下文中指定為YEK。在這些三元聚合物中，這些氨基酸平均摩爾分?jǐn)?shù)可以變化存在的谷氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.300；存在的酪氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.250；和存在的賴氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.3至約0.7。可以用天冬氨酸代替谷氨酸，用精氨酸代替賴氨酸和/或用色氨酸代替酪氨酸。谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸，或者YEK的更優(yōu)選的三元聚合物的單體摩爾比為約0.26∶約0.16∶約0.58。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的三元聚合物包含賴氨酸、谷氨酸和丙氨酸，下文中指定為KEA。在這些三元聚合物中，這些氨基酸平均摩爾分?jǐn)?shù)可以變化。例如，存在的谷氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.300；存在的丙氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.006；和存在的賴氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.2至約0.7?？梢杂锰於彼岽婀劝彼?，用甘氨酸代替丙氨酸和/或用精氨酸代替賴氨酸。谷氨酸、丙氨酸和賴氨酸，或者KEA的更優(yōu)選的三元聚合物的單體摩爾比為約0.15∶約0.48∶約0.36。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的三元聚合物包含酪氨酸、谷氨酸和丙氨酸，下文中指定為YEA。在這些三元聚合物中，這些氨基酸平均摩爾分?jǐn)?shù)可以變化。例如，存在的酪氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.250；存在的谷氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.300；和存在的丙氨酸的摩爾分?jǐn)?shù)可以為約0.005至約0.800?？梢杂蒙彼岽胬野彼幔锰於彼岽婀劝彼岷?或用甘氨酸代替丙氨酸。谷氨酸、丙氨酸和酪氨酸，或者YEA的更優(yōu)選的三元聚合物的單體摩爾比為約0.21∶約0.65∶約0.14。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述三元聚合物的氨基酸的摩爾分?jǐn)?shù)與在共聚物1中優(yōu)選的相當(dāng)。在共聚物1中氨基酸的摩爾分?jǐn)?shù)為谷氨酸約0.14，丙氨酸約0.43，酪氨酸約0.10和賴氨酸約0.34。共聚物1的最優(yōu)選的平均分子量為約5,000至約9,000道爾頓。對(duì)于本文中所公開的效用，如果進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)如下的替換天冬氨酸(D)替換谷氨酸(E)、甘氨酸(G)替換丙氨酸(A)、精氨酸(R)替換賴氨酸(K)、和色氨酸(W)替換酪氨酸(Y)，共聚物1的活性預(yù)計(jì)保留。
結(jié)合于MHC II類蛋白的共聚物在一個(gè)實(shí)施方案中，在本文中所描述的方法中使用的共聚物能結(jié)合于優(yōu)選與自身免疫性疾病相關(guān)聯(lián)的MHC II類蛋白。有至少三種類型的II類MHC分子HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP分子。還有許多等位基因，其編碼這些HLA分子的各自類型。所述的II類MHC分子主要在B淋巴細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞例如巨噬細(xì)胞的表面上表達(dá)。任何可用的方法可用于確定是否所述的共聚物結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)MHC II類蛋白。例如，所述的多肽可用報(bào)道分子(例如放射性核素或生物素)標(biāo)記，與粗的或純的MHC II類蛋白混合，并且如果在排除所述的未結(jié)合多肽后，所述的報(bào)道分子連接于所述的MHC II類蛋白，則檢測(cè)到結(jié)合。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，在本文中所描述的方法中使用的共聚物能結(jié)合于與多發(fā)性硬化相關(guān)聯(lián)的MHC II類蛋白。對(duì)于MHC II類蛋白的抗原結(jié)合溝槽而言，這個(gè)實(shí)施方案的多肽比共聚物1可具有類似的或更大的親合力。因此，所預(yù)計(jì)的多肽能抑制或置換得自MHC II類蛋白的髓磷脂自身抗原的結(jié)合。一種與多發(fā)性硬化相關(guān)聯(lián)的MHC II類蛋白為HLA-DR4(DRB1*1501)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，在本文中所描述的方法中使用的共聚物能結(jié)合于優(yōu)選與關(guān)節(jié)炎疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)聯(lián)的MHCII類蛋白。對(duì)于與自身免疫性疾病相關(guān)聯(lián)的MHC II類蛋白的抗原結(jié)合溝槽而言，這個(gè)實(shí)施方案的無(wú)規(guī)共聚物比II型膠原蛋白261-273肽可具有更大的親合力。因此，所預(yù)計(jì)的本文中所述的共聚物1或無(wú)規(guī)共聚物例如YFAK能抑制結(jié)合或置換得自MHC II類蛋白的抗原結(jié)合溝槽的II型膠原蛋白261-273肽。所述的II類MHC蛋白由大小約相等的α和β亞單元組成，這兩種亞單元都是跨膜蛋白。肽結(jié)合溝槽部分由兩種α和β亞單元的氨基末端形成。這種肽結(jié)合溝槽是T細(xì)胞抗原的呈遞位點(diǎn)。
在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明中所用的無(wú)規(guī)共聚物可結(jié)合于HLA-DR分子的肽結(jié)合溝槽。由于Cop1與MS相關(guān)HLA-DR分子的結(jié)合基元是已知的(Fridkis-Hareli等人，1999，J Immunol.；162(8)4697-704)，可如在Fridkis-Hareli中所述，可容易地制備和測(cè)試固定序列的多肽的與HLA-DR分子的肽結(jié)合溝槽的結(jié)合。這種肽的例子為公開于WO 00/005249中的那些，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用而并入本發(fā)明中。特定公開于所述申請(qǐng)中的肽中的32個(gè)如下所示AAAYAAAAAAKAAAA；AEKYAAAAAAKAAAA；AKEYAAAAAAKAAAA；AKKYAAAAAAKAAAA；AEAYAAAAAAKAAAA；KEAYAAAAAAKAAAA；AEEYAAAAAAAKAAA；AAEYAAAAAAKAAAA；EKAYAAAAAAKAAAA；AAKYEAAAAAKAAAA；AAKYAEAAAAKAAAA；EAAYAAAAAAKAAAA；EKKYAAAAAAKAAAA；EAKYAAAAAAKAAAA；AEKYAAAAAAAAAAA；AKEYAAAAAAAAAAA；AKKYEAAAAAAAAAA；AKKYAEAAAAAAAAA；AEAYKAAAAAAAAAA；KEAYAAAAAAAAAAA；AEEYKAAAAAAAAAA；AAEYAAAAAAAAAAA；EKAYAAAAAAAAAAA；AAKYEAAAAAAAAAA；AAKYAEAAAAAAAAA；EKKYAAAAAAAAAAA；EAKYAAAAAAAAAAA；AEYAAAAAAAAAAAA；AEKAYAAAAAAAAAA；EKYAAAAAAAAAAAA；AYKAEAAAAAAAAAA；AKYAEAAAAAAAAAA.
用于本發(fā)明中的另外的無(wú)規(guī)共聚物及合成它們的方法，可在文獻(xiàn)中找到，例如在Shukaliak Quandt，J.等人，2004，Mol.Immunol.40(14-15)1075-87；Montaudo，M.S.，2004，J.Am.Soc.Mass Spectrom.15(3)374-84；Takeda，N.等人，2004，J.Control Release 95(2)343-55；Pollino，J.M.等人，2004，J.Am.Chem.Soc.126(2)563-7；Fridkis-Hareli，M.等人，2002，J.Clin Invest.109(12)1635-43；Williams，D.M.等人，2000，J.Biol.Chem.275(49)38127-30；Tselios，T.等人，2000，Bioorg.MedChem.8(8)1903-9；和Cady，CT.等人，2000，J.Immunol.165(4)1790-8。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物在長(zhǎng)度上包含至少7個(gè)氨基酸殘基，并能結(jié)合于與自身免疫性疾病相關(guān)的MHC II類蛋白，所述的合成肽，其比II型膠原蛋白261-273肽更大的親合力結(jié)合于MHCII類蛋白的抗原結(jié)合溝槽，其中所述的合成肽包含選自如下序列的序列丙氨酸-谷氨酸-賴氨酸-酪氨酸-丙氨酸(AEKYA)，丙氨酸-谷氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸(AEKVA)，丙氨酸-谷氨酸-賴氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸(AEKFA)，丙氨酸-賴氨酸-酪氨酸-丙氨酸-谷氨酸(AKYAE)，谷氨酸-丙氨酸-賴氨酸-酪氨酸-丙氨酸(EAKYA)，丙氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸-谷氨酸(AKVAE)和谷氨酸-丙氨酸-賴氨酸-纈氨酸-丙氨酸(EAKVA)，丙氨酸-賴氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸-谷氨酸(AKFAE)和谷氨酸-丙氨酸-賴氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸(EAKFA)。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的共聚物結(jié)合于HLA-DQA1分子，并甚至更優(yōu)選結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)HLA分子，所述的HLA分子在等位基因DQA1*0501-DQB1*0201，DQA1*0301，DQB1*0401和DQA1*03-DQB1*0302中編碼。
在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明方法的共聚物結(jié)合于某些HLA-DQ分子，這些HLA-DQ分子使這種分子的載體易受自身免疫相關(guān)疾病如I型糖尿病和乳糜瀉的感染，其中對(duì)于結(jié)合HLA-DR分子和/或其它DQ同型而言的解離常數(shù)(Kd)比所述的共聚物的Kd小至少10倍。這種HLA-DQ分子為已知為DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0304、DQB1*0401、DQB1*0501、DQB1*0502；和DQA1*0301、DQA1*0302、DQA1*0303、DQA1*0501的特異性HLA-DQB1和DQA1等位基因的組合蛋白產(chǎn)物。這些等位基因可以編碼于相同的單元型(″順式″等位基因)，例如DQB1*0201-DQA1*0501-DRB1*0301和DQB1*0302-DQA1*0301-DRB1*0401上。所形成的HLA分子包含″順式″等位基因的多肽產(chǎn)物，該HLA分子本文中指作“順式二聚體”?；蛘?，所述的等位基因可以編碼于不同的單元型(″反式″等位基因)上。所述的HLA分子包含″反式″等位基因的多肽產(chǎn)物，該HLA分子本文中指作“反式”二聚體?！胺词健钡任换虻睦訛樵贒QB1*0201-DQA1*0501-DRB1*0301上的DQB1*0201和在DQB1*0301-DQA1*0301-DRB1*0404上的DQA1*0301的組合。
在一些實(shí)施方案中，在本文中所述的方法中使用的DQ定向共聚物為無(wú)規(guī)或部分無(wú)規(guī)的氨基酸序列的混合物，其包含得自如下四組中每一個(gè)的氨基酸(1)疏水性的脂肪族氨基酸(例如亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蛋氨酸)；(2)具有酸側(cè)鏈的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)；(3)具有小的親水側(cè)鏈的氨基酸(例如絲氨酸、半胱氨酸、蘇氨酸)和(4)具有小的脂肪族側(cè)鏈的氨基酸(例如丙氨酸、甘氨酸)；另外，所述的共聚物還包含脯氨酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的共聚物用氨基酸谷氨酰胺(E)和/或天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)、絲氨酸(S)和丙氨酸(A)衍生，并在本文中指作″ELSA″共聚物。
在另一些實(shí)施方案中，所述的DQ-定向共聚物為無(wú)規(guī)或部分無(wú)規(guī)的氨基酸序列的混合物，其包含得自如下四組中每一個(gè)的氨基酸(1)疏水性的脂肪族氨基酸(例如亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蛋氨酸)；(2)大的疏水性氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、蛋氨酸)；(3)具有小的親水側(cè)鏈的氨基酸(例如絲氨酸、半胱氨酸、蘇氨酸)和(4)具有小的脂肪族側(cè)鏈的氨基酸(例如丙氨酸、甘氨酸)；另外，所述的共聚物還包含脯氨酸殘基。典型的共聚物用氨基酸谷氨酰胺(E)和/或天冬氨酸(D)、亮氨酸(L)、酪氨酸(Y)和纈氨酸(V)衍生，并在本文中指作″DLYV″共聚物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，自身免疫性疾病的治療方法包括給藥結(jié)合于與自身免疫性疾病相關(guān)聯(lián)的HLA-DQ分子的共聚物。優(yōu)選使用包含含有多個(gè)氨基酸殘基的多肽的共聚物進(jìn)行所述的治療方法，所述的氨基酸殘基選自(1)疏水性的脂肪族殘基(亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蛋氨酸)；(2)酸性殘基(天冬氨酸、谷氨酸)；(3)小的親水性殘基(絲氨酸、半胱氨酸、蘇氨酸)和(4)小的脂肪族殘基(丙氨酸、甘氨酸)；和(5)脯氨酸。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的共聚物組合物結(jié)合于一種或多種DQ同型，其中平均Kd為1μM或更小，并且更優(yōu)選平均Kd為小于100nM、10nM或甚至1nM。鑒別優(yōu)選共聚物的另一種方式基于在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)中置換另一種共聚物的共聚物的測(cè)量，例如于Sidney等人，2002，J.Immunol.1695098中所描述的，其以IC50值表達(dá)。本發(fā)明優(yōu)選的共聚物的IC50值小于1μM，更優(yōu)選小于500nM，并且甚至更小于100nM。
在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的共聚物通過(guò)不同氨基酸殘基的無(wú)規(guī)合成(聚合)而形成。要被并入到所述無(wú)規(guī)共聚物中的氨基酸的一些比例可被使用。本發(fā)明優(yōu)選的無(wú)規(guī)共聚物包含氨基酸殘基K、E、A、S、V和P。更優(yōu)選地，K∶E∶A∶S∶V的比例為0.3∶0.7∶9∶0.5∶0.5∶0.3。優(yōu)選地，所述的無(wú)規(guī)共聚物長(zhǎng)度為約10至100個(gè)氨基酸殘基，更優(yōu)選20至80個(gè)氨基酸殘基，甚至更優(yōu)選40-60個(gè)氨基酸殘基，并且最優(yōu)選約50個(gè)氨基酸殘基。當(dāng)合成時(shí)，無(wú)規(guī)共聚物的典型制劑為不同長(zhǎng)度的肽的混合物，它們大部分具有希望的長(zhǎng)度，但也包含由本發(fā)明可用的合成過(guò)程不可避免地形成的更短或更長(zhǎng)的肽。
另外，在一些實(shí)施方案中，所述的共聚物可以是半無(wú)規(guī)(或半有規(guī))的聚合物，該聚合物具有在形成的聚合物中以規(guī)則間隔出現(xiàn)的“錨”或固定殘基，提供最佳的II類結(jié)合。在所述肽中的錨殘基可以是E、D或V。例如，所述的共聚物可被合成為具有如下通式序列中的一個(gè)1.[XXEXXXXXXXEXX]n2.[XXEXXXXXXXDXX]n3.[XXDXXXXXXXDXX]n4.[XXDXXXXXXXEXX]n5.[XXEXXVXXXXDXX]n6.[XXDXXVXXXXDXX]n7.[XXDXXVXXXXEXX]n8.[XXEXXVXXXXEXX]n其中X為A、S、V、K或P，其比例為5∶1∶1∶1∶0.5，并且1≤n≤8。
所述的肽的長(zhǎng)度可以是9-25個(gè)氨基酸殘基。優(yōu)選地，所述的肽的長(zhǎng)度為13個(gè)氨基酸殘基。所定義的序列長(zhǎng)度為9-25個(gè)氨基酸的肽可包含2-25個(gè)固定殘基。描述于本發(fā)明中的肽的單獨(dú)的固定殘基可在P1、P4、P7或P9的任何上結(jié)合于MCH II類分子的肽結(jié)合溝槽。優(yōu)選地，這種肽包含2或3個(gè)固定殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所定義的序列長(zhǎng)度為13個(gè)氨基酸的肽將包含2個(gè)固定殘基，為E或D或其任意組合。優(yōu)選地，所定義的序列長(zhǎng)度為13個(gè)氨基酸的肽將包含3個(gè)固定殘基。所述的肽可以為定義序列的多聚體，其中重復(fù)單元數(shù)優(yōu)選為2-8。更優(yōu)選地，重復(fù)單元數(shù)為3-6。最優(yōu)選地，重復(fù)單元數(shù)為4。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的多聚體包含所定義的序列長(zhǎng)度為13個(gè)氨基酸的肽，其包含2個(gè)固定殘基，為E或D或其任意組合。
在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，主題共聚物被配制成用作醫(yī)藥，從而使多分散性小于25,000，并且更優(yōu)選小于10000、5000、1000、500、100、50或甚至小于10。
無(wú)規(guī)共聚物的合成本發(fā)明中所用的三元共聚物和無(wú)規(guī)共聚物可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的任何步驟制備。例如，所述的三元共聚物可在溶液中在縮合條件下采用所需摩爾比的氨基酸制備，或者通過(guò)固相合成步驟?？s合條件包括合適的溫度、pH和溶劑條件，這些條件用于使一個(gè)氨基酸的羧基與另一個(gè)氨基酸的氨基縮合以形成肽鍵。縮合劑，例如二環(huán)己基-碳二亞胺，可被用于促進(jìn)肽鍵的形成。大體積基團(tuán)可用于保護(hù)官能團(tuán)，例如側(cè)鏈部分和一些氨基和羧基，使它們避免發(fā)生不希望的副反應(yīng)。
例如，可使用描述于美國(guó)專利3,849,550中的方法，其中酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸γ-芐酯和N-ε-三氟乙酰基-賴氨酸的N-羧酐在室溫下，在無(wú)水二烷中，用二乙胺作為引發(fā)劑進(jìn)行聚合。所述的谷氨酸的γ-羧基可通過(guò)溴化氫在冰醋酸中解塊。所述的三氟乙?；ㄟ^(guò)1摩爾的哌啶從賴氨酸上移去。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于理解的是所述的方法可被調(diào)整以通過(guò)選擇性地消除關(guān)于谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸或賴氨酸的反應(yīng)而制備包含所希望的氨基酸，即在共聚物1中的三種或四種氨基酸，的肽和多肽。為了本申請(qǐng)的目的，術(shù)語(yǔ)“環(huán)境溫度”和“室溫”指約20℃至約26℃的溫度。
本發(fā)明無(wú)規(guī)共聚物的優(yōu)選的合成方法為通過(guò)固相合成。通過(guò)固相肽合成(SPPS)方法，使用Fmoc保護(hù)的氨基酸以多步驟進(jìn)行所述合成。SPPS基于向聚合物載體(珠)順序附加被保護(hù)的氨基酸衍生物，如果適合則進(jìn)行側(cè)鏈保護(hù)。堿不穩(wěn)定的Fmoc基團(tuán)用于N-保護(hù)。在除去保護(hù)基團(tuán)后(經(jīng)過(guò)哌啶水解)，用偶合劑(TBTU)添加下一個(gè)氨基酸混合物。在最后一個(gè)氨基酸被偶合上后，將N-端乙?；?。
將所得到的肽(通過(guò)C端連接于聚合物載體)用TFA剪切以形成粗品肽。在剪切的過(guò)程中，所有的側(cè)鏈保護(hù)基也被剪切掉。用二異丙醚沉淀后，將固體過(guò)濾并干燥。所形成的肽在2-8℃下分析和儲(chǔ)存。
固相合成的例子所述的無(wú)規(guī)共聚物YFAK由L-丙氨酸、L-賴氨酸、L-苯丙氨酸和L-酪氨酸組成，其以其被保護(hù)的形式在Wang樹脂上制備。所用的樹脂為Fmoc-L-酪氨酸(叔丁基)-Wang(0.62mmol/g)、Fmoc-L-苯丙氨酸-Wang(0.72mmol/g)、Fmoc-L-丙氨酸-Wang(0.70mmol/g)和Fmoc-L-賴氨酸(Boc)-Wang(0.72mmol/g)。所述的四個(gè)用F-moc保護(hù)的氨基酸，F(xiàn)moc-L-酪氨酸(叔丁基)-OH、Fmoc-L-苯丙氨酸-OH、Fmoc-L-丙氨酸-OH和Fmoc-L-賴氨酸-OH，以摩爾產(chǎn)出比為1∶1∶10∶6在各自偶合的步驟過(guò)程中分別加入。其它用于合成的試劑為2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)、N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)、哌啶和三氟乙酸(TFA)。所用的溶劑為N-甲基吡咯烷酮(NMP)、異丙醇(IsOH，IPA，i-PrOH)、二氯甲烷和異丙醚。每種偶合劑的化學(xué)計(jì)量如下所示·殘基1到10用2當(dāng)量的Fmoc保護(hù)的氨基酸；·殘基11到30用2當(dāng)量的具有雙重偶合的Fmoc保護(hù)的氨基酸；·殘基31到52用2.5當(dāng)量的具有雙重偶合的Fmoc保護(hù)的氨基酸。
在典型的具有逐漸升高丙氨酸含量的YFAK合成的例子中氨基酸產(chǎn)出比的例子如下所示

以相似的方式，共聚物1，本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案的無(wú)規(guī)共聚物，在Wang樹脂上以其被保護(hù)的形式被制備。所用的樹脂為Fmoc-L-酪氨酸(叔丁基)-Wang(0.62mmol/g)、Fmoc-L-谷氨酸-Wang、Fmoc-L-丙氨酸-Wang(0.70mmol/g)和Fmoc-L-賴氨酸(Boc)-Wang(0.72mmol/g)。所述的四個(gè)用F-moc保護(hù)的氨基酸，F(xiàn)moc-L-酪氨酸(叔丁基)-OH、Fmoc-L-谷氨酸-OH、Fmoc-L-丙氨酸-OH和Fmoc-L-賴氨酸-OH，以摩爾產(chǎn)出比為1∶2∶6∶5在各自偶合的步驟過(guò)程中分別加入。其它所用的試劑和偶合化學(xué)計(jì)量與YFAK的合成相同。
在典型的具有逐漸升高丙氨酸含量的YEAK合成的例子中氨基酸產(chǎn)出比的例子如下所示

非天然的多肽，以及共聚物的化學(xué)修飾在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物由天然存在的氨基酸組成。在另一些實(shí)施方案中，所述的共聚物由天然存在的和合成的衍生物，例如硒代半胱氨酸組成。氨基酸進(jìn)一步包括氨基酸類似物。氨基酸的“類似物”為具有不同構(gòu)型的氨基酸的化學(xué)相關(guān)形式，例如異構(gòu)體，或D-構(gòu)型而不是L構(gòu)型，或具有所述氨基酸的相似大小和形狀的有機(jī)分子，或具有對(duì)包含于肽鍵中的原子進(jìn)行修飾的氨基酸，因此當(dāng)在多肽中聚合時(shí)具有蛋白酶抗性。
用于本發(fā)明的共聚物可由L-或D-氨基酸或其混合物組成。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，存在于天然蛋白質(zhì)中的大部分是L-氨基酸。然而D-氨基酸可商購(gòu)并能取代一些或所有用于制備本發(fā)明的三元聚合物和其它共聚物的氨基酸。本發(fā)明預(yù)計(jì)共聚物包含D-和L-氨基酸兩者，以及預(yù)計(jì)共聚物基本上包含L-或D-氨基酸。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物包括這樣的線性共聚物，其通過(guò)取代或附加不同的化學(xué)部分而進(jìn)一步修飾。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種修飾在殘基位置上并且其量足夠抑制所述共聚物在受試者中的蛋白酶解降解。例如，所述的氨基酸修飾可存在于至少一個(gè)脯氨酸殘基的序列中，該殘基以羧基和氨基端基的至少之一的形式存在；另外，所述的脯氨酸可存在于具有羧基和氨基端基中的至少之一的四個(gè)殘基中。另外，所述的氨基酸修飾可以是存在D-氨基酸。
在一些實(shí)施方案中，所述的主題無(wú)規(guī)共聚物為擬肽(peptidomimetic)。擬肽是基于或衍生自肽和蛋白的化合物。本發(fā)明的共聚物擬肽通常可通過(guò)一種或多種天然的氨基酸殘基的結(jié)構(gòu)修飾而獲得，所述的結(jié)構(gòu)修飾例如使用非天然的氨基酸，構(gòu)象限制，同型空間配位取代等。主題擬肽構(gòu)成了在肽和非肽合成結(jié)構(gòu)之間的連續(xù)結(jié)構(gòu)空間。
這種擬肽可具有這樣的性質(zhì)，其不可水解(例如，增加抵抗蛋白酶或其它使相應(yīng)的肽共聚物降解的生理?xiàng)l件的穩(wěn)定性)，具有增加的特異性和/或功效。為了舉例說(shuō)明的目的，本發(fā)明的肽類似物可使用如下物質(zhì)生成例如苯二氮卓(例如參見Freidinger等人，在″PeptidesChemistry and Biology，″中，G.R.Marshall編，ESCOM PublisherLeiden，NeTHerlands，1988)，取代的γ內(nèi)酰胺環(huán)(Garvey等人，在″PeptidesChemistry and Biology，″中，G.R.Marshall編，ESCOM PublisherLeiden，Netherlands，1988，第123頁(yè))，C-7模擬物(Huffman等人，在″PeptidesChemistry and Biology，″中，G.R.Marshall編，ESCOM PublisherLeiden，Netherlands，1988，第105頁(yè))，酮-亞甲基擬肽(Ewenson等人，1986，J.Med.Chem.29295；和Ewenson等人，在″PeptidesStructure andFunction(Proceedings of the 9th American Peptide Symposium)″中，Pierce Chemical Co.Rockland，IL，1985)，β-反轉(zhuǎn)二肽核(Nagai等人，1985，Tetrahedron Lett.26647；和Sato等人，1986，J Chem.Soc.PerkinTrans.11231)，β-氨基醇(Gordon等人，1985，Biochem.Biophys.Res.Commun.126419；和Dann等人，1986，Biochem.Biophys.Res.Commun.13471)，二氨基酮(Natarajan等人，1984，Biochem.Biophys.Res.Commun.124141)，以及亞甲基氨基修飾物(Roark等人，在″PeptidesChemistry and Biology，″中，G.R.Marshall編，ESCOM PublisherLeiden，Netherlands，1988，第134頁(yè))。同樣通常參見，Session IIIAnalytic andsynthetic methods，在″PeptidesChemistry and Biology，″中，G.R.Marshall編，ESCOM PublisherLeiden，Netherlands，1988。
無(wú)規(guī)共聚物的分子量在多肽合成過(guò)程中或在所述共聚物已經(jīng)合成之后可以被調(diào)整。為了在多肽合成過(guò)程中調(diào)整分子量，可以調(diào)整所述的合成條件或氨基酸的量，因此當(dāng)所述的多肽達(dá)到所需的近似的長(zhǎng)度時(shí)，停止合成。在合成后，具有所需分子量的多肽可通過(guò)任何可用的大小選擇步驟獲得，例如在分子量篩選柱或凝膠上的多肽色譜分離，并且收集所需的分子量范圍。本發(fā)明的多肽還可部分水解以除去高分子量物質(zhì)，例如通過(guò)酸或酶水解，并且然后純化以除去酸或酶。
在一個(gè)實(shí)施方案中，具有所需分子量的無(wú)規(guī)共聚物可通過(guò)如下方法制備，所述方法包括使被保護(hù)的多肽與氫溴酸反應(yīng)以形成具有所需分子量分布的三氟乙?；?多肽。所述反應(yīng)在一定溫度下進(jìn)行一段時(shí)間，所述的時(shí)間和溫度通過(guò)一個(gè)或多個(gè)試驗(yàn)反應(yīng)預(yù)先確定。在試驗(yàn)反應(yīng)過(guò)程中，使所述的時(shí)間和溫度變化并且確定給定批次的受試多肽的分子量范圍。對(duì)于某個(gè)批次的多肽，提供最優(yōu)化的分子量范圍的試驗(yàn)條件就用于該批。因此，具有所需分子量分布的三氟乙?；?多肽可通過(guò)如下方法制備，所述方法包括使被保護(hù)的多肽與氫溴酸在由試驗(yàn)反應(yīng)而預(yù)先確定的時(shí)間內(nèi)和溫度下反應(yīng)。然后將具有所需分子量分布的三氟乙?；?多肽用哌啶水溶液進(jìn)一步處理以形成低毒性的具有所需分子量的多肽。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將得自給定批次的被保護(hù)多肽的受試樣品與氫溴酸在20-28℃的溫度下反應(yīng)10-50小時(shí)。通過(guò)進(jìn)行數(shù)次試驗(yàn)反應(yīng)確定該批的最佳反應(yīng)條件。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，將被保護(hù)的多肽與氫溴酸在約26℃的溫度下反應(yīng)約17小時(shí)。
在一些實(shí)施方案中，可用于本發(fā)明中的無(wú)規(guī)共聚物包括描述于如下文獻(xiàn)中的那些國(guó)際PCT公開WO 00/05250、WO 00/05249、WO02/59143、WO 00/27417、WO 96/32119，美國(guó)專利公開2004/003888、2002/005546、2003/0004099、2003/0064915和2002/0037848，美國(guó)專利6,514,938、5,800,808和5,858,964，以及在PCT申請(qǐng)PCT/US05/06822中描述的那些。這些參考文獻(xiàn)進(jìn)一步描述合成無(wú)規(guī)共聚物的方法、包含無(wú)規(guī)共聚物的組合物、無(wú)規(guī)共聚物的治療劑、向受試者給藥無(wú)規(guī)共聚物的方法、可用無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，和另外的可與所述無(wú)規(guī)共聚物一起向受試者共同給藥的有效的治療劑。所有這些專利、申請(qǐng)和公開的教導(dǎo)內(nèi)容通過(guò)引用其全部?jī)?nèi)容并入本發(fā)明中。
清楚的是，這僅是所給的例子，并且如果將上述通用標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合其中，所述的組合物既可關(guān)于組分又可關(guān)于組分的相對(duì)比例進(jìn)行變化。
IV.疾病本發(fā)明提供用于治療和預(yù)防受試者的疾病的方法。處于疾病發(fā)展的危險(xiǎn)中，被懷疑患有疾病，或者患有所述疾病的受試者可使用本發(fā)明提供的方法進(jìn)行治療。
在一個(gè)實(shí)施方案中，可用本發(fā)明的方法治療的疾病包括由T細(xì)胞，和特別是TH1細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，或者是由過(guò)量炎癥細(xì)胞因子惡化的疾病。本發(fā)明的方法可用于治療如下疾病缺血性損傷，包括由全身性缺血或局部缺血導(dǎo)致的那些，特別是心臟、肺或腎。在一些實(shí)施方案中，所述的炎癥與如下疾病有關(guān)膿毒性休克、過(guò)敏性休克、中毒性休克綜合征、惡病質(zhì)、壞死、壞疽、假體植入物或超敏感性，包括I型超敏感性、II型超敏感性、III型超敏感性、IV型超敏感性、即刻超敏感性、抗體介導(dǎo)的超敏感性、免疫復(fù)合體介導(dǎo)的超敏感性、T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的超敏感性和延遲型超敏感性。在另外的實(shí)施方案中，所述的疾病包括心肌梗死、心動(dòng)停止、缺血-再灌注損傷、充血性心衰、心臟中毒、由于寄生蟲感染導(dǎo)致的心臟損傷、急性心臟淀粉樣變性、心臟外科手術(shù)、心臟移植、外傷性心臟損傷、胸主動(dòng)脈瘤的外科手術(shù)修復(fù)、腎上腺主動(dòng)脈瘤、失血導(dǎo)致的失血性休克、心肌梗死或心衰導(dǎo)致的心源性休克、過(guò)敏反應(yīng)、不穩(wěn)定型冠脈綜合征、心動(dòng)過(guò)速、心動(dòng)過(guò)緩或其組合。
在一個(gè)實(shí)施方案中，可用本發(fā)明的方法治療的疾病包括自身免疫性疾病。本發(fā)明所考慮的自身免疫性疾病包括細(xì)胞介導(dǎo)的疾病(例如T細(xì)胞)或抗體介導(dǎo)的疾病(例如B細(xì)胞)。這樣的疾病特別可以是關(guān)節(jié)炎病癥、脫髓鞘疾病和炎癥性疾病。本發(fā)明的方法特別用于治療脫髓鞘炎癥性疾病，其包括多發(fā)性硬化、EAE、視神經(jīng)炎、急性橫貫性脊髓炎和急性彌散性腦炎。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，如果將所考慮的多肽結(jié)合于與自身免疫性疾病相關(guān)聯(lián)的MHC II類蛋白，可用本發(fā)明的多肽治療所有自身免疫性疾病。疾病的進(jìn)展可通過(guò)使用已知方法監(jiān)控臨床或診斷癥狀進(jìn)行測(cè)量。
在一個(gè)實(shí)施方案中，用本文中提供的方法治療的疾病是“關(guān)節(jié)炎病癥”。如本文中所用的，關(guān)節(jié)炎病癥是這樣的病癥，其中在哺乳動(dòng)物中的至少一個(gè)關(guān)節(jié)處，例如在所述哺乳動(dòng)物的肩、膝、髖、脊椎或趾觀察到至少一種類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的癥狀。RA是常見的人自身免疫性疾病，其在白種人中的患病率為約1％(Harris，B.J.等人，1997，InTextbook of Rheumatology 898-932)，目前感染該病的美國(guó)人有250萬(wàn)。RA的特征在于滑液關(guān)節(jié)的慢性發(fā)炎和由導(dǎo)致所述關(guān)節(jié)軟骨逐步破壞的活化T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血漿細(xì)胞產(chǎn)生的浸潤(rùn)。這是關(guān)節(jié)疾病最嚴(yán)重的形式。RA的遺傳易感性與在所述MHC II類DRB1基因座具有等位基因DRB1*0401、DRB1*0404或DRB1*0405或所述的DRB1*0101等位基因的被感染的受試者高度相關(guān)。對(duì)在RA中的一種或多種自身抗原的性質(zhì)知道的很少，盡管膠原蛋白II型(CII)是突出的候選者。在相當(dāng)于殘基261-273的II型膠原蛋白中的免疫優(yōu)勢(shì)T細(xì)胞表位已經(jīng)被確定(Fugger，L.等人，1996，Eur.J.Immunol.26928-933)。
關(guān)節(jié)炎病癥的其它例子包括“多發(fā)性關(guān)節(jié)炎”，其作為關(guān)節(jié)炎病癥感染不止一個(gè)關(guān)節(jié)；“幼年型關(guān)節(jié)炎”，人在21歲以下的關(guān)節(jié)炎病癥；和費(fèi)爾蒂綜合征，其可包含中性粒細(xì)胞減少、脾大、體重減輕、貧血、淋巴結(jié)病和皮膚色素斑的綜合征。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，由本文中提供的方法治療的疾病為多發(fā)性硬化(MS)。多發(fā)性硬化的疾病的過(guò)程是高度變化的、不可預(yù)知的，并在大部分患者中是間歇性的。MS的病理特點(diǎn)是多中心的、多相的CNS炎癥和脫髓鞘。疾病消退可獨(dú)立地為數(shù)月或數(shù)年，特別是在疾病的早期。復(fù)發(fā)-緩解型(RR)的約70％的患者，其特征在于具有完全或部分消退的急性惡化。其它的患者表現(xiàn)出慢性MS發(fā)展，其進(jìn)一步細(xì)分為(a)原發(fā)-進(jìn)展型(PP)，(b)復(fù)發(fā)-進(jìn)展型(RP)，其為RP和RP特征的組合模式，并且其臨床嚴(yán)重性是中等的，和(c)繼發(fā)-進(jìn)展型(SP)，其中許多患有RP的患者隨時(shí)間發(fā)展。在特定的優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)本發(fā)明方法治療的疾病為復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。
MS的臨床癥狀包括感覺喪失(感覺異常)、運(yùn)動(dòng)(肌肉抽筋繼發(fā)痙攣)和自發(fā)性(膀胱、腸、性功能障礙)脊髓癥狀、小腦癥狀(例如構(gòu)音障礙、共濟(jì)失調(diào)、震顫的Charcot三聯(lián)癥)；疲勞和頭昏；關(guān)于神經(jīng)心理測(cè)試的信息加工方面的損傷；眼部癥狀，包括關(guān)于往外側(cè)注視的復(fù)視；三叉神經(jīng)痛和視神經(jīng)炎。
在MS中的自身抗原最可能是幾種髓鞘蛋白中的一種(例如蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP)；髓鞘少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)；髓鞘堿性蛋白(MBP)；髓鞘相關(guān)的糖蛋白(MAG)；髓鞘相關(guān)的少突膠質(zhì)基礎(chǔ)蛋白(MBOP)；瓜氨酸修飾的MBP(MBP的C8異形體，其中6個(gè)精氨酸已經(jīng)被deiminated成瓜氨酸)，環(huán)狀核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)，α-B結(jié)晶質(zhì)的，等)。完整的膜蛋白PLP為髓鞘主要的自身抗原。小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞作為抗原呈遞細(xì)胞共同作用，這導(dǎo)致發(fā)炎過(guò)程、目標(biāo)特異性少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和它們的膜髓鞘的細(xì)胞因子、補(bǔ)體和其它調(diào)質(zhì)的活化。在具有分泌IFN-γ能力的髓鞘自體反應(yīng)TH1細(xì)胞方面量的增加與MS和EAE的發(fā)病機(jī)理相關(guān)，這說(shuō)明自身免疫誘導(dǎo)物/助手T淋巴細(xì)胞，在MS患者的周圍血中可引發(fā)和/或調(diào)整患有MS的患者中的脫髓鞘過(guò)程。另一方面，關(guān)于產(chǎn)生抗炎細(xì)胞因子例如IL-4和IL-10的TH2細(xì)胞的保護(hù)作用有很多文獻(xiàn)。細(xì)胞的由TH1到TH2類型的轉(zhuǎn)化平衡預(yù)計(jì)對(duì)預(yù)防和治療MS和EAE是有利的。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用本文中所提供的方法治療的疾病為胰島素依賴型糖尿病。人的I型糖尿病或胰島素依賴型糖尿病(IDDM)的特征在于在蘭格爾翰斯胰島中的細(xì)胞的自身免疫破壞。β-細(xì)胞的損耗導(dǎo)致不能調(diào)節(jié)在血中的葡萄糖水平。顯性(Overt)糖尿病發(fā)生于當(dāng)在血中的葡萄糖水平上升至高于特定水平時(shí)，通常約250mg/dl時(shí)。在人中，長(zhǎng)期的癥狀前時(shí)段發(fā)生于糖尿病發(fā)病之前。在這段時(shí)段中，胰腺β細(xì)胞功能逐步喪失。疾病的發(fā)展涉及抵抗胰島素的自身抗體、谷氨酸脫羧酶和酪氨酸磷酸酶IA2(IA2)的出現(xiàn)，每個(gè)例子都是本發(fā)明的自身-蛋白、-多肽和-肽的例子。目前用監(jiān)控血液葡萄糖水平以指導(dǎo)重組胰島素的注射或基于泵的遞送而治療人的IDDM。飲食和運(yùn)動(dòng)方案幫助達(dá)到適當(dāng)?shù)难浩咸烟强刂啤?br> 在癥狀前階段過(guò)程中可被評(píng)價(jià)的標(biāo)記為胰腺中胰島炎的出現(xiàn)、小島細(xì)胞抗體的水平和頻率、小島細(xì)胞表面抗體、胰腺β細(xì)胞上MHC II類分子的異常表達(dá)，血液中葡萄糖濃度和胰島素血漿濃度。在胰腺中T淋巴細(xì)胞的數(shù)量、小島細(xì)胞抗體和血液葡萄糖的增加是該疾病的指示，如胰島素濃度降低時(shí)的那樣。
在血清中具有各種特異性的自身抗體的組合的出現(xiàn)對(duì)人I型糖尿病而言是高度敏感性和特異性的。例如，抵抗GAD和/或IA-2的自身抗體的出現(xiàn)為約98％敏感度和99％特異于鑒別得自對(duì)照血清的I型糖尿病。在非糖尿病性一度相關(guān)的I型糖尿病患者中，對(duì)三個(gè)包括GAD的自身抗原中的兩個(gè)，胰島素和IA-2具有特異性的自身抗體的出現(xiàn)傳達(dá)了對(duì)于I型DM的發(fā)展在5年內(nèi)的正預(yù)測(cè)值為＞90％。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用本文中提供的方法治療的疾病為自身免疫性葡萄膜炎。自身免疫性葡萄膜炎為眼的自身免疫性疾病，估計(jì)感染400,000人，在美國(guó)每年出現(xiàn)43,000個(gè)新病例。自身免疫性葡萄膜炎通常用如下試劑治療類固醇、免疫抑制劑如甲氨蝶呤和環(huán)孢素、靜脈內(nèi)免疫球蛋白和TNFα-拮抗劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用本文中提供的方法治療的疾病為實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)。EAU是T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，其靶點(diǎn)是眼睛中的視網(wǎng)膜神經(jīng)、葡萄膜和相關(guān)組織。EAU具有人自身免疫性葡萄膜炎的許多臨床和免疫學(xué)特征，并且由在Complete Freund′sAdjuvant(CFA)中乳化的致葡萄膜炎(uveitogenic)肽的外部給藥誘導(dǎo)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用本文中提供的方法治療的疾病為原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)。PBC為器官特異性自身免疫性疾病，其主要感染40-60歲的婦女。在這組中報(bào)告的患病率達(dá)到每1,000個(gè)中有1個(gè)。PBC的特征在于肝膽上皮細(xì)胞(IBEC)內(nèi)層小肝膽管的逐步破壞。這導(dǎo)致阻塞和干擾膽分泌，導(dǎo)致最終硬化。與以上皮內(nèi)層/分泌腺系統(tǒng)破壞為特征的其它自身免疫性疾病的聯(lián)合已經(jīng)有報(bào)導(dǎo)，包括舍格倫綜合征、CREST綜合征、自身免疫性甲狀腺疾病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用本文中提供的方法治療的疾病為乳糜瀉，也已知為脂肪痢或麩膠敏感性腸病。乳糜瀉是由有缺陷的胃腸吸收導(dǎo)致的疾病，其中所述的有缺陷的胃腸吸收是由于對(duì)谷類谷物儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)，包括存在于小麥、大麥和燕麥中的谷蛋白或其產(chǎn)品麥膠蛋白和麥谷蛋白過(guò)度敏感造成的。該疾病由CD4T細(xì)胞導(dǎo)致，所述CD4T細(xì)胞識(shí)別麥膠蛋白為飲食抗原并且這些細(xì)胞誘導(dǎo)TH1-介導(dǎo)的慢性炎癥應(yīng)答?？梢姷陌Y狀包括腹瀉、失重和脂肪瀉，絨毛萎縮和吸收障礙。它可能與皮炎皰疹，小泡狀的皮膚出疹相關(guān)。乳糜瀉與等位基因DQB1*0302和DQB1*0201相關(guān)，其與DQA1*0301和DQA1*0501組合。95％的患者攜帶DQB1*0201或者DQB1*0302。與HLA的強(qiáng)關(guān)聯(lián)據(jù)信是由于由DQB1*0201、DQA1*0501、DQB1*0302和DQA1*0301編碼DQ分子的能力導(dǎo)致的，以有效地表現(xiàn)出得自麥膠蛋白和麥谷蛋白的富含谷氨酰胺的肽的脫氨基變體。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于在受試者中治療自身免疫性疾病的方法進(jìn)一步包含抑制T細(xì)胞的增殖或功能，所述的T細(xì)胞對(duì)自身抗原有反應(yīng)。自身免疫性疾病和免疫排斥的病理學(xué)過(guò)程是由T細(xì)胞介導(dǎo)的。當(dāng)結(jié)合于抗原并識(shí)別抗原時(shí)，T細(xì)胞增殖，向所述位點(diǎn)分泌細(xì)胞因子并募集更多的炎癥細(xì)胞和細(xì)胞毒性細(xì)胞。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，描述于本文中的用于在受試者中治療自身免疫性疾病的方法涉及將所述的無(wú)規(guī)共聚物結(jié)合于主要的組織相容性復(fù)合體II類蛋白，該蛋白與自身免疫性疾病相關(guān)。所述的MHC II類蛋白主要在B淋巴細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞如巨噬細(xì)胞的表面上表達(dá)。這些MHC II類蛋白具有肽結(jié)合溝槽，該溝槽為將抗原肽呈遞于T細(xì)胞的位點(diǎn)。當(dāng)本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物結(jié)合于主要的組織相容性復(fù)合物II類蛋白時(shí)，那些無(wú)規(guī)共聚物可阻斷或另外干擾抗原呈遞和/或T細(xì)胞激活。
在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)本發(fā)明方法治療的疾病為宿主抗移植物病(HVGD)或移植物抗宿主病(GVHD)。移植系統(tǒng)例如器官移植和骨髓再構(gòu)成，對(duì)于許多危及生命的疾病而言已經(jīng)成為重要和有效的治療。然而，免疫排斥對(duì)于成功的移植仍是主要障礙。在器官移植(宿主抗移植物病或HVGD)的情況下，顯現(xiàn)功能退化和移植物排斥。另一個(gè)病理免疫反應(yīng)性的表現(xiàn)形式為發(fā)生于約30％骨髓接受者身上的GVHD。患有GVHD的那些患者中的最多至一半可能死于這一過(guò)程。這種高的發(fā)病率和死亡率已經(jīng)使人們對(duì)控制和預(yù)防GVHD的可能性方面一直有興趣。臨床病理學(xué)上，已經(jīng)識(shí)別了兩種形式的GVHD。急性GVHD在骨髓移植后的最初3個(gè)月內(nèi)發(fā)展并且其特征為皮膚、肝和胃腸道的疾病。慢性GVHD是類似于多器官自身免疫的疾病，在移植后3個(gè)月至最多3年內(nèi)出現(xiàn)并具有相同于天然發(fā)生的自身免疫性疾病的特征，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和硬皮病。描述于本文中的方法可用于治療急性和慢性GVHD兩者。
在本文中所述方法的特定實(shí)施方案中，共聚物1或YFAK無(wú)規(guī)共聚物可用于預(yù)防和治療在所有發(fā)展成GVHD的器官移植情況下的GVHD，但特別在胎兒胸腺，和更特別在異種骨髓移植的情況下。向處于適當(dāng)處理方案下的患者可給藥GLAT共聚物，治療方案為在移植前2天和然后在移植后另外的60-100天，至少60天給藥。這個(gè)過(guò)程的方案可包括在大于24、30、36、42或48小時(shí)的時(shí)間間隔的條件下給藥所述無(wú)規(guī)共聚物。其它的免疫抑制藥物，例如環(huán)孢素、甲氨喋呤和潑尼松可與共聚物1共聚物一起給藥。
本發(fā)明的方法還可應(yīng)用于預(yù)防和治療在患者中移植骨髓過(guò)程中的GVHD，所述的患者患有可通過(guò)骨髓移植治療的疾病，包括白血病，例如急性淋巴母細(xì)胞白血病(ALL)，急性非淋巴母細(xì)胞白血病(ANLL)，急性髓細(xì)胞白血病(AML)和慢性髓細(xì)胞白血病(CML)，嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷綜合征(SCID)，骨硬化病，再生障礙性貧血，高雪氏癥，地中海貧血和其它天生的或遺傳決定的造血或代謝異常。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法可應(yīng)用于促進(jìn)神經(jīng)再生或應(yīng)用于防止或抑制可另外隨著原發(fā)性神經(jīng)系統(tǒng)損傷而發(fā)生的繼發(fā)性衰退，例如密閉型腦外傷和鈍挫傷，例如由參予危險(xiǎn)運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的那些，貫穿性損傷，例如火器傷，出血性休克，缺血性休克，青光眼，腦缺血，或由外科手術(shù)例如腫瘤切除導(dǎo)致的損傷。另外，這種組合物可用于緩解導(dǎo)致衰退過(guò)程的疾病的作用，所述疾病例如由于各種疾病或病癥而發(fā)生于灰質(zhì)或白質(zhì)(或兩者)中的退化，包括但不限于糖尿病性神經(jīng)病，老年性癡呆，阿爾茨海默病，帕金森氏病，面部神經(jīng)(貝爾氏)癱瘓，青光眼，亨廷頓氏舞蹈病，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化(ALS)，癲癇持續(xù)狀態(tài)，非動(dòng)脈炎性視神經(jīng)病變，椎問(wèn)盤突出，維生素缺乏，朊病毒病例如庫(kù)賈氏病，腕管綜合征，與各種疾病相關(guān)的外周神經(jīng)病，包括但不限于尿毒癥，卟啉癥，低血糖癥，Sjorgren Larsson綜合征，急性感覺神經(jīng)病，慢性混亂神經(jīng)病，膽汁性肝硬變，原發(fā)性淀粉樣變性，阻塞性肺病，肢端肥大癥，吸收障礙綜合征，真性紅細(xì)胞增多，IgA和IgG gammapathies，各種藥物(例如甲硝噠唑)和毒素(例如醇或有機(jī)磷酸酯)的并發(fā)癥，Charcot-Marie-Tooth病，巨大軸突病，遺傳性共濟(jì)失調(diào)型多神經(jīng)炎病(Refsum′s disease)，法布瑞氏癥，脂蛋白血癥等。另外，可通過(guò)給藥本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物而治療的其它臨床病癥包括癲癇癥，健忘癥，憂慮癥，痛覺過(guò)敏，精神病，癲癇發(fā)作，眼內(nèi)壓非正常升高，氧化應(yīng)激和阿片劑耐受和依賴。
在特定的實(shí)施方案中，通過(guò)描述于本文中的方法治療的疾病包括多發(fā)性硬化、I型糖尿病，橋本甲狀腺炎，克隆病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，胃炎，自身免疫性肝炎，溶血性貧血，自身免疫性血友病，自身免疫性淋巴增生性綜合征(ALPS)，自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎，腎小球性腎炎，吉-巴綜合征，銀屑病，重癥肌無(wú)力，自身免疫性腦脊髓炎，吉德帕斯丘綜合征，格雷夫斯病，副腫瘤性天皰瘡，自身免疫性血小板減少性紫癜，具有抗膠原抗體的硬皮病，混合性結(jié)締組織病，惡性貧血，多肌炎，特發(fā)性阿狄森病，與自身免疫有關(guān)的不育癥，大皰性類天皰瘡，舍格倫綜合征，特發(fā)性粘液水腫或結(jié)腸炎。在一些實(shí)施方案中，所述的受試者患有多于一種疾病。
V.治療用組合物本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物可以組合物形式向受試者給藥，所述的組合物包含藥學(xué)有效量的共聚物和可接受的載體和/或賦形劑。藥學(xué)可接受的載體包括生理學(xué)可接受的所有的溶劑、分散介質(zhì)或包衣。優(yōu)選地，所述的載體適合于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、口服、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、透皮、局部或皮下給藥。一個(gè)典型的藥學(xué)可接受的載體為生理鹽水。其它藥學(xué)可接受的載體和它們的制劑是公知的并通常描述于例如Remington′sPharmaceutical Science(第18版，編者Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990)中。很多種藥學(xué)可接受的賦形劑在本領(lǐng)域是公知的并可在例如Handbook of Pharmaceutical Excipients(第4版，編者Rowe等人，Pharmaceutical Press，Washington，D.C)中找到。所述的組合物可被配制成溶液劑、微乳劑、脂質(zhì)體、膠囊劑、片劑或其它合適的形式。包含所述共聚物的活性組分可以在材料中被包衣以保護(hù)使其在到達(dá)作用的靶點(diǎn)位置之前避免由于周圍環(huán)境而失活。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選為無(wú)菌的并且在遞送的時(shí)候是非致熱性的，并優(yōu)選在制備和儲(chǔ)存條件下是穩(wěn)定的。
在本發(fā)明的另外的實(shí)施方案中，所述的藥物組合物可為控釋制劑。本發(fā)明的共聚物可與控制所述共聚物進(jìn)入到最近環(huán)境中的釋放速率的生物相容性聚合物或基質(zhì)摻混。控釋或緩釋組合物包括在親脂性儲(chǔ)庫(kù)(例如脂肪酸，蠟，油類)中的制劑。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，藥物組合物包含無(wú)規(guī)共聚物，其用油和乳化劑配成制劑以形成油包水微粒劑和/或乳劑。所述的油可以是在室溫至約體溫的溫度下無(wú)毒的疏水材料液體，例如可食用的植物油包括紅花油、豆油、玉米油和肉桂油；或礦物油。還可使用化學(xué)定義的油物質(zhì)例如月桂二醇。用于該實(shí)施方案的乳化劑包括司盤20(失水山梨醇單月桂酸酯)和磷脂酰膽堿。在一些實(shí)施方案中，無(wú)規(guī)共聚物組合物被制備成水溶液并制備成油包水乳液，所述的油包水乳液被分散到95-65％的油例如礦物油，和5-35％乳化劑例如司盤20中。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的乳液用明礬而不是用油和乳化劑形成。這些乳液和微粒劑降低了無(wú)規(guī)共聚物的吸收速度并達(dá)到可控抗原遞送的目的。
在一些實(shí)施方案中，所述的藥物組合物還包括另外的治療活性劑，這種另外的組分可為結(jié)合于不同的HLA分子的至少一種另外的無(wú)規(guī)共聚物，例如共聚物1(YEAK，CopaxoneTM)，結(jié)合于不希望的炎癥分子或細(xì)胞因子例如白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8、粒細(xì)胞、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，以及腫瘤壞死因子-α；酶抑制劑例如蛋白酶抑制劑抑肽酶或環(huán)氧合酶抑制劑；抗生素例如阿莫西林、利福平、紅霉素；抗病毒劑例如阿昔洛韋；甾體抗炎藥例如糖腎上腺皮質(zhì)激素；非甾體抗炎藥例如阿司匹林、布洛芬或撲熱息痛；或非炎癥細(xì)胞因子例如白細(xì)胞介素-4或白細(xì)胞介素-10。還可以使用保留類似的生理活性的其它細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子例如干擾素-β，腫瘤壞死因子，新血管生成抑制因子，紅細(xì)胞生成素、血小板生成素、白細(xì)胞介素、成熟因素、趨化蛋白和它們的變體和衍生物作為另外的組分。
在一些實(shí)施方案中，所述另外的活性的治療活性劑選自抗銀屑病霜?jiǎng)?，滴眼劑，滴鼻劑，柳氮磺胺吡淀，糖皮質(zhì)激素類，丙基硫尿嘧啶，甲巰基咪唑，I131，胰島素，IFN-β1a，IFN-β1b，糖皮質(zhì)激素類，ACTH，avonex，咪唑硫嘌呤，環(huán)磷酰胺，UV-B，PUVA，甲氨蝶呤，calcipitriol，環(huán)磷酰胺，OKT3，F(xiàn)K-506，環(huán)孢素A，咪唑硫嘌呤和霉酚酸酯。
本發(fā)明的共聚物還可用于與抗肥胖藥物組合使用。抗肥胖藥物包括P-3激動(dòng)劑，CB-1拮抗劑，食欲抑制劑例如西布曲明(Meridia)和脂肪酶抑制劑例如奧利司他(Xenical)。目標(biāo)共聚物還可在糖尿病患者中與通常用于治療脂質(zhì)紊亂的藥物組合在本發(fā)明的方法中使用。這些藥物包括但不限于HMG-CoA還原酶抑制劑，煙酸，膽汁酸多價(jià)螯合劑和苯氧酸衍生物。本發(fā)明的多肽還可與抗高血壓藥物組合使用，所述的抗高血壓藥物例如β阻斷劑，組織蛋白酶S抑制劑和ACE抑制劑。β阻斷劑的例子為醋丁洛爾，比索洛爾，艾司洛爾，普萘洛爾，阿替洛爾，拉貝洛爾，卡維地洛和美托洛爾。ACE抑制劑的例子為卡托普利，依那普利，賴諾普利，苯那普利，福辛普利，雷米普利，喹那普利，培哚普利，群哚普利和美西普利。
本發(fā)明進(jìn)一步提供的試劑盒，其包含(i)包含無(wú)規(guī)共聚物的組合物和(ii)用于向有需要的受試者以大于24小時(shí)，更優(yōu)選大于36小時(shí)的時(shí)間間隔給藥該組合物用于治療疾病例如自身免疫性疾病的用法說(shuō)明。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的自身免疫性疾病為多發(fā)性硬化。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物為共聚物1。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將所述的無(wú)規(guī)共聚物配成制劑，給藥的間隔為大于約24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)，或者其任何給藥間隔。在本文中所述的試劑盒的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的用法說(shuō)明指示將所述的無(wú)規(guī)共聚物在每隔約24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)或任何之間的時(shí)間間隔給藥。試劑盒可包含另外的組分，例如包裝和一種或多種用于給藥所述共聚物的裝置，例如皮下注射器。
在特定的實(shí)施方案中，所述的自身免疫性疾病選自多發(fā)性硬化、I型糖尿病、橋本甲狀腺炎、克隆病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、胃炎、自身免疫性肝炎、溶血性貧血、自身免疫性血友病、自身免疫性淋巴增生性綜合征(ALPS)、自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎、腎小球性腎炎、吉-巴綜合征、銀屑病、重癥肌無(wú)力、自身免疫性腦脊髓炎、吉德帕斯丘綜合征、格雷夫斯病、副腫瘤性天皰瘡、自身免疫性血小板減少性紫癜、具有抗膠原抗體的硬皮病、混合性結(jié)締組織病、惡性貧血、多肌炎、特發(fā)性阿狄森病、與自身免疫有關(guān)的不育癥、大皰性類天皰瘡、舍格倫綜合征、特發(fā)性粘液水腫和結(jié)腸炎。
VI.治療方法本發(fā)明的一個(gè)方面提供新的方法以治療患有或懷疑患有例如自身免疫性疾病的疾病的受試者，其通過(guò)向所述的受試者給藥治療有效量的一種或多種無(wú)規(guī)共聚物。具體而言，將包括無(wú)規(guī)共聚物組合物的藥物組合物進(jìn)行皮下給藥考慮為是本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案。皮下注射引起更希望的偏向于TH2應(yīng)答的免疫應(yīng)答，其是對(duì)于某些抗原耐受的基礎(chǔ)。
通常，作為對(duì)需要這種治療的受試者進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)的本發(fā)明的治療方法可不同于接種疫苗。成功的接種疫苗依賴于被給藥的疫苗的免疫原性，其增加了抗體直接與在疫苗中的抗原反應(yīng)的效價(jià)。相反，本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物在治療疾病中是有效的，而不會(huì)引起抵抗所述共聚物自身抗體的高效價(jià)。如由如下實(shí)施例證明的，本發(fā)明的方法的有效性不依賴于抵抗所述共聚物產(chǎn)生的抗體，并因此根本不同于接種疫苗。與接種疫苗不同，通過(guò)本發(fā)明的方法給藥的本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物，引起對(duì)于所述疾病相關(guān)的抗原的耐受性，并且更特別地，引起外周耐受性。外周耐受性與中心耐受性相對(duì)照，其益處是作為調(diào)節(jié)現(xiàn)象更安全。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面具體化為給藥包含本發(fā)明無(wú)規(guī)共聚物的組合物的方法，以引起對(duì)無(wú)規(guī)共聚物和與所述疾病相關(guān)的抗原的外周耐受性。
通常，本發(fā)明的實(shí)施方案是給藥適當(dāng)劑量的治療用共聚物組合物，所述劑量為產(chǎn)生治療效果如減輕癥狀的最低的有效劑量。所述的治療用共聚物優(yōu)選對(duì)每個(gè)受試者以一定劑量給藥，所述一定劑量相當(dāng)于每天每劑至少約2mg，至少約5mg，至少約10mg或至少約20mg作為合適的最小起始劑量，或者約x mg，其中x為1-20的整數(shù)。在本文中所述的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，可給藥約0.01至約500mg/kg的劑量。通常，本發(fā)明化合物有效劑量為每千克受試者體重每天約50至約400微克。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，無(wú)論給藥劑量的頻率，每天劑量是等當(dāng)量的，其為約5至100，或更優(yōu)選約10至40，或更優(yōu)選約20mg/天。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，在治療方案中每個(gè)單獨(dú)的劑量為約5至100，或更優(yōu)選約10至40，或更優(yōu)選約20mg/劑。
然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明組合物的劑量將根據(jù)所述的受試者和所用的具體給藥途徑而變化。在本領(lǐng)域中，調(diào)整劑量以適應(yīng)個(gè)體受試者是常規(guī)工作。另外，所述的有效量可特別基于所述化合物的大小、所述化合物的生物可降解性、所述化合物的生物活性和所述化合物的生物使用度。如果所述化合物不會(huì)快速降解，可生物使用和具有高度活性，則只需少量就有效。適合于受試者的實(shí)際劑量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員，例如給出通常的起始劑量的醫(yī)師或獸醫(yī)，作為常規(guī)工作容易地確定。例如所述的醫(yī)師或獸醫(yī)為了獲得所需的治療效果，可在開始給藥在所述藥物組合物中采用的本發(fā)明的化合物，其劑量低于所需的水平，并隨時(shí)間增加所述劑量直至達(dá)到所需的效果。醫(yī)師或獸醫(yī)還可指定建議CopaxoneTM的給藥作為通常起始點(diǎn)。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“治療方案”意于包括給藥包含一種或多種無(wú)規(guī)共聚物的一種或多種組合物的治療、減輕和預(yù)防形式。具體的治療方案持續(xù)的時(shí)間可根據(jù)具體疾病或病癥的性質(zhì)、其嚴(yán)重性和患者的綜合狀況，并可由每天一次或更優(yōu)選每36小時(shí)或48小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間一次擴(kuò)展到每月或數(shù)月一次。治療后，監(jiān)控患者的癥狀變化和病癥或疾病狀態(tài)的癥狀的緩和。寡核苷酸的劑量可在患者對(duì)通常劑量水平?jīng)]有響應(yīng)的情況下增加，或者所述劑量可在如果觀察到所述病癥或疾病狀態(tài)的癥狀的緩和、或者所述的病癥或疾病狀態(tài)已經(jīng)被消除、或者如果用所述的起始劑量觀察到不能接受的副作用的情況下降低。
在一個(gè)實(shí)施方案中，將治療有效量的無(wú)規(guī)共聚物給藥到受試者，治療方案包括給藥之間的時(shí)間間隔為至少36小時(shí)，或更優(yōu)選48小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物在至少54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)的時(shí)間間隔或每天等當(dāng)量的給藥。在一些實(shí)施方案中，每隔一天給藥所述試劑，而在另一些實(shí)施方案中，每周給藥。如果向受試者給藥兩種共聚物，這些共聚物可在同一時(shí)間給藥，例如同時(shí)或基本同時(shí)，例如先后給藥。另外，它們的給藥可以是交錯(cuò)的。例如每48小時(shí)各自給藥的兩種共聚物可同一天給藥，或者可以用交替方式，一種在一天給藥，而另一種在第二天給藥等等。
由如下實(shí)施例所示，采用較長(zhǎng)給藥間隔的治療方案因此通常采用較低的共聚物的總暴露，引起較低的抵抗共聚物自身的抗體效價(jià)，而又引起所需的保護(hù)作用。希望中和抗體的這種降低，因?yàn)樗赡軒椭鸁o(wú)規(guī)共聚物組合物保持其作用而不被中和，并且其關(guān)聯(lián)于降低過(guò)敏性休克的風(fēng)險(xiǎn)，提供更安全的疾病的治療。較長(zhǎng)的時(shí)間間隔方案也是希望的，因?yàn)樗鼈兗訌?qiáng)了對(duì)于TH2應(yīng)答的傾向，該傾向被認(rèn)為是所述無(wú)規(guī)共聚物治療作用的模式。
在另一些實(shí)施方案中，給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，治療方案包括至少一個(gè)不平均的時(shí)間間隔，其中至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)，或數(shù)天的等當(dāng)量。
在一個(gè)實(shí)施方案中，將所述共聚物向受試者給藥，在一個(gè)治療方案過(guò)程中至少3次，因此在給藥之間有至少兩個(gè)時(shí)間間隔。這些時(shí)間間隔可以用I1和I2指示。如果所述聚合物被給藥4次，那么將在第三和第四次給藥之間有增加的間隔，I3，因此對(duì)于給藥的給定數(shù)目“n”，間隔數(shù)為n-1。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，至少在給藥之間的時(shí)間間隔之一為大于約24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，時(shí)間間隔的總數(shù)n-1的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％為至少約24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，在給藥之間的平均時(shí)間間隔((I1+I2+...+In-1)/n-1)為至少24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)，或至少兩周。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的給藥方案包括兩個(gè)或多個(gè)不同的時(shí)間間隔組。例如，給藥方案的第一部分為向受試者每天、每隔一天或每隔兩天，例如在約22mg共聚物/m2受試者體表面積給藥，其中，所述的受試者為人。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的給藥方案開始于向所述的受試者每隔一天、每隔兩天、每周、每?jī)芍芑蛎吭陆o藥。每隔一天或每隔兩天給藥的劑量可以分別為最高至約65mg/m2和110mg/m2。對(duì)于包含每周給藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，所述劑量包含最高至約500mg/m2，并且對(duì)于包含每?jī)芍芑蛎吭陆o藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，可給藥劑量最高至1.5g/m2。所述給藥方案的第一部分可以給藥最多至30天，例如7、14、21或30天。之后可任選隨后進(jìn)行給藥方案的第二部分，其具有不同的、較長(zhǎng)的給藥時(shí)間間隔，具有通常較低暴露(下降的劑量)，其每周、每14天或每月給藥，例如在每周500mg/m2身體表面積至最高1.5g/m2身體表面積，持續(xù)4周至最高2年，例如4、6、8、12、16、26、32、40、52、63、68、78或104周?；蛘?，如果所述疾病緩解或總體改善了，則可保持劑量或保持在低于最大量，例如在每周140mg/m2身體表面積。如果在下降給藥方案過(guò)程中，所述的疾病癥狀復(fù)發(fā)，可以恢復(fù)第一給藥方案直至看到效果，并且可執(zhí)行第二給藥方案。該循環(huán)如必要可重復(fù)多次。
更具體地，本發(fā)明的一個(gè)方面為治療可用無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為治療可用組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物可治療的疾病的治療方法，所述的YFAK的摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.0∶10.0∶6.0，由固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，其為向需要治療的人受試者給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，治療方案的第一部分包括的劑量為每天約22mg/m2身體表面積。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的給藥方案開始于向所述的受試者每隔一天、每隔兩天、每周、每?jī)芍芑蛎吭陆o藥。用于每隔一天或每隔兩天給藥的劑量可以分別為最高至約65mg/m2和110mg/m2。對(duì)于包含每周給藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，該劑量包含最高至約500mg/m2，并且對(duì)于包含每?jī)芍芑蛎吭陆o藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，給藥可以最高至1.5g/m2。所述給藥方案的第一部分可以給藥最多至30天，例如7、14、21或30天。之后可任選隨后進(jìn)行給藥方案的第二部分，其具有不同的、較長(zhǎng)的給藥時(shí)間間隔，具有通常較低暴露(下降的劑量)，其每周、每14天或每月給藥，例如在每周500mg/m2身體表面積至最高1.5g/m2身體表面積，持續(xù)4周至最高2年，例如4、6、8、12、16、26、32、40、52、63、68、78或104周?；蛘?，如果所述疾病緩解或總體改善了，則可保持劑量或保持在低于最大量，例如在每周140mg/m2身體表面積。如果在降低給藥方案過(guò)程中，所述的疾病癥狀復(fù)發(fā)，可以恢復(fù)第一給藥方案直至看到效果，并且可執(zhí)行第二給藥方案。該循環(huán)如必要可重復(fù)多次。
在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法用于治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病，所述的共聚物1的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且通過(guò)固相化學(xué)合成。所述的給藥方案類似于上述對(duì)于YFAK所描述的。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為治療可用組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病的方法，所述的YFAK平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶18∶6，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶20∶6，其為向需要治療的人受試者給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，劑量為約每天22mg/m2身體表面積，或者具有較長(zhǎng)的間隔例如如上所述的每隔一天、每隔兩天、每周、每?jī)芍芑蛎吭隆Ｔ诒景l(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法用于治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，其中共聚物1的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且通過(guò)固相化學(xué)合成，其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0。所述的給藥方案類似于如上所述的方案，并可以任選地包括降低給藥。如果在降低給藥方案中，所述的疾病癥狀復(fù)發(fā)，可恢復(fù)第一給藥方案直至看到效果，并且可執(zhí)行第二給藥方案。該循環(huán)如必要可重復(fù)多次。
本發(fā)明的另一個(gè)方面具體化為用于緩解疾病的方法，所述的疾病為可用無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，所述的無(wú)規(guī)共聚物包括組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，其摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.0∶XA∶6.0，其中XA為大于5.0并小于15.0的數(shù)，其為向受試者給藥對(duì)緩解所述疾病有效的劑量。更特別地，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為用于緩解疾病的方法，所述的疾病為可用無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病，所述的無(wú)規(guī)共聚物包括組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，其平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶18∶6，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶20∶6。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法為用于治療可用無(wú)規(guī)共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，所述的無(wú)規(guī)共聚物1的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并通過(guò)固相化學(xué)合成，其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0。所述的受試者用在22mg共聚物/m2受試者體表面積的給藥方案治療，其中所述的受試者為人。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的給藥方案開始于向所述的受試者每隔一天、每隔兩天、每周、每?jī)芍芑蛎吭陆o藥。用于每隔一天或每隔兩天給藥的劑量可以分別為最高至約65mg/m2和110mg/m2。對(duì)于包含每周給藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，該劑量包含最高至約500mg/m2，并且對(duì)于包含每?jī)芍芑蛎吭陆o藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，給藥可以最高至1.5g/m2。所述給藥方案的第一部分可以給藥最多至30天，例如7、14、21或30天。之后可任選隨后進(jìn)行給藥方案的第二部分，其具有不同的、較長(zhǎng)的給藥時(shí)間間隔，具有通常較低暴露(下降的劑量)，其每周、每14天或每月給藥，例如在每周500mg/m2身體表面積至最高1.5g/m2身體表面積，持續(xù)4周至最高2年，例如4、6、8、12、16、26、32、40、52、63、68、78或104周?；蛘?，如果所述疾病緩解或總體改善了，則可保持劑量或保持在低于最大量，例如在每周140mg/m2身體表面積。如果在降低給藥方案過(guò)程中，所述的疾病癥狀復(fù)發(fā)，可以恢復(fù)第一給藥方案直至看到效果，并且可執(zhí)行第二給藥方案。該循環(huán)如必要可重復(fù)多次。
本發(fā)明的一個(gè)方面為用于改善不希望的免疫應(yīng)答的手段，其為通過(guò)用無(wú)規(guī)共聚物向受試者給藥對(duì)于改善所述疾病的有效的劑量，所述的無(wú)規(guī)共聚物包含組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.0∶10.0∶6.0。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法為用于治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，其中所述的共聚物1的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且通過(guò)固相化學(xué)合成。給藥方案類似于本文中為YFAK所描述的。對(duì)于兩種類型的無(wú)規(guī)共聚物，典型的手段是通過(guò)向人受試者給藥每天劑量為約22mg無(wú)規(guī)共聚物/m2身體表面積。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的給藥方案開始于向所述的受試者每隔一天、每隔兩天、每周、每?jī)芍芑蛎吭陆o藥。用于每隔一天或每隔兩天給藥的劑量可以分別為最高至約65mg/m2和110mg/m2。對(duì)于包含每周給藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，該劑量包含最高至約500mg/m2，并且對(duì)于包含每?jī)芍芑蛎吭陆o藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，給藥可以最高至1.5g/m2所述給藥方案的第一部分可以給藥最多至30天，例如7、14、21或30天。之后可任選隨后進(jìn)行給藥方案的第二部分，其具有不同的、較長(zhǎng)的給藥時(shí)間間隔，具有通常較低暴露(下降的劑量)，其每周、每14天或每月給藥，例如在每周500mg/m2身體表面積至最高1.5g/m2身體表面積，持續(xù)4周至最高2年，例如4、6、8、12、16、26、32、40、52、63、68、78或104周。或者，如果所述疾病緩解或總體改善了，則可保持劑量或保持在低于最大量，例如在每周140mg/m2身體表面積。如果在降低給藥方案過(guò)程中，所述的疾病癥狀復(fù)發(fā)，可以恢復(fù)第一給藥方案直至看到效果，并且可執(zhí)行第二給藥方案。該循環(huán)如必要可重復(fù)多次。
本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案為用無(wú)規(guī)共聚物改善不希望的免疫應(yīng)答的手段，所述的無(wú)規(guī)共聚物為組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸，其中共聚物序列的殘基1-10具有的比例為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的比例為約1.0∶1.2∶18∶6，并且殘基31-52的比例為約1.0∶1.2∶20∶6。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法為治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，所述的共聚物1的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為1.0∶2.0∶6.0∶5.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中共聚物序列的殘基1-10具有的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0。所述的給藥方案類似于如上所述的用于YFAK的方案。對(duì)于兩種類型的無(wú)規(guī)共聚物，這種方法可通過(guò)向人受試者每天給藥約22mg無(wú)規(guī)共聚物/m2身體表面積而實(shí)行。給藥方案可類似于如上所述的那些，修改為符合受試者的需求。或者，所述的無(wú)規(guī)共聚物可向人受試者給藥最大每天劑量的約80mg。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是用無(wú)規(guī)共聚物改善不希望的具有TH1顯型的免疫應(yīng)答的方法，所述的無(wú)規(guī)共聚物為組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，其平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有比例為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的比例為約1.0∶1.2∶18∶6，并且殘基31-52的比例為約1.0∶1.2∶20∶6。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法為用于治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，其中所述的共聚物1的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，其具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且通過(guò)固相化學(xué)合成，其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0。對(duì)于兩種類型的無(wú)規(guī)共聚物，所述的給藥方案可以被確定，修改以符合受試者的需求，并可類似于如上所述的那些。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是在受試者中用無(wú)規(guī)共聚物改善自身免疫反應(yīng)的方法，所述的無(wú)規(guī)共聚物為組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，其平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有比例為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的比例為約1.0∶1.2∶18∶6，并且殘基31-52的比例為約1.0∶1.2∶20∶6。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法是用于治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，其中共聚物1的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并通過(guò)固相化學(xué)合成，其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0。對(duì)于兩種類型的無(wú)規(guī)共聚物，所述的給藥方案可類似于如上所述的那些被修改以符合受試者的需求。
任何方法和手段可使用在本申請(qǐng)中的組合物和制劑實(shí)踐。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的任何方法可使用包含無(wú)規(guī)共聚物的緩釋制劑實(shí)現(xiàn)。當(dāng)使用緩釋方式給藥本發(fā)明的無(wú)規(guī)共聚物時(shí)，所述共聚物的總暴露通常低于在快速注射給藥中的總暴露。例如，給藥方案的第一部分是向受試者每天、每隔一天或每隔兩天給藥，例如在約22mg/m2受試者體表面積，其中所述的受試者為人。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的給藥方案采用緩釋方式，每隔一天、每隔兩天、每周、每?jī)芍芑蛎吭孪蚴茉囌呓o藥，使得所述的共聚物在所述的間隔內(nèi)釋放。用于每隔一天或每隔兩天給藥的劑量可以分別為最高至約35mg/m2和65mg/m2。對(duì)于包含每周給藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，該劑量包含最高至約140mg/m2，對(duì)于包含每隔1周或每月給藥所述無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案而言，可給藥最高至約750mg/m2。所述給藥方案的第一部分可以給藥最多至30天，例如7、14、21或30天。之后可任選隨后進(jìn)行給藥方案的第二部分，其具有不同的、較長(zhǎng)的給藥時(shí)間間隔，具有通常較低暴露(下降的劑量)，其每周、每14天或每月給藥，例如在每周140mg/m2身體表面積至最高1.5g/m2身體表面積，持續(xù)4周至最高2年，例如4、6、8、12、16、26、32、40、52、63、68、78或104周?；蛘?，如果所述疾病緩解或總體改善了，則可保持劑量或保持在低于最大量，例如在每周140mg/m2身體表面積。如果在降低給藥方案過(guò)程中，所述的疾病癥狀復(fù)發(fā)，可以恢復(fù)第一給藥方案直至看到效果，并且可執(zhí)行第二給藥方案。該循環(huán)如必要可重復(fù)多次。
本發(fā)明的另一個(gè)方面為用無(wú)規(guī)共聚物治療患有或顯示出多發(fā)性硬化(MS)的癥狀的受試者的手段，所述的無(wú)規(guī)共聚物為組合物YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有比例為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的比例為約1.0∶1.2∶18∶6，并且殘基31-52的比例為約1.0∶1.2∶20∶6。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法為治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，所述的共聚物1的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并通過(guò)固相化學(xué)合成，其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0?？蓪⑦@種共聚物用最大劑量為500mg如上所述無(wú)規(guī)共聚物的無(wú)規(guī)共聚物的給藥以治療患有或顯示出MS癥狀的受試者。所述的無(wú)規(guī)共聚物可以在緩釋制劑中遞送。
用于治療患有多發(fā)性硬化的受試者的方法，其用的最大劑量為在緩釋制劑中遞送的500mg，所述的緩釋制劑為組合物(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物，其平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0，通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有比例為約1.0∶1.2∶16∶6，殘基11-30的比例為約1.0∶1.2∶18∶6，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶20∶6。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的方法是治療可用共聚物1(YEAK)治療的疾病的方法，所述的共聚物1的長(zhǎng)度為約52個(gè)氨基酸，摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶1.2∶6.0∶5.0，并通過(guò)固相化學(xué)合成，其中共聚物序列的殘基1-10具有摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶5.5∶5.0，殘基11-30的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.0∶5.0，并且殘基31-52的摩爾產(chǎn)出比為約1.0∶2.0∶6.5∶5.0?；蛘撸龅氖茉囌呖捎妹恐茏畲髣┝繛?00mg的、在緩釋制劑中遞送的無(wú)規(guī)共聚物治療。
在如上所述的任何典型的實(shí)施方案中，每種劑型的量?jī)?yōu)選為0.1ml至0.5ml。
在本文中所述的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，給藥的途徑可以是口服、腹膜內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、通過(guò)靜脈或肌內(nèi)注射、通過(guò)吸入、局部、病灶內(nèi)的、灌輸、脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送、局部、鞘內(nèi)的、齦袋、直腸的、葉鞘內(nèi)的、支氣管內(nèi)的、鼻的、經(jīng)粘膜的、腸的、眼睛或耳部遞送，或如本領(lǐng)域中技術(shù)人員可容易獲知的本領(lǐng)域的其它方法。本發(fā)明組合物的其它實(shí)施方式包括用于給藥的各種途徑的顆粒形式的保護(hù)涂層、蛋白抑制劑或促滲劑，所述途徑包括非腸道的、肺部的、鼻的和口的。給藥可以是全身性的和局部用的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將所述的無(wú)規(guī)共聚物皮下給藥。
本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案為在緩釋形式中給藥本發(fā)明的共聚物。這種方法包括施用緩釋透皮貼片或植入緩釋膠囊或涂覆可植入的藥物裝置，使得治療有效的本發(fā)明的共聚物的劑量以限定的時(shí)間間隔向這種方法的受試者遞送。本發(fā)明的化合物和/或試劑可通過(guò)膠囊遞送，所述膠囊允許所述的無(wú)規(guī)共聚物在一段時(shí)段內(nèi)調(diào)整釋放?？蒯尰蚓忈尳M合物包括在親脂性儲(chǔ)庫(kù)(例如脂肪酸、蠟、油)中的制劑。本發(fā)明還包括用聚合物(例如聚氧乙烯聚氯丙烯共聚物或其乙二胺衍生物)涂覆的顆粒組合物。在一些實(shí)施方案中，共聚物的來(lái)源被立體定向地提供，在或接近于自身免疫攻擊的區(qū)域，例如接近用于治療IDDM的胰腺。
對(duì)于口服給藥，所述的藥物制劑可以是液體形式，例如溶液劑、糖漿或懸浮劑，或者可以呈現(xiàn)為可用水或其它合適的介質(zhì)在使用前重新組成的藥物產(chǎn)品。這種液體制劑可通過(guò)常規(guī)的方法用藥學(xué)可接受的添加劑例如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用油脂)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯樹膠)；非水性介質(zhì)(例如扁桃仁油、油性酯或分餾植物油)和防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)制備。所述的藥物組合物可采用如下形式，例如由常規(guī)方法制備的片劑或膠囊劑，其采用藥學(xué)可接受的賦形劑例如粘合劑(例如預(yù)膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)、潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、云母或硅石)、崩解劑(例如土豆淀粉或淀粉乙醇酸鈉)或保濕劑(例如十二烷基硫酸鈉)。所述的片劑可通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法包被。
當(dāng)將共聚物1或其它無(wú)規(guī)共聚物口服時(shí)，它可以與其它食物形式混合并以固體、半固體、懸浮液或乳液形式使用，并且其可與藥學(xué)可接受的載體，包括水、懸浮劑、乳化劑、增味劑等混合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的口服組合物具有腸包衣。腸包衣的使用在本領(lǐng)域中是公知的。例如Lehman(1971)教導(dǎo)了腸包衣，例如Eudragit S和EudragitL。The Handbook of Pharmaceutical Excipients，第2版也教導(dǎo)了EudragitS和Eudragit L的應(yīng)用?？捎糜诒景l(fā)明中的一種Eudragit為L(zhǎng)30D55。用于口服給藥的制劑可適合于配成給出所述活性化合物的控釋效果的制劑。
對(duì)于經(jīng)頰用藥，所述的組合物可采用以常規(guī)方式配制的片劑或錠劑的形式。所述的組合物可配制成用于非腸道給藥的制劑，其可通過(guò)注射，例如通過(guò)快速注射或持續(xù)灌輸。用于注射的制劑可以單位劑量的形式，例如以安瓿或多劑量容器的形式存在，其中加入防腐劑。所述的組合物可采取如在油性或水性介質(zhì)中的懸浮劑、溶液劑或乳劑這種形式，并且可以包含配制用試劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘撸龅幕钚越M分在使用前可以是粉末形式，其用于與適合的媒介物例如無(wú)菌無(wú)致熱源的水構(gòu)成試劑。
所述的組合物還可被配成直腸用組合物形式，例如栓劑或停留灌腸劑，例如包含常規(guī)的栓劑基質(zhì)如可可脂或其它甘油酯。對(duì)于通過(guò)吸入給藥，用于本發(fā)明的組合物通常以氣溶膠噴霧形式遞送，所述的氣溶膠噴霧由壓力包裝或霧化器提供，其使用合適的推進(jìn)劑例如二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體。在壓力氣溶膠的情況下，所述的劑量單位可通過(guò)提供閥控制以遞送計(jì)量而確定。用于吸入器或吹入器的，例如明膠的膠囊和藥包，可配制成包含所述化合物和合適的粉末基質(zhì)例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，包含共聚物1或其它無(wú)規(guī)共聚物的組合物可根據(jù)常規(guī)步驟配制成制劑作為適用于向人靜脈內(nèi)給藥的藥物組合物。通常，用于靜脈內(nèi)給藥的組合物是無(wú)菌的等滲水緩沖溶液。只要需要，所述的組合物還可包括增溶劑和局部麻醉劑，例如利多卡因以緩解在注射位置的疼痛。通常，將所述的組分單獨(dú)或者混合在一起提供。如果將所述的組合物通過(guò)灌輸給藥，它可以用包含無(wú)菌制藥級(jí)水或鹽水的灌輸瓶分配，其中給藥的時(shí)間間隔為大于24小時(shí)、32小時(shí)或更優(yōu)選大于36或48小時(shí)。如果將所述的組合物通過(guò)注射給藥，可提供用于注射的無(wú)菌水或鹽水的安瓿，使得所述的組分可在給藥前被混合。
在某些實(shí)施方案中，描述于本文中的方法允許通過(guò)緩釋載體持續(xù)治療自身免疫性疾病，所述的緩釋載體例如適于活性組分緩釋的透皮貼片、涂覆有緩釋制劑的可植入藥物裝置，或可植入或可注射藥物制劑。在這些實(shí)施方案中，給藥之間的間隔優(yōu)選大于24小時(shí)，32小時(shí)或更優(yōu)選大于36或48小時(shí)。例如在2天的時(shí)間內(nèi)釋放所述共聚物的可植入裝置或緩釋制劑可以是每四天進(jìn)入到患者體內(nèi)的植入物，使得在2天的時(shí)間內(nèi)，沒(méi)有共聚物向所述的受試者給藥。在相關(guān)的實(shí)施方案中，沒(méi)有給藥發(fā)生的時(shí)間間隔為至少24+x小時(shí)，其中x表示任何正整數(shù)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，將所述的無(wú)規(guī)共聚物配置成制劑，其當(dāng)以至少24小時(shí)的時(shí)間間隔給藥到需要其的受試者時(shí)，具有治療效果。在特定的實(shí)施方案中，所述的無(wú)規(guī)共聚物被配制成長(zhǎng)效治療有效的制劑，使得治療所述的疾病的治療效果在當(dāng)將所述無(wú)規(guī)共聚物在給藥之間的時(shí)間間隔為至少24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234或240小時(shí)給藥到所述的受試者時(shí)觀察到。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為通過(guò)給藥無(wú)規(guī)共聚物預(yù)防治療受試者的方法，所述的受試者處于發(fā)展為自身免疫性疾病的危險(xiǎn)中。處于危險(xiǎn)中的受試者通過(guò)如下方式確定，例如通過(guò)測(cè)試與這種自身免疫性疾病相關(guān)的和/或基于家族史HLA的等位基因，或其它與這種自身免疫性疾病相關(guān)的基因標(biāo)記而確定對(duì)所述自身免疫性疾病的遺傳敏感性。這種預(yù)防治療可另外包含結(jié)合于第二HLA分子的第二共聚物，所述的第二HLA分子與待治療的自身免疫性疾病相關(guān)。所述的第二HLA分子可以是HLA-DQ或HLA-DR分子。優(yōu)選地，待被預(yù)防治療的自身免疫性疾病為IDDM或乳糜瀉。
在描述于本文中的方法的其它實(shí)施方案中，將另外的治療活性劑向受試者給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，將包含另外一種或多種治療劑的組合物以單獨(dú)組合物的形式向所述的受試者給藥，其中所述的單獨(dú)組合物得自包含所述無(wú)規(guī)共聚物的那些。例如，可向受試者皮下給藥包含無(wú)規(guī)共聚物的組合物，而包含另一種治療劑的組合物可口服給藥。所述的另外的治療劑可以治療與所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病相同的疾病，相關(guān)的疾病，或可意于治療所述共聚物的給藥所產(chǎn)生的不希望的副作用，例如降低在皮內(nèi)注射位置處的腫脹。
可向所述的受試者給藥的另外的治療活性劑包括結(jié)合于與所述疾病相關(guān)的第二HLA分子的共聚物，例如CopaxoneTM，抗體，酶抑制劑，抗菌劑，抗病毒劑，類固醇，非甾體抗炎藥，抗代謝劑，細(xì)胞因子或可溶細(xì)胞因子受體。所述的第二HLA分子可以是HLA-DQ分子或HLA-DR分子。所述的酶抑制劑可以是蛋白酶抑制劑或環(huán)氧合酶抑制劑?？梢詫⑺龅牧硗獾乃巹┳鳛樗鏊幬锝M合物的部分加入，或者可以伴隨給藥或在如下所述的時(shí)間期間內(nèi)給藥，所述的時(shí)間期間為可使所述的另外的試劑的生理作用與本發(fā)明的共聚物的生理作用重疊。更特別地，所述的另外的試劑可以伴隨給藥或在給藥所述的共聚物之前一周、數(shù)天、24小時(shí)、8小時(shí)或即刻給藥?；蛘?，可在給藥所述共聚物之后一周、數(shù)天、24小時(shí)、8小時(shí)或即刻給藥。
作為給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物結(jié)果的患有多發(fā)性硬化(MS)的受試者的癥狀的改善可以通過(guò)MS事件發(fā)生的頻率的降低，通過(guò)癥狀嚴(yán)重性的降低和通過(guò)在開始給藥后消除重新發(fā)生事件一段時(shí)間來(lái)說(shuō)明。相對(duì)于未治療的受試者，治療有效劑的劑量?jī)?yōu)選使癥狀和再次發(fā)生的頻率降低一種或多種癥狀消除的至少約20％，例如降低至少約40％，至少約60％和至少約80％，或者約100％，或消除自身免疫性疾病的再次發(fā)生。所述的時(shí)間周期可以是至少約1個(gè)月，至少約6個(gè)月或至少約1年。
對(duì)于患有關(guān)節(jié)炎或其它導(dǎo)致關(guān)節(jié)發(fā)炎的自身免疫性疾病的受試者的癥狀的改進(jìn)，其指征為一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)的浮腫的降低、一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)的炎癥的降低、一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)活動(dòng)性的增強(qiáng)。相對(duì)于未治療的受試者，治療有效的劑量?jī)?yōu)選降低關(guān)節(jié)炎癥和水腫并改善活動(dòng)性至少約20％，更優(yōu)選至少約40％，甚至更優(yōu)選至少約60％，和甚至更優(yōu)選至少約80％。
在本申請(qǐng)中任何地方參考的任何專利、專利申請(qǐng)或科技文章的內(nèi)容以它們的全部?jī)?nèi)容并入本發(fā)明中。
如果合適，除非另外提及，本發(fā)明的實(shí)踐將應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)、基因改造生物學(xué)、微生物學(xué)、病毒學(xué)、重組DNA和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些技術(shù)在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。這些技術(shù)描述于文獻(xiàn)中。參見例如Molecular CloningA Laboratory Manual，第3版，編者Sambrook and Russell(Cold Spring Harbor Laboratory Press2001)；the treatise，Methods In Enzymology(Academic Press，Inc.，N.Y.)；Using Antibodies，第二版，作者Harlow和Lane，Cold Spring HarborPress，New York，1999；Current Protocols in Cell Biology，編者Bonifacino，Dasso，Lippincott-Schwartz，Harford和Yamada，John Wileyand Sons，Inc.，New York，1999；和PCR Protocols，編者Bartlett等人，Humana Press，2003。
VII.實(shí)施例實(shí)施例1.抵抗無(wú)規(guī)共聚物的抗體的產(chǎn)生和與疾病相關(guān)的抗原肽PLP(139-151)肽是主要的免疫源決定子，其由CD4+TH1細(xì)胞識(shí)別，該決定子反過(guò)來(lái)驅(qū)使SJL小鼠中EAE的發(fā)展。當(dāng)用百日咳毒素注射時(shí)，PLP(139-151)肽在SJL小鼠中導(dǎo)致類似于MS的癥狀。在百日咳毒素不存在的情況下，被注射的動(dòng)物僅發(fā)展出中度和瞬時(shí)的疾病。無(wú)規(guī)共聚物組合物保護(hù)所述動(dòng)物不受PLP注射的影響的能力在所述動(dòng)物暴露于PLP(139-151)肽后該動(dòng)物每天和每周的給藥過(guò)程中評(píng)價(jià)。同種抗體電被檢測(cè)。CD4T細(xì)胞根據(jù)它們產(chǎn)生的細(xì)胞因子的模式可分為至少兩種不同的亞組。TH1細(xì)胞優(yōu)選產(chǎn)生IL-2和IFN-γ，活性巨噬細(xì)胞，并刺激產(chǎn)生Ig亞類，在小鼠中為IgG2a和IgG3，而在人中為IgG1和IgG3。相反，TH2細(xì)胞的信號(hào)細(xì)胞因子為IL-4、IL-5和IL-13，其提供有力的B細(xì)胞，幫助和誘導(dǎo)同種抗體對(duì)在小鼠中IgE和IgG1或在人中的IgE、IgG2和IgG4進(jìn)行調(diào)控。因此，測(cè)量小鼠的通常與TH2應(yīng)答相關(guān)的IgG1和IgG2b，和小鼠的IgG2a(其是TH1免疫性的標(biāo)記)。
小鼠(SJL，雌性)在第1天用100μg的PLP(139-151)肽在完全弗氏佐劑(Complete Freund′s adjuvant)中免疫。在同一天，對(duì)這些動(dòng)物進(jìn)行靜脈內(nèi)注射200ng的百日咳毒素。在第3天，重復(fù)相同的靜脈內(nèi)注射。在第6天開始并繼續(xù)每天直至第36天，每天用7.5mg/kg的CopaxoneTM(YEAK)或Co-14(YFAK)治療。在第37天收集個(gè)體的血清，并且使用標(biāo)準(zhǔn)ELISA用抗小鼠總Ig、IgG1、IgG2a或IgG2b作為二次抗體，測(cè)量抵抗PLP(139-151)肽Co-14(YFAK)和CopaxoneTM的抗體應(yīng)答。
在試驗(yàn)的過(guò)程中，使用標(biāo)準(zhǔn)的記分系統(tǒng)在0(沒(méi)有病)和5(瀕死)之間測(cè)量，并且小鼠的體重作為疾病狀態(tài)的另一個(gè)量度被記錄。每天記錄動(dòng)物的死亡率。
盡管CopaxoneTM的每天給藥與甘露醇單獨(dú)給藥相比，對(duì)于降低所述疾病的嚴(yán)重性是有效的(圖1)，但用每天給藥CopaxoneTM的小鼠大多在治療約3周后突然死亡(圖2)。如圖3所示，每天給藥CopaxoneTM，在存活的被注射的小鼠中引起大量的抗體。相比之下，每周給藥CopaxoneTM，和每天和每周用Co-14(YFAK)給藥，導(dǎo)致非常低的抗體效價(jià)。所述的免疫應(yīng)答主要是IgG1+IgG2b(即主要是TH2)應(yīng)答，并觀察到非常低的IgG2a(即TH1)應(yīng)答。在每天給藥CopaxoneTM的組中很少存活的小鼠中，其具有大的抵抗化合物的IgG1和IgG2b應(yīng)答(圖4和圖5)，所述化合物提高了導(dǎo)致在每天給藥CopaxoneTM小鼠中的死亡的可能性，這些很少存活的小鼠像是過(guò)敏性反應(yīng)。相比之下，每周給藥CopaxoneTM，和每天和每周給藥Co-14(YFAK)，其顯示出非常低的抗體效價(jià)，預(yù)防了過(guò)敏性休克并增加了效力?？贵w效價(jià)的另一個(gè)例子示于圖6中，其中CopaxoneTM和Co-14(YFAK)或者每周1次或者每周3次給藥。當(dāng)每周給藥3次時(shí)，CopaxoneTM誘導(dǎo)大量直接抵抗它的抗體的出現(xiàn)，而每周給藥CopaxoneTM和或者每周或者每周3次給藥Co-14，不會(huì)引起可見量的抵抗相應(yīng)聚合物的抗體。
當(dāng)測(cè)量對(duì)于PLP(139-151)肽的抗體的效價(jià)時(shí)，CopaxoneTM和Co-14(YFAK)兩者，無(wú)論是給藥間隔是多少，與僅給藥介質(zhì)相比，都誘導(dǎo)相似的，抵抗PLP(139-151)肽的IgG1形成的量的小的增加。抵抗PLP(139-151)的IgG2b的效價(jià)也沒(méi)有顯著受影響(圖8)。這些結(jié)果顯示CopaxoneTM或Co-14(YFAK)的保護(hù)作用沒(méi)有通過(guò)調(diào)制抵抗PLP(139-151)肽的抗體量而顯露。
實(shí)施例2.對(duì)無(wú)規(guī)共聚物應(yīng)答的T細(xì)胞用5μg CopaxoneTM或Co-14(YFAK)每周3次注射小鼠的TH1和TH2特征，或基于每周直至22天的治療。在第2、8、9、15、16、22、23、29天，收集脾并分離脾細(xì)胞。將每孔400,000個(gè)脾細(xì)胞用不同濃度(0.8、4或20μg/ml)的Co-14(YFAK)重新刺激3天。在所述細(xì)胞培養(yǎng)的第3天，將這些細(xì)胞轉(zhuǎn)移到ELISPOT(酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法)板上，用IFN-γ(干擾素γ)或IL-13(白細(xì)胞介素13)涂覆。通過(guò)測(cè)量IFNγ的產(chǎn)生(TH1細(xì)胞因子)和IL-13的產(chǎn)生(TH2細(xì)胞因子)檢查所述的T細(xì)胞應(yīng)答。T細(xì)胞刺激的程度還通過(guò)測(cè)量所述細(xì)胞的增殖進(jìn)行檢測(cè)，所述的細(xì)胞增殖由吸收的氚標(biāo)記的胸腺嘧啶脫氧核苷顯示。
應(yīng)答的暴發(fā)在給藥的第一星期觀察到，隨后應(yīng)答降低但維持進(jìn)行。如圖9所示，所述的應(yīng)答偏向于TH2，其中比所述的IFN-γ在細(xì)胞用CopaxoneTM或Co-14(YFAK)治療的所有時(shí)間時(shí)引起更強(qiáng)烈的IL-13的產(chǎn)生。所述的TH2偏向通過(guò)23個(gè)細(xì)胞因子和趨化激素的量進(jìn)一步證實(shí)，如圖10中所見的。
權(quán)利要求
1.治療可用無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病的方法，所述的方法包括對(duì)有需要的受試者給藥有效量的無(wú)規(guī)共聚物的給藥方案用于改善所述疾病，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物包含摩爾進(jìn)料比分別為約1.0∶1.0∶10.0∶6.0的YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，所述的無(wú)規(guī)共聚物通過(guò)固相化學(xué)合成并且長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述的有效量以兩個(gè)或多個(gè)劑量給藥到所述的受試者，每個(gè)劑量由大于24小時(shí)的時(shí)間間隔分開。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述的受試者為哺乳動(dòng)物。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述的哺乳動(dòng)物為人。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述的有效量為當(dāng)每天給藥時(shí)有效果的量。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述的有效量為如果每天給藥有效果的量。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述的有效量為當(dāng)每天給藥時(shí)已知有效果的量。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述的有效量為10mg至30mg。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述的有效量為15mg至25mg。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述的有效量為約20mg。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述的有效量小于20mg。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述的受試者患有可用所述無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述的疾病由TH1細(xì)胞介導(dǎo)。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述的受試者患有至少一種自身免疫性疾病。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述的自身免疫性疾病為多發(fā)性硬化。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述的多發(fā)性硬化為復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。
17.權(quán)利要求1的方法，其中所述的疾病為不希望的免疫應(yīng)答。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述的疾病選自多發(fā)性硬化、I型糖尿病，橋本甲狀腺炎，克隆病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，胃炎，自身免疫性肝炎，溶血性貧血，自身免疫性血友病，自身免疫性淋巴增生性綜合征(ALPS)，自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎，腎小球性腎炎，吉-巴綜合征，銀屑病，重癥肌無(wú)力，自身免疫性腦脊髓炎，吉德帕斯丘綜合征，格雷夫斯病，副腫瘤性天皰瘡，自身免疫性血小板減少性紫癜，具有抗膠原抗體的硬皮病，混合性結(jié)締組織病，惡性貧血，多肌炎，特發(fā)性阿狄森病，與自身免疫有關(guān)的不育癥，大皰性類天皰瘡，舍格倫綜合征，特發(fā)性粘液水腫或結(jié)腸炎。
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述的疾病為HVGD或GVHD。
20.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)或口服給藥。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述的給藥方案包括皮下給藥。
22.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括通過(guò)被設(shè)計(jì)成持續(xù)遞送所述的無(wú)規(guī)共聚物的裝置給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述的裝置為透皮貼片或泵。
24.權(quán)利要求1的方法，其中使用緩釋制劑對(duì)所述的受試者遞送所述的有效量，所述的緩釋制劑在至少3天的時(shí)段內(nèi)給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，并且其中所述的有效量為如果每天給藥有效果的量。
25.權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步包括對(duì)所述的受試者給藥另外的治療活性劑。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述的另外的治療活性劑為一種或多種無(wú)規(guī)共聚物。
27.權(quán)利要求25的方法，其中所述的治療活性劑可用于治療所述疾病。
28.權(quán)利要求25的方法，其中所述的治療活性劑為抗炎藥。
29.權(quán)利要求27的方法，其中所述的疾病為自身免疫性疾病。
30.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少36小時(shí)。
31.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少48小時(shí)。
32.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少72小時(shí)。
33.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少96小時(shí)。
34.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少120小時(shí)。
35.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少144小時(shí)。
36.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為至少7天。
37.權(quán)利要求1的方法，其中每次給藥之間的時(shí)間間隔為36小時(shí)至14天。
38.權(quán)利要求1的方法，其中所述的有效量以三個(gè)或多個(gè)劑量遞送。
39.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少36小時(shí)。
40.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少48小時(shí)。
41.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少72小時(shí)。
42.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少96小時(shí)。
43.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少120小時(shí)。
44.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少144小時(shí)。
45.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為至少7天。
46.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少一個(gè)時(shí)間間隔為36小時(shí)至14天。
47.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為至少36小時(shí)。
48.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為至少48小時(shí)。
49.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為至少72小時(shí)。
50.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為至少96小時(shí)。
51.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為至少120小時(shí)。
52.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為至少144小時(shí)。
53.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為至少7天。
54.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的時(shí)間間隔的至少50％為36小時(shí)至14天。
55.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少36小時(shí)。
56.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少48小時(shí)。
57.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少72小時(shí)。
58.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少96小時(shí)。
59.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少120小時(shí)。
60.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少144小時(shí)。
61.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為至少7天。
62.權(quán)利要求38的方法，其中給藥之間的平均時(shí)間間隔為36小時(shí)至14天。
63.權(quán)利要求38的方法，其中所述的給藥方案包括兩個(gè)或多個(gè)部分，其中所述的給藥方案的第一部分包括以第一時(shí)間間隔給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，并且其中所述的給藥方案的第二部分包括以第二時(shí)間間隔給藥所述的無(wú)規(guī)共聚物，其中所述的第一時(shí)間間隔短于所述的第二時(shí)間間隔。
64.權(quán)利要求63的方法，其中所述的第一時(shí)間間隔為至少24小時(shí)。
65.權(quán)利要求64的方法，其中所述的第一時(shí)間間隔為24、48或72小時(shí)。
66.權(quán)利要求63、64或65的方法，其中所述的第二時(shí)間間隔為至少7天。
67.權(quán)利要求66的方法，其中所述的第二時(shí)間間隔為7天、14天、21天或30天。
68.權(quán)利要求63的方法，其中所述的給藥方案必要時(shí)重復(fù)進(jìn)行。
69.權(quán)利要求63的方法，其中所述的給藥方案的第一部分持續(xù)最多7、14、21或30天。
70.權(quán)利要求63的方法，其中所述的給藥方案的第二部分持續(xù)最多4、6、8、12、16、26、32、40、52、63、68、78或104周。
71.權(quán)利要求1的方法，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物的有效量為每劑0.02mg至每劑2000mg。
72.權(quán)利要求71的方法，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物的有效量為每劑2mg至每劑200mg。
73.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括每天約22mg/m2受試者體表面積的劑量。
74.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括每隔一天約65mg/m2受試者體表面積的劑量。
75.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括每隔兩天約110mg/m2受試者體表面積的劑量。
76.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括每周約500mg/m2受試者體表面積的最大劑量。
77.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括每?jī)芍芗s1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量。
78.權(quán)利要求1的方法，其中所述的給藥方案包括每月約1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量。
79.權(quán)利要求73、74或75的方法，其進(jìn)一步包括給藥每周約500mg/m2受試者體表面積的最大劑量的劑量。
80.權(quán)利要求73、74或75的方法，其進(jìn)一步包括給藥每隔1周約1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量的劑量。
81.權(quán)利要求73、74或75的方法，其進(jìn)一步包括給藥每月約1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量的劑量。
82.治療可用無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病的方法，其包括對(duì)有需要的受試者給藥給藥方案，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物包含平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0的YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，所述的無(wú)規(guī)共聚物通過(guò)固相化學(xué)合成并且其長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有約1.0∶1.2∶16∶6的比，殘基11-30具有約1.0∶1.2∶18∶6的比，并且殘基31-52具有約1.0∶1.2∶20∶6的比。
83.權(quán)利要求87的方法，其中所述的給藥方案包括每天約22mg/m2受試者體表面積的劑量。
83.權(quán)利要求82的方法，其中所述的給藥方案包括每天約22mg/m2受試者體表面積的劑量。
84.權(quán)利要求82的方法，其中所述的給藥方案包括每隔1天約22mg/m2受試者體表面積的劑量。
85.權(quán)利要求82的方法，其中所述的給藥方案包括每隔2天約22mg/m2受試者體表面積的劑量。
86.權(quán)利要求82的方法，其中所述的給藥方案包括每周約500mg/m2受試者體表面積的最大劑量。
87.權(quán)利要求82的方法，其中所述的給藥方案包括每隔1周約1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量。
88.權(quán)利要求82的方法，其中所述的給藥方案包括每月約1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量。
89.權(quán)利要求83、84或85的方法，其進(jìn)一步包括給藥每周約500mg/m2受試者體表面積的最大劑量的劑量。
90.權(quán)利要求83、84或85的方法，其進(jìn)一步包括給藥每隔1周給藥約1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量的劑量。
91.權(quán)利要求83、84或85的方法，其進(jìn)一步包括給藥每月約1500mg/m2受試者體表面積的最大劑量的劑量。
92.改善不希望的免疫應(yīng)答的方法，其包括給藥具有平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0的組成YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物，所述無(wú)規(guī)共聚物通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有約1.0∶1.2∶16∶6的比，殘基11-30具有約1.0∶1.2∶18∶6的比，并且殘基31-52具有約1.0∶1.2∶20∶6的比。
93.權(quán)利要求92的方法，其中所述的受試者為人，并且所述的無(wú)規(guī)共聚物以每天約22mg/m2受試者體表面積的劑量給藥。
94.權(quán)利要求92的方法，其中所述的受試者為人，并且所述的無(wú)規(guī)共聚物以每天約80mg的最大劑量給藥。
95.權(quán)利要求92的方法，其中所述的不希望的免疫應(yīng)答具有TH1表型。
96.在受試者中改善自身免疫反應(yīng)的方法，其包含給藥具有平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0的組成YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物，所述的無(wú)規(guī)共聚物通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有約1.0∶1.2∶16∶6的比，殘基11-30具有約10∶1.2∶18∶6的比，并且殘基31-52具有約1.0∶1.2∶20∶6的比。
97.在有需要的受試者中治療多發(fā)性硬化的方法，其包含給藥具有平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0的組成YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)的無(wú)規(guī)共聚物，所述的無(wú)規(guī)共聚物通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有約1.0∶1.2∶16∶6的比，殘基11-30具有約1.0∶1.2∶18∶6的比，并且殘基31-52具有約1.0∶1.2∶20∶6的比。
98.權(quán)利要求97的方法，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物以500mg的最大劑量給藥。
99.權(quán)利要求98的方法，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物以緩釋制劑的形式遞送。
100.權(quán)利要求99的方法，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物以每周500mg的最大劑量給藥。
101.通過(guò)向有需要的受試者給藥有效量的無(wú)規(guī)共聚物改善不希望的免疫應(yīng)答的方法，所述的無(wú)規(guī)共聚物包含摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.0∶10.0∶6.0的組成YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)。
102.權(quán)利要求101的方法，其中所述的受試者為人，并且所述的無(wú)規(guī)共聚物以每天約22mg/m2受試者體表面積的劑量給藥。
103.權(quán)利要求101的方法，其中所述的受試者為人，并且所述的無(wú)規(guī)共聚物以每周約500mg/m2受試者體表面積的劑量給藥。
104.權(quán)利要求101的方法，其中所述的受試者為人，并且所述的無(wú)規(guī)共聚物以大于4天的時(shí)間間隔以500mg的最大劑量給藥。
105.通過(guò)向受試者給藥有效改善所述疾病的劑量的無(wú)規(guī)共聚物治療可用無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病的方法，所述無(wú)規(guī)共聚物包括摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.0∶＞5.0＜15∶6.0的組成YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)。
106.包含預(yù)先測(cè)量的可注射小瓶的試劑盒，所述的可注射小瓶含有包括無(wú)規(guī)共聚物YFAK和藥物可接受賦形劑的組合物。
107.權(quán)利要求106中的試劑盒，其中自身免疫性疾病選自多發(fā)性硬化、I型糖尿病，橋本甲狀腺炎，克隆病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，胃炎，自身免疫性肝炎，溶血性貧血，自身免疫性血友病，自身免疫性淋巴增生性綜合征(ALPS)，自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎，腎小球性腎炎，吉-巴綜合征，銀屑病，重癥肌無(wú)力，自身免疫性腦脊髓炎，吉德帕斯丘綜合征，格雷夫斯病，副腫瘤性天皰瘡，自身免疫性血小板減少性紫癜，具有抗膠原抗體的硬皮病，混合性結(jié)締組織病，惡性貧血，多肌炎，特發(fā)性阿狄森病，與自身免疫有關(guān)的不育癥，大皰性類天皰瘡，舍格倫綜合征，特發(fā)性粘液水腫和結(jié)腸炎。
108.權(quán)利要求106的試劑盒，其中所述的疾病為自身免疫性疾病。
109.權(quán)利要求106的試劑盒，其中所述的疾病為多發(fā)性硬化。
110.權(quán)利要求109的試劑盒，其中所述的多發(fā)性硬化為復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。
111.權(quán)利要求106的試劑盒，其中所述的疾病由TH1細(xì)胞介導(dǎo)。
112.用于經(jīng)營(yíng)醫(yī)藥商業(yè)的方法，其包括向保健提供者銷售權(quán)利要求106-111中任一項(xiàng)的試劑盒，提供所述的試劑盒在治療疾病或病癥中的益處。
113.用于經(jīng)營(yíng)醫(yī)藥商業(yè)的方法，其包括(a)制備權(quán)利要求106-111中任一項(xiàng)所述的試劑盒；和(b)向保健提供者銷售使用所述的試劑盒在治療疾病或病癥中的益處。
114.治療可通過(guò)給藥無(wú)規(guī)共聚物治療的疾病的方法，其包括對(duì)有需要的受試者給藥給藥方案，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物包含平均摩爾產(chǎn)出比分別為約1.0∶1.2∶18.0∶6.0的YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，所述的無(wú)規(guī)共聚物通過(guò)固相化學(xué)合成，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物的長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸，并且其中共聚物序列的殘基1-10具有約1.0∶1.2∶16∶6的比，殘基11-30具有約1.0∶1.2∶18∶6的比，并且殘基31-52具有約1.0∶1.2∶20∶6的比，其中所述的給藥方案抑制抵抗所述無(wú)規(guī)共聚物的抗體的形成并在受試者中誘導(dǎo)對(duì)所述無(wú)規(guī)共聚物的外周耐受性。
115.權(quán)利要求114的方法，其中所述的方法在受試者中誘導(dǎo)對(duì)所述無(wú)規(guī)共聚物的外周耐受性。
116.權(quán)利要求114的方法，其中所述的方法在受試者中誘導(dǎo)對(duì)所述無(wú)規(guī)共聚物的中心耐受性。
117.包含無(wú)規(guī)共聚物的藥物組合物，其以微粒劑和乳劑的形式存在。
118.權(quán)利要求117的藥物組合物，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物在水相、油和乳化劑中，其中所述的水相形成油包水乳劑。
119.權(quán)利要求117的藥物組合物，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物懸浮于明礬中。
120.權(quán)利要求118的藥物組合物，其中所述的油為礦物油并且所述的乳化劑為單月桂酸山梨糖醇酯。
121.權(quán)利要求117、118、119或120的藥物組合物，其中所述的無(wú)規(guī)共聚物為摩爾進(jìn)料比分別為約1.0∶1.0∶10.0∶6.0的YFAK(L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸和L-賴氨酸)，所述的無(wú)規(guī)共聚物通過(guò)固相化學(xué)合成并且其長(zhǎng)度為52個(gè)氨基酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過(guò)給藥無(wú)規(guī)共聚物用于治療或預(yù)防疾病的新的方法和試劑盒。本發(fā)明還涉及自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化的治療，并涉及在包括以大于24小時(shí)的間隔給藥制劑的治療方案給藥無(wú)規(guī)共聚物，或涉及在大于24小時(shí)的時(shí)段內(nèi)給藥所述共聚物的緩釋制劑。本發(fā)明還涉及用于經(jīng)營(yíng)醫(yī)藥商業(yè)的方法，包括制備、許可或分配試劑盒，所述試劑盒包含或涉及本文中所述的無(wú)規(guī)共聚物的制劑或給藥方案。
文檔編號(hào)A61P25/00GK101052409SQ200580022756
公開日2007年10月10日 申請(qǐng)日期2005年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月7日
發(fā)明者詹姆斯·拉斯穆森, 張建新, 薩姆·鮑德溫, 埃里克·扎內(nèi)利, 余北, 杜斯坦·伯尼恩, 基思·約翰遜 申請(qǐng)人:肽免疫公司