專利名稱：奧克代酸在制備抗青光眼手術(shù)瘢痕藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及奧克代酸(Okadaic acid，OA)在制藥方面的用途，具體說，是在制備青光眼濾過手術(shù)后防止濾過泡瘢痕化，進(jìn)而提高手術(shù)成功率藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
本說明書中使用英文縮寫分別代表幾種化學(xué)物質(zhì)，它們的對(duì)應(yīng)關(guān)系為，MMC絲裂霉素C(Mitomycin C)MTT四甲基偶氮唑鹽SDS十二烷基硫酸鈉DMF二甲基甲酰胺FN纖維連接蛋白(細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，fibronectin)PBS磷酸鹽緩沖液BSA牛血清白蛋白 OD值吸光度值對(duì)藥物無法控制的青光眼患者實(shí)施濾過手術(shù)治療是所能采用的主要治療手段。青光眼濾過術(shù)后傷口愈合的進(jìn)程關(guān)系到手術(shù)的成敗。手術(shù)后濾過泡成纖維細(xì)胞增殖、胞外基質(zhì)合成，致手術(shù)局部纖維化及瘢痕形成是青光眼濾過手術(shù)失敗的主要原因。抑制手術(shù)后濾過泡纖維增殖及瘢痕化可以防止青光眼濾過手術(shù)失敗。目前臨床應(yīng)用抗代謝藥絲裂霉素C(Mitomycin C，MMC)、氟脲嘧啶(5-Fu)等阻止濾過術(shù)后瘢痕形成，提高了手術(shù)成功率。但由于這些藥物的毒性較大，以及引起濾過泡漏、持續(xù)性低眼壓及低眼壓性黃斑病變等副作用，使其臨床應(yīng)用受限。因此，尋找高效而毒副作用低的抗瘢痕藥物是眼科醫(yī)生關(guān)注的問題。
以往的研究曾證實(shí)，人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞是青光眼濾過術(shù)后瘢痕化的主要細(xì)胞成分，其過度增殖及纖維化是導(dǎo)致術(shù)后濾過泡瘢痕化的主要原因。但目前臨床上尚缺乏阻止或抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞增殖的有效方法。
奧克代酸是一種海洋生物提取物。已有研究發(fā)現(xiàn)，奧克代酸對(duì)磷酸酶PP-1、PP-2A有選擇性抑制作用，可通過抑制PP-1誘導(dǎo)基因表達(dá)引起兔晶體上皮細(xì)胞凋亡。但目前尚未見奧克代酸抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞增殖的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供磷酸酶抑制劑奧克代酸在制備抗濾過泡纖維增殖及瘢痕化藥物的用途。所制作的藥物配合青光眼濾過手術(shù)使用，防止因?yàn)V過泡瘢痕化導(dǎo)致手術(shù)失敗。
本發(fā)明人所做的實(shí)驗(yàn)證明，磷酸酶抑制劑奧克代酸可抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞的增殖；奧克代酸抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞向纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)貼附，引起細(xì)胞骨架功能改變，引起細(xì)胞形態(tài)改變，使細(xì)胞收縮變圓，誘導(dǎo)人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞凋亡；奧克代酸還可干擾結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，使細(xì)胞溶質(zhì)中Ca2+過高，抑制細(xì)胞代謝功能，甚至引起細(xì)胞凋亡。發(fā)明人的上述發(fā)現(xiàn)，確定將奧克代酸作為活性成分制備適用劑型的藥物，應(yīng)用于青光眼濾過手術(shù)過程和手術(shù)后，可以防止濾過泡瘢痕化，提高青光眼濾過手術(shù)成功率。以奧克代酸作為活性成分可以制備藥劑學(xué)上所稱不同劑型的藥物，優(yōu)選水溶液，在青光眼濾過手術(shù)時(shí)于手術(shù)局部應(yīng)用，在手術(shù)后早期滴眼用。
本發(fā)明人所進(jìn)行的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)還顯示，奧克代酸不對(duì)生物體產(chǎn)生毒性作用，顯示了將其作藥物應(yīng)用所具有的安全性。
對(duì)本發(fā)明人實(shí)驗(yàn)顯示奧克代酸抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞增殖的機(jī)制的解釋是，磷酸酶是細(xì)胞代謝的重要信號(hào)通路，與細(xì)胞增殖關(guān)系密切。可逆性蛋白質(zhì)磷酸化是影響細(xì)胞功能的基本機(jī)制，PP-1是糖代謝的關(guān)鍵酶之一，PP-2A參與的生理過程也較廣泛。奧克代酸選擇性抑制蛋白磷酸酶PP-1和PP-2A，阻斷或減弱細(xì)胞代謝信號(hào)，從而抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞增殖。
以下通過實(shí)驗(yàn)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞均為北京同仁醫(yī)院眼庫培養(yǎng)的第三代人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)例1奧克代酸對(duì)人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞抑制作用實(shí)驗(yàn)一.試劑配制1.MTT溶液MTT，四甲基偶氮唑鹽，是一種四唑鹽顯色劑，化學(xué)名3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名為噻唑藍(lán)?；罴?xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物(Formazan)，沉積在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍，而死細(xì)胞無此功能。
本實(shí)驗(yàn)所用MTT溶液是以0.01mol/L生理鹽水溶解，配至5mg/ml濃度，過濾除菌，4℃保存。
2.甲瓚緩沖液SDS以20％的濃度溶于50％DMF中。
3.D-hanks液配制1000ml的配方為，KCl 0.4g、KH2PO40.06g、NaCl8.0g、NaHCO30.35g、Na2HPO4·7H2O 0.06g、酚紅0.02g。
二.實(shí)驗(yàn)方法1.MTT法檢測奧克代酸對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖抑制將生長良好的細(xì)胞以2×104/ml濃度混懸于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，并接種于平底96孔板內(nèi)，每孔100μl，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，使細(xì)胞完全貼壁。分別加入MMC 400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml，及OA 200nmol/L、100nmol/L、50nmol/L，各設(shè)2(3)個(gè)平行孔，同時(shí)設(shè)無藥物細(xì)胞對(duì)照孔及無細(xì)胞藥物對(duì)照孔(避免假陽性)，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)不同時(shí)間，向終止培養(yǎng)的細(xì)胞孔板內(nèi)每孔加入20μl MTT溶液，37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育6小時(shí)，每孔再加入100μl 20％SDS-50％DMF，室溫下振蕩30分鐘，酶標(biāo)儀測定各孔吸光度(OD值)，最大吸收波長600nm。計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率并繪制抑制曲線。抑制率(％)＝(1-實(shí)驗(yàn)孔OD值/對(duì)照孔OD值)×100％。
每種相同實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次以上。
2、加藥后細(xì)胞形態(tài)學(xué)及線粒體代謝改變同上法接種培養(yǎng)細(xì)胞，分別加人MMC 200μg/ml，奧克代酸100nmol/L，各設(shè)3個(gè)平行孔，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)不同時(shí)間，觀察細(xì)胞形態(tài)變化情況。同時(shí)加入MTT，觀察細(xì)胞線粒體代謝情況。
三.實(shí)驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)細(xì)胞接種24小時(shí)后完全貼壁。MMC 400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml，及奧克代酸200nmol/L、100nmol/L、50nmol/L均有效抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞增殖，呈時(shí)間及劑量依賴性，隨藥物劑量加大或培養(yǎng)時(shí)間加長，細(xì)胞增殖抑制增高。24小時(shí)各藥物對(duì)細(xì)胞抑制的半效量分別為MMC 200μg/ml，奧克代酸100nmol/L。50μmol/L奧克代酸作用4小時(shí)及24小時(shí)后，可見細(xì)胞出現(xiàn)明顯收縮變圓現(xiàn)象，但細(xì)胞輪廓尚清晰，細(xì)胞形態(tài)較完整；而200μg/mlMMC作用4小時(shí)，細(xì)胞無胞體回縮，且至24小時(shí)，部分細(xì)胞膜完整性破壞，出現(xiàn)細(xì)胞破碎。繼續(xù)培養(yǎng)至48小時(shí)，MMC組細(xì)胞膜破壞明顯，細(xì)胞碎片增多，表明細(xì)胞死亡。而100nmol/L奧克代酸組表現(xiàn)對(duì)人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞有明顯的抑制作用，細(xì)胞則收縮變小，但胞膜均未見明顯破壞。該劑量作用48小時(shí)，大部分細(xì)胞收縮變圓，但鏡下細(xì)胞膜完整，加入MTT后可見細(xì)胞代謝，細(xì)胞周圍出現(xiàn)藍(lán)紫色結(jié)晶物(Formazan)沉積。
向MMC 200μg/ml、奧克代酸100nmol/L培養(yǎng)不同時(shí)間的細(xì)胞中加入MTT后，顯微鏡下可見MMC作用48小時(shí)組出現(xiàn)較多喪失了代謝功能的破碎細(xì)胞，而奧克代酸作用的細(xì)胞較完整，有明顯的代謝，細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞周圍可見藍(lán)紫色甲簪顆粒。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，奧克代酸可抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞的增殖。其機(jī)理可能是通過干擾細(xì)胞周期的進(jìn)程，使細(xì)胞周期延遲或不同步而造成的。
實(shí)驗(yàn)例2奧克代酸對(duì)細(xì)胞貼壁抑制作用實(shí)驗(yàn)一.試劑配制1.MTT溶液同實(shí)驗(yàn)例1方法。
2.甲瓚緩沖液SDS以20％的濃度溶于50％DMF中。
二.實(shí)驗(yàn)方法1.奧克代酸對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白FN貼壁作用的抑制實(shí)驗(yàn)(1)培養(yǎng)板制備向96孔培養(yǎng)板內(nèi)加入20mg/L FN，每孔50μl，室溫下包被24小時(shí)，PBS液洗3次，以清除未貼附的蛋白，再向每孔加入2g/L牛血清白蛋白(BSA)50μl，室溫孵育2小時(shí)，封閉非特異吸附位點(diǎn)，再用PBS液洗3次。同時(shí)，用包被了相同濃度的BSA作對(duì)照。
(2)漂浮細(xì)胞計(jì)數(shù)將生長良好的細(xì)胞以1×105/ml濃度混懸于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，并接種于上述包被的平底96孔板內(nèi)，每孔100μl，同時(shí)加入不同終濃度的奧克代酸(200nmol/L，100nmol/，50nmol/L)，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4小時(shí)、24小時(shí)，每次每組取3孔，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)未貼壁的細(xì)胞(漂浮細(xì)胞)數(shù)。
(3)貼壁細(xì)胞MTT檢測小心移去上述孔板中的漂浮細(xì)胞，向存留有貼壁細(xì)胞的孔板中按前述方法加入MTT，檢測貼壁細(xì)胞的OD值，并與對(duì)照孔(FN)OD值比較，計(jì)算貼壁細(xì)胞百分率％＝實(shí)驗(yàn)孔OD值/對(duì)照孔OD值×100％。
2.奧克代酸對(duì)已貼壁細(xì)胞的促脫落作用(1)脫落細(xì)胞計(jì)數(shù)按上述濃度接種細(xì)胞，待完全貼壁后，分別加入與上述同濃度的MMC，奧克代酸，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4小時(shí)，24小時(shí)，每次每組取3孔，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)脫落細(xì)胞數(shù)。
(2)貼壁細(xì)胞MTT檢測同時(shí)，向存留有貼壁細(xì)胞的孔板中按前述方法加入MTT，檢測貼壁細(xì)胞的OD值，并與對(duì)照孔(FN)OD值比較，計(jì)算貼壁細(xì)胞百分率％＝實(shí)驗(yàn)孔OD值/對(duì)照孔OD值×100％。
三.實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.奧克代酸對(duì)細(xì)胞向胞外基質(zhì)蛋白FN貼壁作用的抑制本實(shí)驗(yàn)可見，奧克代酸對(duì)人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞向FN的貼附具有明顯的抑制作用。細(xì)胞接種后4小時(shí)，未加藥物組細(xì)胞貼壁達(dá)100％，而奧克代酸組含大量未貼壁的漂浮細(xì)胞。將藥物作用4小時(shí)及24小時(shí)的未貼壁細(xì)胞吸出后，對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行MTT分析表明，隨奧克代酸劑量加大，作用時(shí)間延長，細(xì)胞貼壁的百分?jǐn)?shù)遞減。
表1.奧克代酸對(duì)成纖維細(xì)胞向胞外基質(zhì)蛋白FN貼壁的抑制作用

2.奧克代酸對(duì)已貼壁細(xì)胞的促脫落作用實(shí)驗(yàn)表明，奧克代酸對(duì)已貼壁的人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞具有明顯的促脫落作用。奧克代酸作用3小時(shí)細(xì)胞開始收縮變圓，至4小時(shí)及24小時(shí)已有大部分細(xì)胞脫落。將脫落細(xì)胞吸出后，對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行MTT分析表明，隨藥物劑量加大，作用時(shí)間延長，細(xì)胞貼壁的百分?jǐn)?shù)遞減。
表2.奧克代酸對(duì)已貼壁的人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞的促脫落作用

本實(shí)驗(yàn)表明，奧克代酸具有抑制人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞向FN貼附的作用。奧克代酸200nmol/L，100nmol/L，50nmol/L作用24小時(shí)仍明顯抑制細(xì)胞貼附，形態(tài)學(xué)上可見細(xì)胞收縮變圓，但胞膜完整，無明顯的細(xì)胞碎片，臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞無著色。據(jù)此可以認(rèn)為，奧克代酸引起細(xì)胞形態(tài)改變，收縮變圓，與引起細(xì)胞骨架功能的改變有關(guān)。
實(shí)驗(yàn)例3奧克代酸誘導(dǎo)人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)一.試劑配制(1)D-hanks液同實(shí)驗(yàn)例1配制方法。
(2)TE緩沖液(pH8.0)10mmol Tris-Cl，pH8.0，1mmol EDTA，pH8.0，高壓滅菌，4℃存放。
(3)6×上樣緩沖液0.25％溴酚藍(lán)，0.25％二甲苯腈藍(lán)，30％甘油溶于水中，4℃存放。
(4)5×電泳緩沖液(TBE)1000mlTris 54g，硼酸27.5g，0.5mol/LEDTA，pH8.0，20ml。工作液0.5×TBE(5)姬姆薩原液配制(姬姆薩粉劑0.8g，甘油50ml，甲醇50ml)將姬姆薩粉劑溶于甲醇中，在乳缽中充分研磨，溶解后再加甘油，混合搖勻，置于37℃溫箱中8小時(shí)，用有色玻璃瓶保存?zhèn)溆谩?br> 二.實(shí)驗(yàn)方法1.DNA Ladder分析(1)細(xì)胞收集將生長良好的細(xì)胞傳代后接種于75ml培養(yǎng)瓶中，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每3天換液一次，待細(xì)胞生長至80％-90％融合時(shí)，分別加入終濃度100nmol/L OA，繼續(xù)于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，收集全部細(xì)胞(直接收集收縮脫落的細(xì)胞，未脫落的細(xì)胞用胰酶消化后收集)，PBS洗3次，800轉(zhuǎn)離心10分鐘，將細(xì)胞團(tuán)收集到1.5mlEP管中備用。同時(shí)收集等量(約1×106/管)正常未用藥物的細(xì)胞作為對(duì)照。
(2)用溶液I(10mmol/L TrisHCl，pH7.6；10mmol/L KCl；10mmol/L MgCl2)1ml，加入1％NP40，反復(fù)顛倒混勻，裂解細(xì)胞膜。
(3)2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，沉淀細(xì)胞核，棄上清。
(4)加入800μl溶液II(10mmol/L TrisHCl，pH7.6；10mmol/L KCl；10mmol/L MgCl2；0.5mol/LnaCl；0.5％SDS；2mmol/L EDTA)，溫和混勻，避免強(qiáng)烈震蕩，因?yàn)槿芤篒I已使核膜破裂，DNA已釋放到溶液中。
(5)用400μl飽和酚抽提，反復(fù)顛倒混勻，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心一分鐘，上清用400μl酚和700μl氯仿分別抽提一次。
(6)上清加入2倍容積的冰預(yù)冷乙醇，混勻，-20℃1小時(shí)。
(7)12000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，倒出上清，真空蒸發(fā)乙醇2分鐘，加入100μl TE溶解液。
(8)用2％瓊脂糖凝膠電泳，電壓40-60V，約2小時(shí)出現(xiàn)DNA“梯狀”條帶，在紫外燈下觀察并照相。
每種相同實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
2.Giemsa染色觀察(1)常規(guī)將細(xì)胞接種于事先放有無菌蓋玻片的35mm培養(yǎng)皿中，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每3天換液一次，待細(xì)胞生長至80％-90％融合時(shí)，加入終濃度100nmol/L奧克代酸，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，收集全部細(xì)胞(直接收集脫落的細(xì)胞，做細(xì)胞涂片；將含未脫落細(xì)胞的蓋玻片直接用于實(shí)驗(yàn))。
(2)將細(xì)胞用甲醇固定5分鐘，空氣干燥，再用100∶1PBS稀釋的吉姆薩染液染色15分鐘，流水沖洗，干燥。在油鏡下觀察、拍照。
三.實(shí)驗(yàn)結(jié)果100nmol/L奧克代酸作用24小時(shí)可見細(xì)胞凋亡，電泳出現(xiàn)DNA梯狀條帶(ladder)，100nmol/L奧克代酸作用24小時(shí)的細(xì)胞Giemsa染色可見細(xì)胞核染色質(zhì)凝縮現(xiàn)象，部分細(xì)胞核染色質(zhì)發(fā)生了斷裂。結(jié)合實(shí)驗(yàn)例2所見100nmol/L奧克代酸作用24小時(shí)的細(xì)胞胞膜完整，臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞不著色及加入MTT可見細(xì)胞能量代謝，均支持100nmol/L奧克代酸作用24小時(shí)可誘發(fā)細(xì)胞凋亡。
實(shí)驗(yàn)例4奧克代酸影響細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的實(shí)驗(yàn)一.實(shí)驗(yàn)方法1.細(xì)胞內(nèi)鈣離子的熒光標(biāo)記(1)將第3代培養(yǎng)的人結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞以1∶3傳代接種在直徑35mm的一次性培養(yǎng)皿中，3天一換液，待長至70％融合時(shí)用于實(shí)驗(yàn)。
(2)luo-3100μg溶于100μl DMSO中，分裝10μl/支，-20℃密閉遮光保存。
(3)F1275mg溶于100μl DMSO中，分裝10μl/支，室溫密閉遮光保存。
(4)將培養(yǎng)皿中細(xì)胞用無血清的DMEM培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)沖洗3次，再向皿中加入800μl該培養(yǎng)基，同時(shí)加入Fluo-3及F127各3μl，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時(shí)。
(5)用上述無血清DMEM培養(yǎng)基洗3次，再加入該培養(yǎng)基400μl，置于激光掃描共聚焦顯微鏡下。動(dòng)態(tài)觀察和記錄所選細(xì)胞的熒光強(qiáng)度變化，熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度呈正相關(guān)。
2.細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光檢測靜態(tài)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度約2～3分鐘后基本穩(wěn)定。細(xì)胞的熒光強(qiáng)度定量曲線隨細(xì)胞的不同略有差異。向不同皿中分別加入奧克代酸(10-6M，10-7M，10-8M)，動(dòng)態(tài)觀察所選定細(xì)胞的熒光強(qiáng)度變化，記錄變化曲線。每皿細(xì)胞只加藥一次，每個(gè)濃度重復(fù)3次。當(dāng)動(dòng)態(tài)細(xì)胞熒光強(qiáng)度變化趨于穩(wěn)定時(shí)，停止實(shí)驗(yàn)，存盤圖像及數(shù)據(jù)。
二.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)10-6M濃度的奧克代酸引起結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，動(dòng)態(tài)可見鈣離子熒光強(qiáng)度增加，10-7M及10-8M濃度的OA對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度無明顯影響。
(2)奧克代酸引起劑量相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度熒光強(qiáng)度變化見表3。
表3.奧克代酸處理前后鈣離子熒光強(qiáng)度的比較

鈣信號(hào)的發(fā)生是基于細(xì)胞溶質(zhì)中Ca2+濃度時(shí)空依賴性的變化。正常細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度為50～150nmol/L，胞外鈣離子濃度為1.2～1.3mmol/L，相差達(dá)10,000倍。胞外鈣內(nèi)流和胞內(nèi)鈣庫動(dòng)員形成的鈣震蕩(鈣峰或鈣波)在各種生理過程中起重要作用；病理狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)鈣超負(fù)荷將造成一系列代謝紊亂，直至細(xì)胞壞死或凋亡。細(xì)胞內(nèi)某些細(xì)胞器如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、肌漿網(wǎng)和線粒體等具有較高的Ca2+，稱之為胞內(nèi)鈣庫。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+庫耗盡，細(xì)胞溶質(zhì)中Ca2+濃度過高，會(huì)使磷酸根沉淀，而后者是細(xì)胞能量及物質(zhì)代謝所必須的，因此Ca2+過高會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷甚至死亡。
本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)奧克代酸還可干擾結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，使細(xì)胞溶質(zhì)中Ca2+過高，可抑制細(xì)胞代謝功能，甚至引起細(xì)胞凋亡。與實(shí)驗(yàn)例3結(jié)果一致。
具體實(shí)施例方式
可將奧克代酸配以可藥用輔料制作成相應(yīng)的劑型供臨床使用。優(yōu)選的配制方法為，將奧克代酸溶于蒸餾水，或生理鹽水，或磷酸鹽緩沖液中使用。奧克代酸最佳濃度為50～200nmol/L。用于青光眼濾過泡手術(shù)過程中在濾過泡局部涂抹或噴灑，也可于手術(shù)后早期(兩周內(nèi))滴眼。
權(quán)利要求
1.磷酸酶抑制劑奧克代酸在制備用于防止青光眼濾過泡手術(shù)后局部纖維化及瘢痕形成的藥物中的用途。
2.一種用于防止青光眼濾過泡手術(shù)后局部纖維化及瘢痕形成的藥物組合物，其含有有效量的作為活性成分的奧克代酸和可藥用輔料。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，將奧克代酸溶于蒸餾水，或生理鹽水，或磷酸鹽緩沖液中使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，奧克代酸的濃度為50～200nmol/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了磷酸酶抑制劑奧克代酸(Okadaicacid，OA)在制備用于青光眼濾過泡手術(shù)后防止手術(shù)局部纖維化及瘢痕形成的藥物中的用途。其應(yīng)用是將有效量的奧克代酸和可藥用輔料配制成藥物組合物使用，適宜的溶劑為蒸餾水、生理鹽水或磷酸鹽緩沖液，適宜的濃度為50～200nmol/L。于青光眼濾過泡手術(shù)過程中在濾過泡局部涂抹或噴灑，也可于手術(shù)后早期(兩周內(nèi))滴眼。
文檔編號(hào)A61P27/02GK1799540SQ20051011493
公開日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月16日
發(fā)明者陳鳳華, 龐文躍, 王津津, 李志輝, 王寧利 申請(qǐng)人:陳鳳華