專利名稱：一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于形成在臨床腫瘤手術(shù)中可阻斷組織外游離癌細(xì)胞擴(kuò)散的纖維蛋白膜的試劑盒；本發(fā)明也涉及所述試劑盒的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤病人手術(shù)過程中由于機(jī)械創(chuàng)傷或切口所造成的游離腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，會增加腫瘤病人術(shù)后“病灶”復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，降低病人的存活時間和幾率。纖維蛋白原和凝血酶等形成的復(fù)合物，可用于減少根治性乳房切除術(shù)和腫塊切除術(shù)后血清腫的形成；目前臨床上使用較多的纖維蛋白膠主要用于止血，上述產(chǎn)品都不能阻斷游離腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散。
因此，本發(fā)明提供的纖維蛋白膜試劑盒能將網(wǎng)狀致密的纖維蛋白膜用于阻斷游離癌細(xì)胞的擴(kuò)散中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒；本發(fā)明的另一個目的是提供所述試劑盒的用途。
本發(fā)明提供一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，它包括濃度為50-100毫克/毫升的纖維蛋白原、濃度為100-1000國際單位/毫升的凝血酶和濃度為20-60毫摩爾/升的氯化鈣；所述的纖維蛋白原優(yōu)選濃度為60-80毫克/毫升，更優(yōu)選70毫克/毫升，所述的凝血酶優(yōu)選濃度為300-800國際單位/毫升，更優(yōu)選400-600國際單位/毫升，所述的氯化鈣優(yōu)選濃度為30-50毫摩爾/升，更優(yōu)選40毫摩爾/升；所述的凝血酶和氯化鈣組合成為凝血酶的氯化鈣溶液；所述的纖維蛋白原和凝血酶為人血液來源；所述的試劑盒還包括說明書。
本發(fā)明還提供所述的試劑盒在制備纖維蛋白膜中的應(yīng)用，及其在制備阻斷臨床腫瘤手術(shù)中游離腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散的試劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明在臨床腫瘤手術(shù)中可以阻斷手術(shù)創(chuàng)傷和切割所引起的游離腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，提高腫瘤患者術(shù)后的生存率，有很好的生物相容性，并且使用方便。


圖1和圖2分別是用本發(fā)明試劑盒所形成的纖維蛋白膜在其不同位點(diǎn)處的電子掃描顯微鏡照片。
圖3A1、圖3A2是對照組細(xì)胞侵染性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯微鏡照片圖3B1、圖3B2是實(shí)驗(yàn)組去掉纖維蛋白膜后細(xì)胞侵染性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯微鏡照片圖3C1、圖3C2是從實(shí)驗(yàn)組去掉的纖維蛋白膜的顯微鏡照片具體實(shí)施方式
人體血液凝固過程已被研究即闡明，纖維蛋白原和凝血酶在其中的作用也為人們所熟知，而且也有許多利用該原理的產(chǎn)品在使用，但都用于防止術(shù)后血塊形成或用于止血。本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)通過凝血酶對纖維蛋白原的激活作用，使纖維蛋白原逐漸聚合后形成的一層網(wǎng)絡(luò)狀致密的纖維蛋白膜能阻斷腫瘤細(xì)胞穿透擴(kuò)散，因而提供了一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，其中的纖維蛋白原和凝血酶優(yōu)選的為人血液來源。
本發(fā)明試劑盒中的纖維蛋白原的濃度為50-100毫克/毫克，優(yōu)選的為60-80毫克/毫升，最好是70毫克/毫升；凝血酶的濃度為100-1000國際單位/毫升，優(yōu)選的為300-800國際單位/毫升，最好是400-600國際單位/毫升；氯化鈣的濃度為20-60毫摩爾/升，優(yōu)選的為30-50毫摩爾/升，最好是40毫摩爾/升。
本發(fā)明的試劑盒優(yōu)選的還包括說明書。
這樣使用本發(fā)明的試劑盒將試劑盒中的纖維蛋白原和凝血酶交替涂布2-4次，形成的纖維蛋白膜孔徑大于0微米小于10微米，更優(yōu)選的是小于0.6微米，而人體腫瘤細(xì)胞一般直徑是大于10-100微米，因此，用本發(fā)明的試劑盒所形成的纖維蛋白膜能完全能阻斷所述人體腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散。
具體地說，纖維蛋白原和凝血酶交替涂布在腫瘤組織或“病灶”表面形成纖維蛋白膜，形成一層能阻斷腫瘤細(xì)胞穿透擴(kuò)散的網(wǎng)絡(luò)狀致密的纖維蛋白膜，阻斷在腫瘤病人手術(shù)過程中由于機(jī)械創(chuàng)傷或切口所造成的游離腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，從而達(dá)到降低和減少腫瘤病人術(shù)后“病灶”復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，提高病人的存活時間和幾率。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(1)應(yīng)用于臨床腫瘤手術(shù)中阻斷手術(shù)創(chuàng)傷和切割所引起的游離腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，提高腫瘤患者術(shù)后的生存率；(2)有很好的生物相容性；(3)使用方便。
下面結(jié)合實(shí)施例說明本發(fā)明，但并不意味著以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1 纖維蛋白膜的形成(1)在0.8×0.8厘米的玻璃板上交替涂布3層70毫克/毫升的纖維蛋白原和凝血酶(由450國際單位/毫升凝血酶和40毫摩爾/升氯化鈣溶液組成)；(2)待涂膜凝固后，用2.5％的戊二醛固定液4℃固定2小時(固定后可貯存數(shù)周，對超微結(jié)構(gòu)無明顯不良影響)；(3)用1％的鋨酸固定30分鐘后，脫水并臨界點(diǎn)干燥，裝樣上機(jī)觀測。
結(jié)果見圖1、圖2所示的兩張電鏡照片，它們在纖維蛋白膜不同位點(diǎn)處拍攝得到，放大倍數(shù)為5,000倍的視野?？梢钥闯?，所形成的纖維蛋白膜沒有出現(xiàn)明顯的孔狀結(jié)構(gòu)。由照片放大比例尺估計可知，蛋白膜所形成的孔徑大小是小于0.6μm的，而人體腫瘤細(xì)胞一般直徑大小為10-100μm，因此，形成的纖維蛋白膜是可以阻斷腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散。
實(shí)施例2 纖維蛋白膜試劑盒用于阻斷組織外游離癌細(xì)胞擴(kuò)散(1)用85毫克/毫升的纖維蛋白原和凝血酶(由700國際單位/毫升凝血酶和40毫摩爾/升氯化鈣溶液組成)交替涂布24孔板中的測試培養(yǎng)皿(inserts)的底部外表面3次，形成一層致密光滑的纖維蛋白膜；(2)用無血清培養(yǎng)基溶脹測試培養(yǎng)皿(inserts)底膜后，以0.5～1.0×106接種密度接入300微升的細(xì)胞懸浮液，其中包括胃癌細(xì)胞株MKN45和AGS，結(jié)腸癌細(xì)胞株Ls174T，以及乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231，進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)48小時。
(3)移去培養(yǎng)液，用棉簽輕輕擦拭沒有透過測試培養(yǎng)皿(inserts)底膜的細(xì)胞，染色20分鐘，晾干；
(4)對照組不涂纖維蛋白原和凝血酶；(5)纖維拍照，記錄試驗(yàn)結(jié)果。
結(jié)果見圖3A1、圖3A2、圖3B1、圖3B2、圖3C1、圖3C2。
從中清楚地看出，與對照組相比，交替涂布纖維蛋白原和凝血酶形成的纖維蛋白膜將腫瘤細(xì)胞完全阻斷，從而使得細(xì)胞全部阻留在測試培養(yǎng)皿(inserts)底膜上而沒有穿透纖維蛋白膜。因此，說明纖維蛋白膜是可以完全阻斷游離腫瘤細(xì)胞的侵襲擴(kuò)散的。
通過體外實(shí)驗(yàn)來模擬由纖維蛋白原和凝血酶交替涂布在腫瘤組織或“病灶”表面形成纖維蛋白膜，阻斷在腫瘤病人手術(shù)過程中由于機(jī)械創(chuàng)傷或切口所造成的游離腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，從而達(dá)到降低和減少腫瘤病人術(shù)后“病灶”復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，提高病人的存活時間和幾率。
權(quán)利要求
1.一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，其特征在于，包括濃度為50-100毫克/毫升的纖維蛋白原、濃度為100-1000國際單位/毫升的凝血酶和濃度為20-60毫摩爾/升的氯化鈣。
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的纖維蛋白原濃度為60-80毫克/毫升，凝血酶濃度為300-800國際單位/毫升，氯化鈣濃度為30-50毫摩爾/升。
3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的纖維蛋白原濃度為70毫克/毫升，凝血酶濃度為400-600國際單位/毫升，氯化鈣濃度為40毫摩爾/升。
4.如權(quán)利要求1-3任一所述的試劑盒，其特征在于，所述的凝血酶和氯化鈣組合成為凝血酶的氯化鈣溶液。
5.如權(quán)利要求1-3任一所述的試劑盒，其特征在于，所述的纖維蛋白原和凝血酶為人血液來源。
6.如權(quán)利要求1-3任一所述的試劑盒，其特征在于，還包括說明書。
7.權(quán)利要求1-3任一所述的試劑盒在制備纖維蛋白膜中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1-3任一所述的用于形成纖維蛋白膜的試劑盒在制備阻斷臨床腫瘤手術(shù)中游離腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散的試劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于形成纖維蛋白膜的試劑盒，它包括濃度為50－100毫克/毫升的纖維蛋白原、濃度為100－1000國際單位/毫升的凝血酶和濃度為20－60毫摩爾/升的氯化鈣。本發(fā)明也涉及所述試劑盒在制備在臨床腫瘤手術(shù)中阻斷組織外游離癌細(xì)胞的擴(kuò)散的試劑中的應(yīng)用。將所述的纖維蛋白原和凝血酶交替涂布，形成一層網(wǎng)絡(luò)狀致密的纖維蛋白膜，阻斷在腫瘤病人手術(shù)過程中由于機(jī)械創(chuàng)傷或切口所造成的游離腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，從而達(dá)到降低和減少腫瘤病人術(shù)后“病灶”復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，提高病人的存活時間和幾率。
文檔編號A61K38/39GK1911440SQ20051002857
公開日2007年2月14日 申請日期2005年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月8日
發(fā)明者黃凱, 張軍, 何秋, 許必雄, 趙霞, 李軍輝 申請人:上海萊士血制品有限公司