專利名稱：含有兩組不同聚合物－活性劑綴合物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明一般地涉及含有兩組聚合物-活性劑綴合物的組合物，其適合于在給患者施用時(shí)提供期望的藥物動(dòng)力學(xué)特性。此外，本發(fā)明還涉及制備該組合物、含有該組合物的藥物制劑以及類似物的方法。
本發(fā)明的背景科學(xué)家和臨床工作人員在他們?cè)噲D將活性劑研制成適合向患者給藥的形式中面臨許多挑戰(zhàn)。例如，多肽類活性劑往往是通過(guò)注射方式給藥而不是口服。用這種方式，該多肽就不必接觸胃的蛋白水解環(huán)境而被直接引入體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)。然而，注射多肽也有幾個(gè)缺點(diǎn)。例如，很多種多肽的半衰期較短，故需要反復(fù)注射，這往往造成不便和痛苦。而且，某些多肽可能會(huì)引發(fā)一種或多種免疫反應(yīng)，其結(jié)果是可能會(huì)激活患者體內(nèi)的免疫系統(tǒng)以降解多肽。因此，即使是通過(guò)注射方式給予這些藥劑，多肽之類的活性劑的給藥往往也是成問(wèn)題的。在解決以注射方式給予活性劑的問(wèn)題方面，獲得了某些成功。例如，使活性劑與水溶性聚合物綴合而產(chǎn)生具有降低的免疫原性和抗原性的聚合物-活性劑綴合物。此外，由于腎臟清除率降低和/或體循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)酶降解減少，這些聚合物-活性劑綴合物與它們的非綴合的相對(duì)物相比，其半衰期往往大大地延長(zhǎng)。由于其半衰期較長(zhǎng)，所以聚合物-活性劑綴合物所需用藥的次數(shù)不太頻繁，其依次減少了令人痛苦的注射和不便的就醫(yī)的總次數(shù)。而且，當(dāng)微溶性的活性劑與一種水溶性聚合物綴合后，其水溶性顯著增加。由于聚乙二醇經(jīng)證實(shí)是安全的并經(jīng)FDA批準(zhǔn)可供局部使用和內(nèi)服，它已被用于與活性劑進(jìn)行綴合。當(dāng)活性劑與聚乙二醇或“PEG”的聚合物綴合時(shí)，該綴合的活性劑在習(xí)慣上被稱為“聚乙二醇化”。聚乙二醇化活性劑例如PEGASYS聚乙二醇化干擾素α-2a(Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ)、PEG-INTRON聚乙二醇化干擾素α-2b(Schering Corp.，Kennilworth，NJ)以及NEULASTATMPEG-filgrastim(Amgen Inc.，Thousand Oaks，CA)的商業(yè)化成功顯示，綴合形式活性劑的給藥比非綴合形式活性劑的給藥具有顯著的優(yōu)越性。與小分子例如二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(Zalipsky(1993)Bioconjug.Chem.4(4)296-299)和氟尿嘧啶(Ouchi等(1992)DrugDes.Discov.9(1)93-105)的綴合物也已經(jīng)被制備。盡管取得了這些成功，但要提供具有藥理活性又在迅速起效和持久作用之間具有適當(dāng)平衡的含綴合物的藥物制劑，往往仍然是富有挑戰(zhàn)性的。例如，PEGASYS牌聚乙二醇化干擾素α-2a與這種干擾素的天然形式比較，僅具有約7％的體外活性。雖然生成的聚乙二醇化干擾素產(chǎn)品因其更長(zhǎng)的半衰期而彌補(bǔ)了活性的下降，但并非所有藥物產(chǎn)品都將具有僅產(chǎn)生持久體內(nèi)活性的柔性；許多藥物產(chǎn)品除了產(chǎn)生持久的體內(nèi)活性以外，還將理想地產(chǎn)生相對(duì)迅速的起效。因此，通過(guò)提供含綴合物的組合物，本發(fā)明尋求解決本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的這些需求和其它需求，使得給患者施用該組合物時(shí)，產(chǎn)生較迅速的起效，然后產(chǎn)生較持久的活性。
本發(fā)明的概述相應(yīng)地，本發(fā)明提供了一種組合物，其含有第一組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物都含具有一定重均分子量的一種或多種聚合物；以及第二組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物也都含具有一定重均分子量的一種或多種聚合物，其中，第一組中一種或多種聚合物的重均分子量不同于第二組中一種或多種聚合物的重均分子量。本發(fā)明也提供了這樣一種組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于120,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于100道爾頓至約120,000道爾頓，其中，第一組中一種或多種聚合物的重均分子量不同于第二組中一種或多種聚合物的重均分子量。此外，本發(fā)明還提供了這樣一種組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于20,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于100道爾頓至約120,000道爾頓，其中，第一組中一種或多種聚合物的重均分子量不同于第二組中一種或多種聚合物的重均分子量。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了這樣一種組合物，第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于20,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于20,000道爾頓至約100,000道爾頓。本發(fā)明另外還提供了這樣一種組合物，其中第一組和第二組的聚合物重均分子量之間的絕對(duì)差為約500至約100,000。此外，本發(fā)明還提供了這樣一種組合物，其中第一組和第二組的聚合物重均分子量之間的絕對(duì)差為約2,000至約100,000。本發(fā)明也提供了這樣一種組合物，其中，第一組和第二組中每種聚合物都是聚(乙二醇)。此外，本發(fā)明還提供了一種進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受的賦形劑的組合物，從而提供了一種藥物制劑。而且，本發(fā)明提供了一種制備組合物的方法，其中該方法包括以下步驟(i)提供第一組聚合物-活性劑綴合物；(ii)提供第二組聚合物-活性劑綴合物；以及(iii)將第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物合并，從而形成第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物的混合物，其中第一組綴合物和第二組綴合物不相同。本發(fā)明更進(jìn)一步提供了一種引起活性最初開始和活性延遲開始的方法，其中該方法包括以下步驟(i)給患者施用第一組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物均含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物；以及(ii)給患者施用第二組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物均含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物，該重均分子量大于第一組中一種或多種聚合物的重均分子量。本發(fā)明的其它特點(diǎn)和新穎特點(diǎn)將在隨后的敘述中加以闡述，而且其部分特點(diǎn)對(duì)于那些熟悉本技術(shù)的人士而言，在閱讀以下內(nèi)容后將變得顯而易見，或者可通過(guò)實(shí)施本發(fā)明而得以掌握。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，提供了一種含有兩組聚合物-活性劑綴合物的組合物。在第一組中，該綴合物由各具有基本上相同重均分子量的聚合物制成。相似地，第二組中的綴合物也由各具有基本上相同重均分子量的聚合物制成，但該重均分子量不同于第一組中聚合物的重均分子量。任一指定組的綴合物均可含有單連接的綴合物(即單一聚合物與單一活性劑連接，或“1-mer”)，以及多重連接的綴合物，例如兩種聚合物分別與單一活性劑連接(或“2-mer”)，三種聚合物分別與單一活性劑連接(或“3-mer”)，等等。本說(shuō)明也包括單一聚合物與兩種活性劑連接的綴合物。單連接的和多重連接的綴合物的組合也包括在內(nèi)。雖然任何聚合物均可用于形成綴合物，但優(yōu)選聚合物是聚(乙二醇)。此外，將聚合物與活性劑連接的共軛鍵，既可以是一種穩(wěn)定的鍵也可以是一種可解離的(例如可水解的)鍵。此外，該組合物中每一種綴合物都可含有穩(wěn)定的鍵或可解離的鍵，或者該組合物可由一種混合物組成，其中該混合物中的某些綴合物含有穩(wěn)定的鍵而組合物中的其它綴合物含有可解離的鍵。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，提供了一種制備組合物的方法。雖然有許多方法可用于制備本文所述的組合物，但典型的方法包括以下步驟(i)提供第一組聚合物-活性劑綴合物；(ii)提供第二組聚合物-活性劑綴合物；以及(iii)將第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物合并，從而形成第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物的混合物，其中第一組和第二組互不相同。無(wú)論使用何種方法制備該組合物，優(yōu)選的是在上述合并步驟之后采用一個(gè)混合步驟，以便提供基本上均勻的組合物。有利的是，可將藥學(xué)上可接受的賦形劑加入該組合物，從而形成藥物組合物。正如即將在下文中進(jìn)一步詳細(xì)解釋的，現(xiàn)在所述組合物的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是它們?cè)谑┯糜诨颊邥r(shí)提供理想藥物動(dòng)力學(xué)特性的能力。因此，提供了一種引起活性最初開始和活性延遲開始的方法，其中該方法包括以下步驟(i)給患者施用第一組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物均含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物；以及(ii)給患者施用第二組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物也均含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物，該重均分子量大于第一組中一種或多種聚合物的重均分子量。通常，盡管并非必須如此，給藥是可以同時(shí)進(jìn)行的，例如，當(dāng)?shù)谝唤M和第二組綴合物存在于單一組合物中時(shí)，將該組合物給患者施用。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1和2是當(dāng)給患者施用實(shí)施例1中所述的綴合物和混合物時(shí)，網(wǎng)狀細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白水平的近似和預(yù)期結(jié)果的圖示。
本發(fā)明的詳述在詳細(xì)敘述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于特定的聚合物、合成技術(shù)、活性劑，等等，因?yàn)檫@些都可以改變。必須注意，如本說(shuō)明書和權(quán)利要求中所使用的，單數(shù)的“某”、“某個(gè)”和“該”包括復(fù)數(shù)形式的事物，除非上下文中另行明確規(guī)定。因此，例如，“某聚合物”的提法包括某種單一聚合物以及兩種或更多種相同或不同的聚合物，“某綴合物”的提法是指單一綴合物以及兩種或更多種相同或不同的綴合物，“某賦形劑”的提法包括某種單一賦形劑以及兩種或更多種相同或不同的賦形劑，等等。在敘述和要求保護(hù)本發(fā)明時(shí)，將按照下述定義使用以下術(shù)語(yǔ)。如本文所用的“PEG”、“聚乙二醇”以及“聚(乙二醇)”意為包括任何水溶性聚(環(huán)氧乙烷)。通常，按照本發(fā)明所使用的PEG含有以下結(jié)構(gòu)“-O(CH2CH2O)m-”，其中m為2至4000。如本文所用，PEG也包括“-CH2CH2-O(CH2CH2O)m-CH2CH2-”以及“-(CH2CH2O)m-”，取決于末端的氧是否被置換。當(dāng)PEG進(jìn)一步含有間隔部分(下面將進(jìn)一步詳述)時(shí)，含有間隔部分的原子，當(dāng)與水溶性聚合物鏈段以共價(jià)鍵連接時(shí)，不會(huì)導(dǎo)致氧-氧鍵(即“-O-O-”或過(guò)氧化物鍵)的形成。在本說(shuō)明書和權(quán)利要求中，應(yīng)記住“PEG”這一術(shù)語(yǔ)包括具有各種各樣末端或“封端”基團(tuán)的結(jié)構(gòu)?！癙EG”這一術(shù)語(yǔ)還意為一種含有多數(shù)(即大于50％)-CH2CH2O-單體亞單位的聚合物。至于具體形式，PEG可具有任何不同的分子量，以及任何結(jié)構(gòu)或幾何形狀，例如“支化的”、“線性的”、“分叉的”、“多官能的”等等，其將在下文中詳述?！胺舛说摹被颉澳┒朔忾]的”這些術(shù)語(yǔ)在本文中可互換使用，以說(shuō)明具有一個(gè)封端部分的聚合物的末端或終端。通常，盡管并非必須如此，封端部分含有羥基或C1-20烷氧基。因此，封端部分的實(shí)例包括烷氧基(例如甲氧基、乙氧基和芐氧基)，以及芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基，等等。此外，也考慮到了上述各基團(tuán)的飽和的、不飽和的、取代的和未取代的形式。而且，封端部分也可以是硅烷。封端部分還可有利地含有可檢測(cè)的標(biāo)記。當(dāng)聚合物具有含可檢測(cè)標(biāo)記的封端部分時(shí)，所研究的該聚合物和/或與該聚合物偶聯(lián)的部分(例如活性劑)的量或者位置，可通過(guò)使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)器來(lái)測(cè)定。這類標(biāo)記包括，但不限于，熒光劑、化學(xué)發(fā)光劑、用于酶標(biāo)記的部分，比色劑(例如染料)、金屬離子、放射性部分等。適宜的檢測(cè)器包括光度計(jì)、膠片、分光儀等。在提及聚合物或水溶性聚合物的鏈段時(shí)，“非天然存在的”意為聚合物的整體未在自然界里發(fā)現(xiàn)。但是，非天然存在的聚合物或水溶性聚合物的鏈段也許含有天然存在的一個(gè)或數(shù)個(gè)亞單位或一個(gè)亞單位的某些部分，只要該聚合物整體結(jié)構(gòu)未在自然界里發(fā)現(xiàn)即可。“水溶性聚合物鏈段”和“水溶性聚合物”中的“水溶性”是指在室溫條件下可溶于水的任何鏈段或聚合物。通常，與同樣的溶液過(guò)濾之后所能傳播的光相比，水溶性聚合物或鏈段將傳播至少約75％、更優(yōu)選的是至少約95％的光。以重量計(jì)，水溶性聚合物或其鏈段將優(yōu)選是至少約35％(重量)溶于水，更優(yōu)選的是至少約50％(重量)溶于水，還更優(yōu)選的是約70％(重量)溶于水，并且還更優(yōu)選的是約85％(重量)溶于水。然而，最優(yōu)選的是水溶性聚合物或鏈段為約95％(重量)溶于水或完全溶于水。就本發(fā)明的水溶性、非天然存在的聚合物例如PEG而論，“分子質(zhì)量”是指聚合物的重均分子量，通常是以尺寸排阻色譜法、光散射技術(shù)或在1，2，4-三氯苯中以特性速度測(cè)定法測(cè)定的。一種被本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員稱為MALDI的方法能夠測(cè)定聚合物的真實(shí)質(zhì)量。本發(fā)明的聚合物通常是多分散性的，具有較低的多分散性值，該分散性值優(yōu)選低于約1.2，更優(yōu)選低于約1.15，還更優(yōu)選低于約1.10，還更優(yōu)選低于約1.05，并且最優(yōu)選低于約1.03。如本文所用，如“羧酸”衍生物中的“羧酸”這一術(shù)語(yǔ)是指含有 官能團(tuán)[也可表示為“-COOH”或-C(O)OH]的部分。除非上下文中另行明確規(guī)定，羧酸這一術(shù)語(yǔ)不僅包括酸的形式，也包括對(duì)應(yīng)的酯類和被保護(hù)形式。參考Greene等，Protecting Groups in OrganicSynthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán))Third Edition，，Wiley，New York，1999中關(guān)于羧酸和其它官能團(tuán)的適當(dāng)保護(hù)基。“反應(yīng)性”或“活化的”這一術(shù)語(yǔ)，當(dāng)與特定官能團(tuán)結(jié)合使用時(shí)，是指易與另一分子的親電子體或親核體發(fā)生反應(yīng)的反應(yīng)性官能團(tuán)。這與那些需要強(qiáng)催化劑或非常不切實(shí)際的反應(yīng)條件才能發(fā)生反應(yīng)的基團(tuán)(即“非反應(yīng)性”或“惰性”基團(tuán))相反。如本文所用，“官能團(tuán)”這一術(shù)語(yǔ)或其任何同義詞均意在包括其被保護(hù)形式。本文所用的“間隔”或“間隔部分”這一術(shù)語(yǔ)是指任選地用于將一個(gè)部分與另一個(gè)部分連接的原子或原子的集合。本發(fā)明的間隔部分可以是穩(wěn)定而不易水解的或可含在生理?xiàng)l件下可水解的或用酶降解的鍵?！坝H電子體”是指離子或原子、或原子的集合，它可以是離子型的，具有親電子中心，即追蹤電子的中心，能與親核體發(fā)生反應(yīng)?！坝H核體”是指離子或原子、或原子的集合，它可以是離子型的，具有親核中心，即追蹤親電子中心或帶有親電子體的中心?！霸谏?xiàng)l件下可解離的”或“可水解的”或“可降解的”鍵是一種相對(duì)較弱且能在生理?xiàng)l件下與水反應(yīng)(即水解)的鍵。一個(gè)鍵在水中發(fā)生水解的傾向?qū)⒉粌H取決于連接兩個(gè)中心原子的鍵的一般類型，還取決于與這些中心原子連接的取代基。適宜的不穩(wěn)定而易水解的鍵或弱鍵包括但不限于羧酸酯、磷酸酯、酸酐、縮醛、酮縮醇、酰氧烷基醚、亞胺、原酸酯、肽和低聚核苷酸?！胺€(wěn)定而不易水解的”鍵合或鍵是指一種化學(xué)鍵，通常是一種共價(jià)鍵，它在水中基本上是穩(wěn)定的，即在生理?xiàng)l件下在一段較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不會(huì)水解至任何可察覺(jué)的程度。穩(wěn)定而不易水解的鍵的實(shí)例包括但不限于碳-碳鍵(例如在脂肪烴鏈中)、醚、酰胺、氨基甲酸乙酯等。通常，穩(wěn)定而不易水解的鍵是在生理?xiàng)l件下水解速率低于每天約1-2％的鍵。典型化學(xué)鍵的水解速率可在大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)教科書中查到。“活性劑”、“生物活性劑”和“藥理活性劑”這些術(shù)語(yǔ)在本文中互換使用，并定義為包括能產(chǎn)生可在體內(nèi)或體外證實(shí)的、經(jīng)常是有利的一些藥理效果的任何試劑、藥物、化合物，物質(zhì)的組合物或混合物。這包括食品、食品增補(bǔ)劑、營(yíng)養(yǎng)素、營(yíng)養(yǎng)藥物(nutriceutical)、藥物、蛋白、疫苗、抗體、維生素以及其它有益的物質(zhì)。如本文所用，這些術(shù)語(yǔ)還進(jìn)一步包括能在患者身上產(chǎn)生局部或全身效應(yīng)的任何生理或藥理活性物質(zhì)。“藥學(xué)上可接受的賦形劑”或“藥學(xué)上可接受的載體”是指可包括在本發(fā)明的組合物中，且不會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生顯著不良毒理學(xué)效應(yīng)的賦形劑?！八幚碛行Я俊?、“生理有效量”以及“治療有效量”在本文中互換使用，意為在血流或靶組織內(nèi)提供理想水平的活性劑和/或綴合物所需的聚合物-活性劑綴合物(通常存在于藥物制劑內(nèi))的量。確切的量將取決于許多因素，例如具體的活性劑、藥物制劑的組分和物理特性、目標(biāo)患者群、患者自己的考慮等，并可由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員根據(jù)本文及有關(guān)文獻(xiàn)中可獲得的信息來(lái)決定。就本發(fā)明的聚合物而論，“多官能團(tuán)的”意為聚合物含有3個(gè)或3個(gè)以上官能團(tuán)，這些官能團(tuán)可相同或不同。本發(fā)明的多官能團(tuán)聚合物在聚合物中通常將含有約3-100個(gè)官能團(tuán)，或3-50個(gè)官能團(tuán)，或3-25個(gè)官能團(tuán)，或3-15個(gè)官能團(tuán)，或3-10個(gè)官能團(tuán)，或?qū)⒑?、4、5、6、7、8、9或10個(gè)官能團(tuán)?！半p官能團(tuán)”聚合物意為其中含有兩個(gè)官能團(tuán)，相同(即同雙官能團(tuán))或不同(即雜雙官能)的聚合物。至于聚合物的幾何形狀或整體結(jié)構(gòu)，“支化的”是指聚合物具有2條或2條以上聚合物“臂”。支化聚合物可具有2條聚合物臂、3條聚合物臂、4條聚合物臂、6條聚合物臂、8條聚合物臂或更多的聚合物臂。高度支化聚合物的一個(gè)具體類型是樹枝狀聚合物或樹狀聚合物，出于本發(fā)明的目的，它被認(rèn)為具有不同于支化聚合物的結(jié)構(gòu)。“樹狀聚合物”或樹枝狀聚合物是球狀的、尺寸單分散性聚合物，其中所有的鍵均從一個(gè)中心焦點(diǎn)或核心以一種規(guī)則的支化模式徑向伸出并具有重復(fù)的單元，其中每個(gè)單元都提供一個(gè)支化點(diǎn)。樹狀聚合物展示了某些樹枝狀性質(zhì)，例如核心封閉，使得它們不同于其它類型的聚合物?！盎颊摺边@一術(shù)語(yǔ)是指活生物，包括人和動(dòng)物，該活生物患有或易患可通過(guò)施用本文所提供的綴合物來(lái)預(yù)防或治療的某種病癥?！叭芜x的”和“任選地”意為隨后所述的情況也許發(fā)生或也許不發(fā)生，因此該敘述包括所述情況發(fā)生的情況以及所述情況不發(fā)生的情況?；氐奖景l(fā)明的第一種實(shí)施方案，其提供了一種含有兩組不同聚合物-活性劑綴合物的組合物。與先前所述的含有綴合物的組合物不同，當(dāng)本文所述的混合的組組合物施用于患者時(shí)，它除了產(chǎn)生較持久的藥理作用之外，還產(chǎn)生較迅速的藥理作用的開始。尤其是，通過(guò)產(chǎn)生較迅速的藥理作用的開始，現(xiàn)述的組合物比先前所述的綴合物組合物有所改進(jìn)，后者一般只能提供較持久的藥理作用。有利的是，現(xiàn)述的組合物通過(guò)提供兩組不同的聚合物-活性劑綴合物，產(chǎn)生了較迅速的開始作用和較持久的作用的活性。因此，該組合物含有第一組聚合物-活性劑綴合物和第二組聚合物-活性劑綴合物。除了任何其它區(qū)別，與第一組相關(guān)的聚合物的重均分子量不同于第二組聚合物-活性劑綴合物中的重均分子量。由于與每一組中聚合物相關(guān)的重均分子量不同，與一組相關(guān)的聚合物的重均分子量將必需低于與另一組相關(guān)的聚合物的重均分子量。僅為一致性起見，并為了清晰地?cái)⑹霰景l(fā)明，通常將與相對(duì)較低的重均分子量相關(guān)的活性劑綴合物稱為“第一組”，而通常將與相對(duì)較高的重均分子量相關(guān)的活性劑綴合物稱為“第二組”。然而，必須記住，術(shù)語(yǔ)“第一”和“第二”只是為了識(shí)別和區(qū)分這彼此不同的兩組，并不賦予它們?nèi)魏纹渌饣驍?shù)值。因此，如果將與相對(duì)較低的重均分子量相關(guān)的那組聚合物-活性劑綴合物稱為“第二組”，而將與相對(duì)較高的重均分子量相關(guān)的那組稱為“第一組”，也是完全可接受的。雖然不希望受理論的約束，但據(jù)信正是由于與第一組和第二組相關(guān)的重均分子量之間的差別，才產(chǎn)生了期望的較迅速開始作用和較持久作用的聯(lián)合作用。尤其是，據(jù)信具有較低分子量聚合物的那組綴合物產(chǎn)生與具有較高分子量聚合物的那組綴合物無(wú)關(guān)的較迅速的開始作用。因此，通過(guò)提供兩組綴合物的混合物，本文中所述的組合物(在施用于患者時(shí))產(chǎn)生了具有較迅速開始作用及較持久作用的藥物動(dòng)力學(xué)特性。第一組和第二組均含有聚合物-活性劑綴合物。聚合物-活性劑綴合物均含有至少一種聚合物和至少一種活性劑。至于活性劑，任何活性劑都可使用而且本發(fā)明在這方面并無(wú)限制。適宜的藥劑可選自例如，催眠藥和鎮(zhèn)靜劑、精神供能劑、安定藥、呼吸道藥物、抗驚厥劑、肌肉松弛劑、抗帕金森氏癥劑(例如多巴胺拮抗劑)、鎮(zhèn)痛藥、消炎藥、抗焦慮藥(例如抗焦慮藥)、食欲抑制劑、抗偏頭痛劑、肌肉收縮藥、抗感染劑(例如抗生素、抗病毒劑、抗真菌劑和疫苗)、抗關(guān)節(jié)炎藥、抗瘧疾劑、止吐劑、抗癲癇藥、支氣管擴(kuò)張劑、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、抗癌劑、抗血栓形成劑、抗高血壓藥、心血管藥物、抗心律失常藥、抗氧化劑、抗哮喘劑、激素劑(包括避孕藥)、擬交感神經(jīng)藥、利尿藥、脂質(zhì)調(diào)節(jié)劑、抗雄激素劑、抗寄生物藥、抗凝劑、腫瘤藥、抗腫瘤藥、降血糖藥、營(yíng)養(yǎng)劑和增補(bǔ)劑、生長(zhǎng)增補(bǔ)劑、抗腸炎劑、抗體、診斷試劑和造影劑。更尤其是，該活性劑可歸于下列一系列結(jié)構(gòu)中的一種，包括但不限于小分子(優(yōu)選的是不溶性小分子)、肽、多肽、蛋白、多糖、類固醇、核苷酸、低聚核苷酸、多核苷酸、脂肪、電解質(zhì)等。優(yōu)選的是，與本文所述的聚合物偶聯(lián)的活性劑具有一個(gè)天然的氨基，或者，被修改成含有至少一個(gè)適合與本文所述聚合物綴合的反應(yīng)性氨基。適合以共價(jià)鍵連接的活性劑具體實(shí)例包括但不限于天冬酰胺酶、amdoxovir(DAPD)、安泰德(antide)、貝卡普勒明、降鈣素、藍(lán)藻抗病毒蛋白(cyanovirin)、地尼白介素毒素連接物、紅細(xì)胞生成素(EPO)、EPO激動(dòng)劑(例如長(zhǎng)度為約10-40個(gè)氨基酸并包括一種特殊核心序列的肽)、鏈球菌NDA酶α、紅細(xì)胞生成刺激蛋白(NESP)、凝血因子，例如因子V、因子VII、因子VIIa、因子VIII、因子IX、因子X(jué)、因子X(jué)II、因子X(jué)III、馮·維勒布蘭德因子；西利酶(ceredase)、依米格西酶(cerezyme)、α-葡糖苷酶、膠原、環(huán)孢菌素、α防御素、β-防御素、exedin-4、粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)、血小板生成素(TPO)、α-1蛋白酶抑制劑、依降鈣素、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)、纖維蛋白原、非格司亭、生長(zhǎng)激素、人類生長(zhǎng)激素(hGH)、生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)、GRO-β、GRO-β抗體、骨形成蛋白如骨形成蛋白-2、骨形成蛋白-6、OP-1；酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、CD-40配體、肝素、人血清蛋白、低分子量肝素(LMWH)、干擾素如干擾素α、干擾素β、干擾素γ、干擾素ω、干擾素τ、復(fù)合(consensus)干擾素；白細(xì)胞介素以及白細(xì)胞介素受體如白細(xì)胞介素-1受體、白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-2融合蛋白、白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑、白細(xì)胞介素-3、白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-4受體、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-8、白細(xì)胞介素-12、白細(xì)胞介素-13受體、白細(xì)胞介素-17受體；乳鐵蛋白和乳鐵蛋白片段、促黃體激素釋放激素(LHRH)、胰島素、胰島素原、胰島素類似物(例如美國(guó)專利第5,922,675號(hào)所述的單?；葝u素)、糊精、C-肽、促生長(zhǎng)素抑制素、促生長(zhǎng)素抑制素類似物，包括奧曲肽、抗利尿激素、促卵泡激素(FSH)、流行性感冒疫苗、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、胰島調(diào)理素(insulintropin)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、纖維蛋白溶酶原活化劑如阿替普酶(alteplase)、尿激酶、瑞替普酶(reteplase)、鏈激酶、帕米替普酶(pamiteplase)、拉諾普酶(lanoteplase)以及替尼普酶(teneteplase)；神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、骨保護(hù)素、血小板衍生生長(zhǎng)因子、組織生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-1、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、白血病抑制因子、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、角質(zhì)生長(zhǎng)因子(GGF)、T細(xì)胞受體、CD分子/抗原、腫瘤壞死因子(TNF)、單核細(xì)胞化學(xué)吸引劑蛋白-1、內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、副甲狀腺激素(PTH)、胰高血糖素樣肽、生長(zhǎng)激素、胸腺素α1、rasburicase、胸腺素α1 IIb/IIIa抑制劑、胸腺素β10、胸腺素β9、胸腺素β4、α-1抗 胰蛋白酶、磷酸二酯酶(PDE)化合物、VLA-4(極晚抗原-4)、VLA-4抑制劑、二膦酸酯、呼吸合胞體病毒抗體、囊性纖維化跨膜調(diào)節(jié)劑(CFTR)基因、脫氧核糖核酸酶(Dnase)、殺菌/滲透性增加蛋白(BPI)以及抗-CMV抗體。典型的單克隆抗體包括etanercept(由與IgG1的Fc部分連接的人的75kD TNF受體的細(xì)胞外配體結(jié)合部分組成的二聚融合蛋白)、阿昔單抗、阿達(dá)木單抗、阿非莫單抗、阿侖單抗、B-淋巴細(xì)胞抗體、atlizumab、巴利昔單抗、貝伐單抗、比西單抗、bertilimumab、CDP-571、CDP-860、CDP-870、西妥昔單抗、克立昔單抗、達(dá)克珠單抗、eculizumab、依決可單抗、efalizumab、依帕珠單抗、fontolizumab、gavilimomab、吉姆單抗奧佐米星、替伊莫單抗、英夫利昔單抗、inolimomab、凱利昔單抗、labetuzumab、lerdelimumab、奧立珠單抗、放射性標(biāo)記的lym-l、metelimumab、美泊利單抗、米妥莫單抗、莫羅-CD3、奈巴庫(kù)抗體、那他珠單抗、奧度莫單抗、omalizumab、oregovomab、帕利珠單抗、pemtumomab、pexelizumab、rhuMAb-VEGF、利妥昔單抗、沙妥莫單抗噴地肽、司韋單抗、siplizumab、托西莫單抗、I131托西莫單抗、曲妥單抗、妥韋單抗、visilizumab、他克林、美金剛、利凡斯的明、加蘭他敏、多奈哌齊、左乙拉西坦、瑞格列奈、阿伐他汀、alefacept、伐地那非、西地那非，以及伐昔洛韋。其它適宜于共價(jià)鏈接的藥劑包括，但不限于，阿德福韋、阿洛司瓊、氨磷汀、乙胺碘呋酮、氨基己酸、氨基馬尿酸鈉、氨魯米特、氨基乙酰丙酸、氨基水楊酸、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、阿立哌唑、天冬酰胺酶、蒽環(huán)霉素、貝沙羅汀、比卡魯胺、博來(lái)霉素、布舍瑞林、白消胺、卡麥角林、卡培他濱、碳鉑、卡莫司汀、氯氨布西(chlorambucin)、西拉司丁鈉、順鉑、克拉屈濱、氯膦酸鹽、環(huán)磷酰胺、環(huán)丙孕酮、阿糖胞苷、喜樹堿、13-順式視黃酸、全反式視黃酸；達(dá)卡巴嗪、放線菌素D、柔紅霉素、去鐵胺、地塞米松、雙氯芬酸、己烯雌酚、多西他賽、阿霉素、度他雄胺、表阿霉素、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、依澤替米貝、非索非那定、氟達(dá)拉濱、氟氫可的松、氟尿嘧啶、氟甲睪酮、氟他胺、磺達(dá)肝素、氟維司群、γ-羥基丁酸酯、吉西他濱、腎上腺素、L多巴、羥基脲、伊達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、伊馬替尼、伊立替康、伊曲康唑、戈舍瑞林、來(lái)曲唑、亞葉酸、左旋咪唑、賴諾普利、左旋甲狀腺素鈉、羅莫司汀、氮芥、甲孕酮、甲地孕酮、美法侖、巰基嘌呤、間羥胺酒石氫酸鹽、甲氨蝶呤、滅吐靈、美西律、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、納洛酮、尼古丁、尼魯米特、尼替西農(nóng)、奧曲肽、奧沙利鉑、帕米膦酸鹽、噴司他丁、普卡霉素、卟吩姆、強(qiáng)的松、丙卡巴肼、丙氯拉嗪、昂丹司瓊、帕洛諾司瓊、奧沙利鉑、雷替曲塞、西羅莫司、鏈佐星、他克莫司、吡美莫司、他莫西芬、替加色羅、替莫唑胺、替尼泊苷、睪酮、四氫大麻酚、沙利度胺、硫鳥嘌呤、塞替派、托泊替康、treprostinil、維甲酸、伐地考昔、塞來(lái)考昔、羅非考昔、戊柔比星、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春酰胺、長(zhǎng)春瑞濱、伏立康唑、多拉司瓊、格拉司瓊；福莫特羅、氟替卡松、亮丙立德、咪達(dá)唑侖、阿普唑侖、兩性霉素B、鬼臼毒素(podophylotoxins)、核苷類抗病毒劑、芳酰腙、舒馬曲坦、依來(lái)曲普坦、大環(huán)內(nèi)酯類例如紅霉素、竹桃霉素、醋竹桃霉素、羅紅霉素、克拉霉素、達(dá)發(fā)新紅霉素(davercin)、阿奇霉素、氟紅霉素、地紅霉素、交沙霉素、螺旋霉素、麥迪霉素、氯雷他定、地氯雷他定、吉他霉素、美奧卡霉素、洛他霉素、安達(dá)際霉素(andazithromycin)，以及swinolideA；氟喹諾酮類例如環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左氟沙星、曲伐沙星、阿拉曲沙星、莫西沙星、諾氟沙星、依諾沙星、格帕沙星、加替沙星、洛美沙星、司帕沙星、替馬沙星、培氟沙星、氨氟沙星、氟羅沙星、托氟沙星、普盧利沙星、依洛沙星、帕珠沙星、克林沙星，以及西他沙星；氨基糖甙類例如慶大霉素、奈替米星、草履蟲素、妥布霉素、阿米卡星、卡那霉素、新霉素，以及鏈霉素、萬(wàn)古霉素、替考拉寧、雷莫拉寧(rampolanin)、麥地拉寧、多粘菌素E、達(dá)托霉素、短桿菌肽、多粘菌素E(colistimethate)；多粘菌素類(polymixins)例如多粘菌素B(polymixinsB)、卷曲霉素、桿菌肽、青霉烯類；青霉素類包括對(duì)青霉素酶敏感的藥劑，例如青霉素G、青霉素V；抗青霉素酶的藥劑，例如甲氧苯青霉素、苯唑青霉素、鄰氯青霉素、雙氯青霉素、氟氯青霉素、萘夫西林；格蘭氏陰性的微生物活性劑，例如氨芐青霉素、羥氨芐青霉素，以及海他西林、西林(cillin)，以及galampicillin；抗假單胞菌(antipseudomonal)青霉素，如卡比西林、替卡西林、阿洛西林、美洛西林，以及哌拉西林；頭孢菌素類如頭孢泊肟、頭孢羅齊、頭孢布坦、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢噻吩、頭孢吡硫、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢西丁、頭孢羥唑、頭孢唑啉、頭孢噻啶、頭孢克洛、頭孢羥氨芐、頭孢格來(lái)星、頭孢氨呋肟、頭孢雷特、頭孢噻肟、頭孢曲嗪、頭孢乙氰、頭孢吡肟、頭孢克肟、頭孢尼西、頭孢哌酮、頭孢替坦、頭孢美唑、頭孢他啶、氯拉卡比，以及拉氧頭孢、單菌霉素類如菌克單；以及碳青霉烯類例如伊米配能、美洛培南，以及厄他培南(ertapenem)、依西酸噴他脒、硫酸沙丁胺醇、利多卡因、硫酸奧西那林、倍氯米松雙丙酸酯(beclomethasone diprepionate)、確炎舒松乙酰胺、布地奈德丙酮化物(budesonide acetonide)、氟替卡松、異丙托溴銨、氟尼縮松、色甘酸鈉，以及酒石酸麥角胺；紫杉烷類例如紫杉醇；SN-38、以及tyrphostines。與本文所述聚合物偶聯(lián)的優(yōu)選小分子是含有至少一個(gè)天然存在的氨基或羥基的那些分子。優(yōu)選的是含有氨基的分子包括氨基馬尿酸鈉、兩性霉素B、阿霉素、氨基己酸、氨基酮戊酸、氨基水楊酸、間羥胺酒石酸氫鹽、帕米膦酸鈉、道諾霉素、左旋酒石酸鈉、賴諾普利、西拉司丁鈉、美西律、頭孢氨芐、甲磺酸去鐵胺以及阿米斯丁。用于與本文所述聚合物偶聯(lián)的優(yōu)選的肽或蛋白包括EPO(紅細(xì)胞生成素)、IFN-α、 IFN-β、復(fù)合IFN、因子VIII、因子IX、GCSF、GMCSF、hGH、胰島素、FSH以及PTH?？蛇m用時(shí)，上述典型的生物活性劑意在包括其類似物、激動(dòng)劑、拮抗劑、抑制劑、異構(gòu)體和藥學(xué)上可接受的鹽等形式。至于肽和蛋白，本發(fā)明意在包括合成的、重組的、天然的、糖基化和非糖基化的形式，及其生物活性片段。本發(fā)明尤為優(yōu)選的活性劑包括EPO(紅細(xì)胞生成素)或任何具有紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑活性的藥理活性劑。具有紅細(xì)胞生成素活性的活性劑包括文獻(xiàn)中所述的那些活性劑，例如，美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2002/0081734、國(guó)際公開號(hào)WO96/40749和美國(guó)專利第5,106,954、6,642,353、6,048,971、5,986,047，以及5,888,772號(hào)。確定任何特定的活性劑是否具有紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑活性可以用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。例如，如美國(guó)專利申請(qǐng)公開2002/0081734中所解釋的，紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑活性的測(cè)定可在擬使用的活性劑與人體細(xì)胞系TF-1接觸時(shí)，通過(guò)測(cè)量在含10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)的依賴EPO的該細(xì)胞系的增長(zhǎng)(若有的話)來(lái)確定。見Kitamura等(1989)Blood73375-380。誘導(dǎo)這些細(xì)胞增殖的活性劑是具有紅細(xì)胞生成活性的藥劑。當(dāng)然，用于確定一種活性劑是否具有紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑活性的其它方法也可以使用。紅細(xì)胞生成素(或具有紅細(xì)胞生成素激動(dòng)劑活性的任何肽活性劑)優(yōu)選是以重組方式生產(chǎn)，盡管其它的方法(尤其是用于小型肽)，例如Merrifield(1963)J.Am.Chem.Soc.852149一文中所述的固相合成技術(shù)也可以使用。尤為優(yōu)選的是，按照本發(fā)明所使用的活性劑是人的、重組紅細(xì)胞生成素。至于聚合物，只要該聚合物是非抗原性和非致免疫性的，任何聚合物均可以使用。尤其是，對(duì)于較大的活性劑(例如蛋白)，優(yōu)選的是綴合物內(nèi)的聚合物為水溶性的。對(duì)于較小的活性劑(通常是非肽活性劑)，綴合物內(nèi)的聚合物可以是水溶性的，也可以是非水溶性的。然而，對(duì)于與綴合物有關(guān)的聚合物，該聚合物通常是非肽的。盡管優(yōu)選的是聚(乙二醇)，但適用于本申請(qǐng)的聚合物可以是，例如，其它水溶性(聚亞烷基二醇)、乙二醇和丙二醇的共聚物等、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羥基烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羥基烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖類)、聚(α-羥酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉、聚(N-丙烯酰嗎啉)，如美國(guó)專利第5,629,384號(hào)所述，以及前述任何物質(zhì)的共聚物、三元共聚物、非無(wú)規(guī)嵌段聚合物和無(wú)規(guī)嵌段聚合物。而且，盡管用于第一組綴合物的聚合物優(yōu)選與用于第二組的聚合物具有相同的類型(例如線性、支化、分叉等等)，但該組合物也可包括其中各組聚合物不同的情況。例如，聚(乙二醇)類聚合物可用于第一組和第二組各綴合物。另外，也可在該組合物中將聚(乙二醇)聚合物類型聚合物用于某一組，而將乙二醇和丙二醇的共聚物用于另一組。此外，聚合物往往是線性的，但也可以是其它形式(例如支化、分叉等等)，正如下文中將詳述的。在存在于整體結(jié)構(gòu)中的情況下，水溶性聚合物鏈段具有1至約300個(gè)終端。除了上述形式的聚合物之外，在聚合物中聚合物也可含有一個(gè)或多個(gè)弱鍵或可降解的鍵。例如，可將聚(乙二醇)(“PEG”)制備成使該聚合物中含有易水解的酯鍵。如下所示，此水解導(dǎo)致聚合物解離為分子量較低的片段適用作聚合物內(nèi)可降解鍵的其它可以水解方式降解的鍵包括碳酸酯鍵；如胺和醛反應(yīng)而形成的亞胺鍵(可參閱Ouchi等，(1997)Polymer preprints38(1)582-3)；如醇與磷酸基反應(yīng)而形成的磷酸酯鍵；通常由酰肼和醛反應(yīng)而形成的腙鍵；通常由醛和醇反應(yīng)而形成的縮醛鍵；例如，由甲酸酯和醇反應(yīng)而形成的原酸酯鍵；例如，由位于一種聚合物如PEG末端的胺基和另一個(gè)PEG鏈上的羧基所形成的酰胺鍵；例如，由帶有一個(gè)終端異氰酸酯基的PEG和PEG醇反應(yīng)而形成的氨基甲酸乙酯鍵；例如，由位于一種聚合物如PEG末端的胺基和肽的羧基所形成的肽鍵；以及如一種聚合物末端的氨基亞磷酸酯基和低聚核苷酸5’端羥基所形成的低聚核苷酸鍵。該聚合物通常是生物相容的和非致免疫性的。關(guān)于生物相容性，如果與某種物質(zhì)單獨(dú)或與另一種物質(zhì)(例如活性劑)一起用于活組織(例如給患者施用)，經(jīng)臨床工作人員例如醫(yī)師評(píng)估，所產(chǎn)生的有益作用超過(guò)其任何有害作用，則該物質(zhì)就被認(rèn)為是生物相容的。關(guān)于非致免疫性，如果某種物質(zhì)單獨(dú)或與另一種物質(zhì)一起用于活組織，未產(chǎn)生某種免疫反應(yīng)(例如抗體形成)，或如果產(chǎn)生了某種免疫反應(yīng)，但這種反應(yīng)經(jīng)臨床工作人員評(píng)估，不認(rèn)為具有臨床意義或是重要的，則該物質(zhì)就被認(rèn)為是非致免疫性的。由于它的水溶性、非致免疫性和生物相容性，聚(乙二醇)是用于本文所述組合物每一組聚合物-活性劑綴合物中的優(yōu)選聚合物。從結(jié)構(gòu)上說(shuō)，聚(乙二醇)是一種每端以羥基封端的線性聚合物HO-CH2CH2O-(CH2CH2O)m’-CH2CH2-OH其中(m′)是代表重復(fù)單體數(shù)目的正整數(shù)(通常為約2至約4000)。方便的是，聚(乙二醇)可簡(jiǎn)寫為“PEG”，無(wú)論何時(shí)當(dāng)結(jié)構(gòu)式中有“PEG”出現(xiàn)時(shí)，都假設(shè)以下結(jié)構(gòu)可適用-CH2CH2O-(CH2CH2O)m’-CH2CH2-
其中(m′)如上所定義。此外，該聚合物可具有以較為惰性的基團(tuán)例如烷氧基封端的一個(gè)或多個(gè)的末端。因此，如上面所示的線性聚(乙二醇)可具有以較為惰性的甲氧基封端的末端。該“甲氧基-聚(乙二醇)”的結(jié)構(gòu)如下CH3O-CH2CH2O-(CH2CH2O)m’-CH2CH2-OH其中(m′)如上所定義。除烷基之外的其它封端基團(tuán)也是可能的。代表性封端部分包括選自以下一組的那些烷氧基、取代的烷氧基、烯氧基、取代的烯氧基、炔氧基、取代的炔氧基、芳基氧基、取代的芳基氧基以及羥基。優(yōu)選的封端基團(tuán)選自烷氧基(例如甲氧基)和羥基。如先前所述，本發(fā)明的組合物包括第一組和第二組綴合物。任一特定組的綴合物均可使用本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所知的任何技術(shù)來(lái)制備。然而，通常允許一種聚合物與一種活性劑在適合于綴合的條件下發(fā)生反應(yīng)。盡管前述聚合物都可與一定的活性劑發(fā)生反應(yīng)，但常用含有與反應(yīng)基團(tuán)連接的聚合物的聚合物試劑。這類聚合物試劑的應(yīng)用，提供了一種把聚合物與活性劑連接從而形成聚合物-活性劑綴合物的方便手段。使這些聚合物試劑與活性劑綴合的代表性聚合物試劑和方法在本領(lǐng)域中是已知的，并且在“官能化聚乙二醇在多肽修飾方面的應(yīng)用”一文[Zalipsky等，“Use of Functionalized Poly(Ethylene Glycols)for Modification of Polypeptides”in Polyethylene Glycol ChemistryBiotechnical and Biomedical Applications，J.M.Harris，Plenus Press，New York(1992)]，以及Zalipsky(1995)Advanced Drug Reviews16157-182中有進(jìn)一步闡述。方便地是，許多聚合物試劑可從NektarTherapeutics公司(Huntsville，AL)購(gòu)得。這些以及其它聚合物試劑更詳述如下。聚合物試劑的反應(yīng)基可以是適合與活性劑反應(yīng)的任何基團(tuán)。通常，反應(yīng)基含有一個(gè)親電子基或親核基，其允許活性劑在共價(jià)偶聯(lián)條件下發(fā)生共價(jià)連接。這類與聚合物試劑結(jié)合的反應(yīng)基實(shí)例包括，但不限于選自下列一組基團(tuán)的那些反應(yīng)基羥基(-OH)、酯、原酸酯、碳酸酯、縮醛、醛、醛水合物、酮、酮水合物、硫酮、硫酮水合物、半酮縮醇、硫取代的半酮縮醇、酮縮醇、鏈烯基、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、砜、胺、酰肼、硫醇、硫醇水合物、羧酸、異氰酸酯、異硫氰酸酯、馬來(lái)酰亞胺 琥珀酰亞胺 苯并三唑 乙烯基砜、氯乙基砜、二硫代吡啶、乙烯基吡啶、碘乙酰胺、環(huán)氧化物、乙二醛類、二酮類、甲磺酸酯類、甲苯磺酸酯類、硫代磺酸酯、三氟乙磺酸酯、硅烷，及其被保護(hù)或活化形式。關(guān)于活性劑，為聚合物試劑的反應(yīng)基提供共價(jià)鏈接點(diǎn)的優(yōu)選基團(tuán)包括氨基(優(yōu)選的是伯氨基)、羧酸和硫醇。當(dāng)該活性劑是肽時(shí)，肽的N-端可提供一個(gè)適宜的氨基，而肽的C-端可提供一個(gè)適宜的羧基，以便與聚合物試劑發(fā)生反應(yīng)。一個(gè)適當(dāng)?shù)陌被部膳c該肽中任何賴氨酸殘基側(cè)鏈上的氨基連接。肽的組氨酸殘基側(cè)鏈也可用作為一個(gè)連接點(diǎn)。相似地，含半胱氨酸的肽側(cè)鏈上的硫醇基團(tuán)也可使用。此外，與活性劑的碳水化合物部分(例如在某些肽的糖基化形式中)相連的其它基團(tuán)也可用于與聚合物試劑形成綴合物?，F(xiàn)將典型的聚合物試劑進(jìn)一步詳述如下。典型的聚合物試劑包括那些其中反應(yīng)基是親電子體的聚合物試劑。這種“親電子型活化”的聚合物試劑能與某些活性劑中發(fā)現(xiàn)的胺(例如在賴氨酸殘基中)反應(yīng)。適用于與某些活性劑相連的可利用胺形成共價(jià)鍵的特定聚合物試劑的非限制性實(shí)例，包括mPEG-琥珀酰亞胺基丙酸酯(如美國(guó)專利第5,672,662號(hào)中所述)、mPEG-琥珀酰亞胺基丁酸酯(如美國(guó)專利第5,672,662號(hào)中所述)、mPEG-苯并三唑碳酸酯(如美國(guó)專利第5,650,234號(hào)中所述)、mPEG-丙醛(如美國(guó)專利第5,824,784號(hào)中所述)、mPEG-乙醛(如美國(guó)專利第5,990,237號(hào)中所述)。所有這些均可從Nektar Therapeutics公司(Huntsville，AL)購(gòu)得。作為參考，每種衍生物的實(shí)例如下所示 mPEG-琥珀酰亞胺基丙酸酯； mPEG-琥珀酰亞胺基丁酸酯； mPEG-苯并三唑碳酸酯； mPEG-丙醛；以及 mPEG-乙醛二乙基縮醛。
其中(n)代表環(huán)氧乙烷單體的重復(fù)次數(shù)。含有酮、酮水合物、半酮縮醇以及酮縮醇的聚合物試劑(及其對(duì)應(yīng)的硫代形式)也可用于與胺的綴合反應(yīng)。這些聚合物衍生物一個(gè)特別的優(yōu)點(diǎn)是它們的相對(duì)穩(wěn)定性(至少與對(duì)應(yīng)的醛形式相比)，使得能夠進(jìn)行更特異性和更為定向的綴合反應(yīng)。親電子型活化的聚合物的支化形式也是已知的，例如“mPEG2-N-羥基琥珀酰亞胺”和“mPEG2-乙醛”，如下所示 mPEG2-N-羥基琥珀酰亞胺；以及
mPEG2-乙醛。
其中(n)代表環(huán)氧乙烷單體的重復(fù)次數(shù)。同樣，諸如“mPEG2-N-羥基琥珀酰亞胺”和“mPEG2-乙醛”之類的試劑，也可從Nektar Therapeutics公司(Huntsville，AL)購(gòu)得?？墒褂貌捎靡阎磻?yīng)條件的常規(guī)偶聯(lián)反應(yīng)以便使聚合物試劑與活性劑綴合。有關(guān)文獻(xiàn)和本文援引的許多文章、專利及專利公開書中闡述了這類反應(yīng)和條件。有一種方法其特點(diǎn)是還原性氨基化反應(yīng)，例如用于使伯胺與以酮或醛官能化的聚合物發(fā)生綴合。在這一方法中，活性劑的伯胺與醛或酮的羰基發(fā)生反應(yīng)而形成席夫堿。然后，依次，席夫堿在氫硼化鈉存在條件下可還原轉(zhuǎn)化為一種穩(wěn)定的綴合物。在較低的pH值條件下，有可能在N-端發(fā)生選擇性反應(yīng)。這樣，有可能生成某些特殊的綴合物(例如含有以共價(jià)鍵連接的一至三種水溶性聚合物的綴合物)。與活性劑中除胺之外的基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)的其它聚合物試劑也是可利用的。例如，如果該聚合物試劑是以羥基在末端實(shí)現(xiàn)官能化或“活化的”，則通過(guò)該末端是羥基的聚合物試劑與一種含有羧酸基的活性劑反應(yīng)即可形成一個(gè)酯鍵。而且，如果該聚合物試劑是以硫醇基實(shí)現(xiàn)官能化的，則將在該聚合物試劑的硫醇基和含有羧酸基的活性劑之間形成一個(gè)硫酯鍵。其它聚合物試劑包括那些含有酰肼部分的聚合物試劑。這類含酰肼的聚合物試劑也可用于與活性劑中任何可利用的羧基發(fā)生綴合。這類聚合物試劑的實(shí)例包括具有以下結(jié)構(gòu)的聚合物試劑 其中的POLY代表一種聚合物。與活性劑中(例如半胱氨酸殘基中)巰基發(fā)生反應(yīng)的聚合物試劑是已知的。適用于與某些活性劑有關(guān)的可利用的硫醇基形成共價(jià)鍵的特定聚合物試劑的非限制性實(shí)例包括N-馬來(lái)酰亞胺基聚合物試劑，如美國(guó)專利第5,739,208號(hào)和國(guó)際專利公開書WO01/62827中所述。用于本發(fā)明這一具體實(shí)施方案的典型的硫氫基選擇性PEG包括mPEG-分叉的馬來(lái)酰亞胺[mPEG(MAL)2]、mPEG2-分叉的馬來(lái)酰亞胺[mPEG2(MAL)2]、mPEG馬來(lái)酰亞胺(mPEG-MAL)，以及mPEG2-馬來(lái)酰亞胺(mPEG2-MAL)。所有這些均可從Nektar Therapeutics公司(Huntsville，AL)購(gòu)得。這些活化PEG的結(jié)構(gòu)分別如下所示mPEG-CONHCH[(CH2CONH(CH2CH2O)2CH2CH2-MAL]2；mPEG2-賴氨酸-NH-CH[CH2CONH(CH2CH2O)2CH2CH2-MAL]2，mPEG-MAL；以及mPEG2-賴氨酸-NH-CH2CH2NHC(O)CH2CH2MAL，其中mPEG是單甲氧基PEG，賴氨酸是氨基酸賴氨酸，且MAL代表馬來(lái)酰亞胺，即， 傳統(tǒng)上稱為“硫醇選擇性”聚合物的其它聚合物試劑適合于與硫醇基發(fā)生反應(yīng)，并在國(guó)際公開書WO04/63250中有所闡述。雖然在兩組綴合物中用于形成綴合物的該聚合物試劑(并可引伸至所生成的聚合物-活性劑綴合物中的聚合物)其重均分子量可以處于幾乎任何范圍(只要與各組有關(guān)的聚合物具有不同的重均分子量)，但該重均分子量通常是在以下一個(gè)或數(shù)個(gè)范圍內(nèi)約50道爾頓至約130,000道爾頓；約100道爾頓至約100,000道爾頓；約500道爾頓至約80,000道爾頓；約l,000道爾頓至約50,000道爾頓；約2,000道爾頓至約25,000道爾頓；以及約5,000道爾頓至約20,000道爾頓。典型的重均分子量包括約100道爾頓、約200道爾頓、約300道爾頓、約400道爾頓、約500道爾頓、約600道爾頓、約700道爾頓、約750道爾頓、約800道爾頓、約900道爾頓、約1,000道爾頓、約2,000道爾頓、約2,500道爾頓、約3,000道爾頓、約4,000道爾頓、約5,000道爾頓、約6,000道爾頓、約7,000道爾頓、約7,500道爾頓、約8,000道爾頓、約9,000道爾頓、約10,000道爾頓、約11,000道爾頓、約12,000道爾頓、約12,500道爾頓、約15,000道爾頓、約20,000道爾頓、約25,000道爾頓、約30,000道爾頓、約40,000道爾頓、約50,000道爾頓、約60,000道爾頓、約70,000道爾頓、約75,000道爾頓、約80,000道爾頓、約85,000道爾頓、約90,000道爾頓、約100,000道爾頓，以及約120,000道爾頓。雖然已經(jīng)敘述了許多聚合物試劑的實(shí)例，但仍還有其它聚合物試劑可供利用，以形成聚合物-活性劑綴合物。因此，本發(fā)明不限于由現(xiàn)述的聚合物試劑所形成的聚合物-活性劑綴合物。此外，由于可能分子量范圍非常廣，故本發(fā)明不限于任何特定的重均分子量。為了形成每一組聚合物-活性劑綴合物，可讓一種適宜的聚合物試劑與活性劑接觸。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員知道或者能夠通過(guò)常規(guī)的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，任何一種特定的聚合物試劑是否適用于與一種特定的活性劑形成綴合物。例如，含有一個(gè)或多個(gè)胺基的活性劑將與如上所述載有親電子基的聚合物試劑發(fā)生反應(yīng)。此外，也可以直接讓擬議中的聚合物試劑與該活性劑接觸，并讓反應(yīng)混合物通過(guò)一個(gè)尺寸排阻柱來(lái)確定綴合是否實(shí)現(xiàn)；既含有聚合物又含有活性劑的尺寸較大的綴合物將在非綴合聚合物試劑和活性劑之前被洗脫。在選定形成一組所需綴合物的聚合物試劑和活性劑之后，通常以等摩爾量(相對(duì)于適合于與反應(yīng)基反應(yīng)的基團(tuán)所需的數(shù)量)或以過(guò)量摩爾量將聚合物試劑加入活性劑中。例如，可以約1∶1(聚合物∶活性劑)、1.5∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、8∶1、10∶1、20∶1或40∶1等各種摩爾比率，將聚合物試劑加入目標(biāo)活性劑中。應(yīng)讓綴合反應(yīng)一直進(jìn)行至基本上不再有綴合發(fā)生為止。一般可通過(guò)監(jiān)測(cè)反應(yīng)隨時(shí)間的進(jìn)展來(lái)確定這一點(diǎn)。反應(yīng)的進(jìn)展可通過(guò)在不同的時(shí)間點(diǎn)取出等量的反應(yīng)混合物，并以SDS-PAGE或MALDI-TOF質(zhì)譜法、高效液相色譜法(HPLC)，或其它任何適當(dāng)?shù)姆治龇椒▉?lái)分析反應(yīng)混合物而加以監(jiān)測(cè)。所形成綴合物的量被或未綴合的聚合物試劑剩余的量一旦達(dá)到平態(tài)，則認(rèn)為反應(yīng)已經(jīng)完全。通常，綴合反應(yīng)進(jìn)行大概幾分鐘乃至幾小時(shí)(例如從5分鐘至24小時(shí)或更長(zhǎng))。生成的每一組聚合物-活性劑綴合物的組優(yōu)選(但并非必須)加以純化，以便分離出過(guò)量的試劑、未綴合的反應(yīng)物(例如活性劑)，不需要的多重綴合物以及游離的或未反應(yīng)的聚合物試劑。生成的每一組綴合物也可采用諸如MALDI、毛細(xì)管電泳法、凝膠電泳法和/或色譜法等分析方法加以進(jìn)一步表征。為了達(dá)到預(yù)期的結(jié)果，可以修改綴合反應(yīng)的條件。例如，調(diào)節(jié)反應(yīng)介質(zhì)的pH值往往會(huì)對(duì)聚合物試劑和活性劑之間的反應(yīng)性產(chǎn)生影響，從而可以調(diào)節(jié)與活性劑連接的聚合物數(shù)量。例如，含醛的聚合物試劑可與某種肽在pH值7.5條件下發(fā)生反應(yīng)，使得主要產(chǎn)物為三種聚合物分別與單一活性劑連接的綴合物。然而，同樣的含醛的聚合物試劑和肽在pH值6.5條件下綴合主要形成與該肽連接的單一聚合物。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過(guò)在某個(gè)條件范圍(例如某個(gè)pH值條件范圍)內(nèi)進(jìn)行任何特定的綴合反應(yīng)，即可確定這種選擇性，并確定哪些條件能夠產(chǎn)生期望的結(jié)果(例如與期望數(shù)量的活性劑連接的聚合物的期望數(shù)量)。對(duì)于任何特定組的聚合物-活性劑綴合物，該綴合物都可加以純化，以獲得或分離出不同類型的綴合物。或者，而且對(duì)于分子量較低(例如低于約20,000道爾頓，更優(yōu)選的是低于約10,000道爾頓)的聚合物而言，更優(yōu)選的是該組聚合物-活性劑綴合物可加以純化，以獲得每個(gè)活性劑的聚合物分布。例如，每一組都可加以純化，以獲得每一個(gè)活性劑(例如蛋白)與平均大概一至五個(gè)PEG連接，通常為每一個(gè)活性劑(例如蛋白)與平均約一至三個(gè)PEG連接。最終的綴合反應(yīng)混合物的純化策略將取決于一系列因素，包括例如所用聚合物試劑的分子量、具體的活性劑、所需的給藥方案，以及個(gè)體綴合物的殘余活性和活體內(nèi)特性。雖然優(yōu)選的是使單一聚合物與單一活性劑連接，但含有與一種或多種活性劑連接的一種或多種聚合物的其它綴合物也是可能的。此外，組合物中每一組可含有與不同數(shù)目活性劑連接的不同數(shù)目的聚合物(例如一種組合物，其包含的第一組含有與一種活性劑單一連接和雙重連接的聚合物混合物，第二組基本上只含有與單一活性劑單一連接的聚合物)。表1列出了適合于組合物中任何一組的典型綴合物。
表1含有典型的聚合物數(shù)目對(duì)活性劑數(shù)目的綴合物 如果需要，具有不同分子量(因連接的聚合物數(shù)量不同)的任一特定組的綴合物均可以采用色譜法或其它非樹脂分離技術(shù)(例如滲濾、膜濾等)加以分離。也就是說(shuō)，根據(jù)綴合物的不同分子量(該差別基本上對(duì)應(yīng)于水溶性聚合物鏈段的平均分子量)，可采用凝膠過(guò)濾色譜法以及其它技術(shù)來(lái)分級(jí)分離聚合物對(duì)活性劑的比例不同數(shù)目的綴合物(例如1-mer，2-mer，3-mer等，其中“1-mer”表示一個(gè)聚合物對(duì)一個(gè)活性劑，“2-mer”表示兩個(gè)聚合物對(duì)活性劑，依此類推)。例如，在一種典型的反應(yīng)中，一種分子量為100,000道爾頓的蛋白與一種分子量為約20,000道爾頓的PEG鏈烷酸隨機(jī)地發(fā)生綴合，生成的反應(yīng)混合物很可能含有未修飾的蛋白(分子量為100,000道爾頓)、單PEG化蛋白(分子量為120,000道爾頓)、雙PEG化蛋白(分子量為140,000道爾頓)，等等。雖然這種方法可用于分離具有不同分子量的PEG和其它聚合物-活性劑綴合物，但這種方法對(duì)于分離蛋白內(nèi)具有不同聚合物連接點(diǎn)的位置異構(gòu)體一般是無(wú)效的。例如，凝膠過(guò)濾色譜法可用于將PEG 1-mers、2-mers、3-mers等的混合物相互分離，盡管每一種回收的PEG-mer組合物可能含有與活性劑內(nèi)不同反應(yīng)性氨基(例如賴氨酸殘基的ε-氨基)連接的PEG。適合于進(jìn)行這類分離的凝膠過(guò)濾柱包括SuperdexTM和SephadexTM柱，可從Amersham Biosciences(Piscataway，NJ)購(gòu)得。具體柱的選擇將取決于所需的分級(jí)分離范圍。通常使用適宜的緩沖劑，例如磷酸鹽、乙酸鹽等進(jìn)行洗脫。例如，所收集的級(jí)分可通過(guò)一系列不同的方法分析，例如，(i)于280nm測(cè)量光學(xué)密度(OD)，以確定蛋白含量，(ii)使用一種標(biāo)準(zhǔn)品如牛血清白蛋白(BSA)，進(jìn)行蛋白質(zhì)基于染料的分析，(iii)進(jìn)行碘試驗(yàn)以測(cè)定PEG含量[Sims等，(1980)Anal.Biochem，10760-63]，以及(iv)硫酸十二酯鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS PAGE)，隨之用碘化鋇進(jìn)行PEG的染色，用考馬斯或其它染料進(jìn)行肽的染色。也可以利用其它為本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所知的分離技術(shù)。位置異構(gòu)體的分離是以反相色譜法進(jìn)行的，采用一種反相高效液相色譜法(RP-HPLC)C18柱(Amersham Biosciences或Vydac)；或以離子交換色譜法進(jìn)行，采用一種離子交換柱，例如可從AmershamBiosciences購(gòu)得的SepharoseTM離子交換柱。任一種方法都可用于分離具有相同分子量的聚合物-活性劑異構(gòu)體(位置異構(gòu)體)。如先前所指出，本文所述的組合物包括兩組不同的聚合物-活性劑綴合物，其中這兩組之間的區(qū)別在于聚合物的重均分子量。因此，本發(fā)明的組合物可通過(guò)以下方法形成(a)制備通過(guò)使具有一定重均分子量的聚合物試劑反應(yīng)而形成的第一組綴合物；(b)制備通過(guò)使具有一定重均分子量的聚合物試劑反應(yīng)而形成的第二組綴合物，該聚合物試劑的重均分子量與步驟(a)中的聚合物試劑重均分子量不同；以及(c)將第一組和第二組合并而形成一種組合物。本發(fā)明的組合物也可用“一釜”合成法來(lái)制備。在這一方法中，綴合物是由一種活性劑和兩種聚合物試劑結(jié)合而形成的，每種聚合物試劑具有不同的重均分子量。通常，在這一方法中，每種聚合物試劑的反應(yīng)基將完全相同。此外，每種聚合物試劑中的聚合物通常也是相同的(例如PEG)，但每種聚合物將具有不同的重均分子量。無(wú)論在其形成時(shí)采用何種方法，都可采用各種常規(guī)技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)一個(gè)任選的混合組合物，以形成一種基本上均勻的混合物的步驟。至于涉及兩組不同綴合物的各自形成方法，優(yōu)選是將該任選的混合第一組和第二組聚合物-活性劑的步驟包括在內(nèi)，以形成一種基本上均勻的混合物。出于某種特定目的(如迅速開始或持久作用)的每組有關(guān)的聚合物的具體重均分子量，將是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的，或無(wú)需過(guò)度的實(shí)驗(yàn)即可測(cè)定。例如，通過(guò)形成一系列的重均分子量較小(例如500、750、1,000、2,000、3,000、4,000及5,000)的綴合物，然后(例如通過(guò)向動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)象給藥)確定哪一種將產(chǎn)生期望的迅速開始效應(yīng)(例如從12小時(shí)至2天)，就可決定第一組聚合物-活性劑綴合物中適宜的聚合物尺寸。相似地，通過(guò)形成一系列各重均分子量較大(例如10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、100,000及120,000)的綴合物，然后(例如通過(guò)向動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)象給藥)確定哪一種將產(chǎn)生期望的持久活性(例如從4天至幾個(gè)星期)，就可決定綴合物中適宜的聚合物尺寸。然后，通過(guò)選擇(i)由較小重均分子量、經(jīng)發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生期望的迅速起效的聚合物之一形成的綴合物組，以及(ii)由較大重均分子量、經(jīng)發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生期望的持久作用的聚合物之一形成的綴合物組，可確定既能產(chǎn)生迅速起效又能產(chǎn)生持久作用所必需的所需組合。典型的重均分子量包括以下各范圍第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約50道爾頓至小于30,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于5,000道爾頓至小于約130,000道爾頓(其中每一組相關(guān)的聚合物的重均分子量是不同的)；第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于20,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于20,000道爾頓至約100,000道爾頓；第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約1,000道爾頓至約15,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于約25,000道爾頓至約50,000道爾頓；第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約2,500道爾頓至10,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于30,000道爾頓至40,000道爾頓；并且第一組中每種聚合物的重均分子量為約5,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為約30,000道爾頓至約40,000道爾頓。如果在兩組中都使用小分子作為活性劑，則重均分子量通常(盡管不必需如此)會(huì)更小。因此，小分子的重均分子量包括以下各典型范圍第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約50道爾頓至小于5,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于100道爾頓至小于約10,000道爾頓；第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于3,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于200道爾頓至小于約5,000道爾頓；第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約150道爾頓至小于1,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于500道爾頓至小于約3,000道爾頓，其中(對(duì)于每個(gè)實(shí)例)每一組相關(guān)的聚合物的重均分子量是不同的。此外，因?yàn)榕c每一不同組相關(guān)的重均分子量是不同的，故有可能以數(shù)字來(lái)表征這種區(qū)別。例如，5,000道爾頓聚合物-活性劑綴合物和30,000道爾頓聚合物-活性劑綴合物之間的絕對(duì)差為25,000道爾頓。第一組中聚合物重均分子量和第二組的重均分子量之間的典型絕對(duì)差包括以下范圍約500至約100,000；約2,000至約100,000；約10,000至約100,000；約20,000至約100,000；約30,000至約100,000；約20,000至約40,000；以及約25,000至約35,000。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，采用絕對(duì)差是為了消除進(jìn)行計(jì)算時(shí)和得到負(fù)值結(jié)果時(shí)的影響。組合物中的每一組也將與摩爾比率有關(guān)。第一和第二兩組聚合物-活性劑綴合物之間的典型摩爾比率包括以下范圍約1000∶1至約100∶1；約100∶1至約10∶1；約10∶1至約1∶1；約1∶1至約1∶10；約1∶10至約1∶100；以及約1∶100至約1∶1000。有利的是，可以調(diào)整第一組和第二組之間的特定比例，以發(fā)揮期望的藥物動(dòng)力學(xué)特性。例如，可以制備一種包含第一組與第二組之間最初比例為1∶1的組合物，并施用于試驗(yàn)對(duì)象，然后監(jiān)測(cè)該試驗(yàn)對(duì)象的藥理活性隨時(shí)間的變化。如果通過(guò)提供更多的迅速起作用的成分能夠更好地滿足臨床適應(yīng)癥，則可增加綴合物內(nèi)含有較小聚合物的組。此外，如果通過(guò)提供更多的持久作用的成分將能更好地滿足臨床適應(yīng)癥，則可增加綴合物內(nèi)含有較大聚合物的組。在另一種方法中，可以提供一系列各具有獨(dú)特比例的各組的組合物，并分別施用于不同的患者。監(jiān)測(cè)每名患者一段時(shí)間，并根據(jù)對(duì)顯示出最佳總體藥理反應(yīng)(如足夠的迅速起作用和持久活性所表現(xiàn)出的)的患者所給予的所選組合物，可確定最佳比例。這些方法和其它方法均可用于為任何特定的應(yīng)用優(yōu)化各組之間的最佳比例。對(duì)于擬用于皮下給藥和透皮給藥的聚合物-活性劑綴合物，本發(fā)明具有特別的適用性。這是由于包括治療劑分子大小等其它因素會(huì)影響皮下給藥和透皮給藥，因?yàn)槿魏卧噭┒急仨氊灤┢つw的幾個(gè)層才能達(dá)到全身循環(huán)系統(tǒng)。結(jié)果，分子尺寸的增大導(dǎo)致了皮下給藥和透皮給藥達(dá)到體內(nèi)循環(huán)的時(shí)間同時(shí)增加。因此，本文提供的組合物既可通過(guò)采用與第一組綴合物有關(guān)的較小(以產(chǎn)生較小綴合物)的、能更好地穿過(guò)皮膚層的聚合物，來(lái)產(chǎn)生較迅速的開始作用，又可采用與第二組綴合物有關(guān)的較大(以產(chǎn)生較大綴合物)的、需要更長(zhǎng)時(shí)間才能穿過(guò)皮膚層的聚合物，來(lái)產(chǎn)生更持久的作用。本發(fā)明也包括含有本文所述的組合物與藥物賦形劑的藥物制劑。因此，制備該組合物的方法包括一個(gè)添加一種藥學(xué)上可接受的賦形劑的任選步驟。通常，該組合物本身是一種固體形式(例如沉淀物)，它可與一種適宜的固體或液體形式的藥物賦形劑結(jié)合。例如，該組合物(以及對(duì)應(yīng)的藥物制劑)可以一種凍干或溶液的形式提供。典型的賦形劑包括但不限于選自下列一組的那些賦形劑碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽、抗微生物劑、抗氧化劑、表面活化劑、緩沖劑、酸、堿及其組合。碳水化合物例如糖、衍生糖例如糖醇、醛糖酸、酯化糖和/或糖聚合物均可作為賦形劑存在。具體的碳水化合物賦形劑包括，例如單糖(例如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等)；二糖(例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維素二糖等)；多糖(例如棉子糖、松三糖、麥芽糖糊精、葡聚糖、淀粉等)；以及糖醇(例如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇(葡萄糖醇)、吡喃山梨糖醇、肌醇等)。賦形劑也可包括無(wú)機(jī)鹽或緩沖劑，例如檸檬酸、氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、硝酸鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉及其組合。該制劑也可包括抗微生物劑，以預(yù)防或阻止微生物的生長(zhǎng)。適合于本發(fā)明的抗微生物劑的非限制性實(shí)例包括苯扎氯銨、苯索氯銨、芐醇、十六烷基氯化吡啶鎓、氯代丁醇、苯酚、苯乙醇、硝酸苯汞、硫柳汞及其組合。該制劑中也可存在抗氧化劑?？寡鮿┦怯糜诜乐寡趸?，從而防止該制劑的綴合物或其它組分的降解。適合用于本發(fā)明的抗氧化劑包括，例如，棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、次磷酸、一硫代甘油、沒(méi)食子酸丙酯、亞硫酸氫鈉、次硫酸甲醛鈉、偏亞硫酸氫鈉及其組合。表面活化劑可作為賦形劑存在。典型的表面活化劑包括聚山梨酯，例如“Tween 20”和“Tween 80”以及泊洛沙姆例如F68和F88(兩者均可從BASF，Mount Olive，New Jersey購(gòu)得)；山梨糖醇酐酯；類脂，例如卵磷脂和其它磷脂酰膽堿之類的磷脂、磷脂酰乙醇胺(盡管優(yōu)選不是脂質(zhì)體的形式)、脂肪酸和脂肪酯；類固醇，例如膽固醇；以及螯合劑，例如EDTA、鋅以及其它這類適合的陽(yáng)離子。酸或堿也可作為賦形劑存在于該制劑中?？杀皇褂玫乃岬姆窍拗菩詫?shí)例包括選自下列一組的那些酸鹽酸、乙酸、磷酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、甲酸、三氯乙酸、硝酸、高氯酸、磷酸、硫酸、富馬酸及其組合。適用的堿的實(shí)例包括但不限于選自下列一組堿的那些堿氫氧化鈉、乙酸鈉、氫氧化銨、氫氧化鉀、乙酸銨、乙酸鉀、磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉、甲酸鈉、硫酸鈉、硫酸鉀、富馬酸鉀及其組合。該藥物制劑包括所有各種類型的制劑，尤其是那些適宜于注射的制劑，例如可重新溶解的粉末以及懸浮液和溶液。組合物中綴合物(即本文中所述的活性劑和聚合物之間形成的綴合物)的含量將隨著一系列因素而變化，但當(dāng)該組合物儲(chǔ)存于單位劑量容器(例如小瓶)內(nèi)時(shí)，最好是治療有效量。此外，該藥物制劑也可儲(chǔ)存于注射器中。治療有效量可通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定，即反復(fù)給以增加劑量的該綴合物，以便確定哪種劑量能產(chǎn)生臨床期望的終點(diǎn)。該組合物中任何一種賦形劑的量將隨著該賦形劑的活性和組合物的特殊需要而變化。通常，任何個(gè)體賦形劑的最佳量是通過(guò)常規(guī)的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定的，即通過(guò)制備賦形劑含量不同(從低到高)的組合物，考查其穩(wěn)定性和其它參數(shù)，然后確定在哪一范圍可獲得最佳的表現(xiàn)而無(wú)明顯的不良作用。然而，該組合物中賦形劑的含量以重量計(jì)通常將是約1％至99％，優(yōu)選的是約5％-98％重量，更優(yōu)選的是約15％-95％重量的賦形劑，最優(yōu)選的是濃度低于30％重量。上述藥物賦形劑以及其它賦形劑在″RemingtonThe Science& Practice of Pharmacy″(《藥劑學(xué)科學(xué)與實(shí)踐》)，19thed.，Williams& Williams，(1995)、″the Physician′s Desk Reference″(《醫(yī)師參考手冊(cè)》)，52nded.，Medical Economics，Montvale，NJ(1998)，以及Kibbe，A.H.，Handbook of Pharmaceutical Excipients(醫(yī)藥賦形劑手冊(cè))，3rdEdition，American Pharmaceutical Association，Washington，D.C.，2000等文獻(xiàn)中均有闡述。本發(fā)明的藥物制劑通常(盡管并非必須)是通過(guò)注射方式給藥，故一般是在給藥前當(dāng)即配制的液體溶液或懸浮液。藥物制劑也可采取其它形式、例如糖漿、霜?jiǎng)?、凝膠劑、軟膏、片劑、粉末等等。其它給藥方式也包括在內(nèi)，例如經(jīng)肺、經(jīng)直腸、經(jīng)皮、經(jīng)粘膜、經(jīng)口、經(jīng)鞘內(nèi)、經(jīng)皮下、經(jīng)動(dòng)脈內(nèi)等等。有利的是，該藥物制劑(以及組合物)可以單位劑量的形式提供。此外，藥物制劑(以及組合物)可在小瓶(例如玻璃小瓶或塑料小瓶)內(nèi)使用，或在注射器內(nèi)使用以提供預(yù)填充注射器。如前所述，藥物制劑可經(jīng)腸胃外以靜脈內(nèi)注射的方式注射，或較不優(yōu)選的是采取肌肉內(nèi)或皮下注射的方式。適合于胃腸外給藥的制劑類型包括可供即可注射的溶液、在使用前與溶劑結(jié)合的干粉、即可注射的懸浮液、在使用前與載體結(jié)合的不溶性干組合物、乳液以及在給藥前稀釋的液體濃縮液，等等。通常，該制劑是以干(例如凍干)的形式提供以便儲(chǔ)存，并以適宜的液體稀釋劑重構(gòu)。首選的液體稀釋劑選自注射用抑菌水、5％葡萄糖水溶液、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液、鹽水溶液、無(wú)菌水、去離子水及其組合。本發(fā)明還包括一種產(chǎn)生活性最初開始和活性延遲開始的方法，該方法包括以下步驟(i)給患者施用第一組活性劑-聚合物綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物；以及(ii)給患者施用第二組活性劑-聚合物綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物，該分子量大于第一組中一種或多種聚合物的重均分子量。通常，第一組和第二組是同時(shí)施用的。通過(guò)施用如本文所述的藥物制劑可很方便地實(shí)現(xiàn)同時(shí)給藥。然而，也可能進(jìn)行第一組和第二組先后依次給藥，無(wú)論那組在先均可，或者中間停頓一定時(shí)間以確定患者是否對(duì)治療有反應(yīng)。在某些情況下，可能希望只施用兩組聚合物-活性劑綴合物的混合物作為初始劑量，隨后將給藥限制于例如與重均分子量較高有關(guān)的第二組活性劑-聚合物綴合物。因此，例如，本發(fā)明的組合物可被急救醫(yī)務(wù)人員在緊急情況下使用，而通過(guò)只在常規(guī)基礎(chǔ)上施用單一聚合物-活性劑組，來(lái)維持該聚合物-活性劑的治療水平。本發(fā)明還提供了一種給患者施用如本文所提供藥物制劑的方法，該患者患有對(duì)使用聚合物-活性劑綴合物的治療有反應(yīng)的病癥。該方法包括施用(通常是以注射方式)治療有效量的聚合物-活性劑綴合物(優(yōu)選的是作為藥物制劑的一部分而提供)。該施用方法可用于治療通過(guò)施用該聚合物-活性劑組合物可治療或預(yù)防的任何病癥。本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)那些普通技術(shù)人員應(yīng)能理解，哪些癥狀可用特定的聚合物-活性劑綴合物有效地治療。給藥的實(shí)際劑量將取決于給藥對(duì)象的年齡、體重、總的狀況、所治療病癥的嚴(yán)重性，醫(yī)護(hù)專業(yè)人員的判斷，以及所用的綴合物。治療有效量對(duì)于那些熟悉本技術(shù)的人士而言是眾所周知的和/或在有關(guān)參考書籍和文獻(xiàn)中有所闡述。通常，治療有效量的范圍為約0.001mg至100mg，優(yōu)選的劑量是0.01mg/日至75mg/日，更優(yōu)選的劑量是0.10mg/日至50mg/日。任何特定綴合物的單位劑量(同樣，優(yōu)選的是作為藥物制劑的一部分而提供)，可根據(jù)臨床工作人員的評(píng)斷、患者的需要等等，按照不同的給藥方案加以施用。具體的給藥方案將為本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)那些普通技術(shù)人員所熟知，或可以常規(guī)方法通過(guò)實(shí)驗(yàn)加以確定。典型的給藥方案包括但不限于，每天給藥5次、每天4次、每天3次、每天2次、每天1次、每星期3次，每星期2次，每星期1次，每月2次、每月一次，及其任何組合。一旦達(dá)到臨床終點(diǎn)，即停止該組合物的給藥。當(dāng)綴合物含有可從治療劑上解離的聚合物時(shí)，則該組合物的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，作為聚合物與綴合物其余部分解離時(shí)尺寸減小的結(jié)果，能夠使較大的聚合物從身體內(nèi)被清除的能力。最理想的是，通過(guò)使用在生理?xiàng)l件下可發(fā)生解離和/或酶降解的鍵，例如氨基甲酸乙酯、酰胺、碳酸酯或含酯鍵，可促進(jìn)每個(gè)聚合物的解離。這樣，通過(guò)選擇聚合物分子的大小和將提供所需清除特性的官能團(tuán)類型，可調(diào)節(jié)綴合物的清除率(通過(guò)個(gè)體聚合物的解離)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠確定適宜的聚合物分子大小以及可解離的官能團(tuán)。例如，本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員，采用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)，首先制備一系列含有不同聚合物重量和可解離官能團(tuán)的綴合物，然后通過(guò)給患者給予該聚合物衍生物并定期采取血樣和/或尿樣而獲得清除曲線(例如通過(guò)定期采取血樣或尿樣)，可確定適宜的聚合物分子尺寸以及可解離官能團(tuán)。一旦獲得所測(cè)試的每種綴合物的一系列的清除曲線，可鑒別適宜的綴合物。應(yīng)當(dāng)理解，盡管結(jié)合某些優(yōu)選的具體實(shí)施方案已經(jīng)說(shuō)明了本發(fā)明，但前面的說(shuō)明以及隨后的實(shí)驗(yàn)部分，都是企圖說(shuō)明而不是限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明范圍內(nèi)的其它方面、優(yōu)點(diǎn)以及修改，對(duì)于那些熟悉本發(fā)明相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員而言將是顯而易見的。
實(shí)驗(yàn)本發(fā)明的實(shí)施，除非另行指出，將采用有機(jī)合成的常規(guī)技術(shù)及類似技術(shù)，這類技術(shù)可為本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所理解，并在文獻(xiàn)中有所闡述。在以下實(shí)施例中，已做出許多努力以保證所用的有關(guān)數(shù)字的準(zhǔn)確性(例如劑量、溫度等)，但一定的實(shí)驗(yàn)誤差和偏差也應(yīng)考慮在內(nèi)。以下預(yù)言的每個(gè)實(shí)施例提供了相對(duì)于先前技術(shù)意料之外的益處。
實(shí)施例1按照EP 1 333 036中實(shí)施例8制備了第一組線性單PEG綴合rhEPO的綴合物。此第一組組合物中綴合物的聚合物部分的重均分子量為5,000道爾頓。按照EP 1 333 036中的實(shí)施例8制備了第二組線性單PEG綴合rhEPO的綴合物。但此第二組組合物中綴合物的聚合物部分的重均分子量為30,000道爾頓。然后合并第一組和第二組并充分混合。按照EP 1 333 036中實(shí)施例11中所述的方案，分別給大鼠給予第一組、第二組以及合并的混合物。簡(jiǎn)而言之，用含有0.05％大鼠血清白蛋白和0.05％Tween 20的生理鹽水將第一組、第二組以及合并的混合物稀釋至2.5μg/mL(假設(shè)合并的混合物中第一組綴合物與第二組綴合物的比例為1∶1)。以單尾注射2mL/kg的方式給每組大鼠分別注射第一組和第二組和合并的混合物。于給藥后第1、2、4、5、7、10、15、21、29及35天，從每組的每只大鼠(通過(guò)從尾靜脈抽血)抽取血樣。測(cè)試每個(gè)血樣的網(wǎng)狀細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白水平。每組的近似和預(yù)期平均值如圖1(網(wǎng)狀細(xì)胞計(jì)數(shù))和圖2(血紅蛋白水平)所示。從圖1和圖2可見，與單獨(dú)給藥的任一組比較，合并的PEG-EPO綴合物的混合物產(chǎn)生了相對(duì)更快的開始作用與較持久的作用。
實(shí)施例2現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，含有單一組干擾素綴合物(與單一干擾素連接的單一聚合物)的第一組合物具有較迅速的開始作用(例如約5小時(shí))，正如其Tmax(即給藥后藥劑達(dá)到其最高濃度的時(shí)間的量)所證明，其中該聚合物(PEG)具有較小的重均分子量(例如約5,000道爾頓)。現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，含有單一組干擾素綴合物(與單一干擾素連接的單一聚合物)的第二組合物具有較長(zhǎng)的開始作用(例如約96小時(shí))，正如其Tmax所證明，其中該聚合物(PEG)具有較大的重均分子量(例如約40,000道爾頓)。將該兩個(gè)聚合物干擾素組的各組合并充分混合，以形成由不同的組組成的單一組合物。經(jīng)皮下向患者給藥后，預(yù)期該單一組合物將很快地提供較高水平的PEG-干擾素綴合物(從而較快地達(dá)到最低治療濃度)，以及在一段時(shí)間內(nèi)提供持續(xù)的水平(從而在一段時(shí)間內(nèi)保持濃度高于該最低治療濃度)。
實(shí)施例3現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，含有單一組G-CSF(例如非格司亭)綴合物的第一組合物具有較迅速的開始作用，正如其Tmax(即給藥后藥劑達(dá)到其最高濃度的時(shí)間的量)所證明，其中該聚合物(PEG)具有較小的重均分子量(例如約5,000道爾頓)?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)，含有單一組G-CSF(例如非格司亭)綴合物的第二組合物具有較長(zhǎng)的開始作用，正如其Tmax所證明，其中該聚合物(PEG)具有較大的重均分子量(例如約20,000道爾頓)。將這兩組聚合物G-CSF的各組合并充分混合，以形成由不同的組組成的單一組合物。經(jīng)皮下向患者給藥后，預(yù)期該單一組合物將很快地提供較高水平的PEG-G-CSF綴合物，以及在一段時(shí)間內(nèi)提供持續(xù)的水平，直至最低點(diǎn)后絕對(duì)中性白細(xì)胞計(jì)數(shù)恢復(fù)正常。
實(shí)施例4現(xiàn)發(fā)現(xiàn)，含有單一組胰島素綴合物的第一組合物具有較迅速的開始作用，正如其Tmax(即給藥后藥劑達(dá)到其最高濃度的時(shí)間的量)所證明，其中該聚合物(PEG)具有較小的重均分子量(例如約750道爾頓)?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)，含有單一組胰島素綴合物的第二組合物具有較長(zhǎng)的開始作用，正如其Tmax所證明，其中該聚合物(PEG)具有較大的重均分子量(例如約5,000道爾頓)。將這兩組聚合物胰島素的各組合并充分混合，以形成由不同的組組成的單一組合物。經(jīng)皮下向患者給藥后，預(yù)期該單一組合物將很快地提供較高水平的PEG-胰島素綴合物，以及在一段時(shí)間內(nèi)提供持續(xù)的水平。
權(quán)利要求
1.一種組合物，其含有第一組聚合物-活性劑綴合物，第一組中的每種聚合物-活性劑綴合物均含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物；以及第二組聚合物-活性劑綴合物，第二組中的每種聚合物-活性劑綴合物均含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物，其中，第一組中一種或多種聚合物的重均分子量不同于第二組中一種或多種聚合物的重均分子量。
2.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于120,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于100道爾頓至約120,000道爾頓，其中第一組中一種或多種聚合物的重均分子量不同于第二組中一種或多種聚合物的重均分子量。
3.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于20,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于100道爾頓至約120,000道爾頓，其中第一組中一種或多種聚合物的重均分子量不同于第二組中一種或多種聚合物的重均分子量。
4.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約100道爾頓至小于20,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于20,000道爾頓至約100,000道爾頓。
5.權(quán)利要求4所述的組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約1,000道爾頓至約15,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于約25,000道爾頓至約50,000道爾頓。
6.權(quán)利要求5所述的組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量范圍為約2,500道爾頓至約10,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為大于30,000道爾頓至約40,000道爾頓。
7.權(quán)利要求6所述的組合物，其中第一組中每種聚合物的重均分子量為約5,000道爾頓，第二組中每種聚合物的重均分子量范圍為約30,000道爾頓至約40,000道爾頓。
8.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中聚合物的重均分子量與第二組的重均分子量之間的絕對(duì)差為約500道爾頓至約100,000道爾頓。
9.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中聚合物的重均分子量和第二組的重均分子量之間的絕對(duì)差為約2,000道爾頓至約100,000道爾頓。
10.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中聚合物的重均分子量和第二組的重均分子量之間的絕對(duì)差為約10,000道爾頓至約100,000道爾頓。
11.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中聚合物的重均分子量和第二組的重均分子量之間的絕對(duì)差為約20,000道爾頓至約100,000道爾頓。
12.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中聚合物的重均分子量和第二組的重均分子量之間的絕對(duì)差為約30,000道爾頓至約100,000道爾頓。
13.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中聚合物的重均分子量和第二組的重均分子量之間的絕對(duì)差為約20,000道爾頓至約40,000道爾頓。
14.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中聚合物的重均分子量和第二組的重均分子量之間的絕對(duì)差為約25,000道爾頓至約35,000道爾頓。
15.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一和第二兩組聚合物-活性劑綴合物之間的摩爾比率為約1000∶1至約100∶1。
16.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一和第二兩組聚合物-活性劑綴合物之間的摩爾比率為約100∶1至約10∶1。
17.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一和第二兩組聚合物-活性劑綴合物之間的摩爾比率為約10∶1至約1∶1。
18.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一和第二兩組聚合物-活性劑綴合物之間的摩爾比率為約1∶1至約1∶10。
19.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一和第二兩組聚合物-活性劑綴合物之間的摩爾比率為約1∶10至約1∶100。
20.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一和第二兩組聚合物-活性劑綴合物之間的摩爾比率為約1∶100至約1∶1000。
21.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組和第二組中聚合物-活性劑綴合物中的每種聚合物獨(dú)立地選自聚(環(huán)氧烷)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚噁唑啉，聚(丙烯酰嗎啉)，以及聚(氧乙烯化多元醇)。
22.權(quán)利要求1所述的組合物，其中每種聚合物都是聚(乙二醇)。
23.權(quán)利要求22所述的組合物，其中每種聚(乙二醇)的末端均以一種封端部分封端。
24.權(quán)利要求23所述的組合物，其中每個(gè)封端部分獨(dú)立地選自烷氧基、取代的烷氧基、烯氧基、取代的烯氧基、炔氧基、取代的炔氧基、芳基氧基、取代的芳基氧基和羥基。
25.權(quán)利要求24所述的組合物，其中每個(gè)封端部分是烷氧基。
26.權(quán)利要求25所述的組合物，其中每個(gè)烷氧基是甲氧基。
27.權(quán)利要求24所述的組合物，其中所述封端部分是羥基。
28.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物中的每種聚合物獨(dú)立地具有選自均聚物、交替共聚物、無(wú)規(guī)共聚物、嵌段共聚物、交替三聚物、無(wú)規(guī)三聚物和嵌段三聚物的結(jié)構(gòu)。
29.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一組中的每種聚合物-活性劑綴合物均含有與單一活性劑連接的單一聚合物。
30.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第二組中的每種聚合物-活性劑綴合物均含有與單一活性劑連接的單一聚合物。
31.權(quán)利要求1所述的組合物，其中第一和第二兩組中的每種聚合物-活性劑綴合物均含有與單一活性劑連接的單一聚合物。
32.權(quán)利要求31所述的組合物，其中所述聚合物是聚(乙二醇)。
33.權(quán)利要求30所述的組合物，其中所述聚乙二醇是線性的。
34.權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑具有紅細(xì)胞生成的活性。
35.權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑是促紅細(xì)胞生成素。
36.權(quán)利要求35所述的組合物，其中所述促紅細(xì)胞生成素是以重組方式衍生的。
37.權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑是小分子。
38.權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑是肽。
39.權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述活性劑是蛋白質(zhì)。
40.權(quán)利要求1所述的組合物，其進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受的賦形劑。
41.權(quán)利要求40所述的組合物，其中所述賦形劑是糖。
42.權(quán)利要求40所述的組合物，其為凍干形式。
43.權(quán)利要求1所述的組合物，其中進(jìn)一步含有液體稀釋劑。
45.權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述液體稀釋劑選自注射用抑菌水、5％葡萄糖水溶液、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液、鹽水溶液、無(wú)菌水、去離子水及其組合。
46.權(quán)利要求1所述的組合物，其呈單位劑量形式。
47.權(quán)利要求40所述的組合物，其儲(chǔ)存在玻璃小瓶?jī)?nèi)。
48.一種制備混合物的方法，其中該方法包括以下步驟(i)提供第一組聚合物-活性劑綴合物；(ii)提供第二組聚合物-活性劑綴合物；以及(iii)將第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物合并，從而形成第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物的混合物。
49.權(quán)利要求48所述的方法，其進(jìn)一步包括將第一組和第二組聚合物-活性劑綴合物混合的步驟，以形成基本上均勻的混合物。
50.權(quán)利要求49所述的方法，其進(jìn)一步包括添加藥學(xué)上可接受的賦形劑的步驟。
51.權(quán)利要求50所述的方法，其中所述賦形劑是糖。
52.權(quán)利要求48所述的方法，其進(jìn)一步包括將所述混合物凍干的步驟。
53.一種遞送藥物制劑的方法，其包括給患者施用治療有效量的權(quán)利要求40所述的組合物的步驟。
54.一種提供活性的最初開始和活性的延遲開始的方法，其中該方法包括以下步驟(i)給患者施用第一組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物均含有一種或多種具有一定重均分子量的聚合物；以及(ii)給患者施用第二組聚合物-活性劑綴合物，每種聚合物-活性劑綴合物均含有一種或多種其重均分子量大于第一組中一種或多種聚合物的重均分子量的聚合物。
55.權(quán)利要求54所述的方法，其中所述第一組和第二組先后依次給藥。
56.權(quán)利要求54所述的方法，其中所述第一組和第二組同時(shí)給藥。
57.權(quán)利要求54所述的方法，其中所述第一組和第二組以注射方式給藥。
58.含有權(quán)利要求1所述組合物的凝膠劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了含有兩組不同聚合物－活性劑綴合物的組合物，其中與每組綴合物相關(guān)的聚合物重均分子量是不同的；還提供了制備此類組合物的方法以及施用此類組合物的方法。
文檔編號(hào)A61K38/18GK1913925SQ200480041555
公開日2007年2月14日 申請(qǐng)日期2004年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月10日
發(fā)明者M·J·博薩德 申請(qǐng)人:尼克塔治療亞拉巴馬公司