專利名稱：(反式)－2－脫氧－2－(氟亞甲基)－4－r酰胞苷化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種能有效地抑制和殺傷荷瘤動物的腫瘤細胞，并且不伴有明顯的毒副作用，因此有可能改變傳統(tǒng)的化療藥物對所有快速分裂的細胞進行全面打擊的作用方式，即能夠主要針對腫瘤細胞的基因突變或基因表達異常來發(fā)揮其有效作用，而對正常細胞沒有影響的(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
癌癥是世界公認的人類現(xiàn)代疾病中的重大殺手，據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究中心的研究報告表明，根據(jù)癌癥的發(fā)病趨勢，2020年全世界的癌癥發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50％，全球每年新增的癌癥患者人數(shù)將達到1500萬人。據(jù)統(tǒng)計，我國自20世紀70年代以來，癌癥發(fā)病率一直呈上升趨勢，因患癌癥致死已經(jīng)成為城鎮(zhèn)居民諸多死因中的第一位，我國目前每年癌癥發(fā)病的人數(shù)已經(jīng)高達200萬，死于癌癥的人數(shù)已經(jīng)超過140萬。農(nóng)村及西部地區(qū)癌癥的上升速度已經(jīng)明顯高于城市及全國的平均水平，這不僅嚴重的影響了公民的身體的健康，而且已成為我國醫(yī)療費用上漲的重要因素。據(jù)有關(guān)部門估算，每年用于癌癥病人的醫(yī)療費用高達數(shù)百億元。此外，由于中晚期癌癥患者的治療效果普遍不佳，其不良的預(yù)后往往波及親友和家庭，影響社會的安全和穩(wěn)定。因此，尋找有效的抗腫瘤藥物和治療方法一直是一個受到社會和政府高度重視的重大課題。
隨著科技的進步，惡性腫瘤對人類已不再是“不治之癥”，藥物治療作為癌癥治療的主要手段之一，近年來進展迅速。據(jù)Scrip最新報道，美國正在加緊抗腫瘤新藥的開發(fā)，目前正在研究開發(fā)的有315個，其中皮膚癌60個，乳腺癌58個，結(jié)腸癌35個，淋巴癌33個，實體瘤33個，與腫瘤有關(guān)的疾病32個，卵巢癌24個，頭頸癌18個，肺癌16個，腎癌13個，胃癌10個，膀胱癌9個，多發(fā)性骨髓瘤8個，肉瘤8個，肝癌7個，宮頸癌7個，成神經(jīng)細胞瘤5個和其他癌40個。其中，(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-胞苷作為一種核糖核苷酸二磷酸還原酶抑制劑，具有潛在的抗腫瘤作用，目前在美國已經(jīng)進入了臨床III期試驗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為提高和改善(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-胞苷化合物的效用和價值，從改善其脂溶性出發(fā)，設(shè)計合成了(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物。
本發(fā)明是在(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-胞苷化合物的基礎(chǔ)上增加R?；鶄?cè)鏈后所形成的新化合物，使其能夠更加迅速地通過生物膜進入細胞內(nèi)，它不僅具有良好的水溶性，而且還具有良好的脂溶性。
本發(fā)明提出的(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物(FMdc)的化學(xué)結(jié)構(gòu)分子式是； R＝(CH2)nCH3n＝0-21該化合物的制備方法化學(xué)反應(yīng)式
其中a:TIPDS-pyridine；(四異丙基二硅氧烷-吡啶)b:(Me)2NCH(OMe)2；(N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛)c:Swernn oxidation；(斯沃納氧化反應(yīng))d:PhSO2CH2F/(EtO)2P(O)Cl/LiHMDS；(苯氟甲基砜/二乙氧基磷酰氯)eNH3/CH3OH；(氨/甲醇)；f:BU3SnH/AlBN；(氫化三丁基錫/偶氮二異丁氰)；gCsF/MeOH；(氟化銫/甲醇)；合成路線①、N-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成。
在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L組成的漿狀液中，在N2保護下緩緩加入1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小時后變成溶液，溫度上升到34℃，4小時后開始形成固體，18小時后，將N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛加入，374ml，2.82mol，約0.3小時左右加畢，溫度升至37℃，溶液呈黃色，4小時后，減壓除去溶劑，剩余物用乙酸乙脂1L，500ml，50ml加熱提取三次，合并提取液，用無水硫酸鎂(MgSO4)干燥，過濾，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加熱，再加乙酸乙脂500ml以溶解剩余之固體，然后乘熱過濾，冷卻后，析出白色結(jié)晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，濾液濃縮，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重結(jié)晶，又得(2)83.0g，濾液再濃縮，重結(jié)晶，又得(2)22.6g，總計可得到(2)381.9g，85％，m.p137-138℃。
②、N[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成。
在氮氣保護下，在一個裝有攪拌器，溫度計和滴液漏斗的2L的三口瓶內(nèi)放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，將溶液冷至-75℃，將21.3ml 0.3mol二甲基亞砜滴入，并控制反應(yīng)溫度-55℃以下，繼續(xù)攪拌5分鐘，再將純(2)54g，0.1mol于CH2CL2750ml的溶液加入，約10分鐘，加畢，繼續(xù)攪拌30分鐘，于-75℃，將(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，讓反應(yīng)溫熱至室溫，1小時后在室溫下，混合物用等體積乙醚稀釋，繼續(xù)攪拌1小時，將混合物倒入裝有硅膠500ml的玻璃漏斗內(nèi)先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫，乙醚洗下部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml處理，濾集固體，干燥，得到白色粉狀物36.1gN[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml重結(jié)晶，另又得到(3)12.5g，總共可得到(3)48.6g(90％)，mp 169.5-171℃。
③、2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成。
將氟甲基苯砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氫呋喃800ml，氮氣保護，冷卻至-70℃，用注射器將16ml，0.11mol，的二乙基磷酰氯加到上溶液中，稱取1mol的六甲基二硅氮鋰放入200ml四氫呋喃，用滴液漏斗緩緩滴加到上反應(yīng)瓶內(nèi)，加畢，溫度升至-65℃，1小時，用少量飽和氯化銨/乙酸乙脂，終止反應(yīng)，薄層板檢測，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氫呋喃于-60℃滴加到上反應(yīng)液中，將反應(yīng)液升溫至0℃，0.5小時，然后再升至室溫25小時，用飽和氯化銨100ml終止反應(yīng)，用600ml乙醚稀釋，再加適量水去溶解無機鹽，將反應(yīng)液倒入分液漏斗內(nèi)，水層用200ml乙醚提取，醚層再用冰鹽水洗，有機層用無水硫酸鎂干燥，濃縮，得到71.8g，黑色粘狀油狀物，將此粗品溶解在甲醇中，用氨氣飽和，攪拌過夜，濃縮，剩余物用柱層析分離，1.4L硅膠5％正己烷——乙酸乙脂，收集每200ml1瓶，含純產(chǎn)品濃縮，干燥，得20g 2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)純品，不純部分16g可用高效液相乙酸乙脂溶劑純化得到純品11.4g，共計為31.4g，以上產(chǎn)品用正己烷重結(jié)晶，可得到白色粉末狀固體，熔點135-145℃。
④、2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成。
將樣品(4)26g，0.0406mol放入500ml圓底燒瓶內(nèi)，加300ml環(huán)己烷，未放冷凝管回流15分鐘，冷至室溫，加32.6g0.122mol的氫化三丁基錫(BU3SnH)和500mg的偶氮二異丁氰(AIBN)回流18小時，薄層層析檢測，15％甲醇/乙酸乙脂，已沒有起始原料，濃縮反應(yīng)液，用14L硅膠柱層析分離，洗脫劑比例為4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，可得到265g(82.8％)2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，其為黃色泡沫狀。
⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成。
將(5)26g，0.033mol和氟化銫25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小時，待冷卻后，溶液被部分濃縮，加75ml硅膠，此粘稠物進一步濃縮至松散流動的固體，用1L硅膠柱層析分離，純化，洗脫劑首先用1∶1乙酸乙脂∶己烷2L然后依次用10％甲醇/乙酸乙脂8L含產(chǎn)品部分濃縮得到9.3g的白色固體，用甲醇-乙酸乙脂20ml，重結(jié)晶得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，其為白色晶體，另從母液中可得到1.66g，總計為5.82g，熔點167-169℃。
⑥、(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷(1)的合成。
在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，酸酐2.47mmol，室溫加入(6)300mg，1.23mmol，和水的溶液，于80℃攪拌5小時，反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物可用苯洗滌除去生成的酸，得粗品(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷，用二甲基亞砜重結(jié)晶，最終得到(1)。
該化合物的用途生物體內(nèi)的細胞是由蛋白質(zhì)所組成，蛋白質(zhì)是生命活動的基礎(chǔ)。執(zhí)行生命功能、表現(xiàn)生命特征的主要物質(zhì)是蛋白質(zhì)分子。而有著特定排列順序的氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)分子的基本單位。細胞不停地利用氨基酸合成蛋白質(zhì)和分解蛋白質(zhì)成為氨基酸。
核酸是由核苷酸聚合而成的高分子化合物，是所有生物遺傳信息的攜帶者。核苷酸是組成核酸的基本單位，其由磷酸基、戊糖和含氮堿基組成。根據(jù)核苷酸分子中戊糖的類型，核酸被分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩大類。組成DNA的核苷酸是脫氧核糖核苷酸，組成RNA的是核糖核苷酸。
脫氧核糖核酸(DNA)是生物界遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。生物有機體的遺傳特征以密碼(code)的形式編碼在DNA分子上，表現(xiàn)為特定的核苷酸排列順序----即遺傳信息，在細胞分裂前通過DNA的復(fù)制，將遺傳信息由親代傳遞給子代，在后代的個體發(fā)育過程中，遺傳信息自DNA轉(zhuǎn)錄給RNA，并指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成，以執(zhí)行各種生命功能，使后代表現(xiàn)出與親代相似的遺傳性狀，這種遺傳信息的傳遞方向，是從DNA到RNA再到蛋白質(zhì)，即所謂的生物學(xué)“中心法則”。
被稱為生物催化劑的酶，就是在活細胞內(nèi)產(chǎn)生的具有高度專-性和催化效率的蛋白質(zhì)。生物體的新陳代謝幾乎都是在酶的催化下進行化學(xué)反應(yīng)的。催化脫氧核糖核苷酸生成的酶被稱為核糖核苷酸還原酶(RNR)。
研究表明，腫瘤細胞的快速繁殖主要表現(xiàn)在脫氧核糖核酸(DNA)的復(fù)制，然而脫氧核糖核酸(DNA)的復(fù)制則是受核糖核苷酸還原酶(RNR)所控制。正是由于RNR催化所產(chǎn)生的脫氧核塘核苷酸，為合成DNA提供了足夠的原材料。
(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物是一種不可逆的核糖核苷酸二磷酸還原酶抑制劑，它主要參與細胞內(nèi)的磷酸化過程，從而干擾了DNA的合成，使腫瘤細胞的生長得到抑制。動物試驗結(jié)果表明，該化合物能有效地抑制和殺傷荷瘤動物的腫瘤細胞，并且不伴有明顯的毒副作用，因此有可能改變傳統(tǒng)的化療藥物對所有快速分裂的細胞進行全面打擊的作用方式，即能夠針對腫瘤細胞的基因突變或基因表達異常來發(fā)揮其有效作用，而對正常細胞的影響較小，該化合物適應(yīng)于肺癌，直腸癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，胰腺癌，卵巢癌，腦瘤等的治療，由于增強了對細胞膜的滲透，明顯提高和改善了藥物的療效，尤其是對耐藥的腫瘤具有較好的治療效果，對裸鼠移植人結(jié)腸癌HCT-8和人肺癌A549均顯示出顯著的生長抑制作用，使用途徑是靜脈點滴或口服。
具體實施例方式
實施例1(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丁酰胞苷的合成①、N-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成。
在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L組成的漿狀液中，在N2保護下緩緩加入1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小時后變成溶液，溫度上升到34℃，4小時后開始形成固體，18小時后，將N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛加入，374ml，2.82mol，約0.3小時左右加畢，溫度升至37℃，溶液呈黃色，4小時后，減壓除去溶劑，剩余物用乙酸乙脂1L，500ml，50ml加熱提取三次，合并提取液，用無水硫酸鎂(MgSO4)干燥，過濾，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加熱，再加乙酸乙脂500ml以溶解剩余之固體，然后乘熱過濾，冷卻后，析出白色結(jié)晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，濾液濃縮，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重結(jié)晶，又得(2)83.0g，濾液再濃縮，重結(jié)晶，又得(2)22.6g，總計可得到(2)381.9g，85％，m.p137-138℃。
②、N[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成。
在氮氣保護下，在一個裝有攪拌器，溫度計和滴液漏斗的2L的三口瓶內(nèi)放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，將溶液冷至-75℃，將21.3ml 0.3mol二甲基亞砜滴入，并控制反應(yīng)溫度-55℃以下，繼續(xù)攪拌5分鐘，再將純(2)54g，0.1mol于CH2CL2750ml的溶液加入，約10分鐘，加畢，繼續(xù)攪拌30分鐘，于-75℃，將(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，讓反應(yīng)溫熱至室溫，1小時后在室溫下，混合物用等體積乙醚稀釋，繼續(xù)攪拌1小時，將混合物倒入裝有硅膠500ml的玻璃漏斗內(nèi)先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫，乙醚洗下部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml處理，濾集固體，干燥，得到白色粉狀物36.1gN[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-O[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml重結(jié)晶，另又得到(3)12.5g，總共可得到(3)48.6g(90％)，mp 169.5-171℃。
③、2’-脫氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成。
將氟甲基苯砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氫呋喃800ml，氮氣保護，冷卻至-70℃，用注射器將16ml，0.11mol，的二乙基磷酰氯加到上溶液中，稱取1mol的六甲基二硅氮鋰放入200ml四氫呋喃，用滴液漏斗緩緩滴加到上反應(yīng)瓶內(nèi)，加畢，溫度升至-65℃，1小時，用少量飽和氯化銨/乙酸乙脂，終止反應(yīng)，薄層板檢測，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氫呋喃于-60℃滴加到上反應(yīng)液中，將反應(yīng)液升溫至0℃，0.5小時，然后再升至室溫25小時，用飽和氯化銨100ml終止反應(yīng)，用600ml乙醚稀釋，再加適量水去溶解無機鹽，將反應(yīng)液倒入分液漏斗內(nèi)，水層用200ml乙醚提取，醚層再用冰鹽水洗，有機層用無水硫酸鎂干燥，濃縮，得到71.8g，黑色粘狀油狀物，將此粗品溶解在甲醇中，用氨氣飽和，攪拌過夜，濃縮，剩余物用柱層析分離，1.4L硅膠5％正己烷——乙酸乙脂，收集每200ml1瓶，含純產(chǎn)品濃縮，干燥，得20g 2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-O-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)純品，不純部分16g可用高效液相乙酸乙脂溶劑純化得到純品11.4g，共計為31.4g，以上產(chǎn)品用正己烷重結(jié)晶，可得到白色粉末狀固體，熔點135-145℃。
④、2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成。
將樣品(4)26g，0.0406mol放入500ml圓底燒瓶內(nèi)，加300ml環(huán)己烷，未放冷凝管回流15分鐘，冷至室溫，加32.6g0.122mol的氫化三丁基錫(BU3SnH)和500mg的偶氮二異丁氰(AIBN)回流18小時，薄層層析檢測，15％甲醇/乙酸乙脂，已沒有起始原料，濃縮反應(yīng)液，用14L硅膠柱層析分離，洗脫劑比例為4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，可得到265g(82.8％)2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-O-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，其為黃色泡沫狀。
⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成。
將(5)26g，0.033mol和氟化銫25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小時，待冷卻后，溶液被部分濃縮，加75ml硅膠，此粘稠物進一步濃縮至松散流動的固體，用1L硅膠柱層析分離，純化，洗脫劑首先用1∶1乙酸乙脂∶己烷2L然后依次用10％甲醇/乙酸乙脂8L含產(chǎn)品部分濃縮得到9.3g的白色固體，用甲醇-乙酸乙脂20ml，重結(jié)晶得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，其為白色晶體，另從母液中可得到1.66g，總計為5.82g，熔點167-169℃。
⑥、(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷(1)的合成。在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，丁酸酐391mg，2.47mmol，在室溫下加入(6)300mg，1.23mmol和水的溶液。于80℃攪拌5小時。反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物用苯洗滌，除去生成的丁酸，得粗品(反式)2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，可得(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丁酰胞苷305mg。
實施例2(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4乙酰胞苷的合成同實施例1，首先需制備得到(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，然后在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，醋酐255mg(2.47mmol)，室溫加入(6)300mg(1.23mmol)和水的溶液。于80℃攪拌5小時。反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物用苯洗滌(可除去生成的乙酸)，得粗品((反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-乙酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，可得(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4乙酰胞苷285mg。
實施例3(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丙酰胞苷的合成同實施例1，首先應(yīng)制備得到(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)，然后在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，丙酐321mg，2.47mmol，室溫加入(6)300mg，1.23mmol和水的溶液，于80℃攪拌5小時。反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物可用苯洗滌，除去丙酸，得粗品(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丙酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，可得(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4丙酰胞苷290mg。
實施例4用實施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對不同組織來源的腫瘤細胞系的增殖抑制作用(見表1)。
實施例5用實施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對小鼠種植性乳腺癌EMT-6的抑制作用(見表2)。
實施例6用實施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對小鼠種植性Lewis肺癌的抑制作用(見表3)。
實施例7用實施例1所制備的(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-丁酰胞苷，對裸鼠移植人結(jié)腸癌HCT-8的生長抑制(見表4)。




權(quán)利要求
1.一種(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物及其制備方法，其特征在于該化合物采用以下的合成路線①、N-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)的合成在由胞苷203.8g，0.84mol和吡啶1.6L組成的漿狀液中，在N2保護下緩緩加入1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷(TIPDS-Cl2)268ml，0.84mol，0.5小時后變成溶液，溫度上升到34℃，4小時后開始形成固體，18小時后，將N，N-二甲基甲瞇二甲縮醛加入，374ml，2.82mol，約0.3小時左右加畢，溫度升至37℃，溶液呈黃色，4小時后，減壓除去溶劑，剩余物用乙酸乙脂1L，500ml，50ml加熱提取三次，合并提取液，用無水硫酸鎂(MgSO4)干燥，過濾，加入己烷6L，混合液于水蒸汽浴上加熱，再加乙酸乙脂500ml以溶解剩余之固體，然后乘熱過濾，冷卻后，析出白色結(jié)晶得到276.3gN-[(二甲氨基)甲稀]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞嘧啶核)苷(2)，濾液濃縮，加入500ml乙酸乙酯/1.5L己烷重結(jié)晶，又得(2)83.0g，濾液再濃縮，重結(jié)晶，又得(2)22.6g，總計得到381.9g，85％，m.p137-138℃；②、N[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)的合成在氮氣保護下，在-個裝有攪拌器，溫度計和滴液漏斗的2L的三口瓶內(nèi)放入草酰氯13.1ml，0.15mol及干燥的二氯甲烷(CH2CL2)750ml，將溶液冷至-75℃，將21.3ml 0.3mol二甲基亞砜滴入，并控制反應(yīng)溫度-55℃以下，繼續(xù)攪拌5分鐘，再將純(2)54g，0.1mol于CH2CL2750ml的溶液加入，約10分鐘，加畢，繼續(xù)攪拌30分鐘，于-75℃，將(Et3N)75.5ml.0.54mol加入，除去冰浴，讓反應(yīng)溫熱至室溫，1小時后在室溫下，混合物用等體積乙醚稀釋，繼續(xù)攪拌1小時，將混合物倒入裝有硅膠500ml的玻璃漏斗內(nèi)先用乙醚(Et2O)1L，再用二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫，乙醚洗下部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml處理，濾集固體，干燥，得到白色粉狀物36.1gN[(二甲氨基)甲稀]-2-’氧合-3-5-0[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-胞苷(3)，二氯甲烷(CH2Cl2)洗脫部分濃縮后用10％氯仿/己烷300ml重結(jié)晶，另又得到(3)12.5g，總共可得到(3)48.6g(90％)，mp169.5-171℃；③、2’-脫氧-[氟(苯磺?；?甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)的合成將氟甲基苯砜19.4g，0.11mol放入干燥的四氫呋喃800ml，氮氣保護，冷卻至-70℃，用注射器將16ml，0.11mol，的二乙基磷酰氯加到上溶液中，稱取1mol的六甲基二硅氮鋰放入200ml四氫呋喃，用滴液漏斗緩緩滴加到上反應(yīng)瓶內(nèi)，加畢，溫度升至-65℃，1小時，用少量飽和氯化銨/乙酸乙脂，終止反應(yīng)，薄層板檢測，用(3)的溶液40g，0.074mol溶于200ml四氫呋喃于-60℃滴加到上反應(yīng)液中，將反應(yīng)液升溫至0℃，0.5小時，然后再升至室溫25小時，用飽和氯化銨100ml終止反應(yīng)，用600ml乙醚稀釋，再加適量水去溶解無機鹽，將反應(yīng)液倒入分液漏斗內(nèi)，水層用200ml乙醚提取，醚層再用冰鹽水洗，有機層用無水硫酸鎂干燥，濃縮，得到71.8g，黑色粘狀油狀物，將此粗品溶解在甲醇中，用氨氣飽和，攪拌過夜，濃縮，剩余物用柱層析分離，1.4L硅膠5％正己烷——乙酸乙脂，收集每200ml1瓶，含純產(chǎn)品濃縮，干燥，得20g 2’-脫氧-[氟(苯磺酰基)甲烯]-3’-5’-0-1，1，3，3-四(1-甲基乙基)1，3-二硅氧烷＝]-(2’-z)胞苷(4)純品，不純部分16g用高效液相乙酸乙脂溶劑純化得到純品11.4g，共計31.4g，以上產(chǎn)品用正己烷重結(jié)晶得到白色粉末狀固體，熔點135-145℃；④、2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)的合成將樣品(4)26g，0.0406mol放入500ml圓底燒瓶內(nèi)，加300ml環(huán)己烷，回流15分鐘，冷至室溫，加32.6g0.122mol的氫化三丁基錫(BU3SnH)和500mg的偶氮二異丁氰(AIBN)回流18小時，薄層層析檢測，15％甲醇/乙酸乙脂，已沒有起始原料，濃縮反應(yīng)液，用14L硅膠柱層析分離，洗脫劑比例為4％甲醇/二氯甲烷4L，然后用6％甲醇/二氯甲烷，得到265g(82.8％)2’-脫氧-2’-[氟(三丁基甲錫烷基)甲烯]-3’-5’-0-[1，1，3，3-四(1-甲基乙基)-1，3-二硅氧烷二]-(2’z)-胞苷(5)，為黃色泡沫狀；⑤、(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)的合成將(5)26g，0.033mol和氟化銫25g，0.165mol溶解在甲醇300ml中，回流24小時，待冷卻后，溶液被部分濃縮，加75ml硅膠，此粘稠物進一步濃縮至松散流動的固體，用1L硅膠柱層析分離，純化，洗脫劑首先用1∶1乙酸乙脂∶己烷2L然后依次用10％甲醇/乙酸乙脂8L含產(chǎn)品部分濃縮得到9.3g的白色固體，用甲醇-乙酸乙脂20ml，重結(jié)晶得到4.16g的(2E)-4氨基-1-[2-(氟烯基)-赤型-戊呋喃]-胞苷(6)白色晶體，另從母液中得到1.66g，總計為5.82g，熔點167-169℃；⑥、(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷(1)的合成在反應(yīng)瓶中，加入二氧六環(huán)30ml，酸酐2.47mmol，室溫加入(6)300mg，1.23mmol，和水的溶液，于80℃攪拌5小時，反應(yīng)畢，于60℃減壓濃縮至干，剩余物可用苯洗滌除去生成的丁酸，得到粗品(反式)-2-脫氧-2-甲基)-4-R酰胞苷，然后用二甲基亞砜重結(jié)晶，最終得到(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物。
2.一種(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物，其特征在于它是由權(quán)利要求1所述方法制備的，其化學(xué)結(jié)構(gòu)分子式是 R＝(CH2)nCH3n＝0-21
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的(反式)-2-脫氧-2-(氟亞甲基)-4-R酰胞苷化合物的用途，其特征在于它用于抑制和殺傷荷瘤動物的腫瘤細胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種(反式)－2－脫氧－2－(氟亞甲基)－4－R酰胞苷化合物及其制備方法和用途，其特點是在(反式)－2－脫氧－2－(氟亞甲基)－胞苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)上增加了R?；鶄?cè)鏈，它能夠有效地提高化合物的脂溶性，幫助更易、更快地進入生物細胞內(nèi)，有效的抑制和殺傷荷瘤動物的腫瘤細胞，并且不伴有明顯的毒副作用。因此，有可能改變傳統(tǒng)的化療藥物對所有快速分裂的細胞進行全面打擊的作用方式，即能夠主要針對腫瘤細胞的基因突變或基因表達異常發(fā)揮作用，而對正常細胞沒有影響，它適應(yīng)于肺癌，直腸癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，胰腺癌，卵巢癌，腦瘤等的治療，尤其是對耐藥的腫瘤具有較好的治療效果。
文檔編號A61P35/00GK1629177SQ20041000971
公開日2005年6月22日 申請日期2004年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月27日
發(fā)明者孫薇, 陳肖華, 高月, 李魯, 熊曉鏗 申請人:北京東華康明生物科技有限公司